CN102579559B - 一种龙须藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种龙须藤乙酸乙酯提取物，它含有槲皮素的重量百分含量不得少于0.05％，杨梅素的重量百分含量不得少于0.04％。本发明还提供了该龙须藤乙酸乙酯提取物的制备方法和用途。本发明还提供了一种龙须藤正丁醇提取物，它含有β-谷甾醇的重量百分含量不得少于0.1％。本发明还提供了龙须藤正丁醇提取物的制备方法和用途。本发明龙须藤乙酸乙酯部位和正丁醇部位用于治疗类风湿性关节炎，药效明确，质量可控，且制备方法稳定，适合大生产，为临床提供了一种新的选择。

Description

一种龙须藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种龙须藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物及其制备方法和用途，属药物领域。

背景技术

龙须藤为豆科羊蹄甲属植物龙须藤Bauhinia championii Benth.的藤，又称九龙藤、梅花入骨丹，主要分布福建、江西、广西、浙江等，具有祛风湿、行血气的功效。现代药理学研究证明，龙须藤的有效成分具有祛风除湿、活血止痛、健脾理气的作用，用于治疗风湿性关节炎、腰腿疼、跌打损伤、胃痛、小儿疳积。根据闽南名医黄金钢验方，以龙须藤为主要成分的康美肤烧伤膏在临床上具有良好治疗烧烫伤作用。龙须藤药材的化学成分主要为黄酮类、氰苷、没食子酸等。

文献HONG Z F，ZHENG H Y，XU W，et al.Stydy on resistinflammation andanalgesic effect of Kangmeifu BurnsOintment(KBO)[J].Chin J Tradit Med SciTechnol(中国中医药科技)，2007，14(4)：261-262.HONG Z F，ZHENG HY，WANG R G，et al.Study on antibacterial activity of Kangmeifu BurnsOintment(KBO)[J].Chin J Microecol(中国微生态学杂志)，2007，19(2)：177-178.]报道了龙须藤中黄酮类成分具有镇痛抗炎的作用，该文献只提及粗总黄酮具有镇痛抗炎作用，没有涉及具体化合物。也有文献报道对龙须藤中化学成分进行研究，如：白海云，等，九龙藤化学成分研究(I)，中国中药杂志，第30卷第1期，2005年1月，报道了从乙醇提取物中分离鉴定了5个化合物，其提取和分离方法为：取九龙藤茎7Kg，粉碎后用95％工业乙醇渗漉3次。浸膏用水混悬，依次用石油醚、醋酸乙酯、正丁醇萃取。醋酸乙酯部位经反复硅胶、大孔树脂、葡聚糖凝胶和反相硅胶柱色谱分离，分得5个化合物。白海云等，九龙藤化学成分研究(II)，天然产物研究所开发，2004，Vol.16 NO.4，从醋酸乙酯有效部位中分离得到了没食子酸、谷甾醇、胡萝卜苷、槲皮苷、杨梅苷、表儿茶素、5，6，7，3′，4′，5′-六甲氧基黄酮。

发明内容

本发明的技术方案是提供了一种龙须藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物。本发明的另一技术方案是提供了该提取物的制备方法和用途。

本发明提供了一种龙须藤乙酸乙酯提取物，它含有槲皮素的重量百分含量不得少于0.05％，杨梅素的重量百分含量不得少于0.04％。

进一步优选地，它含有槲皮素的重量百分含量为0.05-1.50％，杨梅素的重量百分含量为0.04-1.25％。

更进一步优选地，它含有化合物I、II、III、IV、V。

本发明龙须藤乙酸乙酯提取物是由如下步骤制备而成：

取龙须藤药材，加40-95％乙醇加热回流提取，提取液回收乙醇至无醇味，醇提液用石油醚萃取，得石油醚层和水层，水层加氯仿萃取，得氯仿层和水层；水层用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取液，回收，烘干，即得龙须藤乙酸乙酯提取物。

其中，所述的乙醇为浓度为80％的乙醇。

本发明还提供了一种制备所述的龙须藤乙酸乙酯提取物的方法，包括如下步骤：

取龙须藤药材，加40-95％乙醇加热回流提取，提取液回收乙醇至无醇味，醇提液用石油醚萃取，得石油醚层和水层，水层加氯仿萃取，得氯仿层和水层；水层用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取液，回收，烘干，即得龙须藤乙酸乙酯提取物。

本发明还提供了龙须藤乙酸乙酯提取物在制备镇痛抗炎、抗类风湿性关节炎的药物中的用途。

本发明提供了一种龙须藤正丁醇提取物，它含有β-谷甾醇的重量百分含量不得少于0.1％。

其中，它含有β-谷甾醇的重量百分含量为0.1-0.85％。

更进一步地，它含有化合物V、VI。

本发明龙须藤正丁醇提取物是由下述方法制备而成：

取龙须藤药材，加40-95％乙醇加热回流提取，提取液回收乙醇至无醇味，醇提液用石油醚萃取，得石油醚层和水层，水层加氯仿萃取，得氯仿层和水层；水层用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯层和水层；水层加正丁醇萃取，得正丁醇提取液，回收，烘干，即得龙须藤正丁醇提取物。进一步优选地，所述的乙醇为浓度为80％的乙醇。

本发明还提供了一种制备所述的龙须藤正丁醇提取物的方法，它包括如下步骤：

取龙须藤药材，加40-95％乙醇加热回流提取，提取液回收乙醇至无醇味，醇提液用石油醚萃取，得石油醚层和水层，水层加氯仿萃取，得氯仿层和水层；水层用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯层和水层；水层加正丁醇萃取，得正丁醇提取液，回收，烘干，即得龙须藤正丁醇提取物。

本发明还提供了该龙须藤正丁醇提取物在制备镇痛抗炎、抗类风湿性关节炎的药物中的用途。

本发明龙须藤乙酸乙酯部位和正丁醇部位用于治疗类风湿性关节炎，药效明确，质量可控，且制备方法稳定，适合大生产，为临床提供了一种新的选择。

附图说明

图1β-谷甾醇结构式图

图2胡萝卜苷结构式图

图3槲皮素结构式图

图4化合物VI结构式图

图5大鼠一般状态

图6正常对照组

图7模型组

图8雷公藤多苷组

图9乙酸乙酯低剂量组

图10乙酸乙酯中剂量组

图11乙酸乙酯高剂量组

图12正丁醇低剂量组

图13正丁醇中剂量组

图14正丁醇高剂量组

具体实施方式

实施例1龙须藤乙酸乙酯部位和正丁醇部位的成分分离与纯化

1.提取和分离

取1000g龙须藤药材，加80％乙醇加热回流提取3次，每次1.5h，过滤，合并乙醇液，回收乙醇至无醇味，得醇提浸膏。加2000ml水，使浸膏混悬，加石油醚萃取5次，1000ml/次，合并石油醚提取液，回收，得油状物；水层加氯仿萃取5次，1000ml/次，合并氯仿提取液，回收，烘干，得浸膏；水层加乙酸乙酯萃取5次，1000ml/次，合并乙酸乙酯提取液，回收，烘干，得浸膏；水层加正丁醇萃取5次，1000ml/次，合并正丁醇提取液，回收，烘干，得浸膏。

此法得到的龙须藤乙酸乙酯部位按浸膏计算，得率不得少于2％，含槲皮素和杨梅素分别不得少于0.05％和0.04％。

此法得到的龙须藤正丁醇部位按浸膏计算，得率不得少于6％，含β-谷甾醇分别不得少于0.1％。

具体测定方法为：

采用HPLC方法测定龙须藤乙酸乙酯提取物中槲皮素、杨梅素的含量。色谱条件为乙腈(A)-0.05％磷酸溶液(B)，梯度洗脱程序为0-5min乙腈从20％到30％，5-10min从30％到50％，然后保持20min；流速为1.0ml/min；测定波长为370nm；柱温为30℃。

重复三次实验，由此法测定提取物得到槲皮素的含量分别为0.062％、0.064％、0.065％，杨梅素的含量分别为0.051％、0.053％、0.055％，平均含量分别为0.064％、0.053％。

采用HPLC方法测定龙须藤正丁醇提取物中β-谷甾醇的含量。色谱条件为乙腈(A)-水(B)(96∶4)；流速为1.0ml/min；测定波长为210nm；柱温为30℃。

重复三次实验，由此法测定提取物得到β-谷甾醇的含量分别为0.364％、0.363％、0.363％。平均含量为0.363％。

乙酸乙酯部分用粗硅胶(160～200目)1∶1拌样，加入以二氯甲烷湿法装硅胶柱中，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，等体积收集洗脱液，流分经TLC检识再合并，经反复的硅胶、聚酰胺、SephadexLH-20、ODS分离和纯化，得到化合物I、II、III、IV、V。

正丁醇部分用热水溶解，水不溶部位用粗硅胶(160～200目)1∶1拌样，加入以二氯甲烷湿法装硅胶柱中，用二氯甲烷-甲醇梯度洗脱，等体积收集洗脱液，流分经TLC检识再合并，经反复的硅胶、聚酰胺、SephadexLH-20、ODS分离和纯化，得到化合物V、VI。

2.结构鉴定

化合物I：白色针状结晶(丙酮)，mp 141-142℃。5％硫酸-乙醇溶液加热显紫红色，香草醛-浓硫酸显紫红色。IR中显示在3432、2936、2860、1461、1381、1054、959、800cm^-1处有吸收带，与Sigma Biological Sample Library谱库中β-谷甾醇的匹配度达90％以上。在石油醚-乙酸乙酯、石油醚-丙酮、二氯甲烷-丙酮三种不同展开条件下，其Rf值与谷甾醇一致，混合熔点不下降。与文献一致，故鉴定为β-谷甾醇，结构式见图1。

化合物II：白色粉末，mp 288～289℃。IR中显示在3397、2959、2933、2869、1463、1379、1073、1024cm^-1处有吸收带，与Aldrich Condensed PhaseSample Library谱库中胡萝卜苷的匹配度达90％以上。在硅胶薄层板上用二氯甲烷-丙酮、二氯甲烷-甲醇、二氯甲烷-甲醇-水等体系展开，均为单点，其Rf值与胡萝卜苷标准品一致，且混合熔点不下降，故鉴定为胡萝卜苷，结构式见图2。

化合物III：白色片状结晶(石油醚-乙酸乙酯)，mp 65～66℃。IR中显示在2917、2848、1472、1061、719cm^-1有吸收带，与Aldrich CondensedPhase Sample Library谱库中三十烷的匹配度达90％以上，且在硅胶薄层板上用不同的溶剂体系展开，均为单点，其Rf值与三十烷标准品一致，故鉴定为正三十烷。

化合物IV：白色片状固体(石油醚-乙酸乙酯)，mp 97～98℃。IR中显示在2917、2849、1742、1472、1363、1239、1179cm^-1处有吸收带，与Aldrich Condensed Phase Sample Library谱库中六十烷的匹配度达90％以上，且在硅胶薄层板上用不同的溶剂体系展开，均为单点，故鉴定为正六十烷。

化合物V：黄色针状结晶(氯仿-甲醇)，mp＞300℃。盐酸-镁粉反应阳性。IR中显示在2918、2849、1664、1610、1521、1450、1381、1318、1261、1198、1167、1013cm^-1处有吸收带，与HR A1drich Aldehydes and Ketones谱库中槲皮素的匹配度达90％以上，1H-NMR数据与文献报道^[7]的槲皮素数据一致。且在硅胶薄层板上用不同的溶剂体系展开，均为单点，且Rf值与槲皮素对照品一致，混合熔点不下降。故鉴定为槲皮素，结构式见图3。

化合物VI：黄色颗粒状晶体(氯仿-甲醇)，mp＞280℃。IR中显示在3409，1647，1611，1576，1458，1293，1257，1168，1119cm-1有吸收带，经氢谱、质谱鉴定，推断化合物的分子量为：326，初步推断的结构如图4。

以下通过具体药效学试验证明本发明的有益效果。

药品与试剂：

雷公藤多苷片，黄石飞云制药有限公司生产(批准文号：，国药准字Z42021212，)；

本发明药物(实施例1制备的龙须藤乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物)；本发明药物的低剂量为含乙酸乙酯部位或正丁醇部位500mg/mL、中剂量为含乙酸乙酯部位或正丁醇部位250mg/mL、高剂量为含乙酸乙酯部位或正丁醇部位125mg/mL。

角叉菜胶(carrageenan)由福建省药检所提供，用生理盐水配成1％，放置2d后使用。硫化钠：上海统亚化工科技发展有限公司，批号：051212。二甲苯：AR，上海兴达化工试剂厂，批号：20050203。乙醚：AR，上海市久亿化学试剂有限公司，批号：20050401。牛II型胶原，完全弗氏佐剂，由美国SIGMA公司生产，购自北京博蕾德生物科技有限公司。TNF-α、IL-1(ELISA法)、免疫球蛋白(1gG、IgM)试剂盒：购自武汉博士德生物工程有限公司。

试验例1本发明药物的抗炎实验

1对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响：将80只体重20±2g克小鼠，按体重随机分为8组：低剂量本发明药物组，中剂量本发明药物组，高剂量本发明药物组，阳性对照组(雷公藤多苷片)，模型对照组(白凡士林)。8组小鼠分别灌胃，每天1次，连续3d，末次涂药30min后，用二甲苯以0.1ml/只的量在右耳两侧相同的地方均匀涂抹，左耳作对照，4h后处死，立即剪下双耳，用直径8mm打孔器取相同部位耳片，在万分之一半自动分析天平上称重，按以(右耳重-左耳重)/左耳重为肿胀率，以(模型组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/模型组平均肿胀度为肿胀抑制率。将对照组与给药组的肿胀程度使用SPSS统计软件处理分析，其平均数间差异采用单因素方差分析，见表1。

表1本发明药物组对小鼠二甲苯致炎的影响(n＝10)

与模型对照组比较，各给药组都有显著性差异(P＜0.01，P＜0.05)，三种剂量本发明药物组对二甲苯致炎的抑制率均大于20％，提示本发明药物组对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀具有抑制作用。并呈剂量效应关系。

2对角叉菜胶致大鼠足跖肿胀的影响：将80只体重150±10g克SD大鼠，按体重随机分为8组：模型组，本发明药物低、中、高剂量组，雷公藤多苷片组。将大鼠右后肢拉直，自足跖中部皮下注入1％角叉菜胶0.1mL。分别于注入后0.5h、1h、1.5h、2h、4h、6h用游标卡尺测量肿胀肢体的厚度，以(致炎后-致炎前足跖厚度)/致炎前足跖厚度×100％计算肿胀率，以(模型对照组平均肿胀率-实验组平均肿胀率)/模型对照组平均肿胀率×100％计算抑制率，各组数据处理使用SPSS统计软件处理分析，其平均数间差异采用单因素方差分析，结果见表2。

表2本发明药物组合物对大鼠角叉菜胶致足跖肿胀抑制率的影响(n＝10)

结果表明，各药物组于致炎后1h至6h与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05)，提示各药物组对角叉菜胶所致大鼠足跖肿胀均有抑制作用。本发明药物组的三个剂量，在致炎后1h抑制率就达到30％以上；1h时达到高峰，其高剂量组与雷公藤多苷片组比较差异有非常显著性的意义(P＜0.01)。低剂量本发明药物组的抗炎持续时间达4h，中高剂量达6h以上，在4h及6h时进行单因素方差分析表明，低、中、高剂量与雷公藤多苷片无明显差异(P＞0.05)。

试验例2本发明药物的镇痛实验(对雌性小鼠热板致痛的影响)

取体重20±2g的雌性小鼠，按热板法于试验前在热板测痛仪上测定痛阈值在5s-30s内的小鼠80只，按体重随机分为8组：空白对照组，本发明药物组低、中、高剂量组，雷公藤多苷片组。以出现舔后足反应为观察指标。分别于每鼠灌胃以上药物，0.2mL/只。0.5h后按上法测定痛阈值，然后按前法给药，测定1h、1.5h、2h的痛阈值。比较给药前后痛阈的变化，并按(用药后-用药前平均痛阈值)/用药前平均痛阈值×100％计算痛阈提高百分率。各组数据处理使用SPSS统计软件处理分析，其平均数间差异采用单因素方差分析，结果见表3。

表3药物对小鼠热板致痛阈和痛阈提高率的影响(n＝10)

结果显示，本发明药物组合物与模型对照组比较有显著性差异(P＜0.05)，且2h时仍具有镇痛效果。本发明药物组合物三个剂量均能明显提高小鼠痛阈值。提示：本发明药物组合物对热致痛具有显著镇痛作用，且镇痛持久达2h以上。

试验例3本发明药物对关节炎的影响

分组与造模：Wistar大鼠(雄性)，平均体重(200±20)g，适应性饲养1周，统一光照，低温环境，自由饮水，固体饲料自由摄食。随机分为9组，即正常组(A)、模型组(B)、雷公藤多苷组(C)、乙酸乙酯低剂量组(D)、乙酸乙酯中剂量组(E)、乙酸乙酯高剂量组(F)、正丁醇低剂量组(G)、正丁醇中剂量组(H)、正丁醇高剂量组(I)，每组为10只。将完全弗氏佐剂(CFA)与2mg/ml的牛II型胶原乳液等体积混合，制成胶原乳剂，除正常组外，每只大鼠尾根部皮内注射胶原蛋白0.2mg，初次免疫后第1日即开始分组灌胃给药，每日1次。于第7天进行二次免疫，除正常组外，每只大鼠尾根部皮内注射胶原乳剂0.1mg(不完全弗氏佐剂(IFA)与2mg/ml的牛II型胶原乳液等体积混合，制成胶原乳剂)。正常组、模型组每日给予9.0g/L氯化钠注射液10ml/kg；高剂量组灌胃给予500mg/kg，中剂量组每日灌胃给予250mg/kg，低剂量组每日灌胃给予125mg/kg，雷公藤多苷组每日给予6mg/kg。全部动物连续给药28天。采用容积法在造模前1d测定大鼠双侧后足爪容积，致炎后每4d对大鼠双侧足爪容积进行测量，记录容积值，以此作为评价抗炎作用强度的基数。

样本采集与指标检测：分别在制模前，造模后测足跖肿胀厚度和体重的变化；治疗前，治疗后计算关节炎肿胀度；治疗第28天给药后，全部动物腹主动脉取血，分放于干燥管中，将干燥管置于3000转/分离心8min，取上清液分离血清，分别按试剂盒说明书方法测定血清TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)的含量。

统计学方法：采用SPSS15.0数据统计包进行数据处理，实验数据用

表示。计量资料采用组内配对t检验和组间方差分析。

1大鼠一般状态观察如图5所示，模型组大鼠经胶原乳化液致敏、加强免疫后，精神状态、饮食情况、活动能力有所降低，初次免疫后尾部出现溃烂，7天后逐渐结痂。在二次免疫后第3天左右，大鼠开始发病，模型大鼠足趾和踝关节开始出现肿胀，并日渐加重，体重下降，部分大鼠右后足出现足趾变形，无死亡；阳性对照组及龙须藤组大鼠治疗后上述症状明显缓解。

2大鼠的体重：结果见表4。除药物组外，其他各组大鼠体重缓慢增长，在14天都21天期间体重开始下降，而后缓慢增长。

表4各组对大鼠体重的影响

注：与正常组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；

3组织病理学观察：各组动物踝关节病理学显示，正常对照组(A)的大鼠滑膜组织滑膜衬里层厚为1～2层，细胞排列整齐，无炎性细胞浸润及血管增生，关节软骨光滑无破坏。而CIA模型组(B)的大鼠滑膜细胞增生明显，排列紊乱，滑膜衬里层细胞由原来的1～3层增生到5～6层甚至更多，伴随纤维素渗出，胶原纤维沉着，可见大量的梭形成纤维样细胞，滑膜增厚，滑膜组织呈不同程度的蘑菇样或乳头样增生，滑膜下层的小血管增多，血管翳形成，组织稀松、水肿，有大量炎细胞渗出，有些切片可看到滑膜向软骨表面侵蚀性生长。乙酸乙酯低剂量组(D)滑膜组织中度增生及炎性细胞浸润，有血管翳形成及少数软骨破坏；乙酸乙酯中剂量组(E)可见滑膜组织中度增生，少量炎性细胞浸润，无明显软骨及骨组织破坏；乙酸乙酯高剂量组(F)滑膜仅轻度增生，细胞形态规则，少量炎性细胞浸润，无典型血管翳形成，软骨表面光滑，无软骨破坏及骨侵蚀。低剂量组病变改变较模型组有所减轻，但病变减轻程度不及高、中剂量组。本发明药物组合物减轻踝关节的变形破坏、滑膜组织的异常增生、炎性细胞浸润呈剂量依赖性降低(见图6-14)。

4大鼠的关节肿胀度：结果见表5。治疗后各治疗组、雷公藤多苷组低于模型组(P＜0.01或P＜0.05)，高剂量组低于其他各组(P＜0.01或P＜0.05)。

表5各组对大鼠关节肿胀度的影响(x±s)

各组对CIA大鼠右后跖肿胀度的影响

注：与空白组比较，^#P＜0.05，^##P＜0.01；与模型组比较，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01；

5大鼠血清TNF-α、白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素8(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)的含量：结果见表6。模型组大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α与正常组比较明显增高(P＜0.01)，乙酸乙酯和正丁醇低组、中组、高组、雷公藤多苷组均可下调CIA大鼠血清IL-6、IL-8和TNF-α的含量，乙酸乙酯各组比较均有差异显著性(P＜0.05)。乙酸乙酯高组与乙酸乙酯低组在IL-6、IL-8和TNF-α方面，比较有差异性(P＜0.05)。

表6各组大鼠血清中IL-6、IL-8和TNF-α含量比较

注：与正常组比较，^*P＜0.05，^**P＜0.01；与模型组比较，^ΔP＜0.05，^ΔΔP＜0.01；与低剂量组比较，^#P＜0.05。

3讨论

抗炎实验研究表明，乙酸乙酯和正丁醇药物组合物均可显著减轻二甲苯引起的小鼠耳肿胀，减轻角叉菜胶所致的大鼠足趾肿胀度，具有较好的抗炎作用。

镇痛实验研究表明，在热板法中，本发明药物组合物三个剂量与给药前比较均有明显的差异，能明显延长小鼠的痛反应潜伏期，且随着剂量的增加镇痛作用增强，有效镇痛作用持久，能维持2h以上。

同时，本发明药物组合物能够有效治疗II型胶原性关节炎，表明对类风湿性关节炎具有良好的治疗作用。

Claims (9)

1.一种龙须藤乙酸乙酯提取物，其特征在于：它含有槲皮素的重量百分含量不得少于0.05%，杨梅素的重量百分含量不得少于0.04%；

所述的龙须藤乙酸乙酯提取物是由如下步骤制备而成：

取龙须藤药材，加40-95%乙醇加热回流提取，提取液回收乙醇至无醇味，醇提液用石油醚萃取，得石油醚层和水层，水层加氯仿萃取，得氯仿层和水层；水层用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取液，回收，烘干，即得龙须藤乙酸乙酯提取物。

2.    根据权利要求1所述的龙须藤乙酸乙酯提取物，其特征在于：它含有槲皮素的重量百分含量为0.05-1.50%，杨梅素的重量百分含量为0.04-1.25%。

3.根据权利要求1或2所述的龙须藤乙酸乙酯提取物，其特征在于：它含有β-谷甾醇、胡萝卜苷、正三十烷、正六十烷、槲皮素和                                                

。   

4.根据权利要求1所述的龙须藤乙酸乙酯提取物，其特征在于：所述的乙醇为浓度为80%的乙醇。

5.一种制备权利要求1-4任意一项所述的龙须藤乙酸乙酯提取物的方法，包括如下步骤：

取龙须藤药材，加40-95%乙醇加热回流提取，提取液回收乙醇至无醇味，醇提液用石油醚萃取，得石油醚层和水层，水层加氯仿萃取，得氯仿层和水层；水层用乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯提取液，回收，烘干，即得龙须藤乙酸乙酯提取物。

6.权利要求1-4任意一项龙须藤乙酸乙酯提取物在制备镇痛抗炎的药物中的用途。

7.权利要求1-4任意一项龙须藤乙酸乙酯提取物在抗类风湿性关节炎的药物中的用途。

8.一种治疗类风湿性关节炎的药物组合物，它是由权利要求1-4任意一项所述的龙须藤乙酸乙酯提取物为活性成分，加入药学上可接受的辅料制备成药学上常用的制剂。

9.根据权利要求8所述的治疗类风湿性关节炎的药物组合物，其特征在于：所述的制剂是口服制剂。

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