CN104162058A - 一种治疗痛风的中药复方制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种治疗痛风的中药复方制剂及其制备方法。所述治疗痛风的中药复方制剂，由土茯苓、青风藤、防己、黄柏、三七、金钱草、粉萆薢、牛膝、赤芍九味组成，其功能主治为：清热利尿除湿，解毒活血散结。用于高尿酸血症及痛风性关节炎，湿热下注、毒瘀互阻症。症见发病关节红肿热痛，活动受限，发热，头痛，乏力，舌质红，苔黄腻，脉滑数。

Description

一种治疗痛风的中药复方制剂及其制备方法

技术领域

本发明属于中成药制备技术领域，具体涉及一种治疗痛风的中药复方制剂及其制备方法。 

背景技术

痛风是由单钠尿酸盐(MSU)沉积所致的晶体相关性关节病，与嘌呤代谢紊乱和（或）尿酸排泄减少所致的高尿酸血症直接相关，特指急性特征性关节炎和慢性痛风石疾病，主要包括急性发作性关节炎、痛风石形成、痛风石性慢性关节炎、尿酸盐肾病和尿酸性尿路结石，重者可出现关节残疾和肾功能不全。

痛风分布在世界各地，受种族、饮食、饮酒、职业、环境和受教育程度等多因素影响，欧美地区痛风的患病率为0.2%~1.7%。在我国，近年来痛风的发病率呈上升趋势，我国普通人群患病率约1.14%。痛风的发生还与性别和年龄相关，多见于中老年人，约占90%，发病高峰年龄为40~50岁，男女比例约为20:1。痛风属难治性疾病，发病率日趋上升。尽管现代医学治疗痛风的药物不断更新，但是由于药物作用的局限性，或存在不同程度的毒副作用，而使患者难以接受。

发明内容

诸多临床研究表明，中医药治疗痛风疗效肯定，并有一定的优势。本发明的目的在于提供一种可用于高尿酸血症及痛风性关节炎，湿热下注、毒瘀互阻症的治疗痛风的中药复方制剂。

为达到上述发明目的，本发明采用的技术方案是：

一种治疗痛风的中药复方制剂，包括活性组分和辅料，按重量份数计其活性组分为：土茯苓200~300份、青风藤200~300份、防己200~300份、黄柏200~300份、三七120~200份、金钱草400~600份、粉萆薢200~300份、牛膝200~300份、赤芍200~300份。     

进一步地，所述治疗痛风的中药复方制剂按重量份数计其活性组分为：土茯苓220~280份、青风藤220~280份、防己220~280份、黄柏220~280份、三七150~180份、金钱草450~550份、粉萆薢220~280份、牛膝220~280份、赤芍220~280份。

进一步地，所述治疗痛风的中药复方制剂按重量份数计其活性组分为：土茯苓250份、青风藤250份、防己250份、黄柏250份、三七167份、金钱草500份、粉萆薢250份、牛膝250份、赤芍250份。

进一步地，所述治疗痛风的中药复方制剂制成片剂、丸剂、颗粒剂或胶囊剂。

进一步优选地，所述治疗痛风的中药复方制剂制成片剂。

本发明的另一目的在于提供一种所述的治疗痛风的中药复方制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

1）取三七粉碎成细粉，备用。

2）金钱草切段，与土茯苓、粉萆薢、牛膝、赤芍加水浸泡1小时，煎煮提取，滤过，滤液合并，减压浓缩（≤70℃）至相对密度为1.25～1.30（70℃），减压干燥（≤70℃），得水提干膏，粉碎成细粉，备用。

3）取青风藤、防己、黄柏加60%乙醇浸泡2小时，回流提取，滤过，滤液合并，减压回收乙醇（≤70℃），减压浓缩（≤70℃），至相对密度为1.25～1.30（70℃）的稠膏，减压干燥（≤70℃），得醇提干膏，粉碎成细粉，备用。

4）按比例取上述三七细粉、水提干膏粉、醇提干膏粉和淀粉适量，混合均匀，加入90%乙醇，30目筛制粒，50℃干燥，30目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，即得。

进一步地，所述步骤（2）中水提干膏制备步骤如下：金钱草切段，与土茯苓、粉萆薢、牛膝、赤芍加水浸泡1小时，煎煮提取2次，每次1小时，第一次加12倍量水，第二次加10倍量水，滤过，滤液合并，减压浓缩（≤70℃）至相对密度为1.25～1.30（70℃），减压干燥（≤70℃），得水提干膏，粉碎成细粉，备用。

进一步地，所述步骤（3）中醇提干膏制备步骤如下：取青风藤、防己、黄柏加60%乙醇浸泡2小时，回流提取2次，每次2小时，第一次加9倍量乙醇，第二次加7倍量乙醇，滤过，滤液合并，减压回收乙醇（≤70℃），减压浓缩（≤70℃），至相对密度为1.25～1.30（70℃）的稠膏，减压干燥（≤70℃），得醇提干膏，粉碎成细粉，备用。

本发明所述治疗痛风的中药复方制剂，由土茯苓、青风藤、防己、黄柏、三七、金钱草、粉萆薢、牛膝、赤芍等九味组成，其功能主治为：清热利尿除湿，解毒活血散结。用于高尿酸血症及痛风性关节炎，湿热下注、毒瘀互阻证。症见发病关节红肿热痛，活动受限，发热，头痛，乏力，舌质红，苔黄腻，脉滑数。根据功能主治，采用多种动物模型对本发明进行了抗痛风的药效学研究。

高尿酸血症是痛风发生的重要生化基础，痛风发病过程中的反复发作性痛风性急性关节炎、痛风石沉积、痛风石性慢性关节炎和关节畸形，以及慢性间质性肾炎和尿酸肾结石等均以高尿酸血症为基础。针对痛风，降低血清尿酸为治本之法，是评价药物疗效的重要指标。前期研究表明本发明复方制剂对酵母膏所致的由于血尿酸生成增多而引起的高尿酸血症具有降低血清尿酸的作用，并能保护肾功能，并具有抗炎和镇痛作用。为了进一步证明本发明复方制剂治疗痛风的有效性，又通过腹腔注射氧嗪酸钾盐、抑制小鼠尿酸分解酶建立高尿酸血症模型，研究本发明复方制剂对血清尿酸的影响，客观地评价药效。结果显示，对于不同方法造成的高尿酸血症动物模型，本发明复方制剂均能有效降低血清尿酸含量，并能保护肾脏功能，抑制病程的进展及恶化。中医学认为痛风多由于禀赋不足，或饮食不节、内生湿浊，酿生痰瘀，阻滞经络所致。本发明复方制剂针对痛风的发病机制，以清热利湿、解毒化瘀、通络止痛立法，由黄柏、土茯苓、牡丹皮等组成，临床应用取得了很好的疗效。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明进一步的说明，实施例中均为重量份数，但本发明并不局限于此。

应用实施例一

实施例1   

取三七粉碎成细粉，备用。金钱草切段，与土茯苓、粉萆薢、牛膝、赤芍加水浸泡1小时，煎煮提取2次，每次1小时，第一次加12倍量水，第二次加10倍量水，滤过，滤液合并，减压浓缩（≤70℃）至相对密度为1.25～1.30（70℃），减压干燥（≤70℃），得水提干膏，粉碎成细粉，备用。取青风藤、防己、黄柏加60%乙醇浸泡2小时，回流提取二次，每次2小时，第一次加9倍量乙醇，第二次加7倍量乙醇，滤过，滤液合并，减压回收乙醇（≤70℃），减压浓缩（≤70℃），至相对密度为1.25～1.30（70℃）的稠膏，减压干燥（≤70℃），得醇提干膏，粉碎成细粉，备用。取上述三七细粉、水提干膏粉、醇提干膏粉和淀粉适量，混合均匀，加入90%乙醇适量，30目筛制粒，50℃干燥，30目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，即得。实施例2   

土茯苓250g、青风藤250g、防己250g、黄柏250g、三七167g、金钱草500g、粉萆薢250g、牛膝250g、赤芍250g。

按实施例1所述制备方法制得1000片。

实施例3   

土茯苓220g、青风藤240g、防己240g、黄柏220g、三七150g、金钱草500g、粉萆薢260g、牛膝260g、赤芍240g。

按实施例1所述制备方法制得1000片。

实施例4   

土茯苓230g、青风藤220g、防己220g、黄柏280g、三七180g、金钱草550g、粉萆薢230g、牛膝230g、赤芍230g。

按实施例1所述制备方法制得1000片。

实施例5    

土茯苓260g、青风藤250g、防己250g、黄柏260g、三七165g、金钱草480g、粉萆薢260g、牛膝260g、赤芍220g。

按实施例1所述制备方法制得1000片。

应用实施例二  

实施例6  本发明复方制剂对酵母膏致高尿酸血症小鼠模型血清UA、XOD、BUN的影响

6.1 实验材料

6.1.1 药品

受试药：本发明实施例1~5，拟临床人用量为29g药材/日，0.483g药材/kg（人按60kg体重计）。阳性药：别嘌呤醇：广东彼迪药业有限公司；小鼠用量40mg/kg。苯溴马隆/立加利仙：江苏昆山龙灯瑞迪制药有限公司，小鼠用量20mg/kg。配制方法：取出胶囊内容物，用去离子水配制成溶液。

6.1.2 动物

健康昆明种小鼠，雄性，体重20±1g，由中国医学科学院实验动物研究所提供。

6.1.3 器材

TGL-16A台式高速冷冻离心机，长沙平凡仪器仪表有限公司

SK-1快速混匀器，江苏国华仪器厂

752紫外光栅分光光度计，上海精密科学仪器有限公司

恒温水浴锅，北京长风仪器仪表公司

6.1.4 试剂  

酵母膏，北京奥博星生物技术有限责任公司；

尿酸试剂盒，南京建成生物工程研究所；

黄嘌呤氧化酶测试盒，南京建成生物工程研究所；

BUN试剂盒，南京建成生物工程研究所；

6.2  实验方法

6.2.1 动物分组及给药方法

取KM种雄性小鼠70只，称重后随机分为空白对照组、模型对照组、别嘌呤醇（allopurinol）组、苯溴马隆（benzbromarone）组及本发明高（TFK-H）、中（TFK-M）、低（TFK-L）剂量组共7组，每组10只。除空白组外，其余各组以酵母30g·kg-1·d-1灌胃，连续1WK，d6、d7别嘌呤醇组和苯溴马隆组分别给予别嘌呤醇（40mg·kg-1·d-1）和苯溴马隆（20mg·kg-1·d-1）ig，本发明实施例1高、中、低各剂量组从d5开始予以水溶液（分别按9.67g生药/kg、4.83g生药/kg、2.42g生药/kg给药，分别相当于60kg成人每日用量的20、10、5倍) ig，连续3天。空白组及模型组灌胃等体积的蒸馏水，各组均按0.1ml/10g体重灌胃。

6.2.2 观察指标

于实验第八天，各组动物眼眶后静脉丛取血，测定小鼠血清尿酸（UA）、尿素氮（BUN）含量及黄嘌呤氧化酶（XOD）活性。

6.2.3 统计方法

实验数据以均数±标准差（                                                ±SD)表示，SPSS-11.0统计软件分析，组间比较用单因素方差分析法（One-way ANOVA)，显著性水平以p＜0.05和p＜0.01为标准。

6.3  实验结果

表1 本发明对酵母膏致高尿酸血症小鼠模型

血清UA的影响(±SD)

与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01 

与模型对照组比较：﹟P＜0.05，﹟﹟P＜0.01 

表2 本发明对酵母膏致高尿酸血症小鼠模型

血清XOD活性的影响(±SD)

与空白对照组相比：*P＜0.05，**P＜0.01

与模型对照组相比：﹟P＜0.05，﹟﹟P＜0.01

表3  本发明对酵母膏致高尿酸血症小鼠模型

血清BUN的影响(±SD)

与空白对照组比较：*P＜0.05，**P＜0.01。

与模型对照组比较﹟P＜0.05，﹟﹟P＜0.01

与苯溴马隆组比较，★p＜0.05，★★p＜0.01

实施例7  本发明对腺嘌呤+乙胺丁醇致高尿酸血症大鼠模型血清UA、XOD、BUN的影响

7.1  实验材料

7.1.1 药品

受试药：受试药：本发明实施例1~5，拟临床人用量为29g药材/日，0.483g药材/kg（人按60kg体重计）。阳性药分别为苯溴马隆和痛风定胶囊。苯溴马隆/立加利仙:江苏昆山龙灯瑞迪制药有限公司；痛风定胶囊：成都中汇制药有限公司。

7.1.2 动物 

清洁级健康雄性Wistar大鼠70只，体重200g±10g，由中国医学科学院实验动物研究所提供。

7.1.3 器材  

同实施例6

7.1.4 试剂  

腺嘌呤，北京奥博星生物技术有限责任公司；

盐酸乙胺丁醇片，杭州民生药业集团有限公司；

尿酸试剂盒，南京建成生物工程研究所；

BUN试剂盒，南京建成生物工程研究所；

黄嘌呤氧化酶测试盒，南京建成生物工程研究所；

7.2  实验方法

7.2.1 动物分组及给药方法[9]

取雄性Wistar大鼠70只，随机分为空白对照组、模型对照组、苯溴马隆组（benzbromarone）、痛风定胶囊组及本发明实施例高、中、低剂量组共7组，每组10只。除空白组外，其余各组以腺嘌呤100mg/kg+乙胺丁醇250mg/kg灌胃，连续10d。同时各给药组灌胃给予相应的药物，痛风定胶囊组剂量为0.56g·kg-1·d-1（相当于成人临床用量的7倍）；苯溴马隆组剂量为10mg·kg-1·d-1（相当于成人临床用量的7倍）；本发明实施例2高、中、低剂量组剂量按生药计，分别为6.77g/kg、3.38g/kg、1.69g/kg（分别相当于成人每日用量的14倍、7倍、3.5倍）；空白组和模型组给予等体积蒸馏水，连续10天。

7.2.2 观察指标

末次给药后2小时，各组动物水合氯醛麻醉后，腹主动脉取血，分离血清，采用生化法按说明书测定大鼠血清UA、XOD、BUN含量。

7.2.3 统计方法

实验数据以均数±标准差（±SD)表示，SPSS-11.0统计软件分析，组间比较用单因素方差分析法（One-way ANOVA)，显著性水平以p＜0.05和p＜0.01为标准。

7.3  实验结果

表4 本发明对腺嘌呤+乙胺丁醇致高尿酸血症大鼠模型

血清UA的影响(±SD)

组别	例数（n）	剂量（g/kg）	尿酸(μmol/L)
				空白对照组	10	-	102.74±28.41
模型对照组	10	-	153.21±29.59**
				苯溴马隆组	10	0.01	97.78±26.11﹟﹟
痛风定胶囊组	10	0.56	141.49±42.86*★★
				本发明（高）	10	6.77	123.02±42.70﹟
本发明（中）	10	3.38	104.99±21.14﹟﹟
				本发明（低）	10	1.69	134.24±24.54* ★★

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

与模型对照组比较，﹟P＜0.05；﹟﹟P＜0.01

与痛风康中剂量组比较，★P＜0.05；★★P＜0.01

表5  本发明实施例对腺嘌呤+乙胺丁醇致高尿酸血症大鼠模型

血清XOD活性的影响(±SD)

组别	例数（n）	剂量（g/kg）	黄嘌呤氧化酶活性(U/L)
				空白对照组	10	-	23.63±2.39
模型对照组	10	-	39.43±3.10**
				苯溴马隆组	10	0.01	34.43±5.30**
痛风定胶囊组	10	0.56	36.28±3.80**
				本发明（高）	10	6.77	32.93±2.98**﹟﹟
本发明（中）	10	3.38	39.06±3.99**
				本发明（低）	10	1.69	39.65±6.97**

与空白对照组比较，*P＜0.05； **P＜0.01

与模型对照组比较，﹟P＜0.05；﹟﹟P＜0.01

表6 本发明实施例对腺嘌呤+乙胺丁醇致高尿酸血症大鼠模型

血清BUN的影响(±SD)

组别	例数（n）	剂量（g/kg）	尿素氮(mmol/L)
				空白对照组	10	-	4.81±0.59
模型对照组	10	-	9.51±1.07**
				苯溴马隆组	10	0.01	9.38±1.64**
痛风定胶囊组	10	0.56	9.30±1.17 **★
				本发明（高）	10	6.77	7.71±1.18**
本发明（中）	10	3.38	7.35±1.03**﹟
				本发明（低）	10	1.69	9.18±0.59 **★

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

与模型对照组比较，﹟P＜0.05；﹟﹟P＜0.01

与本发明实施例中剂量组比较，★P＜0.05；★★P＜0.01

实施例8  本发明复方制剂对大鼠急性痛风性关节炎的影响

急性痛风的致炎因子是尿酸钠盐结晶体，当尿酸钠结晶体沉积到关节腔周围时，可以诱使炎症细胞聚集到其周围发生吞噬反应，在吞噬反应过程中吞噬细胞破裂释放出多种致炎致痛因子，从而引起关节周围广泛的炎症反应。针对以上机制，本研究采用经典的尿酸钠盐局部关节注射所致的急性痛风性关节炎模型；通过测量大鼠足肿胀度，证实本发明复方制剂的抗炎作用。

8.1  实验材料

8.1.1 药品

受试药：本发明实施例1~5，拟临床人用量为29g药材/日，0.483g药材/kg（人按60kg体重计）。消炎痛，山西三晋药业有限公司；痛风定胶囊：成都中汇制药有限公司；

8.1.2 动物

    清洁级健康雄性Wistar大鼠70只，体重200g±10g，由中国医学科学院实验动物研究所提供。

8.1.3 器材

大鼠足容积测量仪，注射器

8.1.4主要试剂  

尿酸钠，sigma公司。

8.2  实验方法

8.2.1动物分组及给药方法

取雄性Wistar大鼠63只，随机分为空白对照组、模型对照组、消炎痛组（indomethacin）、痛风定胶囊组（TFD）及本发明复方制剂高（TFK-H）、中（TFK-M）、低（TFK-L）剂量组共7组，每组9只。造模前在足正面高于踝关节0.5cm处作一清晰标线，然后测量各组大鼠右后足正常体积。

本发明复方制剂各剂量组及痛风定胶囊组于造模前2天开始ig给药，连续5天；消炎痛组于造模当天开始ig给药，连续3天。除空白组注射0.2ml生理盐水外，其余各组均用6号注射针在受试大鼠右侧踝关节背侧从45°方向插入胫骨肌腱内侧，将0.2ml尿酸钠溶液（25mg/ml）注入到踝关节腔，形成急性痛风性关节炎模型 [10]。

消炎痛组剂量为7.5mg/kg；痛风定胶囊组剂量为0.56g/kg（相当于成人临床用量的7倍）；本发明复方制剂高、中、低剂量组剂量按生药计，分别为6.77 g/kg、3.38g/kg、1.69g/kg（分别相当于60kg成人临床用量的14倍、7倍、3.5倍）；空白对照组和模型对照组给予等体积蒸馏水。

8.2.2 观察指标

采用毛细管放大原理，分别测定造模前及造模后6h、12h、24h、48h大鼠足跖容积。并计算肿胀度（肿胀度=造模后鼠爪体积-造模前鼠爪体积）。

于造模72小时后取大鼠右后踝关节甲醛固定、组织脱钙、脱水、包埋、切片、HE染色、拍片，对滑膜组织进行病理形态学观察。

8.2.3 统计方法

实验数据以均数±标准差（±SD)表示，SPSS-11.0统计软件分析，组间比较用单因素方差分析法（One-way ANOVA)，显著性水平以p＜0.05和p＜0.01为标准。

8.3  实验结果

表7 本发明复方制剂对造模后6h大鼠足肿胀度的影响(±SD)

组别	例数（n）	剂量（g/kg）	肿胀度 (ml)
				空白对照组	9	-	0.153±0.137
模型对照组	9	-	0.853±0.175**
				消炎痛组	9	0.0075	0.567±0.177*
痛风定胶囊组	9	0.56	0.672±0.166*
				本发明（高）	9	6.77	0.833±0.320*
本发明（中）	9	3.38	0.578±0.117*﹟
				本发明（低）	9	1.69	0.542±0.271*

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

与模型对照组比较，﹟P＜0.05；﹟﹟P＜0.01

表8  本发明复方制剂对造模后12h大鼠足肿胀度的影响(±SD)

组别	例数（n）	剂量（g/kg）	肿胀度 (ml)
				空白对照组	9	-	0.189±0.138
模型对照组	9	-	1.178±0.144**
				消炎痛组	9	0.0075	0.869±0.226**﹟﹟
痛风定胶囊组	9	0.56	1.022±0.238**★★
				本发明（高）	9	6.77	0.852±0.179**﹟﹟
本发明（中）	9	3.38	0.700±0.111**﹟﹟
				本发明（低）	9	1.69	0.853±0.313**﹟﹟

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

与模型对照组比较，﹟P＜0.05；﹟﹟P＜0.01

与本发明复方制剂中剂量组比较，★P＜0.05；★★P＜0.01

表9  本发明复方制剂对造模24h大鼠足肿胀度的影响(±SD)

组别	例数（n）	剂量（g/kg）	肿胀度 (ml)
				空白对照组	9	-	0.211±0.160
模型对照组	9	-	0.789±0.168**
				消炎痛组	9	0.0075	0.403±0.215﹟﹟
痛风定胶囊组	9	0.56	0.536±0.200**﹟
				本发明（高）	9	6.77	0.463±0.228*﹟﹟
本发明（中）	9	3.38	0.400±0.158﹟﹟
				本发明（低）	9	1.69	0.542±0.301**﹟

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

与模型对照组比较，﹟P＜0.05；﹟﹟P＜0.01

表10  本发明复方制剂对造模48h大鼠足肿胀度的影响(±SD)

组别	例数（n）	剂量（g/kg）	肿胀度 (ml)
				空白对照组	9	-	0.119±0.132
模型对照组	9	-	0.500±0.190**
				消炎痛组	9	0.0075	0.233±0.183﹟﹟
痛风定胶囊组	9	0.56	0.361±0.220**
				本发明（高）	9	6.77	0.154±0.151﹟﹟★
本发明（中）	9	3.38	0.156±0.119﹟﹟★
				本发明（低）	9	1.69	0.372±0.223**

与空白对照组比较，*P＜0.05；**P＜0.01

与模型对照组比较，﹟P＜0.05；﹟﹟P＜0.01

与痛风定胶囊组比较，★P＜0.05；★★P＜0.01

实施例9   本发明复方制剂对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响

9.1  实验材料

9.1.1 药品

受试药物：受试药：本发明实施例1~5，拟临床人用量为29g药材/日，0.483g药材/kg（人按60kg体重计）。阳性药物：消炎痛，山西三晋药业有限公司；

9.1.2 动物 

    清洁级健康KM种小鼠50只，雄性，体重20g±1g，由中国医学科学院实验动物研究所提供。

9.1.3 器材

7mm直径的打孔器，苏州六六视觉科技有限公司 

HF-300电子分析天平，日本AD公司

9.1.4 试剂

二甲苯，Xylene，C8H10，M：106.17，北京化工厂。

9.2  实验方法

9.2.1 动物分组及给药方法[11]

取雄性昆明种小鼠50只，称重后随机分为空白对照组、消炎痛组、本发明复方制剂高、中、低剂量组共5组。分别于每日早8时、晚8时灌胃给药, 给药容量均为0.2ml/10g体重,连续给药3d。末次给药45min后，在右耳的前后两面均匀涂布二甲苯0.020mL/只，以左耳作对照，45min后将其脱颈处死，剪下左、右耳，然后用直径为7mm的打孔器分别在同一部位取下耳圆片，立即天平称重，计算耳壳的肿胀度。

给药剂量：消炎痛0.010g/kg；本发明复方制剂高、中、低各组剂量分别为9.67g/kg、4.83g/kg、2.42g/kg，分别相当于60kg成人临床用量的20倍、10倍、5倍。空白组灌胃等体积的蒸馏水。

9.2.2 观察指标

计算各组小鼠耳肿胀度，肿胀度（g）＝右耳的重量（g）－左耳的重量（g）。

9.2.3 统计方法

实验数据以均数±标准差（±SD)表示，SPSS-11.0统计软件分析，组间比较用单因素方差分析法（One-way ANOVA)，显著性水平以p＜0.05和p＜0.01为标准。

9.3  实验结果

表11  本发明复方制剂对二甲苯所致小鼠耳肿胀的影响(±SD)

与空白对照组比较，*P<0.05；* *P<0.01

实施例10  本发明复方制剂对醋酸所致小鼠扭体反应的影响

10.1  实验材料

10.1.1 药品

受试药物：本发明复方制剂（TFK），同实验一

阳性药物：消炎痛片，山西三晋药业有限公司；

10.1.2 动物 

    清洁级健康KM种小鼠50只，雌雄各半，体重20g±1g，由中国医学科学院实验动物研究所提供。

10.1.3 器材

注射器（1ml），秒表

10.1.4  试剂

冰醋酸，用时配成0.6％的浓度

10.2  实验方法

10.2.1 动物分组及给药方法[12]

选取KM种小鼠50只，随机分为5组，空白对照组、消炎痛组（indomethacin)、本发明复方制剂高剂量组(TFK-H)、中剂量组(TFK-M)、低剂量组(TFK-L)，每组10只。消炎痛组按0.01g/kg，灌胃消炎痛片水溶液，TFK-H、TFK-M、TFK-L组分别按9.67g生药/kg、4.83g生药/kg、2.42g生药/kg灌胃本发明复方制剂水溶液（分别相当于60kg成人日用量的20、10、5倍)，连续给药3天。空白组灌胃等体积的蒸馏水，各组均按0.1ml/10g体重灌胃。

10.2.2 观察指标

末次给药后1h小鼠腹腔注射0.6%醋酸溶液0.1mL/10g，记录每只小鼠出现扭体反应的潜伏期，并记录0～20min内小鼠扭体反应的次数，统计比较不同组别小鼠扭体反应的潜伏期和扭体次数的变化情况。

10.2.3 统计方法

实验数据以均数±标准差（±SD)表示，SPSS-11.0统计软件分析，组间比较用单因素方差分析法（One-way ANOVA)，显著性水平以p＜0.05和p＜0.01为标准。

10.3  实验结果

表12  本发明复方制剂对醋酸所致小鼠扭体次数及潜伏期的影响(±SD)

与空白对照组比较，*p＜0.05，**p＜0.01

本发明中药复方制剂，由黄柏、土茯苓、防己、萆薢、牛膝等药味组成，其功能主治为：清热利尿除湿，解毒活血散结。用于高尿酸血症及痛风性关节炎，湿热下注、毒瘀互阻证。症见发病关节红肿热痛，活动受限，发热，头痛，乏力，舌质红，苔黄腻，脉滑数。

药效学研究表明：①本发明复方制剂高、中、低各剂量均能降低灌服酵母膏所致的高尿酸血症模型小鼠血清尿酸（UA）含量（P＜0.05）；其中本发明复方制剂高剂量降低UA更明显（P＜0.01）；本发明复方制剂高、中、低各剂量均能降低腹腔注射氧嗪酸钾盐所致的高尿酸血症模型小鼠血清UA含量（P＜0.01）；本发明复方制剂高剂量能降低腺嘌呤加乙胺丁醇所致高尿酸血症模型大鼠血清UA含量（P＜0.05）。

②对关节腔注射尿酸钠所致的急性痛风性关节炎大鼠模型，在造模6小时本发明复方制剂中剂量就能使大鼠足跖肿胀度明显减轻（P＜0.05）；于造模12小时，本发明复方制剂高、中、低各剂量组大鼠足肿胀度与模型组比较，均降低，有极显著性差异（P＜0.01）；于造模24小时、48小时，本发明复方制剂高、中剂量组大鼠足跖肿胀度与模型组比较，均降低，有极显著性差异（P＜0.01）；通过观察本发明复方制剂对痛风性关节炎模型大鼠踝关节病理形态的影响，证实本发明复方制剂能有效抑制滑膜组织充血、水肿等炎性反应，维持关节软骨结构正常；表现出明显的抗炎作用。本发明复方制剂高剂量能明显抑制二甲苯所引起的小鼠耳肿胀（P＜0.01）。

③对于腹腔注射醋酸所致的小鼠扭体反应，本发明复方制剂各剂量组均能延长小鼠出现扭体反应的潜伏期；本发明复方制剂高、中剂量组小鼠20min内的扭体次数与空白组比较明显减少，有显著性差异（P＜0.05）。

在药效研究的基础上，针对尿酸生成、排泄的不同环节，及其对肾功能、胶原及基质的降解、细胞凋亡等的影响，进行了本发明复方制剂治疗痛风的机理探讨：  ①对于灌服酵母膏所致的高尿酸血症小鼠模型，本发明复方制剂高、中、低剂量组均能降低血清XOD活力（P＜0.01）；对于灌服腺嘌呤加乙胺丁醇所致的高尿酸血症大鼠模型，本发明复方制剂高剂量组能降低大鼠血清XOD活力，与模型组比较有极显著性差异（P＜0.01）。②本发明复方制剂高、中、低各剂量均能降低灌服酵母膏所致高尿酸血症模型小鼠血清BUN含量（P＜0.01）；均能降低腹腔注射氧嗪酸钾盐所致高尿酸血症模型小鼠血清BUN含量（P＜0.01）；中剂量能降低灌服腺嘌呤加乙胺丁醇致高尿酸血症模型大鼠血清BUN含量（P＜0.05）。

通过上述实验结果，分析本发明复方制剂防治痛风的作用机制可能是：①抑制XOD活性，减少尿酸生成；②保护肾脏功能，有利于尿酸的排泄； 

本发明复方制剂是在中医理论的指导下，辨证用药与辨病用药相结合，传统中医理论与现代药理研究成果相结合，文献研究与临床专家经验相结合，创制的新方。药效研究证明，本发明复方制剂能集降尿酸、抗炎、镇痛于一体，为临床防治痛风奠定了坚实的药效学基础。特别在降尿酸方面，既能抑制尿酸生成，又能促进肾小管对尿酸的分泌而加速排泄，机制明确。同时能保护肾功能，展现了中医药治疗痛风的优势。

虽然本发明已参照如上所述的具体实施例来描述，但本技术领域的普通技术人员应当认识到，以上实施例仅是用以说明本发明而不是限制本发明，只要在本发明的实质精神范围内对上述实施例的变化、变型都应落入本申请的权利要求书请求保护的范围内。

Claims (8)

1.一种治疗痛风的中药复方制剂，包括活性组分和辅料，按重量份数计其活性组分为：土茯苓200~300份、青风藤200~300份、防己200~300份、黄柏200~300份、三七120~200份、金钱草400~600份、粉萆薢200~300份、牛膝200~300份、赤芍200~300份。

2.根据权利要求1所述的治疗痛风的中药复方制剂，其特征在于按重量份数计其活性组分为：土茯苓220~280份、青风藤220~280份、防己220~280份、黄柏220~280份、三七150~180份、金钱草450~550份、粉萆薢220~280份、牛膝220~280份、赤芍220~280份。

3.根据权利要求2所述的治疗痛风的中药复方制剂，其特征在于按重量份数计其活性组分为：土茯苓250份、青风藤250份、防己250份、黄柏250份、三七167份、金钱草500份、粉萆薢250份、牛膝250份、赤芍250份。

4.根据权利要求1或2或3所述的治疗痛风的中药复方制剂，其特征在于：所述治疗痛风的中药复方制剂制成片剂、丸剂、颗粒剂或胶囊剂。

5.根据权利要求4所述的治疗痛风的中药复方制剂，其特征在于：所述治疗痛风的中药复方制剂制成片剂。

6.一种如权利要求5所述治疗痛风的中药复方制剂的制备方法，其特征在于包括如下步骤： 

1）取三七粉碎成细粉，备用.

2）金钱草切段，与土茯苓、粉萆薢、牛膝、赤芍加水浸泡1小时，煎煮提取，滤过，滤液合并，减压浓缩（≤70℃）至相对密度为1.25～1.30（70℃），减压干燥（≤70℃），得水提干膏，粉碎成细粉，备用.

3）取青风藤、防己、黄柏加60%乙醇浸泡2小时，回流提取，滤过，滤液合并，减压回收乙醇（≤70℃），减压浓缩（≤70℃），至相对密度为1.25～1.30（70℃）的稠膏，减压干燥（≤70℃），得醇提干膏，粉碎成细粉，备用.

4）按比例取上述三七细粉、水提干膏粉、醇提干膏粉和淀粉适量，混合均匀，加入90%乙醇，30目筛制粒，50℃干燥，30目筛整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片，包薄膜衣，即得。

7.根据权利要求6所述的治疗痛风的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（2）中水提干膏制备步骤如下：金钱草切段，与土茯苓、粉萆薢、牛膝、赤芍加水浸泡1小时，煎煮提取2次，每次1小时，第一次加12倍量水，第二次加10倍量水，滤过，滤液合并，减压浓缩（≤70℃）至相对密度为1.25～1.30（70℃），减压干燥（≤70℃），得水提干膏，粉碎成细粉，备用。

8.根据权利要求6所述的治疗痛风的中药复方制剂的制备方法，其特征在于，所述步骤（3）中醇提干膏制备步骤如下：取青风藤、防己、黄柏加60%乙醇浸泡2小时，回流提取2次，每次2小时，第一次加9倍量乙醇，第二次加7倍量乙醇，滤过，滤液合并，减压回收乙醇（≤70℃），减压浓缩（≤70℃），至相对密度为1.25～1.30（70℃）的稠膏，减压干燥（≤70℃），得醇提干膏，粉碎成细粉，备用。