CN104586913B - 红花有机溶剂部提取物在制备气道平滑肌舒张药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了红花有机溶剂部提取物在制备气道平滑肌舒张药物中的应用。研究发现，红花能引起收缩的气道平滑肌舒张，舒张作用强于目前临床上使用的β2受体激动剂异丙肾上腺素的约3倍，可用于预防和/或治疗哮喘。另外通过对实验小鼠离体气管环张力的检测也证明，红花有机溶剂部提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，可以用于缓解哮喘患者气道阻塞，为预防和治疗哮喘提供了一个高效新药的来源。

Description

红花有机溶剂部提取物在制备气道平滑肌舒张药物中的应用

技术领域

本发明涉及红花有机溶剂部提取物在制备气道平滑肌舒张药物中的应用。

背景技术

支气管哮喘(以下简称“哮喘”)是一种常见的多发性慢性呼吸道疾病，其发病机制目前尚不完全清楚。目前全球至少有3亿以上，我国有近3000万哮喘患者，哮喘已成为仅次于癌症的世界第二大致死和致残疾病。在“我国哮喘疾病发病状况、治疗进展及哮喘管理十年进步新闻通报”发布会上公布的最新一项调查显示，自1990年至2000年，中国大陆哮喘疾病发病率从0.91％上升到1.97％(上升了一倍多)。2010年北京、重庆、广州三个城市的同期调查资料显示：儿童哮喘的患病率分别为3.15％、7.45％、2.09％，与10年前的2.69％、4.63％、1.33％相比，均呈明显上升趋势。目前哮喘疾病的有效控制率低下，总体状况不容乐观，其主要原因是随着社会经济的发展生活水平的提高，环境变化加快，汽车尾气、工业废气、家庭装修、食品添加剂、家养宠物等过敏原越来越多，这都必然导致哮喘的发病率越来越高。因此亟待寻找能更安全有效的治疗哮喘的药物。

气道阻塞是哮喘的重要病理特征，而气道平滑肌的异常收缩是导致这一症状的主要原因。目前支气管扩张剂如β2-受体激动剂被广泛应用于临床，但治疗效果有限，30-45％哮喘病人的肺功能无法得到改善，即使症状有所缓解，停止治疗后病情亦容易反复发作，严重者更需要住院治疗。这给患者本人和家庭造成了极大的痛苦，同时也加重了社会经济的负担和损失。

红花，菊科(Compositae)红花属(Carthamus L.)1～2年生草本植物。在我过大部分省区都有分布，包括云南、四川、西藏、贵州、湖南、广东、广西、湖北等省份。其中以云南和四川分布最多。湖北省武陵山区作为华中地区最大的中药资源宝库，红花已成为恩施地区具有地区特色产业的重要中药品种之一。红花在医药和食品工业，特别是民族药业中得到了广泛的应用，红花注射液在高血压、冠心病、脑血管疾病、糖尿病及其并发症、慢性肾衰竭、原发性痛经、肩周炎、结节性斑等方面都有临床应用。红花含有红花黄色素及红花甙，还含脂肪油称红花油，是棕桐酸、硬脂酸、亚麻酸、亚油酸、油酸、花生酸等的甘油酯类。中医认为其味辛、性温，入心、肝经，具有活血活络通经、祛瘀止痛功效，可用于闭经、难产、死胎、产后恶露不行、瘀血作痛、痈肿、腹部肿块、跌打损伤等症。研究表明红花在免疫调节及细胞增殖调控方面具有重要的作用。哮喘疾病作为一种以慢性炎症和肌紧张为主要特征的疾病，红花具有治疗或缓解哮喘疾病症状的潜力，但国内还没有关于红花有效成分提取并用于哮喘治疗的研究。

发明内容

本发明要解决的技术问题是现有治疗哮喘的药物疗效欠佳，且停止治疗后病情容易反复发作，没有更有效的药物控制，而对于红花的多方面药效研究仍然有待开发等问题。

本发明提供了红花有机溶剂部提取物在制备气道平滑肌舒张药物中的应用。气道平滑肌舒张药物主要用于预防和/或治疗哮喘。

最近我们发现，红花能引起收缩的气道平滑肌舒张，舒张作用强于目前临床上使用的β2受体激动剂异丙肾上腺素的约3倍，这说明红花是开发用于预防和治疗哮喘高效新药的一个来源。

优选地，所述有机溶剂为石油醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇。经过研究发现，用石油醚、氯仿、乙酸乙酯和/或正丁醇这四类有机溶剂提取的物质，对于哮喘治疗效果较佳。

优选地，所述红花有机溶剂部提取物的制备方法为：干燥红花磨成粉末，用乙醇或其水溶液浸泡，冷浸泡或热回流的方式获得提取液，提取液减压蒸干获得浸膏，浸膏再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇进行萃取，获得萃取物浸膏，即为红花有机溶剂部提取物。

优选地，所述红花有机溶剂部提取物的制备方法为：干燥红花磨成粉末，用乙醇或其水溶液浸泡，冷浸泡或热回流的方式获得提取液，提取液减压蒸干获得浸膏，浸膏经石油醚萃取后，石油醚萃取产物减压蒸干得浸膏，分离出的水相用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取产物减压蒸干得浸膏，分离出的水相用正丁醇萃取，正丁醇萃取产物减压蒸干得浸膏，三种不同有机溶剂提取获得的浸膏或其中任意两种以上的混合物，即为红花有机溶剂部提取物。

优选地，上述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分比浓度为75％。

本发明还提供一种气道平滑肌舒张药物，其有效成分为红花有机溶剂部提取物，提取方法为：干燥红花磨成粉末，用乙醇或其水溶液浸泡，冷浸泡或热回流的方式获得提取液，提取液减压蒸干获得浸膏，浸膏再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇进行萃取，萃取产物即为红花有机溶剂部提取物。

本发明具有以下有益效果：

通过对实验小鼠离体气管环张力的检测发现，红花有机溶剂部提取物具有有效的气管平滑肌舒张作用，可以用于缓解哮喘患者气道阻塞。

附图说明

图1是红花活性成分的提取，纯化的技术路线实验结果；

图2是红花石油醚部提取物完全抑制ACH引起的气道平滑肌收缩实验结果；

图3是红花乙酸乙酯部提取物抑制ACH引起的气道平滑肌收缩实验结果；

图4是红花正丁醇部提取物抑制ACH引起的气道平滑肌收缩实验结果；

图5是红花水部提取物不能抑制ACH引起的气道平滑肌收缩实验结果。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

1、红花有机溶剂部提取物的制备

红花来自湖北省武陵山区。粉碎的干燥红花粉末用体积百分比为75％的乙醇浸泡，冷浸泡方式获得提取液，提取液减压蒸干获得浸膏，浸膏用石油醚进行萃取，萃取的有机相减压蒸干浓缩成浸膏，即为红花石油醚部提取物。石油醚萃取时分离出的水相，继续加入乙酸乙酯进行萃取，萃取的有机相减压蒸干浓缩成浸膏，即为红花乙酸乙酯部提取物。乙酸乙酯萃取时分离出的水相，继续加入正丁醇进行萃取，萃取的有机相减压蒸干浓缩成浸膏，即为红花正丁醇部提取物。正丁醇萃取时分离出的水相，作为红花水相提取物进行对照试验。

每个部分的提取物进行活性检测，组织水平用肌张力(气道平滑肌的张力检测)，细胞水平检测内钙情况。

2、小鼠气管的体外分离

雄性成年的BALB/c小鼠颈椎脱臼法处死，将口腔和四肢钉在解剖板上，喷洒75％的酒精后剪开胸腔，暴露出心肺组织，移除心脏之后取下从喉结至肺部的一整段组织，将取下的组织马上浸泡于PSS溶液(NaCl 135mM,KCl 5mM,MgCl₂1mM,CaCl₂2mM,HEPES 10mM,glucose 10mM,pH 7.4)中，然后在转移至胶板上进行进一步修剪。在SZM体视显微镜下用维纳斯剪小心去除气管外周的结缔组织及内腔中的残留血液。

3、小鼠气道平滑肌的张力检测方法

将小鼠气管剪成长约5mm的气管环后与挂钩连接，小心衔接张力换能器后置于内有6mL PSS并持续通氧的37℃的恒温水浴槽中，前负荷调至500mg，开始平衡，平衡期间，每15min换液1次，共换液4次。平衡完毕后使用80mM高钾溶液或100μM乙酰胆碱(ACh)溶液进行预刺激，充分刺激组织活性后换液洗脱，至恢复至基线，30min后即可开始试验。

实验结果：

(1)红花石油醚部提取物强烈抑制乙酰胆碱引起的气道平滑肌收缩

离体小鼠气管环在100μM ACh溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入红花石油醚部提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，随着红花石油醚部提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明红花石油醚部提取物可完全舒张乙酰胆碱引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现剂量依赖性，如图2。

(2)红花乙酸乙酯部提取物抑制乙酰胆碱引起的气道平滑肌收缩

离体小鼠气管环在100μM ACh溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入红花乙酸乙酯部提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，随着红花乙酸乙酯部提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明红花乙酸乙酯部提取物可完全舒张ACh引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现剂量依赖性，如图3。

(3)红花正丁醇部提取物抑制乙酰胆碱引起的气道平滑肌收缩

离体小鼠气管环在100μM ACh溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入红花正丁醇部提取物后收缩的气管环张力逐渐下降，随着红花正丁醇部提取物浓度的增加气管环张力逐渐恢复为收缩前水平。表明红花正丁醇部提取物可完全舒张ACh引起气道平滑肌收缩，且该药物作用呈现剂量依赖性，如图4。

(4)红花水部提取物不能抑制乙酰胆碱引起的气道平滑肌收缩

离体小鼠气管环在100μM ACh溶液中发生稳定持续的预收缩，当加入红花水部提取物后收缩的气管环张力未下降。表明红花水部提取物不能舒张ACh引起气道平滑肌收缩，如图5。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims (5)

1.红花有机溶剂部提取物在制备气道平滑肌舒张药物中的应用，所述有机溶剂为石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述红花有机溶剂部提取物的制备方法为：干燥红花磨成粉末，用乙醇或其水溶液浸泡，冷浸泡或热回流的方式获得提取液，提取液减压蒸干获得浸膏，浸膏再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇进行萃取，获得萃取物浸膏，即为红花有机溶剂部提取物。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述红花有机溶剂部提取物的制备方法为：干燥红花磨成粉末，用乙醇或其水溶液浸泡，冷浸泡或热回流的方式获得提取液，提取液减压蒸干获得浸膏，浸膏经石油醚萃取后，石油醚萃取产物减压蒸干得浸膏，分离出的水相用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取产物减压蒸干得浸膏，分离出的水相用正丁醇萃取，正丁醇萃取产物减压蒸干得浸膏，三种不同有机溶剂提取获得的浸膏或其中任意两种以上的混合物，即为红花有机溶剂部提取物。

4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，乙醇水溶液中，乙醇的体积百分比浓度为75％。

5.一种气道平滑肌舒张药物，其特征在于，有效成分为红花有机溶剂部提取物，提取方法为：干燥红花磨成粉末，用乙醇或其水溶液浸泡，冷浸泡或热回流的方式获得提取液，提取液减压蒸干获得浸膏，浸膏再用石油醚、氯仿、乙酸乙酯或正丁醇进行萃取，萃取产物即为红花有机溶剂部提取物。