JPH04288019A

JPH04288019A - ギンクゴ・ビロバ葉の抽出物および用途

Info

Publication number: JPH04288019A
Application number: JP3249122A
Authority: JP
Inventors: Klaus-Peter Schwabe; クラウス−ペーター・シュバーベ
Original assignee: Dr Willmar Schwabe GmbH and Co KG
Current assignee: Dr Willmar Schwabe GmbH and Co KG
Priority date: 1990-09-28
Filing date: 1991-09-27
Publication date: 1992-10-13
Anticipated expiration: 2010-08-16
Also published as: CA2052392C; DE69109426D1; EP0477968B1; JPH0776177B2; CA2052392A1; DE69109426T2; DE4030758A1; ATE121941T1; MX9101316A; EP0477968A1; KR920006001A; US5512286A; ES2077130T3; KR0154984B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】この発明は、血清沈澱および／ま
たは粘血属性をもつ成分を含まないギンクゴ・ビロバ葉
（Ｇｉｎｋｇｏ　　ｂｉｌｏｂａ）からの抽出物に関す
る。この発明は特に静脈注射または注入のためのギンク
ゴ・ビロバ葉からの抽出物、および抽出物を含有するア
ンプル薬剤の製造方法に関するものである。

【０００２】この発明の抽出物は、適用を妨げる血清沈
澱および／または血球凝集特性をもつ成分を含まないの
で、静脈注射または注入などの静脈投与用の医薬の製造
に、特に適している。従って、この発明はまた、静脈投
与向けのこの発明の抽出物を含むアンプル剤に関する。

【０００３】

【従来の技術・発明が解決しようとする課題】ＤＥ−Ｂ
−２１１７４２９は、ギンクゴ・ビロバ葉からの有効成
分混合物の製造方法と、例として３．５ｍｇ／ｍｌの有
効成分の濃度のこの混合物から得た注射または注入製剤
を記載している。

【０００４】アレルギー反応の危険性をもつ成分を抽出
物から分離することを目的とする、この方法をさらに具
体化したものが、公開されていない特許出願番号ｐ３９
４００９２．１およびＰ３９４００９１．３に記載され
ている。

【０００５】ＤＥ−Ｂ−２１１７４２９、上記の特許出
願番号Ｐ３９４００９２．１およびＰ３９４００９１．
３またはもう１つの公知の方法に従って製造された、よ
り高い有効成分の含量の混合物をもつ注射液の場合、沈
澱属性の試験で、試験媒体中の濃度２５ｍｇ／ｍｌ以上
で沈澱の線が観られる。

【０００６】さらに、上記のギンクゴ・ビロバの抽出物
は、静脈投与用の医薬としての使用の障壁となる血球凝
集特性を１０ｍｇ／ｍｌ以下の濃度で既にもつ。

【０００７】それゆえこの発明の目的は、フラボン配糖
体、葉の中に元から存在するギンクゴリドおよびビロバ
リドのほとんどを含有し、実質的に血清沈澱および／ま
たは血球凝集特性を示さないギンクゴ・ビロバ葉からの
抽出物を提供することである。

【０００８】さらにこの発明の目的は、医薬的および臨
床的に望ましい効果をもつ有効成分を含み、且つ血清沈
澱および／または血球凝集特性をもつ成分を含まない、
ギンクゴ・ビロバ葉からの上記の抽出物の製法を提供す
ることである。

【０００９】最後に、この発明の目的は、上記ギンクゴ
・ビロバの抽出物を含み、その適用が血清沈澱および／
または血球凝集特性をもつ成分によって起る副作用の危
険性を示さない静脈注射または注入用の医薬製剤、特に
アンプル薬剤を提供するものである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】従って、この発明は、実
質的に血清沈澱および血球凝集特性をもつ成分を含まな
い、請求項１から５記載のギンクゴ・ビロバ葉からの抽
出物に関するものである。

【００１１】さらに、この発明は、ギンクゴ・ビロバの
葉を、葉の成分を含む抽出物を得るために、それ自体公
知の方法で抽出し、そのさい、抽出過程またはその後、
クロマトグラフィー処理を架橋ポリビニルピロリドンま
たはポリアミド上で実施する、請求項６から１２のいず
れか１項記載の上記ギンクゴ・ビロバ抽出物の製造方法
に関するものである。

【００１２】ギンクゴ・ビロバ葉からの成分を得る方法
は、ＤＥ−Ｂ−２１１７４２９およびドイツ特許出願番
号Ｐ３９４００９１．３およびＰ３９４００９２．１に
記載されている。バッチ法によるＤＥ−Ｂ−２１１７４
２９の実施例３によるポリアミド（商標ナイロン−６）
粉末による処理は、望ましくない重合ポリフェノール化
合物を除去するのに役立ち、本質的に血清沈澱および／
または血球凝集特性をもつ成分を含まないギンクゴ・ビ
ロバ葉からのこの発明の抽出物の製造をさせない。

【００１３】ＥＰ−Ａ−８６３１５は、バッチ法による
エタノールー水性溶液中のポリビニルピロリドンを使っ
た、重合ポリフェノール化合物の含量を減らす方法を記
載している。この発明に記載されている血清沈澱および
血球凝集作用を持つ抽出成分の除去は、この方法によっ
ては達成できない。

【００１４】この発明のクロマトグラフィー処理は、架
橋ポリビニルピロリドンまたはポリアミドで実施される
が、架橋ポリビニルピロリドンが好ましい。この発明で
使用される溶離液のうち、水とＣ３−４ケトンの混合物
が好ましい。

【００１５】特に好ましいのは、水とアセトンの割合が
１０：９０から６０：４０の混合物、特に２０：８０か
ら５０：５０の割合の混合物である。

【００１６】最後に、この発明は、特にアンプル剤の形
での、請求項１３から１５のいずれか１項記載の医薬組
成物に関するものである。好ましい薬剤の具体例は、凍
結乾燥の形でこの発明の方法によって製造されたギンク
ゴ・ビロバ抽出物の含有を特徴とする。

【００１７】下記の血清沈澱および／または血球凝集特
性の実験のために、独特許出願番号Ｐ３９４００９１．
３の方法によって提供されたまたはこの発明の教示に従
って変えられた抽出物が使用された。

【００１８】血清沈澱属性の試験のために、修飾二重ゲ
ル拡散試験をオクテルロニー法（プログレス・イン・ア
ラージィ（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ　　ｉｎ　　Ａｌｌｅｒｇ
ｙ）、５巻（１９５８年）ｌ頁）に従って実施した。

【００１９】実験は、電気泳動膜上で０．０２％のＮａ
Ｎ３を含むリン酸緩衝塩化ナトリウム溶液（ＰＢＳ；Ｎ
ａＣｌ　　１２０ｍＭ、ＫＣｌ　　２．７ｍＭ、リン酸
ナトリウム１０ｍＭ、ｐＨ７．４）中の１％の寒天ゲル
の中で実施する。円形配置で、中央の空洞を１０μｌの
希釈されないヒト血清で満たし、８ｍｍの間隔で空いて
いる６つの外縁の空洞の各々を２５または５０ｍｇ／ｍ
ｌの濃度の抽出溶液（ＰＢＳ）１０μｌで満たす。

【００２０】試験製剤を２４時間、室温で、湿室でイン
キュベートし、次に元の状態およびクーマッシーブルー
Ｒ２５０で染色した後で、評価する。比較のために、負
と正の両方の対照を平行薬剤で検査する。使用されてい
る最高の濃度の抽出物の場合に沈澱の線が無いことによ
って、血清沈澱を伴う物質が無いことがわかる。

【表１】血清沈澱属性　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　濃度（ｍ
ｇ／ｍｌ）抽出物番号　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　クロマトグラフィー処理の　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　前　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　後
─────────────────────────
───────────　　　　１　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　５０＋＋　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　−　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　２５＋　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　−　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　５０＋＋
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　−
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　２５＋　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　−　　　　３　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　５０＋＋　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　−　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２５＋　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　−　　　　４　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　５０＋＋　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　−　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　２５＋　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　−───────────────────
─────────────────＋＋２本の沈澱線
；　　＋１本の沈澱線；　　−沈澱線無し

【００２１】
血清沈澱属性の実験に加えて、この発明の抽出物の血球
凝集特性を検査した。下記に記載されている試験方法に
よって血球凝集特性を試験したときの公知技術からの有
効成分の混合物の溶液は、試験媒体中で１０ｍｇ／ｍｌ
未満の濃度で使用されたときのヒトの赤血球の凝集反応
を示している。

【００２２】血球凝集特性の検査の目的は、血液細胞の
凝集を引き起こす付随物質の存在を調べることである。試験はＶ型の微量滴定皿で実施する。各空洞を、リン酸
緩衝塩化ナトリウム溶液（ＰＢＳ；　　ＣａＣｌ　　１
２０ｍＭ、ＫＣｌ　　２．７ｍＭ、リン酸ナトリウム　
　１０ｍＭ、ｐＨ７．４）中の５０μｌの２％のヒト赤
血球（ＡＢＯ血液型のＡ）懸濁液で満たす。次に、５０
μｌのギンクゴ・ビロバ抽出物含有溶液を、ＰＢＳ中に
、５０ｍｇ／ｍｌから０．７８ｍｇ／ｍｌの範囲の、２
倍づつ減少する濃度で加え、その薬剤を、ふりまぜ機で
約３０秒間混合する。

【００２３】室温で６０分間のインキュベーション時間
の後、反応を拡大ガラスによって試験し、同時に試験し
た正負の対照の結果と比較する。２５ｍｇ／ｍｌまでの
濃度の場合の赤血球の凝集反応の欠如は、血球凝集特性
をもつ物質を除去するのに十分であるとみなされる。し
かしながら、この発明によると、５０ｍｇ／ｍｌの濃度
まで赤血球の凝集反応を示さない抽出物を提供すること
ができる。

【表２】血球凝集効果の試験　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　濃度（ｍｇ／
ｍｌ）＊抽出物番号　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　クロマトグラフィー処理の　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　前　　　　　　　　　　
　　　　後────────────────────
────────────────　　　　　　　　１
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　６．２５　　　　　　　　２５．０　　　　
　　　　２　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　６．２５　　　　　　　　５０．
０　　　　　　　　３　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　６．２５　　　　　　
　　５０．０　　　　　　　　４　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３．１３　
　　　　　　　２５．０──────────────
──────────────────────＊正の
反応を確立することができる、各例の最低の濃度を示し
ている。

【００２４】可溶性血球成分との上記の相互作用によっ
て、同等の濃度のギンクゴ・ビロバ葉からの有効成分混
合物を含む注射液を使用するときの副作用または合併症
が、この発明の方法により血清沈澱および／または血球
凝集特性をもつ成分が除去されない場合、起こり得る。

【００２５】以下、実施例によって、この発明を説明す
る。割合および百分率データは、特にことわらなければ
、重量を意味する。実施例１１０ｋｇの架橋したポリビニルピロリドンを、９０ｋｇ
の７５％水性アセトンと共に１時間かき混ぜ、次に、約
１６時間室温に放置する。懸濁液を、網目プレートのあ
る１００リットルのガラスシリンダーに注ぎ、少なくと
も７０ｋｇの溶媒を前留分として集める。約２４％のフ
ラボン配糖体を含む３０ｋｇのギンクゴ抽出物を、９０
ｋｇの７５％水性アセトン中に溶解し、カラムに注入す
る。溶離を、７５％水性アセトンで、溶離液中の抽出物
濃度が０．５％以下になるまで実施する。溶離液留分を
合わせて、濾過し、固形含量４０−６０％になるまで真
空で濃縮する。この濃縮物を、真空の乾燥炉中で、乾燥
抽出物になるまで乾燥する。

【００２６】実施例２１ヴァイアルは、凍結乾燥型で、以下のものを含有する
。ギンクゴ・ビロバ抽出物　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　５０．０ｍｇマンニトール　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　９４．７
ｍｇｐＨ値を、６ＮのＮａＯＨで、ｐＨ４．０から４．
４に調整する。相当する溶媒のアンプルは、以下を含む。Ｎａ２ＨＰＯ４　　×　　１２Ｈ２Ｏ　　　　　　　　
　　　　２６．０ｍｇ注射用水　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　２９７４．０ｍｇ

【
００２７】実施例３１ヴァイアルは、凍結乾燥型で、以下のものを含有する
。ギンクゴ・ビロバ抽出物　　　　　　　　　　　　　　
　　　　２００．０ｍｇ　　　　マンニトール　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　３７８
．８ｍｇｐＨ値を、６ＮのＮａＯＨで、ｐＨ４．０から
４．４に調整する。相当する溶媒のアンプルは、以下を含む。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】　　血清沈澱および／または血球凝集特性
を持つ葉の成分を実質的に含まないことを特徴とする、
葉の中に元から存在するフラボン配糖体、ギンゴグリド
およびビロバリドのほとんどを含むギンゴビロバ葉から
の抽出物。
【請求項２】　　２０−３０重量％、特に２２−２６重
量％のフラボン配糖体、２．５−４．０重量％のギンク
ゴリド（ｇｉｎｋｇｏｌｉｄｅ）Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＪ（
合計）２．０−４．０重量％のビロバリド（ｂｉｌｏｂ
ａｌｉｄｅ）および１０ｐｐｍ未満、特に１ｐｐｍ未満
のアルキルフェノール化合物を含有する、請求項１記載
の抽出物。
【請求項３】　　抽出過程の間にまたはその最後に、架
橋したポリビニルピロリドンまたはポリアミド上でクロ
マトグラフィー処理が実施される、それ自体公知の方法
でのギンクゴ・ビロバ葉の抽出によって得られる、請求
項１または２記載の抽出物。
【請求項４】　　クロマトグラフィー処理が、水および
Ｃ１−４アルコールの混合物または水およびＣ３−４　
ケトンの混合物を溶離剤として実施されることを特徴と
する、請求項３記載の抽出物。
【請求項５】　　クロマトグラフィー処理が、１０：９
０から６０：４０の比率の水及びアセトンの混合物で実
施されることを特徴とする、請求項４記載の抽出物。
【請求項６】　　抽出過程の間にまたはそのあとで、架
橋したポリビニルピロリドンまたはポリアミド上でクロ
マトグラフィー処理が実施されることを特徴とする、葉
の成分を含有する抽出物を得るために、それ自体公知の
方法でギンクゴ・ビロバ葉が抽出される、請求項１から
５のいずれか１項記載の抽出物の製造法。
【請求項７】　　クロマトグラフィー処理が、水および
Ｃ１−４アルコールの混合物または水及びＣ３−４　ケ
トンの混合物を溶離剤として実施されることを特徴とす
る、請求項６記載の方法。
【請求項８】　　クロマトグラフィー処理が、１０：９
０から６０：４０の比率の水及びアセトンの混合物で実
施される、請求項７記載の方法。
【請求項９】　　実質的に血清沈澱および／または血球
凝集特性をもつ葉の成分がない、２０−３０重量％、特
に２２−２６重量％のフラボン配糖体、合計で２．５か
ら４．５重量％のギンクゴリドＡ、Ｂ、ＣおよびＪ、２
．０から４．０重量％のビロバリドおよび１０ｐｐｍ未
満、特に１ｐｐｍ未満のアルキルフェノール化合物を含
む、ギンクゴ・ビロバ葉からの抽出物の製造方法であっ
て、（ａ）生または乾燥、ギンクゴ・ビロバ緑葉を約４
０−１００℃の温度で水性アセトン、１から３個のＣ原
子をもつ水性アルカノールまたは無水メタノールにより
抽出する、（ｂ）有機溶媒のほとんどを抽出物から分離
して最大含量１０重量％、好ましくは最大５重量％とし
、その際最終の蒸留段階で水を添加できる、（ｃ）残留
する濃縮水性溶液を水で希釈して固形含量５−２５重量
％、好ましくは１５−２０重量％とし、攪拌しながら２
５℃以下の温度、好ましくは約１０−１２℃で、沈澱が
形成するまで放冷し、水によく溶解しない親油性成分か
らなるこの沈澱を除去する、（ｄ）硫酸アンモニウムを
残留する水性溶液に加えて３０重量％の含量とし、形成
する溶液をメチルエチルケトンまたはメチルエチルケト
ンとアセトンを９：１ないし４：６、好ましくは６：４
の割合で含む混合物で抽出する、（ｅ）得られる抽出物
を濃縮して固形含量５０−７０％とし、得られる濃縮物
を水で希釈して固形含量５−２０％とする、（ｆ）生成
する溶液を水に溶けないブタノールまたはペンタノール
により多段階抽出に処す、（ｇ）ブタノールまたはペン
タノール層を固形含量５０−７０％まで濃縮する、（ｈ
）濃縮物を、２０−６０重量％の水性エタノール中の５
−２０重量％の乾燥抽出物溶液を得るのに十分な水およ
びエタノールで希釈する、（ｉ）水性アルコール溶液を
、さらにアルキルフェノール化合物を除去するために、
沸点約６０−１００℃の脂肪族または環状脂肪族溶媒で
抽出する、（ｊ）水性層を減圧下で濃縮する、（ｋ）得
られる濃縮物を水及びアセトンが１０：９０から６０：
４０重量％の割合の混合物の中に取り出し、架橋したポ
リビニルピロリドンを充填したカラムに入れ、前記の水
及びアセトンの混合物で溶離する、（ｌ）溶離液を、最
大温度６０−８０℃で乾燥し、水分含量５％未満の乾燥
抽出物とすることを特徴とする方法。
【請求項１０】　　製法段階（ｄ）および（ｅ）を省い
て、（ｃ）で得られる水性溶液をさらに、段階（ｆ）か
ら（ｌ）に従って処理し、その際段階（ｆ）で、１０か
ら３０重量％の塩化ナトリウムまたは硫酸アンモニウム
、好ましくは２０％の硫酸アンモニウムを水性溶液に加
え得ることを特徴とする、請求項９記載の方法。
【請求項１１】　　段階（ｆ）でｎ−ブタノールを使用
することを特徴とする、請求項９または１０記載の方法
。
【請求項１２】　　製法段階（ｅ）から（ｌ）の代わり
に下記の製法段階（ｅ）から（ｍ）を実施することを特
徴とする、請求項９記載の方法。（ｅ）得られる抽出物
を固体含量５０−７０％まで濃縮し、得られる濃縮物を
、５０重量％の水および５０重量％のエタノールを含む
固形含量１０重量％の溶液が得られるように、水および
エタノールで希釈する、（ｆ）酢酸鉛、水酸化酢酸鉛ま
たは硝酸鉛などの塩鉛の水性溶液または水酸化鉛の水性
懸濁液、好ましくは水酸化酢酸鉛の溶液をこうして得ら
れる溶液に、褐色から黄褐色に変色するまで加え、形成
した沈澱物を除く、（ｇ）残留する水性アルコール溶液
を、さらにアルキルフェノール化合物を除去するために
、約６０から１００℃の沸点をもつ脂肪族または環状脂
肪族溶媒で抽出する、（ｈ）残留する水性アルコール溶
液を、減圧下で、エタノールの最大含量が約５％になる
まで濃縮し、硫酸アンモニウムを２０重量％の含量まで
加える、（ｉ）得られる溶液をメチルエチルケトンおよ
びエタノールの割合が８：２から５：５、好ましくは６
：４の比率の混合物で抽出する、（ｋ）残留する有機相
を５０から７０重量％の固形含量まで濃縮する、（ｌ）
残留濃縮物を１０：９０から６０：４０重量％の割合の
水及びアセトンの混合物中に取り出し、架橋したポリビ
ニルピロリドンを充填したカラムに注ぎいれ、上記の水
及びアセトンの混合物で溶離する、（ｍ）溶離液を、最
大温度６０から８０℃で、水の含量が５％未満の乾燥抽
出物になるまで乾燥する。
【請求項１３】　　請求項１から５のいずれか１項記載
のギンクゴ・ビロバ抽出物の含有を特徴とする、医薬組
成物。
【請求項１４】　　有効成分が、所望によりアジュバン
トを共に、乾燥した形でアンプル中にあることを特徴と
する、請求項１３記載の医薬組成物。
【請求項１５】　　アンプル剤が、１０から５０重量％
の有効成分および５０から９０重量％のマンニトールを
アジュバントとして含むことを特徴とする、請求項１４
記載の医薬組成物。