CN103800379A - 一种海蛇提取物及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种海蛇提取物及其制备方法和用途。所述制备方法包含下列步骤:取海蛇干燥体,加水煎煮,水煎液离心滤过;采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤,并将滤液浓缩至相对密度为1.05~1.20,放置,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。本发明制备的海蛇提取物,具有良好的抗类风湿性关节炎作用,可用于制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物。
Description
技术领域
本发明属于天然药物领域,具体涉及一种海蛇提取物及其制备方法和其在制备用于预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
背景技术
海蛇(拉丁名Pelamis platurus),爬行纲,眼镜蛇科,海蛇亚科,是生活在海洋里的爬行动物,有毒,身长1.5~2米。海蛇具有祛风止痛,滋补强壮的功效,常用于治疗风寒湿痹,关节疼痛,屈伸不利,皮肤瘙痒,体虚和小儿营养不良等。
海蛇在中医领域中的应用历史悠久,其功效已被临床实践充分证实。近年来,对海蛇在抗菌消炎、抗病毒、抗癌、治疗呼吸系统疾病以及免疫系统疾病等方面的研究表明,其在临床应用上前景广阔,开发利用潜力很大。但海蛇化学成分复杂,除了对蛇毒的研究比较多以外,其他成分的研究尚不系统深入,且海蛇的应用均是采用原料药材直接入药,或是采用简单水提法或醇提法后入药。目前,海蛇产品的开发形式主要有两种,一是以海蛇干体为主药配伍活血理气药制成复方制剂;二是以海蛇精制成各种保健酒。
发明内容
基于海蛇现有的应用情况,本发明的目的是提供一种海蛇有效部位的制备方法。采用本发明制备方法制得的海蛇提取物,具有良好的抗类风湿性关节炎作用,可用于制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物。
本发明提供了一种海蛇提取物的制备方法,所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮,水煎液离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在15℃~80℃下相对密度为1.05~1.20,放置,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
优选的情况,本发明所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮1~3次,每次加水5~30倍量、煎煮10分钟~2小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在15℃~80℃下相对密度为1.05~1.20,放置24小时以上,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
优选的情况,本发明所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮2~3次,每次加水10倍量、煎煮1小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在15℃~80℃下相对密度为1.05~1.20,放置24小时以上,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。优选的情况,本发明所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮2次,每次加水1 0倍量、煎煮1小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为3000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在70~80℃下相对密度为1.10,放置72小时,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
优选的情况,本发明所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮,水煎液离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在80℃下相对密度为1.10,放置,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
优选的情况,本发明所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮1~3次,每次加水5~30倍量、煎煮10分钟~2小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在80℃下相对密度为1.10,放置24小时以上,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
优选的情况,本发明所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮2~3次,每次加水10倍量、煎煮1小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在80℃下相对密度为1.10,放置24小时以上,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
优选的情况,本发明所述的制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮2次,每次加水10倍量、煎煮1小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为3000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在80℃下相对密度为1.10,放置72小时,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
本发明还提供所述制备方法制得的海蛇提取物。
本发明还提供一种用于预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物组合物,该药物组合物包含所述海蛇提取物。
本发明还提供所述海蛇提取物在制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
本发明制备的海蛇提取物,具有良好的抗类风湿性关节炎作用,可用于制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物;实验证明,本发明所述制备方法得到的海蛇提取物,与单纯的水提法或醇提法得到的海蛇提取物相比,在改善SD大鼠CIA模型关节指数(AI)和关节病理学表现方面取得的效果更为明显。
附图说明
以下,结合附图来详细说明本发明的实施方案,其中:
图1表示空白对照组SD大鼠踝关节。
图2表示CIA模型组SD大鼠踝关节。
图3表示海蛇治疗组SD大鼠踝关节。
具体实施方式
以下参照具体的实施例来说明本发明。本领域技术人员能够理解,这些实施例仅用于说明本发明,其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法,如无特殊说明,均为常规方法。下述实施例中所用的药材原料、试剂材料等,如无特殊说明,均为市售购买产品。
实施例1
取海蛇干燥体(购买自广州清平药材市场,经鉴定为海蛇Pelamisplaturus)1千克,加水煎煮提取3次,每次加水10倍量,每次煎煮1小时,合并水煎煮提取液,离心滤过,冷却至室温,滤液再采用截留分子量为2000的有机滤膜滤过,滤液浓缩至在15℃下相对密度为1.05,放置1小时,沉淀析出,过滤,取沉淀干燥,得海蛇提取物23克。
实施例 2
取海蛇干燥体(购买自广州清平药材市场,经鉴定为海蛇Pelamisplaturus)1千克,加水煎煮提取2次,每次加水10倍量,每次煎煮1小时,合并水煎煮提取液,离心滤过,冷却至常温,滤液再采用截留分子量为3000的有机滤膜滤过,滤液浓缩至在15℃下相对密度为1.20,放置48小时,沉淀析出,过滤,取沉淀干燥,得海蛇提取物52克。
实施例3
取海蛇干燥体(购买自广州清平药材市场,经鉴定为海蛇Pelamisplaturus)1千克,加水煎煮提取2次,每次加水10倍量,每次煎煮1小时,合并水煎煮提取液,离心滤过,冷却至常温,滤液再采用截留分子量为3000的有机超滤膜滤过,滤液浓缩至在80℃下相对密度为1.10,放置72小时,沉淀析出,过滤,取沉淀干燥,得海蛇提取物61克。
实施例4
取海蛇干燥体(购买自广州清平药材市场,经鉴定为海蛇Pelamisplaturus)1千克,加水煎煮提取3次,每次加水10倍量,每次煎煮1小时,合并水煎煮提取液,离心滤过,冷却至常温,滤液再采用截留分子量为8000的有机超滤膜滤过,滤液浓缩至在80℃下相对密度为1.20,放置48小时,沉淀析出,过滤,取沉淀干燥,得海蛇提取物56克。
实施例5
海蛇提取物的药效试验包含以下步骤:
(1)将64只雄性SD大鼠随机分为8组:空白对照组、CIA(胶原诱导性关节炎)模型组、海蛇治疗1组(即实施例1提取物组)、海蛇治疗2组(即实施例2提取物组)、海蛇治疗3组(即实施例3提取物组)、海蛇治疗4组(即实施例4提取物组)、海蛇治疗5组(即单纯水提法组)、海蛇治疗6组(即醇提法组),每组8只。
(2)参照文献(Xiao C,Li J,Dong X等人.Anti-oxidative andTNF-α suppressive activities of puerarin derivative(4AC)in RAW264.7cells and collagen-induced arthritic rats.Eur J Pharmacol.2011 Jun 4;666(3)242-250),于实验开始第1天,取适量浓度为2mg/ml的Ⅱ型胶原蛋白(Collagen Ⅱ)溶液,将该Ⅱ型胶原蛋白溶液逐滴加入等容积的不完全弗氏佐剂中后,在冰浴中,用匀浆器将其充分混匀乳化,以滴加水中不扩散为度,配成Ⅱ型胶原蛋白浓度为1mg/ml的乳剂。
(3)对于CIA模型组和海蛇治疗组,取步骤(2)所得乳剂,分别按每只SD大鼠0.2ml乳剂量于尾根部皮下免疫;对于空白对照组,按每只SD大鼠以0.2ml等容积蒸馏水于尾根部皮下注射。实验开始7天后,对于CIA模型组和海蛇治疗组,按每只SD大鼠0.1ml乳剂量于尾根部皮下再加强免疫一次;对于空白对照组,按每只SD大鼠以0.1ml等容积蒸馏水于尾根部皮下注射。
(4)实验开始第7天(即第二次免疫后),对于海蛇治疗各组,按每只SD大鼠以1.84 g/kg·d的生药剂量,1ml/100g体重的体积灌胃给药;对于空白对照组和CIA模型组,分别按每只SD大鼠以1ml/100g体重的体积给予生理盐水灌胃。
(5)28天期间内对6组SD大鼠进行关节炎指数(Arthritis Index,AI)检测,用来判断其大体发病率。SD大鼠全身病变按5级评分法评价,可以得出SD大鼠的4只肢体病变程度累计积分,然后计算出关节炎指数(AI)。5级评分法具体计分方法为:0分表示无红肿;1分表示小趾关节红肿;2分表示趾关节和足跖肿胀;3分表示踝关节以下的足爪肿胀;4分表示包括踝关节在内的全部足爪肿胀。累计以上所述各个关节的积分,即为每只SD大鼠的关节炎指数(AI),每只SD大鼠最高得分为1 6分。
(6)治疗结束后,将SD大鼠在乙醚麻醉下取全血;后处死SD大鼠,取其膝关节,用多聚甲醛固定36小时后,放入10%EDTA脱钙溶液,再用酒精逐级脱水,二甲苯透明处理,石蜡包埋、切片后进行常规HE染色(即苏木精-伊红染色),后于光镜下观察滑膜、软骨、骨的病理改变。
结果显示:关节炎指数检测表明,各海蛇治疗组对C Ⅱ所致SD大鼠CIA模型关节炎指数均有不同程度的降低,但以海蛇治疗3组(即本发明制备方法制得的海蛇提取物实施例3提取物)关节炎指数降低最明显(见表1)。病理学观察显示,与空白对照组(图1)相比,CIA模型组踝关节滑膜细胞增生,滑膜组织内可见有扩张的血管、新生毛细血管,并伴有淋巴细胞浸润;各跗骨关节的软骨基质及软骨细胞出现不同程度的退行性变,严重处软骨坏死剥脱、变性,剥脱的软骨表面,可见由滑膜细胞和毛细血管增生所形成的血管翳,软骨下骨也受到血管翳的侵袭,出现退行性变(见图2);各海蛇治疗组对CⅡ所致SD大鼠CIA模型踝关节滑膜细胞增生、炎性细胞浸润、血管翳形成、软骨及骨质破坏等病理学改变均有不同程度的减轻,但以海蛇治疗3组(即本发明制备方法制得的海蛇提取物实施例3提取物)上述病理学改变最明显(见图3)。
注:“*”表示为与CIA模型组相比有显著差异,P<0.05;“**”表示为与CIA模型组相比有极显著差异,P<0.01。
总之,以上对本发明具体实施方式的描述并不限制本发明,本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变或变形,只要不脱离本发明的精神,均应属于本发明所附权利要求的范围。
Claims (8)
1.一种海蛇提取物的制备方法,其特征在于,该制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮,水煎液离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在15℃~80℃下相对密度为1.05~1.20,放置,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮1~3次,每次加水5~30倍量、煎煮1 0分钟~2小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在15℃~80℃下相对密度为1.05~1.20,放置24小时以上,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮2~3次,每次加水10倍量、煎煮1小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为2000~8000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在15℃~80℃下相对密度为1.05~1.20,放置24小时以上,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
4.根据权利要求1至3任一项所述的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括下列步骤:
1)取海蛇干燥体,加水煎煮2次,每次加水1 0倍量、煎煮1小时,滤过,合并水煎液,离心滤过;
2)采用截留分子量为3000的有机膜过滤步骤1)得到的滤液,并将滤液浓缩至在70~80℃下相对密度为1.10,放置72小时,析出沉淀,过滤,取沉淀干燥,即得。
5.根据权利要求1至4任一项所述的制备方法,其特征在于,所述步骤2)中将滤液浓缩至在80℃下相对密度为1.10。
6.根据权利要求1至5任一项所述的制备方法制得的海蛇提取物。
7.一种用于预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物组合物,其特征在于,该药物组合物包含根据权利要求6所述的海蛇提取物。
8.根据权利要求6所述的海蛇提取物在制备预防和/或治疗类风湿性关节炎的药物中的用途。
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