CN105017442A - 人参多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种人参多糖的提取方法，包括以下步骤：1)将人参醇提，取滤渣水提，收集滤液备用；2)将滤液经乙醇沉淀，得沉淀；3)将沉淀洗涤后水溶，再次洗涤后水溶，过截留分子量为2万的中空纤维膜，收集第一次浓缩液，然后将第一次浓缩液过截留分子量为10万的中空纤维膜，分别收集第二次透过液和第二次浓缩液；将第二次浓缩液过截留分子量为100万的中空纤维膜，收集第三次浓缩液，将第三次浓缩液过截留分子量为180万的中空纤维膜，收集第四次透过液；合并第二次透过液和第四次透过液，离心，过滤，取滤液备用；5)往滤液活性炭脱色，过滤，取滤液喷雾干燥，即为人参多糖。本发明的人参多糖口服给药降血糖效果好。
Description
技术领域
本发明属于生物提取技术领域，具体涉及人参多糖的提取方法。
背景技术
人参是我国传统中药，对多种疾病都有疗效。近年来在治疗糖尿病方面也取得了良好的效果。人参多糖占人参总重的20％左右，是人参的主要活性成分之一，具有安全无毒的优点。已有文献报道，人参多糖能够通过腹腔注射降低高血糖小鼠的血糖含量。日本科技工作者们先后从日本、朝鲜和中国人参中分离出21种人参多糖，这些中性人参多糖以30mg/kg剂量通过腹腔注射途径，能够显著降低糖尿病小鼠的空腹血糖含量。杨明等人证实在腹腔或皮下注射时，人参果胶需要在较高的浓度时(50～200mg/kg)，才具有降糖效果。目前，人参多糖降血糖实验模型全部采用的是腹腔注射给药途径，口服给药途径将显著降低降糖效果。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种人参多糖的提取方法，该方法得到的人参多糖口服给药时仍能保持较好的生理活性，降血糖效率高。
本发明提供的技术方案是人参多糖的提取方法，包括以下步骤：
人参多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)将人参破碎，用6～12倍重量80～95v％乙醇回流提取2～3次，每次回流2～3h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6～12倍重量的水回流提取2～3次，每次提取2～3h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1～1.3的浸膏，加入乙醇沉淀，离心得沉淀；
4)将沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2～4倍蒸馏水溶解，过截留分子量为2万的中空纤维膜，收集第一次浓缩液，然后将第一次浓缩液过截留分子量为10万的中空纤维膜，分别收集第二次透过液和第二次浓缩液；将第二次浓缩液过截留分子量为100万的中空纤维膜，收集第三次浓缩液，将第三次浓缩液过截留分子量为180万的中空纤维膜，收集第四次透过液；合并第二次透过液和第四次透过液，离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，过滤，取滤液喷雾干燥，即为人参多糖。
步骤3)中，往浸膏中加入90～95v％的乙醇至乙醇含量为80～85v％。
步骤5)中，活性炭的添加量为滤液重量的1～3％。
本发明四次过中空纤维膜，不仅可以最大程度地去除杂质和色素，以保证成品纯度和色泽，且提取得到的人参多糖分子量在2万～10万和100～180万之间，该区间范围内的人参多糖在消化系统内不易降解，其分子仍保持活性状态，依然能发挥原有的活性，通过口服给药时，其降血糖效果可与腹腔注射给药方式相媲美。
具体实施方式
以下具体实施例对本发明作进一步阐述，但不作为对本发明的限定。
实施例1
1)将人参破碎，用6倍重量80v％乙醇回流提取2次，每次回流2h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1的浸膏，往浸膏中加入90v％的乙醇至乙醇含量为80v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用2倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2倍蒸馏水溶解，过截留分子量为2万的中空纤维膜，收集第一次浓缩液，然后将第一次浓缩液过截留分子量为10万的中空纤维膜，分别收集第二次透过液和第二次浓缩液；将第二次浓缩液过截留分子量为100万的中空纤维膜，收集第三次浓缩液，将第三次浓缩液过截留分子量为180万的中空纤维膜，收集第四次透过液；合并第二次透过液和第四次透过液，离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，活性炭的添加量为滤液重量的1％，过滤，取滤液喷雾干燥，即为人参多糖。
对照组
1)将人参破碎，用6倍重量80v％乙醇回流提取2次，每次回流2h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1的浸膏，往浸膏中加入90v％的乙醇至乙醇含量为80v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用2倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2倍蒸馏水溶解，上D303型大孔树脂，用水洗脱至流出液无色透明，收集流出液，浓缩，喷雾干燥，即为人参多糖。
实施例2
1)将人参破碎，用12倍重量95v％乙醇回流提取3次，每次回流3h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用12倍重量的水回流提取3次，每次提取3h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.3的浸膏，往浸膏中加入95v％的乙醇至乙醇含量为85v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用4倍蒸馏水溶解，过截留分子量为2万的中空纤维膜，收集第一次浓缩液，然后将第一次浓缩液过截留分子量为10万的中空纤维膜，分别收集第二次透过液和第二次浓缩液；将第二次浓缩液过截留分子量为100万的中空纤维膜，收集第三次浓缩液，将第三次浓缩液过截留分子量为180万的中空纤维膜，收集第四次透过液；合并第二次透过液和第四次透过液，离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，活性炭的添加量为滤液重量的3％，过滤，取滤液喷雾干燥，即为人参多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量为91.8％，颜色为白色。
实施例3
1)将人参破碎，用10倍重量90v％乙醇回流提取2次，每次回流2h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用10倍重量的水回流提取2次，每次提取2h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.2的浸膏，往浸膏中加入95v％的乙醇至乙醇含量为85v％沉淀，离心，得到沉淀；
4)将沉淀依次用3倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用3倍蒸馏水溶解，过截留分子量为2万的中空纤维膜，收集第一次浓缩液，然后将第一次浓缩液过截留分子量为10万的中空纤维膜，分别收集第二次透过液和第二次浓缩液；将第二次浓缩液过截留分子量为100万的中空纤维膜，收集第三次浓缩液，将第三次浓缩液过截留分子量为180万的中空纤维膜，收集第四次透过液；合并第二次透过液和第四次透过液，离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，活性炭的添加量为滤液重量的2％，过滤，取滤液喷雾干燥，即为人参多糖。
为验证本发明的人参多糖口服降血糖的功效，现进行以下动物实验。
1、药剂配制：
柠檬酸缓冲液：2.1g柠檬酸溶于100ml双蒸水，配成A溶液。2.94g柠檬酸钠溶于100ml双蒸水，配成B溶液。按照1:1的比例将A溶液和B溶液配成pH 4.2～4.5，0.1mol/L的柠檬酸缓冲液。
链脲佐菌素溶液：将链脲佐菌素溶液溶于0.1mol/L的柠檬酸缓冲溶液中，配制成1％的链脲佐菌素溶液。
2、动物
雄性ICR小鼠，体重为20±2g，所有动物均在同样环境下饮水，摄食，保持自然光照。
3、人参多糖腹腔给药对小鼠血糖的影响
取60只小鼠，选取其中10只作为空白对照组，取剩下50只腹腔注射180mg/kg链脲佐菌素溶液，72h测血糖，血糖值大于15mmol/L即为造模成功并用于实验。将糖尿病小鼠，随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组、实验组1、实验组2、对照组1、对照组2。实验组给药实施例1的人参多糖，阳性对照组给药对照例1的人参多糖，具体给药剂量见下表1。除模型对照组外，所有小组小鼠每天腹腔注射给药1次，连续10d，末次给药后，空腹12h，自小鼠眼眶静脉丛取血，分离血清，用葡萄糖氧化酶法测定血清血糖值。
表1
注：与空白对照组相比，△p＜0.05，△△p＜0.01；与模型对照组相比，*p＜0.05，**p＜0.01。
由上表1可知，与空白对照组比较，各组糖尿病小鼠给药前血糖均大于15mmol/L，认为造模成功。与模型对照组相比，实验组和对照组均能显著降低小鼠血糖，且对于相同剂量的实验组和对照组而言，其降糖率相差不大，说明采用腹腔注射给药时，不同提取方法得到的人参多糖的降糖效果相差不大。
4、人参多糖口服给药对小鼠血糖的影响
取60只小鼠，选取其中10只作为空白对照组，取剩下50只腹腔注射180mg/kg链脲佐菌素溶液，72h测血糖，血糖值大于15mmol/L即为造模成功并用于实验。将糖尿病小鼠，随机分为5组，每组10只，分别为模型对照组、实验组1、实验组2、对照组1、对照组2。实验组给药实施例1的人参多糖，阳性对照组给药对照例1的人参多糖，具体给药剂量见下表2。除模型对照组外，所有小组小鼠每天灌胃给药1次，连续10d，末次给药后空腹12h，自小鼠眼眶静脉丛取血，分离血清，用葡萄糖氧化酶法测定血清血糖值。
表2
由表2可知，与空白对照组比较，各组糖尿病小鼠给药前血糖均大于15mmol/L，认为造模成功。与模型对照组比较，给药组均能显著降低糖尿病小鼠血糖，P＜0.05。实验组与对照组相比，实验组通过口服给药的降糖率远远超过对照组。不仅如此，由表1、表2可知，对照组通过口服给药的降糖率远远低于腹腔注射给药的降糖率，但是实验组不论采用口服给药还是腹腔注射给药，其降糖率均高于69％。
Claims (3)
1.人参多糖的提取方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)将人参破碎，用6～12倍重量80～95v％乙醇回流提取2～3次，每次回流2～3h，过滤，取滤渣备用；
2)将滤渣用6～12倍重量的水回流提取2～3次，每次提取2～3h，过滤，收集滤液备用；
3)将滤液浓缩至60℃下相对密度为1.1～1.3的浸膏，加入乙醇沉淀，离心得沉淀；
4)将沉淀依次用2～4倍重量的无水乙醇、丙酮分别洗涤，将洗涤后的沉淀用2～4倍蒸馏水溶解，过截留分子量为2万的中空纤维膜，收集第一次浓缩液，然后将第一次浓缩液过截留分子量为10万的中空纤维膜，分别收集第二次透过液和第二次浓缩液；将第二次浓缩液过截留分子量为100万的中空纤维膜，收集第三次浓缩液，将第三次浓缩液过截留分子量为180万的中空纤维膜，收集第四次透过液；合并第二次透过液和第四次透过液，离心，过滤，取滤液备用；
5)往滤液加入活性炭脱色，过滤，取滤液喷雾干燥，即为人参多糖。
2.根据权利要求1所述的人参多糖的提取方法，其特征在于：步骤3)中，往浸膏中加入90～95v％的乙醇至乙醇含量为80～85v％。
3.根据权利要求1所述的人参多糖的提取方法，其特征在于：步骤5)中，活性炭的添加量为滤液重量的1～3％。
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