JPH0267301A - 多糖類,その単離法および該多糖類を含む薬剤組成物 - Google Patents
多糖類,その単離法および該多糖類を含む薬剤組成物Info
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- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
(産業上の利用分野)
本発明は新規な多tw 類、特に薬用ニンジンまたはそ
の組織培養物より単離し得るカルサンA、カルサンB、
カルサンC,カルサンDおよびカルサンEと命名された
多*i、その単離法および該多tinを含み血糖降下作
用を有する薬剤組成物に関する。
の組織培養物より単離し得るカルサンA、カルサンB、
カルサンC,カルサンDおよびカルサンEと命名された
多*i、その単離法および該多tinを含み血糖降下作
用を有する薬剤組成物に関する。
(従来の技術)
薬用ニンジン、特にオタネニンジン(Panax紅y咀
吐C,A、 Meyer)は古くから生薬として使用さ
れ、抗疲労作用、抗ストレス作用、整腸作用。
吐C,A、 Meyer)は古くから生薬として使用さ
れ、抗疲労作用、抗ストレス作用、整腸作用。
利尿作用、新陳代謝亢進作用などが知られている。
糖尿病の治療薬としても利用されている。薬用ニンジン
の有効成分としては、ジンセッサイドが知られているが
1例えば、上記糖尿病に有効であろうと考えられる血糖
降下作用を示す成分については全く知られていない。
の有効成分としては、ジンセッサイドが知られているが
1例えば、上記糖尿病に有効であろうと考えられる血糖
降下作用を示す成分については全く知られていない。
(発明の目的)
本発明の目的は、薬用ニンジンに含有される血糖降下作
用を有する成分を見出すことである。本発明の他の目的
は、該成分の単離法を提供することにある0本発明のさ
らに他の目的は、該成分を有効成分として含有する薬剤
組成物を提供することにある。
用を有する成分を見出すことである。本発明の他の目的
は、該成分の単離法を提供することにある0本発明のさ
らに他の目的は、該成分を有効成分として含有する薬剤
組成物を提供することにある。
(発明の構成)
発明者らは、薬用ニンジンの水可溶画分に薬効成分が含
有されているという知見に基づいて研究を重ねた結果、
−群の新規な多糖類を見出した。
有されているという知見に基づいて研究を重ねた結果、
−群の新規な多糖類を見出した。
本発明の多tJ!類は血糖降下作用を有し1次の物理化
学的特性をもつカルサンA、カルサンB、カルサンC,
カルサンDおよびカルサンEでなる群から選択される少
なくとも一種であり、そのことにより上記目的が達成さ
れる: ■カルサンA 分子量(ゲル濾過法) ? 9.lX10’比旋光度
: 〔α) 、 −22,9゜(c O,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν11、(cm−’)
:3440.10701H核磁気共鳴(020)δ
: 4.91 (巾広い)5.16 (巾広い) 5.34 (巾広い) 元素分析値(%) : C,37,34。
学的特性をもつカルサンA、カルサンB、カルサンC,
カルサンDおよびカルサンEでなる群から選択される少
なくとも一種であり、そのことにより上記目的が達成さ
れる: ■カルサンA 分子量(ゲル濾過法) ? 9.lX10’比旋光度
: 〔α) 、 −22,9゜(c O,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν11、(cm−’)
:3440.10701H核磁気共鳴(020)δ
: 4.91 (巾広い)5.16 (巾広い) 5.34 (巾広い) 元素分析値(%) : C,37,34。
H,6,41;
N、 0.47
グラスフアイバー濾紙電気泳動度:
13.0cm (グルコース 11.ocm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度;1.3 cm
(ブロモフェノールブルー3.3cm)■カルサンB 分子量(ゲル濾過法) : 1.4 XIO’比旋光度
: 〔α:lD I7.6゜(CO,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)νいIIX(cIIl
−’) :3450.10601H核磁気共鳴δ:
4.96 (巾広い)5.21 (巾広い) 5.40 (巾広い) 元素分析値(%) j C,33,84。
リルアミドゲル(30%)電気泳動度;1.3 cm
(ブロモフェノールブルー3.3cm)■カルサンB 分子量(ゲル濾過法) : 1.4 XIO’比旋光度
: 〔α:lD I7.6゜(CO,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)νいIIX(cIIl
−’) :3450.10601H核磁気共鳴δ:
4.96 (巾広い)5.21 (巾広い) 5.40 (巾広い) 元素分析値(%) j C,33,84。
H,4,83;
N、 1.34
グラスファイバー濾紙電気泳動度:
16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(10%)電気泳動度:1.5 cta
(ブロモフェノールブルー3.9cm)■カルサンC 分子量(ゲル濾過法) : 5.6X10’比旋光
度:〔α〕ゎ+30.4゜ (CO,12,水) 赤外線吸収スペクトル(にBr)シ111.!(ca+
−’ ) : 3400.10501H核磁気共鳴δ
: 4.94 (巾広い)5.19 (巾広い) 5.36 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,75;H,5,90
; N、 2.09 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度:1.0cm (
ブロモフェノールブルー4.7cm)■カルサンD 分子量(ゲル濾過法) : 1.9X10’比旋光
度:〔α〕。+21.6゜ (CO,11,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν+aax(c+n−
’) :3400.1041’H核磁気共鳴δ:5.
12(巾広い)5.26 (巾広い) 元素分析値(%) : C,35,22:H,6,14
; N、 3.19 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3co+ (グルコース 14.5cm)ポリア
クリルアミドゲル(30%)電気泳動度:1.0cm
(ブロモフェノールブルー4.7cm)■カルサンE 分子量(ゲル濾過法) : 5.8X10’比旋光度:
〔α)o 2B、8゜ (CO,16,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)νIIIaX(cm−
’) :3450.10621H核磁気共鳴δ:5.
15(巾広い)5.35 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,59;H6,31
; N、 0.89 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 14.5cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度二0.5cm (
ブロモフェノールブルー3.4cm)。
リルアミドゲル(10%)電気泳動度:1.5 cta
(ブロモフェノールブルー3.9cm)■カルサンC 分子量(ゲル濾過法) : 5.6X10’比旋光
度:〔α〕ゎ+30.4゜ (CO,12,水) 赤外線吸収スペクトル(にBr)シ111.!(ca+
−’ ) : 3400.10501H核磁気共鳴δ
: 4.94 (巾広い)5.19 (巾広い) 5.36 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,75;H,5,90
; N、 2.09 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度:1.0cm (
ブロモフェノールブルー4.7cm)■カルサンD 分子量(ゲル濾過法) : 1.9X10’比旋光
度:〔α〕。+21.6゜ (CO,11,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν+aax(c+n−
’) :3400.1041’H核磁気共鳴δ:5.
12(巾広い)5.26 (巾広い) 元素分析値(%) : C,35,22:H,6,14
; N、 3.19 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3co+ (グルコース 14.5cm)ポリア
クリルアミドゲル(30%)電気泳動度:1.0cm
(ブロモフェノールブルー4.7cm)■カルサンE 分子量(ゲル濾過法) : 5.8X10’比旋光度:
〔α)o 2B、8゜ (CO,16,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)νIIIaX(cm−
’) :3450.10621H核磁気共鳴δ:5.
15(巾広い)5.35 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,59;H6,31
; N、 0.89 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 14.5cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度二0.5cm (
ブロモフェノールブルー3.4cm)。
本発明の多IJ!類の単離法はウコギ科に属する薬用ニ
ンジンの根部もしくは薬用ニンジンの組織培養物、また
はそれらの乾燥物を水および/または水性有機溶媒で抽
出する工程、および得られた抽出液を透析または限外濾
過に付して上記カルサンA、カルサンB、カルサンC,
カルサンDおよびカルサンEを含むカルサン混合物を得
る工程を包含し、そのことにより上記目的が達成される
。
ンジンの根部もしくは薬用ニンジンの組織培養物、また
はそれらの乾燥物を水および/または水性有機溶媒で抽
出する工程、および得られた抽出液を透析または限外濾
過に付して上記カルサンA、カルサンB、カルサンC,
カルサンDおよびカルサンEを含むカルサン混合物を得
る工程を包含し、そのことにより上記目的が達成される
。
本発明の薬剤組成物は、上記カルサンA、カルサンB、
カルサンC,カルサンDおよびカルサンEでなる群から
選択される少なくとも一種である多1!類を有効成分と
して含有し、血糖降下作用を有し、そのことにより上記
目的が達成される。
カルサンC,カルサンDおよびカルサンEでなる群から
選択される少なくとも一種である多1!類を有効成分と
して含有し、血糖降下作用を有し、そのことにより上記
目的が達成される。
本発明の多糖類は上記物理化学的特性を有する。
文献に記載されていない新規な化合物である。これらの
化合物は、ウコギ科に属する薬用ニンジンまたはその組
織培養物に含有される。薬用ニンジンとしては、オタネ
ニンジン(Panax uμ咀吐C。
化合物は、ウコギ科に属する薬用ニンジンまたはその組
織培養物に含有される。薬用ニンジンとしては、オタネ
ニンジン(Panax uμ咀吐C。
^0Meyer)、 )チバニンジン(Panax
Dμ匹国■C。
Dμ匹国■C。
^、 Meyer)、アメリカニンジン(ハユ■肋bl
旦国■すり、)、サンシチニンジン(Panax 匹
漫幻l但旺(Burk)F、 Il、 Chen) 、
および、ヒマラヤニンジン(Panaxseudo 1
nsen 5ubsp、 himalaicus
1lara)などが挙げられる。これらの薬用ニンジン
のうち、特にオタネニンジンが好適である。カルサンを
得るには、上記薬用ニンジンの根部もしくはその乾燥物
(例えば、白参、紅参などの漢方薬として提供される)
が用いられる。カルサンを薬用ニンジンの組織培養物か
ら得るときには、該組織培養物は。
旦国■すり、)、サンシチニンジン(Panax 匹
漫幻l但旺(Burk)F、 Il、 Chen) 、
および、ヒマラヤニンジン(Panaxseudo 1
nsen 5ubsp、 himalaicus
1lara)などが挙げられる。これらの薬用ニンジン
のうち、特にオタネニンジンが好適である。カルサンを
得るには、上記薬用ニンジンの根部もしくはその乾燥物
(例えば、白参、紅参などの漢方薬として提供される)
が用いられる。カルサンを薬用ニンジンの組織培養物か
ら得るときには、該組織培養物は。
通常の方法により調製される。例えば、上記薬用ニンジ
ンの組織の一部を、植物ホルモンを含む固体培地上で無
菌的に培養してカルスを発生させ。
ンの組織の一部を、植物ホルモンを含む固体培地上で無
菌的に培養してカルスを発生させ。
このカルスを液体もしくは固体培地上で培養することに
より調製される。
より調製される。
本発明のカルサン類は、上記薬用ニンジンまたはその組
織培養物から9例えば2次の方法により単離される。ま
ず、薬用ニンジンまたはその組織培養物を必要に応じて
乾燥する。必要に応じてこれを通常の脂溶性有機溶媒を
用いて脱脂した後。
織培養物から9例えば2次の方法により単離される。ま
ず、薬用ニンジンまたはその組織培養物を必要に応じて
乾燥する。必要に応じてこれを通常の脂溶性有機溶媒を
用いて脱脂した後。
水および/もしくは水性有機溶媒で抽出する。抽出は水
で充分行なえるが、抽出液の腐敗を防止し。
で充分行なえるが、抽出液の腐敗を防止し。
また抽出を促進するために水性有機溶媒を用いてもよい
。また両方で抽出してもよい。水性有機溶媒としてはメ
タノール、エタノールなどの低級アルコール、アセトン
、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルア
セトアミドなどの水溶性有機溶媒と水との混合溶液が用
いられる。その濃度は、原料の種類などによって異なる
々く、約1%の低濃度から約60%の濃度のものが用い
られる。
。また両方で抽出してもよい。水性有機溶媒としてはメ
タノール、エタノールなどの低級アルコール、アセトン
、アセトニトリル、ジメチルホルムアミド、ジメチルア
セトアミドなどの水溶性有機溶媒と水との混合溶液が用
いられる。その濃度は、原料の種類などによって異なる
々く、約1%の低濃度から約60%の濃度のものが用い
られる。
抽出時に加温したり、被抽出物である薬用ニンジンやそ
の組織培養物を粉砕すると抽出が促進されるため好まし
い。
の組織培養物を粉砕すると抽出が促進されるため好まし
い。
上記抽出液を透析もしくは限外濾過処理に付してカルサ
ン混合物が得られる。透析もしくは限外濾過に付す場合
は、上記抽出液をそのまま用いてもよ<、a縮したもの
を用いてもよい。このほか。
ン混合物が得られる。透析もしくは限外濾過に付す場合
は、上記抽出液をそのまま用いてもよ<、a縮したもの
を用いてもよい。このほか。
上記抽出液にメタノール、エタノールなどの水溶性有機
溶媒を加えて目的とするカルサン類を含有する沈澱物を
析出させた後、得られた沈澱物に水または上記の水性有
機溶媒を適量加えて希釈したものを用いてもよい。
溶媒を加えて目的とするカルサン類を含有する沈澱物を
析出させた後、得られた沈澱物に水または上記の水性有
機溶媒を適量加えて希釈したものを用いてもよい。
このようにして得られたカルサン混合物は9通常、カル
サンA、 B、 C,DおよびEをその合計量で少
なくとも60%以上含有する。カルサン含有量は80%
以上であることが望ましい。このようなカルサン混合物
はそれ自体、血糖降下剤として使用され得る。しかし、
さらにこの混合物を5例えば下記の分画処理に付して各
カルサン成分に単離して血糖降下剤として使用してもよ
い。
サンA、 B、 C,DおよびEをその合計量で少
なくとも60%以上含有する。カルサン含有量は80%
以上であることが望ましい。このようなカルサン混合物
はそれ自体、血糖降下剤として使用され得る。しかし、
さらにこの混合物を5例えば下記の分画処理に付して各
カルサン成分に単離して血糖降下剤として使用してもよ
い。
まず、上記カルサン混合物を陰イオン交換樹脂。
例えばDEAE−セファデックス(商品名)で処理して
、カルサンA、B、CおよびDを含有するフラクション
と、カルサンEを含有するフラクションとに分画する。
、カルサンA、B、CおよびDを含有するフラクション
と、カルサンEを含有するフラクションとに分画する。
このようにして得られたカルサンA、B、CおよびDを
含有するフラクションを次に分子量分画法に付す。この
分子量分画法としてはセファロース、セファクリル、セ
ファデックス、アガロースビーズ(いずれも商品名)な
どを用いるゲル濾過法;分画分子量1000〜10万の
限外濾過膜を用いる方法などが挙げられる。このように
分子量分画法により、カルサンAを含有するフラクショ
ン;およびカルサンB、CおよびDを含有するフラクシ
ョンとに分画される。カルサンB、CおよびDを含むフ
ラクションは陰イオン交換樹脂(例えば、 DEAD!
−セファデックス、 DEAEトヨパールを用いたクロ
マトグラフィー)で処理し、さらにセファデックス−6
50(商品名)を用いて精製され、カルサンB、カルサ
ンC,カルサンDがそれぞれ得られる。カルサンAを含
むフラクションおよびカルサンEを含有するフラクショ
ンはさらに陰イオン交換樹脂(例えば、 DI!AE−
セファデックス、 DEAE−)ヨパール)を用いた
クロマトグラフィーにより着装される。
含有するフラクションを次に分子量分画法に付す。この
分子量分画法としてはセファロース、セファクリル、セ
ファデックス、アガロースビーズ(いずれも商品名)な
どを用いるゲル濾過法;分画分子量1000〜10万の
限外濾過膜を用いる方法などが挙げられる。このように
分子量分画法により、カルサンAを含有するフラクショ
ン;およびカルサンB、CおよびDを含有するフラクシ
ョンとに分画される。カルサンB、CおよびDを含むフ
ラクションは陰イオン交換樹脂(例えば、 DEAD!
−セファデックス、 DEAEトヨパールを用いたクロ
マトグラフィー)で処理し、さらにセファデックス−6
50(商品名)を用いて精製され、カルサンB、カルサ
ンC,カルサンDがそれぞれ得られる。カルサンAを含
むフラクションおよびカルサンEを含有するフラクショ
ンはさらに陰イオン交換樹脂(例えば、 DI!AE−
セファデックス、 DEAE−)ヨパール)を用いた
クロマトグラフィーにより着装される。
上記のようにして得られた多t1!類であるカルサンA
、B、C,DおよびEは後述の実験例に示すように優れ
た血糖降下作用を有し、かつ副作用がほとんど認められ
ないことが判明した。従って。
、B、C,DおよびEは後述の実験例に示すように優れ
た血糖降下作用を有し、かつ副作用がほとんど認められ
ないことが判明した。従って。
本発明により、カルサンA、B、C,DおよびEの少な
くとも一種である多¥p!類を有効成分として含有し、
血糖降下作用を有する薬剤組成物が提供される。この薬
剤組成物の投与量は病状に応じて異なるが成人に対する
内服による投与の場合にはカルサン類(カルサンA、B
、C,DおよびEのうちの少なくとも一種)として1日
当り50〜500■、好ましくは100〜250■であ
る。この量のカルサン類を2〜3回に分けて投与するこ
とによって所期の効力を発揮することができる。このよ
うな薬剤組成物は内服薬としても注射剤としても投与が
可能である。内服薬の剤型としては1例えば。
くとも一種である多¥p!類を有効成分として含有し、
血糖降下作用を有する薬剤組成物が提供される。この薬
剤組成物の投与量は病状に応じて異なるが成人に対する
内服による投与の場合にはカルサン類(カルサンA、B
、C,DおよびEのうちの少なくとも一種)として1日
当り50〜500■、好ましくは100〜250■であ
る。この量のカルサン類を2〜3回に分けて投与するこ
とによって所期の効力を発揮することができる。このよ
うな薬剤組成物は内服薬としても注射剤としても投与が
可能である。内服薬の剤型としては1例えば。
散剤、舌下錠を含む錠剤、乳剤、カプセル剤、茶剤、顆
粒剤、液剤(流エキス剤、シロップ剤などを含む)があ
る、薬剤組成物はカルサン類のほかに9通常、固体もし
くは液体の賦形剤を含有する。
粒剤、液剤(流エキス剤、シロップ剤などを含む)があ
る、薬剤組成物はカルサン類のほかに9通常、固体もし
くは液体の賦形剤を含有する。
賦形剤としては、当該分野で公知のものが使用され、1
回の投与量に必要なカルサン類を含むように製剤化する
のが望ましい。散剤、その他の内服用粉末剤における賦
形剤としては、乳糖、澱粉。
回の投与量に必要なカルサン類を含むように製剤化する
のが望ましい。散剤、その他の内服用粉末剤における賦
形剤としては、乳糖、澱粉。
デキストリン、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、合
成および天然ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、
乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、
重炭酸ナトリウム、乾燥酵母などが挙げられる。この他
1通常の賦形剤を添加して調製した経皮吸収剤も本発明
の薬剤組成物に含まれる。
成および天然ケイ酸アルミニウム、酸化マグネシウム、
乾燥水酸化アルミニウム、ステアリン酸マグネシウム、
重炭酸ナトリウム、乾燥酵母などが挙げられる。この他
1通常の賦形剤を添加して調製した経皮吸収剤も本発明
の薬剤組成物に含まれる。
(実施例)
次に本発明の実施例について述べる。
1隻糎
(八)カルサンの単離
薬用ニンジンの根部から得た組織の一部を、植物ホルモ
ンを含む寒天培地で無菌的に培養してカルスを発生させ
、このカルスの液体培養を行なった。得られた粒状のカ
ルス(組織培養物)を乾燥し、 20kgの乾燥カルス
を得た。この乾燥カルスにメタノール401を加えて、
1日毎に1回ずつ1合計3回の抽出を行なった。このよ
うにして脱脂した乾燥カルスに水401を加え、3回抽
出を行なった。抽出液を合併し、これを減圧濃縮して.
H.5kgの抽出物を得た。この抽出物を水1iに溶解
させ、エタノール60fを加えて沈澱物を析出させた。
ンを含む寒天培地で無菌的に培養してカルスを発生させ
、このカルスの液体培養を行なった。得られた粒状のカ
ルス(組織培養物)を乾燥し、 20kgの乾燥カルス
を得た。この乾燥カルスにメタノール401を加えて、
1日毎に1回ずつ1合計3回の抽出を行なった。このよ
うにして脱脂した乾燥カルスに水401を加え、3回抽
出を行なった。抽出液を合併し、これを減圧濃縮して.
H.5kgの抽出物を得た。この抽出物を水1iに溶解
させ、エタノール60fを加えて沈澱物を析出させた。
沈澱物(610g)および上清部(870g)のうち、
沈澱物を採取し、これを水に溶解させた。次に、これを
セルロースチューブ(Visking、 Co;36/
32 )を用いて7日間透析を行った。この透析内液6
0gをDIEAE −トヨパール650Mのカラム(C
I型;2.2cm内径×40cn+)にかけ、まず水で
溶出し2次いでIMのNaC1水溶液で溶出した。この
ようにしてBoo mgの固形分を含むフラクションC
−1および2.5gの固形分を含むフラクションC−2
を得た。
沈澱物を採取し、これを水に溶解させた。次に、これを
セルロースチューブ(Visking、 Co;36/
32 )を用いて7日間透析を行った。この透析内液6
0gをDIEAE −トヨパール650Mのカラム(C
I型;2.2cm内径×40cn+)にかけ、まず水で
溶出し2次いでIMのNaC1水溶液で溶出した。この
ようにしてBoo mgの固形分を含むフラクションC
−1および2.5gの固形分を含むフラクションC−2
を得た。
フラクションC−1をセファクリルS−200カラム(
4,0cm内径X90cm)にかけ、(0,1Mトリス
−塩酸緩衝液(pH7,0) −0,5M食塩)で溶出
を行なった。このようにしてフラクションC−3とC−
4とを得た。フラクションC−3をDBAI!−トヨパ
ール650Mカラム(O11型、 2.2 cm内径X
40cm ; 0.05Mトリス−塩酸緩衝液(pH
8,0) −0〜1M食塩)にかけ、白色粉末を得た。
4,0cm内径X90cm)にかけ、(0,1Mトリス
−塩酸緩衝液(pH7,0) −0,5M食塩)で溶出
を行なった。このようにしてフラクションC−3とC−
4とを得た。フラクションC−3をDBAI!−トヨパ
ール650Mカラム(O11型、 2.2 cm内径X
40cm ; 0.05Mトリス−塩酸緩衝液(pH
8,0) −0〜1M食塩)にかけ、白色粉末を得た。
これをセファデックスG−10(2,2cm内径X80
c+n)で脱塩し、ゲル濾過および電気泳動により単一
物質であることを確認した。この白色粉末の物理化学的
特性を調べたところ次に示す測定値が得られ、これは、
カルサンAであることが判明した: 分子量(ゲル濾過法) : 9.lX103比旋光度
: 〔α) D−22,9゜ (c O,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)νlImX(cm−’
) : 3440.10701H核磁気共鳴(Dz
O)δ: 4.91 (巾広い)5.16 (巾広い) 5.34 (巾広い) 元素分析値(%) : C,37,34。
c+n)で脱塩し、ゲル濾過および電気泳動により単一
物質であることを確認した。この白色粉末の物理化学的
特性を調べたところ次に示す測定値が得られ、これは、
カルサンAであることが判明した: 分子量(ゲル濾過法) : 9.lX103比旋光度
: 〔α) D−22,9゜ (c O,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)νlImX(cm−’
) : 3440.10701H核磁気共鳴(Dz
O)δ: 4.91 (巾広い)5.16 (巾広い) 5.34 (巾広い) 元素分析値(%) : C,37,34。
H,6,41:
N、 0.47
グラスフアイバー濾紙電気泳動度:
13.0cm (グルコース 11.ocm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度=1.3cm (
ブロモフェノールブルー3.3 cm)。
リルアミドゲル(30%)電気泳動度=1.3cm (
ブロモフェノールブルー3.3 cm)。
次に、フラクションC−4をDEAE−)コパール65
0Mカラム(011型;2.2cm内径X45cm;
0.05M )リス−塩酸緩衝液(pH8,0) −0
〜IM食塩)にかけ。
0Mカラム(011型;2.2cm内径X45cm;
0.05M )リス−塩酸緩衝液(pH8,0) −0
〜IM食塩)にかけ。
さらにセファデックスG−50カラム(4,Oc+n内
径×60cm; 0.I M )リス−塩酸緩衝液(p
if 7.0) −0,5M食塩)にかけた。溶出時間
の相違により、3種の白色粉末(1)、(■)および(
III)を得た。
径×60cm; 0.I M )リス−塩酸緩衝液(p
if 7.0) −0,5M食塩)にかけた。溶出時間
の相違により、3種の白色粉末(1)、(■)および(
III)を得た。
これらをそれぞれセファデックスG−10(2,2cm
内径X80c+++)カラムにかけて脱塩し、ゲル濾過
および電気泳動により単一物質であることを確認した。
内径X80c+++)カラムにかけて脱塩し、ゲル濾過
および電気泳動により単一物質であることを確認した。
それぞれの物理化学的特性を調べたところ次に示す測定
値が得られ、(1)はカルサンB、(II)はカルサン
C2そして(III)はカルサンDであることが判明し
た: (1)の物理化学的特性 分子量(ゲル濾過法):1.4 xio’比旋光度:
(α) 、 −17,6゜(CO,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)シ7.8(ell−’
) :3450.1060LH核磁気共鳴δ: 4.
96 (巾広い)5.21 (巾広い) 5.40 (巾広い) 元素分析値(%) : C,33,84:H,4,8
3; N、 1.34 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(10%)電気泳動度:1.5cm(ブ
ロモフェノールブルー3.9cm)(II)の物理化学
的特性 分子M(ゲル濾過法) : 5.6X10’比旋光度
: 〔α) o + 30.4゜(CO,12,水) 赤外線吸収スペクトル(Kllr)シ、、、I(cm−
’) :3400.1050’H核磁気共鳴δ: 4
.94 (巾広い)5.19(巾広い) 5.36 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,75;H,5,90
; N、 2.09 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度:1、Qcm(ブ
ロモフェノールブルー4.7cm)(IIl)の物理的
科学的特性 分子li(ゲル濾過法) : 1.9X103比旋
光度: 〔α〕。+21.6゜ (CO,11,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν□や(c+++−’
) : 3400.10411H核磁気共鳴δ:5
.12(巾広い)5.26(111広い) 元素分析値(%) : C,35,22:H,6,14
; N、 3.19 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度:1、Qcm (
ブロモフェノールブルー4.7c+a)。
値が得られ、(1)はカルサンB、(II)はカルサン
C2そして(III)はカルサンDであることが判明し
た: (1)の物理化学的特性 分子量(ゲル濾過法):1.4 xio’比旋光度:
(α) 、 −17,6゜(CO,14,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)シ7.8(ell−’
) :3450.1060LH核磁気共鳴δ: 4.
96 (巾広い)5.21 (巾広い) 5.40 (巾広い) 元素分析値(%) : C,33,84:H,4,8
3; N、 1.34 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(10%)電気泳動度:1.5cm(ブ
ロモフェノールブルー3.9cm)(II)の物理化学
的特性 分子M(ゲル濾過法) : 5.6X10’比旋光度
: 〔α) o + 30.4゜(CO,12,水) 赤外線吸収スペクトル(Kllr)シ、、、I(cm−
’) :3400.1050’H核磁気共鳴δ: 4
.94 (巾広い)5.19(巾広い) 5.36 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,75;H,5,90
; N、 2.09 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度:1、Qcm(ブ
ロモフェノールブルー4.7cm)(IIl)の物理的
科学的特性 分子li(ゲル濾過法) : 1.9X103比旋
光度: 〔α〕。+21.6゜ (CO,11,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν□や(c+++−’
) : 3400.10411H核磁気共鳴δ:5
.12(巾広い)5.26(111広い) 元素分析値(%) : C,35,22:H,6,14
; N、 3.19 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度:1、Qcm (
ブロモフェノールブルー4.7c+a)。
次に、フラクションC−2をセファクリルS−200カ
ラム(4,0cm内径X90cm ; 0.I M ト
リス−塩酸緩衝液(pH7,0) −0,5M食塩)に
かけた後、さらにDEAE−)コパール650Mカラム
(OH型;2.2cm内径X40cm ; 0.05M
トリス−塩酸緩衝液(pH8,0)−0〜1M食塩)
にかけ、白色粉末を得た。これをセファデックスG−1
0(2,2cm内径X80cm)で脱塩し。
ラム(4,0cm内径X90cm ; 0.I M ト
リス−塩酸緩衝液(pH7,0) −0,5M食塩)に
かけた後、さらにDEAE−)コパール650Mカラム
(OH型;2.2cm内径X40cm ; 0.05M
トリス−塩酸緩衝液(pH8,0)−0〜1M食塩)
にかけ、白色粉末を得た。これをセファデックスG−1
0(2,2cm内径X80cm)で脱塩し。
ゲル濾過および電気泳動により単一物質であることを確
認した。この白色粉末の物理化学的特性を調べたところ
次に示す測定値が得られ、これはカルサンEであること
が判明した: 分子量(ゲル濾過法) : 5.8X10’比旋光度:
〔α) 、 −28,8゜(CO,16,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν□8(cm−’ )
: 3450.10621H核磁気共鳴δ:5.1
5(巾広い)5.35 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,59iH,6,31
; N、 0.89 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 14.5cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度=0.5 cta
(ブロモフェノールブルー3.4cm)。
認した。この白色粉末の物理化学的特性を調べたところ
次に示す測定値が得られ、これはカルサンEであること
が判明した: 分子量(ゲル濾過法) : 5.8X10’比旋光度:
〔α) 、 −28,8゜(CO,16,水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν□8(cm−’ )
: 3450.10621H核磁気共鳴δ:5.1
5(巾広い)5.35 (巾広い) 元素分析値(%) : C,36,59iH,6,31
; N、 0.89 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 14.5cm (グルコース 14.5cm)ポリアク
リルアミドゲル(30%)電気泳動度=0.5 cta
(ブロモフェノールブルー3.4cm)。
上記の各データのうち分子量、グラスファイバー濾紙電
気泳動度およびポリアクリルアミドゲル電気泳動度の測
定は次のようにして行った。なお元素分析値のC,H,
N以外の成分は0である。
気泳動度およびポリアクリルアミドゲル電気泳動度の測
定は次のようにして行った。なお元素分析値のC,H,
N以外の成分は0である。
l)分子量
各カルサンはセファクリルS−200または500を用
いてゲル濾過を行ってそれぞれの保持容量を求め、デキ
ストランTシリーズを用いて作成した標準曲線から分子
量を算出した。
いてゲル濾過を行ってそれぞれの保持容量を求め、デキ
ストランTシリーズを用いて作成した標準曲線から分子
量を算出した。
分子量 測定に使ったセフlクリル
9、lX103S −200
1,4X10’ S −2005,6X10’
S −2001,9X 10’ S
−2005,8X10’ S −500カル
サンA カルサンB カルサンC カルサンD カルサンE 2)グラスファイバー濾祇電気泳動度 グラスファイバー濾紙(ワットマンGF/C。
S −2001,9X 10’ S
−2005,8X10’ S −500カル
サンA カルサンB カルサンC カルサンD カルサンE 2)グラスファイバー濾祇電気泳動度 グラスファイバー濾紙(ワットマンGF/C。
15 X 40cm )を用いて移動距離を測定した。
条件:アルカリ性ホウ酸緩衝液pH9,3,450V。
2時間:発色は、p−アニシジン硫酸溶液を噴霧後。
100°Cにて10分間加熱。
3)ポリアクリルアミドゲル電気泳動度10%または3
0%ポリアクリルアミドゲルを充填したカラム(5mm
内径X7cm)を用い、移動距離を測定した。
0%ポリアクリルアミドゲルを充填したカラム(5mm
内径X7cm)を用い、移動距離を測定した。
条件ニホウ酸緩衝液pH9,3、2mA、 2時間;
発色はチモール硫酸法。
発色はチモール硫酸法。
(B)カルサンの糖含量およびペプチド含量の測定上記
カルサンA、 B、 C,DおよびEの糖含有量および
ペプチド含量について調べた。
カルサンA、 B、 C,DおよびEの糖含有量および
ペプチド含量について調べた。
カルサンA、B、C,DおよびEのそれぞれに2N硫酸
を加え、100″Cで6時間加熱し、加水分解を行った
。これを水中でナトリウムボロヒドリドを用いて還元し
、さらにピリジン中無水酢酸でアセチル化した。3%E
CN55−M/Gaschrom Qカラム(100−
200メツシユ、内径3mm、長さ、2m)を用い、1
90°Cで窒素(60mJRmin、)によりガスクロ
マトグラフィーを行い、以下の中性糖の存在を確認した
。()内は存在モル比を示す。
を加え、100″Cで6時間加熱し、加水分解を行った
。これを水中でナトリウムボロヒドリドを用いて還元し
、さらにピリジン中無水酢酸でアセチル化した。3%E
CN55−M/Gaschrom Qカラム(100−
200メツシユ、内径3mm、長さ、2m)を用い、1
90°Cで窒素(60mJRmin、)によりガスクロ
マトグラフィーを行い、以下の中性糖の存在を確認した
。()内は存在モル比を示す。
カルサンA:ラムノース、アラビノース、キシロース、
ガラクトース(0,2:0.8 :1.4 :1.
O) カルサンB:アラビノース、キシロース(1,1:1.
0)カルサンC:アラビノース、ガラクトース(0,3
:1.0)カルサンD:アラビノース、キシロース、マ
ンノース、ガラクトース、グルコース (1,3:0.3 :0.4 :1.0 :t、
o)カルサンE:ラムノース、アラビノース、キシロー
ス、ガラクトース(0,1:0.7 :0.1:1.
0) 別に中性糖含量をフェノール硫酸法、クロモトロブ酸硫
酸法およびアンスロン硫酸法によって測定したところ、
以下の結果を得た。
ガラクトース(0,2:0.8 :1.4 :1.
O) カルサンB:アラビノース、キシロース(1,1:1.
0)カルサンC:アラビノース、ガラクトース(0,3
:1.0)カルサンD:アラビノース、キシロース、マ
ンノース、ガラクトース、グルコース (1,3:0.3 :0.4 :1.0 :t、
o)カルサンE:ラムノース、アラビノース、キシロー
ス、ガラクトース(0,1:0.7 :0.1:1.
0) 別に中性糖含量をフェノール硫酸法、クロモトロブ酸硫
酸法およびアンスロン硫酸法によって測定したところ、
以下の結果を得た。
(以下余白)
酸性糖含量を改良カルバゾール硫酸法によって測定した
ところ、以下の結果を得た。
ところ、以下の結果を得た。
次に、ペプチド含量をローリ−法によって測定したとこ
ろ以下の結果を得た。
ろ以下の結果を得た。
(C)カルサンによる血糖降下試験
13LLL(正常マウスの血糖降下試験)血糖値140
−170mg/a、重量25〜30gの正常dd系マウ
スの5匹を一群とした。これらの群ごとにこの発明のカ
ルサン類を第1表に示す投与量で腹腔的投与し、7時間
後および24時間後の相対血糖値(コントロールに対す
る%)を測定した。その結果を第1表に示す。第1表に
おける透析内液とは(A)項で得られた組織培養物の透
析内液を示す。
−170mg/a、重量25〜30gの正常dd系マウ
スの5匹を一群とした。これらの群ごとにこの発明のカ
ルサン類を第1表に示す投与量で腹腔的投与し、7時間
後および24時間後の相対血糖値(コントロールに対す
る%)を測定した。その結果を第1表に示す。第1表に
おける透析内液とは(A)項で得られた組織培養物の透
析内液を示す。
その結果、カルサン類投与群はコントロール群よりも相
対血1!類が低いことは明らかである。
対血1!類が低いことは明らかである。
(以下余白)
第1表
実験1(アロキサン糖尿マウスの血糖降下試験)実験例
1で用いたのと同様の正常dd系マウスにアロキサン3
5■/kgを静注した。5日間経過後の血糖値は250
〜450 mg/dであり、これをアロキサン糖尿マウ
ス群とした。これに対しカルサン類の主成分であるカル
サンEを第2表に示す投与量で腹腔内投与し、一定時間
後の相対血糖値(コン薬として広く利用されうる。
1で用いたのと同様の正常dd系マウスにアロキサン3
5■/kgを静注した。5日間経過後の血糖値は250
〜450 mg/dであり、これをアロキサン糖尿マウ
ス群とした。これに対しカルサン類の主成分であるカル
サンEを第2表に示す投与量で腹腔内投与し、一定時間
後の相対血糖値(コン薬として広く利用されうる。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、血糖降下作用を有し、次の物理化学的特性をもつカ
ルサンA、カルサンB、カルサンC、カルサンDおよび
カルサンEでなる群から選択される少なくとも一種であ
る多糖類: [1]カルサンA 分子量(ゲル濾過法):9.1×10^3 比旋光度:〔α〕_D−22.9゜ (c0.14、水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν_m_a_x (cm^−^1):3440、1070 ^1H核磁気共鳴(D_2O)δ:4.91(巾広い) 5.16(巾広い) 5.34(巾広い) 元素分析値(%):C、37.34; H、6.41; N、0.47 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 13.0cm(グルコース11.0cm) ポリアクリルアミドゲル(30%)電気泳動度: 1.3cm(ブロモフェノールブルー3.3cm) [2]カルサンB 分子量(ゲル濾過法):1.4×10^4 比旋光度:〔α〕_D−17.6゜ (C0.14、水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν_m_a_x (cm^−^1):3450、1060 ^1H核磁気共鳴δ:4.96(巾広い) 5.21(巾広い) 5.40(巾広い) 元素分析値(%):C、33.84; H、4.83; N、1.34 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm(グルコース14.5cm) ポリアクリルアミドゲル(10%)電気泳動度: 1.5cm(ブロモフェノールブルー3.9cm) [3]カルサンC 分子量(ゲル濾過法):5.6×10^3 比旋光度:〔α〕_D+30.4゜ (C0.12、水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν_m_a_x (cm^−^1):3400、1050 ^1H核磁気共鳴δ:4.94(巾広い) 5.19(巾広い) 5.36(巾広い) 元素分析値(%):C、36.75; H、5.90; N、2.09 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm(グルコース14.5cm) ポリアクリルアミドゲル(30%)電気泳動度: 1.0cm(ブロモフェノールブルー4.7cm) [4]カルサンD 分子量(ゲル濾過法):1.9×10^3 比旋光度:〔α〕_D+21.6゜ (C0.11、水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν_m_a_x (cm^−^1):3400、1041 ^1H核磁気共鳴δ:5.12(巾広い) 5.26(巾広い) 元素分析値(%):C、35.22; H、6.14; N、3.19 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 16.3cm(グルコース14.5cm) ポリアクリルアミドゲル(30%)電気泳動度: 1.0cm(ブロモフェノールブルー4.7cm) [5]カルサンE 分子量(ゲル濾過法):5.8×10^5 比旋光度:〔α〕_D−28.8゜ (C0.16、水) 赤外線吸収スペクトル(KBr)ν_m_a_x (cm^−^1):3450、1062 ^1H核磁気共鳴δ:5.15(巾広い) 5.35(巾広い) 元素分析値(%):C、36.59; H、6.31; N、0.89 グラスファイバー濾紙電気泳動度: 14.5cm(グルコース14.5cm) ポリアクリルアミドゲル(30%)電気泳動度: 0.5cm(ブロモフェノールブルー3.4cm)。 2、ウコギ科に属する薬用ニンジンの根部もしくは薬用
ニンジンの組織培養物、またはそれらの乾燥物を水およ
び/または水性有機溶媒で抽出する工程、および 得られた抽出液を透析または限外濾過に付して特許請求
の範囲第1項に記載のカルサンA、カルサンB、カルサ
ンC、カルサンDおよびカルサンEを含むカルサン混合
物を得る工程、 を包含する多糖類の単離法。 3、前記カルサン混合物を分画処理に付して前記カルサ
ンA、カルサンB、カルサンC、カルサンDおよびカル
サンEをそれぞれ単離する工程をさらに包含する特許請
求の範囲第2項に記載の単離法。 4、前記薬用ニンジンが、オタネニンジン(¥Pana
x¥ ¥ginseng¥C.A.Meyer)、トチ
バニンジン(¥Panax¥ ¥japonicus¥
C.A.Meyer)、アメリカニンジン(¥Pana
x¥ ¥uinquefolium¥L.)、サンシチ
ニンジン(¥Panax¥ ¥notoginseng
¥(Burk)F.H.Chen)、およびヒマラヤニ
ンジン(¥Panax¥ ¥pseudoginsen
g¥ subsp.himalaicusHara)で
なる群から選択される特許請求の範囲第2項に記載の単
離法。 5、前記抽出液を濃縮し、もしくは該抽出液に水溶性有
機溶媒を加えて析出した沈澱物を得、これら濃縮液もし
くは沈澱物を水または水性有機溶媒に溶解させた後、透
析もしくは限外濾過に付す工程を包含する、特許請求の
範囲第2項に記載の単離法。 6、前記水性有機溶媒が低級脂肪族アルコール、アセト
ン、アセトニトリル、ジメチルホルムアミドおよびジメ
チルアセトアミドでなる群から選択される少なくとも一
種を含有する水溶液である特許請求の範囲第2項に記載
の単離法。 7、前記分画処理が分子量分画処理とイオン交換樹脂処
理とで行われる特許請求の範囲第2項に記載の単離法。 8、特許請求の範囲第1項に記載のカルサンA、カルサ
ンB、カルサンC、カルサンDおよびカルサンEでなる
群から選択される少なくとも一種である多糖類を有効成
分として含有し、血糖降下作用を有する薬剤組成物。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63219398A JP2602295B2 (ja) | 1988-09-01 | 1988-09-01 | 多糖類,その単離法および該多糖類を含む薬剤組成物 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP63219398A JP2602295B2 (ja) | 1988-09-01 | 1988-09-01 | 多糖類,その単離法および該多糖類を含む薬剤組成物 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0267301A true JPH0267301A (ja) | 1990-03-07 |
JP2602295B2 JP2602295B2 (ja) | 1997-04-23 |
Family
ID=16734788
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP63219398A Expired - Lifetime JP2602295B2 (ja) | 1988-09-01 | 1988-09-01 | 多糖類,その単離法および該多糖類を含む薬剤組成物 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP2602295B2 (ja) |
Cited By (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR19990068441A (ko) * | 1999-05-20 | 1999-09-06 | 이승준 | 인삼으로부터다당체를추출정제하는방법 |
WO2000050054A1 (en) * | 1999-02-25 | 2000-08-31 | Cv Technologies Inc. | Treatment of autoimmune diseases with american ginseng extract |
CN1057776C (zh) * | 1997-06-27 | 2000-10-25 | 吉林大学 | 人参、西洋参多糖皂甙联合提取工艺 |
JP2003081856A (ja) * | 2001-09-10 | 2003-03-19 | Tadashi Goino | 抗高脂血症組成物及びその製造方法 |
KR100773136B1 (ko) * | 2007-05-30 | 2007-11-05 | 주식회사 코인텍 | 다당체 함량이 우수한 수용성 인삼다당체 추출분말 |
CN105017442A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-11-04 | 桂林茗兴生物科技有限公司 | 人参多糖的提取方法 |
-
1988
- 1988-09-01 JP JP63219398A patent/JP2602295B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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CN1057776C (zh) * | 1997-06-27 | 2000-10-25 | 吉林大学 | 人参、西洋参多糖皂甙联合提取工艺 |
WO2000050054A1 (en) * | 1999-02-25 | 2000-08-31 | Cv Technologies Inc. | Treatment of autoimmune diseases with american ginseng extract |
US8039027B1 (en) | 1999-02-25 | 2011-10-18 | Fx Life Sciences Ag | Treatment of autoimmune diseases with American ginseng extract |
KR19990068441A (ko) * | 1999-05-20 | 1999-09-06 | 이승준 | 인삼으로부터다당체를추출정제하는방법 |
JP2003081856A (ja) * | 2001-09-10 | 2003-03-19 | Tadashi Goino | 抗高脂血症組成物及びその製造方法 |
KR100773136B1 (ko) * | 2007-05-30 | 2007-11-05 | 주식회사 코인텍 | 다당체 함량이 우수한 수용성 인삼다당체 추출분말 |
CN105017442A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-11-04 | 桂林茗兴生物科技有限公司 | 人参多糖的提取方法 |
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