JP2005194256A

JP2005194256A - 肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法

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Publication number: JP2005194256A
Application number: JP2004104489A
Authority: JP
Inventors: I-Horng Pan; 一紅潘; Yu-Ming Hsieh; 右銘謝; Zhi-Jie Huang; 志傑黄; Hsi-Ho Chiu; 惜禾邱; Chaur-Ting Ju; 朝庭朱; Chu-Hsun Lu; 居勲呂; Pei-Yi Tsai; 佩宜蔡; Wei-Lun Fan; ▲い▼倫范; Wen-Huang Peng; 文煌彭; Ming-Tsuen Hsieh; 明村謝
Original assignee: Industrial Technology Research Institute ITRI
Current assignee: Industrial Technology Research Institute ITRI
Priority date: 2003-12-30
Filing date: 2004-03-31
Publication date: 2005-07-21
Anticipated expiration: 2024-03-31
Also published as: US20080138445A1; US20050142222A1; US7431946B2; TWI334782B; JP4220426B2; US7799353B2; TW200520764A

Abstract

【課題】肝炎治療用医薬組成物及びその製造方法の提供。
【解決手段】植物を粉砕後、水で湿潤させ並びに煎じて水抽出液を形成した後、水抽出液を濃縮して第１濃縮液となし、エタノールを加えて沈殿物を生成させる。液相層を取り濃縮して第２濃縮液となし並びにこれを乾燥させる。上述の第２濃縮液を樹脂に通し、さらに水、水／エタノール混合溶液及びエタノールで溶離し、水／エタノール及びエタノール溶離留分を収集して混合し、並びに混合液を濃縮して第３濃縮液となし、最後に乾燥させる。本発明に使用する植物は学名ＢｏｅｈｍｅｒｉａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｔｓＴｈｕｎｂｅｒｇ，Ｂｏｅｈｍｅｒｉａｎｉｖｅａのようなイラクサ科の植物とされる。
【選択図】なし

Description

本発明は一種の肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法に関し、特にイラクサ科植物を利用した肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法に関する。

慢性肝臓病（慢性肝炎、肝硬変及び肝癌）は人類の健康の天敵であり、肝臓病はその病因によりウイルス性肝臓病、エタノール性肝臓病、薬物或いは毒物性肝臓病及び新陳代謝異常性肝臓病に分けられる。世界には現在約３億５千万人の慢性Ｂ型肝炎の帯菌者がおり、２７０万人の慢性Ｃ型肝炎の帯菌者がいる。台湾では、肝臓病は相当に多く、Ｂ型肝炎の帯菌率は約１５〜２０％、全台湾で２−４％の人口がＣ型肝炎ウイルスに感染しており、このため肝炎用医薬品の発展市場は極めて大きい。

現在、医者が肝臓病治療に使用する医薬組成物或いは抗ウイルス薬物或いは免疫調節剤等は、一定の治療効果を有するが、Ｂ型肝臓病治療用インターフェロン及びラミブジン（Ｌａｍｉｖｕｄｉｎｅ）等のように、副作用が大きく且つ費用が高い。インターフェロンは１９９２年に米国ＦＤＡが慢性Ｂ型肝臓病治療薬として使用許可したが、副作用が非常に大きく、Ｂ型肝炎患者の僅かに２０％にしか反応がなく、一方、ラミブジンはＢ型肝炎ウイルスの突然変異を引き起こしやすく、このため治療の効果が下がる。

漢方医による肝臓病治療は、ほとんどが伝統処方或いは民間療法を採用しているが、治癒率は低く、再現性が低く（製造工程を掌握できず、一定の品質に管理できない）、且つ弁証論での治療は治療を誤ったり延長させやすく、このため漢方薬には肝臓上の治療上、往々にしてネックと盲点がある。

しかし漢方薬は肝臓病治療にある程度の貢献を有し、肝臓病治療の有効な組成物及び有効な治療成分の取り出し技術を提供しており、薬物或いはその他の化学性（例えばエタノール性肝臓病）の引き起こす肝炎現象に対して、肝臓保護の作用を有し、臨床上慢性肝炎患者の治療の参考に値する。

一般に使用される漢方薬の多くは全ての薬剤を水で煎じる方式で飲用する。ただしこの方法は往々にして十分な量の活性成分を得ることができず、且つある薬物の活性成分は高温で煮ると活性を失い、薬効を発揮できなくなる。文献には多くの肝臓病治療用の医薬組成物の製造方法が記載されているが、その薬材種類は非常に多く、且つ伝統的な技術で製造されるため、上述の問題を解決できない。このため、有機溶剤で漢方薬中の活性物質を抽出する技術も提供されているが、使用する有機溶剤例えばメタノール、アセトン、クロロホルム等は人体に対する毒性が相当に大きく、徹底的に除去しなければ人体に不適用である。これにより、現在市場には新たな肝臓病治療用の医薬組成物とその製造方法に対する需要がある。

本発明者は研究の結果、イラクサ科の植物が良好な肝臓病治療の効果を有することを発見した。しかし前述したように、伝統的な口服用に煎じた薬物の効果は有限であり、工業上は有毒の有機溶剤で抽出する工程が行なわれ、且つその過程で活性物質が活性を失うことがよくある。このため、現在市場において新たな肝臓病治療用の医薬組成物とその製造方法が求められている。イラクサ科の植物の抽出物を肝臓病治療に用い、且つその製品の含有する有効成分を伝統的な製造方法による製品より高くして更に多くの活性物質を保留すれば、更に良好な治療効果を上げることができ、且つ過程中に有毒な有機溶剤を使用しないようにすれば、薬物の安全性を高めることができる。

ゆえに、本発明の主要な目的は、一種の肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法を提供することにあり、それは肝臓機能を保護し、これにより慢性肝炎患者の治療薬物とすることができる肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法であるものとする。

本発明のもう一つの目的は、一種の肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法を提供することにあり、それは植物中の活性物質を有効に抽出し、且つ有機溶剤を含有させないようにして製造した医薬組成物及びその製造方法であるものとする。

請求項１の発明は、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、
（ａ）植物を粉砕後、水で湿潤させ並びに煎煮し水抽出液を形成する工程、
（ｂ）該水抽出液を濃縮して第１濃縮液となす工程、
（ｃ）該第１濃縮液にエタノールを加えて沈殿物を生成させ、分離した固相と液相を形成し、液相層を収集する工程、
（ｄ）液相層を濃縮して第２濃縮液となす工程、
そのうち、該植物は学名Boehmeria frtescents Thunberg 、Boehmeria nivea 或いはイラクサ科の植物より選択することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項２の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ａ）の工程で湿潤時間は８−２４時間とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項３の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ａ）の工程で前記植物を複数回煮沸及び攪拌し、毎回水抽出液を収集することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項４の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｂ）の工程で水抽出液を濃縮して固形含有率１−５０重量％の濃縮液とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項５の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｃ）の工程で９５％エタノールを加え、並びにエタノールの最終濃度を４０〜８０重量％とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項６の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｃ）の工程で遠心濾過方式で固相と液相を分離することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項７の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｄ）の工程の濃縮で固形含有率５〜５０重量％の濃縮液を形成することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項８の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、第２濃縮液を乾燥、粉砕、造粒並びにカプセル封入する工程を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項９の発明は、請求項８記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、第２濃縮液の乾燥は冷凍乾燥或いは噴霧造粒乾燥或いは流動ベッド乾燥とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１０の発明は、請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｄ）の工程の後に、更に、
（ｅ）第２濃縮液を大孔吸着樹脂或いはイオン交換樹脂に通す工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１１の発明は、請求項１０記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｅ）の工程の後に、更に、
（ｆ）水、水／エタノール混合液、及びエタノールで溶離させる工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１２の発明は、請求項１１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｆ）の工程の後に、更に、
（ｇ）水／エタノール混合液の溶離留分とエタノール溶離留分を収集並びに合併する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１３の発明は、請求項１２記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｇ）の工程の後に、更に、
（ｈ）合併した溶離留分を濃縮して第３濃縮液となす工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１４の発明は、請求項１３記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｈ）の工程の後に、更に、
（ｉ）第３濃縮液を乾燥並びに粉砕する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１５の発明は、請求項１４記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｉ）の工程の乾燥は冷凍乾燥或いは噴霧造粒乾燥或いは流動ベッド乾燥とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１６の発明は、肝臓病治療用医薬組成物であり、
（ａ）学名Boehmeria frtescents Thunberg 、Boehmeria nivea 或いはイラクサ科の植物より選択した植物を粉砕し、水で８〜２４時間湿潤させた後、煎煮して水抽出液を形成する工程、
（ｂ）水抽出液を濃縮して第１濃縮液を形成する工程、
（ｃ）該第１濃縮液にエタノールを加えて沈殿物を生成させ、分離した固相と液相を形成し、液相層を収集する工程、
（ｄ）液相層を濃縮して第２濃縮液となし、その後、該第２濃縮液を乾燥させる工程、以上の工程により製造されることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１７の発明は、請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ａ）の工程で前記植物を複数回煮沸及び攪拌し、毎回水抽出液を収集することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１８の発明は、請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｂ）の工程で水抽出液を濃縮して固形含有率１−５０重量％の濃縮液とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１９の発明は、請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｃ）の工程で９５％エタノールを加え、並びにエタノールの最終濃度を４０〜８０重量％とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２０の発明は、請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｃ）の工程で遠心濾過方式で固相と液相を分離することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２１の発明は、請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｄ）の工程の濃縮で固形含有率５〜５０重量％の濃縮液を形成することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２２の発明は、請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、第２濃縮液を乾燥、粉砕、造粒並びにカプセル封入する工程を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２３の発明は、請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｄ）の工程の後に、更に、
（ｅ）第２濃縮液を大孔吸着樹脂或いはイオン交換樹脂に通す工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２４の発明は、請求項２３記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｅ）の工程の後に、更に、
（ｆ）水、水／エタノール混合液、及びエタノールで溶離させる工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２５の発明は、請求項２４記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｆ）の工程の後に、更に、
（ｇ）水／エタノール混合液の溶離留分とエタノール溶離留分を収集並びに合併する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２６の発明は、請求項２５記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｇ）の工程の後に、更に、
（ｈ）合併した溶離留分を濃縮して第３濃縮液となす工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２７の発明は、請求項２６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｈ）の工程の後に、更に、
（ｉ）第３濃縮液を乾燥並びに粉砕する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２８の発明は、請求項２７記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｉ）の工程の乾燥は冷凍乾燥或いは噴霧造粒乾燥或いは流動ベッド乾燥とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。

本発明は、肝臓機能を保護し、これにより慢性肝炎患者の治療薬物とすることができる肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法を提供している。

本発明は、植物中の活性物質を有効に抽出し、且つ有機溶剤を含有させないようにした肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法を提供している。

本発明は肝臓病治療用医薬組成物の製造方法を提供し、それによると、植物を粉砕後、水で湿潤させ並びに煎煮し水抽出液を形成した後、水抽出液を濃縮して第１濃縮液となし、エタノールを加えて沈殿物を生成させる。液相層を取り濃縮して第２濃縮液となし並びにこれを乾燥させる。そのうち、植物は学名ＢｏｅｈｍｅｒｉａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｔｓＴｈｕｎｂｅｒｇ，Ｂｏｅｈｍｅｒｉａｎｉｖｅａ或いはその他のイラクサ科の植物とされる。

本発明は肝臓病治療用医薬組成物の製造方法を提供し、それによると、上述の第２濃縮液を樹脂塔に通し、さらに水、水／エタノール混合溶液及びエタノールで溶離し、水／エタノール及びエタノール溶離留分を収集して混合し、並びに混合液を濃縮して第３濃縮液となし、最後に第３濃縮液を乾燥させる。

本発明はまた上述の方法により得た肝臓病治療用医薬組成物を提供し、その成分は学名ＢｏｅｈｍｅｒｉａｆｒｕｔｅｓｃｅｎｔｓＴｈｕｎｂｅｒｇ，Ｂｏｅｈｍｅｒｉａｎｉｖｅａその他のイラクサ科の植物より抽出される。

本発明の肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法中、湿潤の時間に制限はないが、好ましくは８〜２４時間とされる。煎煮工程は更に植物に対する複数回の煮沸と攪拌工程を具え、並びに毎回形成する浸膏を収集して水抽出液を形成する。その第１濃縮液は固形含有量が１−５０重量％の濃縮液とするのが好ましく、濃縮液に沈殿物を発生させるエタノールは開始濃度を９５重量％とし、最終濃度を４０〜８０重量％とするのが好ましい。第２濃縮液の濃度は固形含有率５〜５０重量％の濃縮液とするのが好ましい。

本発明の肝臓病治療用医薬組成物のさらなる純化工程中で、攪拌時間及び温度に制限はないが、好ましくは０．５〜５時間及び摂氏１５〜６０度とし、固相と液相の分離方式に制限はないが、好ましくは遠心分離を採用する。使用する樹脂塔は、そのうちの樹脂の種類に制限はないが、好ましくは大孔吸着樹脂或いはイオン交換樹脂とする。製品を溶離するエタノール濃度に制限はないが、好ましくは９５〜１００％エタノールとする。水／エタノール混合溶液の水とエタノールの比例に制限はないが、好ましくは１：４〜４：１とする。第３濃縮液は好ましくは固形含有率が５〜５０重量％の濃縮液であるものとする。

本発明の肝臓病治療用医薬組成物の製造工程中、固相と液相の分離方式に制限はないが、好ましくは遠心方式で分離する。最後に製品を乾燥させる方式に制限はないが、好ましくは冷凍乾燥、噴霧造粒乾燥或いは流動ベッド乾燥とする。本発明の製造方法中、選択的に最終製品を乾燥粉砕、造粒並びにカプセル封入する。

実施例１．Boehmeria frtescents Thunberg 抽出物の製造・・ＪＭ：
Boehmeria frtescents Thunberg 根３．６ｋｇに３．６Ｌの水を加え、２時間浸漬する。その後、摂氏１００度で二時間煎煮し、濾過して煎煮液を得る。さらに薬剤中に２．２Ｌの水を加え、摂氏１００度で約２時間煎煮した後、濾過してもう一つの煎煮液を得る。二つの煎煮液を混合し、さらに減圧濃縮して０．２１８ｋｇとする。測定したその固形含有率は１５．３％であった。冷凍乾燥後に製品ＪＭ３３ｇを得る。

実施例２．Boehmeria frtescents Thunberg 抽出物の製造・・ＢＭＥＣ−１：
Boehmeria frtescents Thunberg 根１５ｋｇに１５０Ｌの水を加え、８−１６時間浸漬する。その後、摂氏１００度で二時間煎煮し、濾過して煎煮液を得る。さらに薬剤中に１５０Ｌの水を加え、摂氏１００度で約２時間煎煮した後、濾過してもう一つの煎煮液を得る。二つの煎煮液を混合して２６６ｋｇの煎煮液を得て、それをさらに減圧濃縮して８．３ｋｇとする。測定したその固形含有率は１７．６％であった。濃縮液を攪拌し並びに蠕動ポンプを使用し１５Ｌの９５％エタノールでエタノール沈殿させる。最後に遠心分離機を使用してエタノール沈殿液を分離し、上澄み液を収集し、減圧濃縮、冷凍乾燥後に製品ＢＭＥＣ−１を、全部で１．０１３ｋｇ得る。

実施例３．Boehmeria frtescents Thunberg 抽出物の製造・・ＢＭＥＣ−１０１：
Boehmeria frtescents Thunberg 根９５ｋｇに８００Ｌの水を加え、８−１６時間浸漬する。その後、摂氏１００度で二時間煎煮し、濾過して煎煮液を得る。さらに薬剤中に７００Ｌの水を加え、摂氏１００度で約２時間煎煮した後、濾過してもう一つの煎煮液を得る。二つの煎煮液を混合して１３４０ｋｇの煎煮液を得て、それをさらに減圧濃縮して４２ｋｇとする。測定したその固形含有率は２５％であった。濃縮液を攪拌し並びに蠕動ポンプを使用し７０Ｌの９５％エタノールでエタノール沈殿させる。遠心分離機を使用してエタノール沈殿液を分離し、上澄み液を収集し、減圧濃縮して１２．５ｋｇ（第２濃縮液）とする。その固形含有率は１５％であった。さらに第２濃縮液を遠心分離して固相と液相を分離し、上澄み液を収集してＨＰ２０樹脂塔を通し（三菱化学株式会社製の多孔性、スチレン系の吸着／脱着樹脂）で吸着させ、並びに３０Ｌの水で溶離させる。３０Ｌの５０％エタノール（９５％エタノール／水＝１体積／１体積）で溶離させ、５０％エタノール溶離液２９．１ｋｇを得る。１５Ｌのエタノール（９５％エタノール）で溶離させ、エタノール溶離液１２．３ｋｇを得る。５０％エタノール溶離液とエタノール溶離液を収集並びに合併し、減圧濃縮して１．９ｋｇとする（第３濃縮液）。その固形含有率は２１．６％であった。冷凍乾燥後に製品０．４１５ｋｇを得た（コード番号ＢＭＥＣ−１０１）。

実施例４．各工程の純化倍率の比較：
表１を参照されたい。薬材抽出より開始し、各段階の純化工程により、各段階の製品の相対収率もまた改変し、薬材１００％で開始し、粗抽出（水抽出）でＪＭとした後、その濃縮倍率は１０倍である。エタノール沈殿純化によりＢＭＥＣ−１とした後、その濃縮倍率は２０倍に達する。最後に樹脂吸着純化後の製品ＢＭＥＣ−１０１はその濃縮倍率が２００倍に達する。

実施例５．動物試験（ｉｎｖｉｖｏ）・・・ｄ−ガラクトサミン（ｇ−ｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ）誘発急性肝炎（参考薬物グループはグアニン（ｇｕａｎｉｎｅ）を投与）：
雄ラット各５匹を一グループとし、各一匹は約２００±２０ｇとする。実験時に制御グループと毒薬グループに蒸留水を経口投与し、薬物グループに異なる工程で製造した薬物或いは剤量を経口投与する（薬物を蒸留水に溶かした後に投与）。参考薬物グループにはグアニン（３００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与し、投剤量はいずれも１０ｍｇ／ｋｇである。
０．５時間後、制御グループ以外の各グループにｄ−ガラクトサミン（５００ｍｇ／ｋｇ）を腹腔注射する。ｄ−ガラクトサミン注射後４時間、８時間に、更に一回投薬し、剤量は同じである。ｄ−ガラクトサミン注射後２４時間に、動物犠牲採血し、ＨＩＴＡＣＨＩ社の自動分析システム（ｍｏｄｅｌ７０５０）にＵＶ法を組合せ、血清中のＧＯＴとＧＰＴの活性を測定した。

実施例６．動物試験・・ｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎（二グループの参考薬物グループに、それぞれシリマリン（ｓｉｌｙｍａｒｉｎ）とグアニン（ｇｕａｎｉｎｅ）を経口投与：
ラット各６匹を一グループとする。実験前に２４時間禁食し、実験時に制御グループと毒薬グループに蒸留水を投与し、薬物グループに１ｇ／ｋｇを経口投与する。参考薬物グループにシリマリン（２００ｍｇ／ｋｇ）とグアニン（３００ｍｇ／ｋｇ）を経口投与し、一時間後に、各グループにｄ−ガラクトサミン（４００ｍｇ／ｋｇ）を腹腔注射し、制御グループには生理食塩水を腹腔注射する。ｄ−ガラクトサミン注射後４時間、８時間の薬物グループ及び参考薬物グループそれぞれに再度一回投薬し、剤量は同上である。ｄ−ガラクトサミン注射後２４時間に、動物にエーテル麻酔し、頸動脈より採血し、血清を分離し、血清を室温中で１時間静かに置き、遠心分離機内（Ｂａｃｋｍａｎ，ＧＳ−６Ｒ，３０００ｒｐｍ）で１０分間遠心分離する。血清中のＧＯＴとＧＰＴの活性を測定する。

実施例７．病理組織標本の製造：
ｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎試験採血完了した実験動物を解剖し、肝臓を取り出し、約０．５ｃｍ³ の肝組織を取り、１０％の中性ホルマリンで肝組織を固定し１から２週間後に、さらにこれらの肝組織を脱水浸ロウ機で脱水、パラフィンで被包し、被包後に回転式切片機で約４〜５μｍの肝組織切片に切る。肝組織切片をハエマトキシリン（Ｈａｅｍａｔｏｘｙｌｉｎ）及びエオシン（Ｅｏｘｉｎ）で染色し、光学顕微鏡で肝組織切片病理変化を観察する。

実施例８．実験結果：
肝臓細胞が損傷を受ける時、肝臓内の酵素は大量に血清中に放出され、血清中のＧＯＴとＧＰＴ値を上昇させる。これによりBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物処理の前後のラット血清中のＧＯＴとＧＰＴの変化を比較することにより、Boehmeria frtescents Thunberg 抽出物の肝臓損害に対する修復の影響を推測できる。並びに肝重量の比較によりラットの肝肥大の状況を推測できる。その結果は以下のとおりである。
（ａ）表２はBoehmeria frtescents Thunberg （ＪＭ）のｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎の動物に対する影響結果を示す

（サンプル数＝５、数値は平均値±標準差で表示、ｄ−ガラクトサミングループと ^*ｐ＜０．０５， ^** ｐ＜０．０１，^*** ｐ＜０．００１を比較、グループｔ−ｔｅｓｔで分析し、ＧＯＴとＧＰＴの下降程度は３０％あるいはそれ以上であり、即ち顕著な肝臓保護効果を具備することを示す）
Boehmeria frtescents Thunberg 抽出物（ＪＭ）はｄ−ガラクトサミンが誘発する血清中の高いＧＯＴとＧＰＴ値に対して明らかな降下作用を有する（ＧＯＴとＧＰＴ値がそれぞれ３５％及び５５％の降下を達成）。参考薬物対照グループ（グアニン経口投与、ＧＯＴとＧＰＴ値はそれぞれ２４％及び３２％降下）と比較すると、ＪＭはｄ−ガラクトサミンにより誘発される肝損傷に対して有効な保護或いは修復の機能を有する。
（ｂ）表３はBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物（ＢＭＥＣ−１）のｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎の動物に対する影響の結果を示す。

（サンプル数＝５、数値は平均値±標準差で表示、ｄ−ガラクトサミングループと ^*ｐ＜０．０５， ^** ｐ＜０．０１，^*** ｐ＜０．００１を比較、グループｔ−ｔｅｓｔで分析し、ＧＯＴとＧＰＴの下降程度は３０％あるいはそれ以上であり、即ち顕著な肝臓保護効果を具備することを示す）
実施例２で製造したBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物（ＢＭＥＣ−１）１０００×３ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、ｄ−ガラクトサミンが誘発する血清中の高いＧＯＴとＧＰＴ値は明らかな降下作用を有する（ＧＯＴとＧＰＴ値がそれぞれ６４％及び６７％の降下を達成）。参考薬物対照グループ（グアニン経口投与、ＧＯＴとＧＰＴ値はそれぞれ２４％及び３２％降下）と比較すると、ＢＭＥＣ−１はｄ−ガラクトサミンにより誘発される肝損傷を有効に防止する。
（ｃ）表４は異なるバッチのBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物（ＢＭＥＣ−１）及び使用する剤量のｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎の動物に対する影響の結果を示す。
実施例２で製造したＢＭＥＣ−１の工程の安定性を了解いただくよう、実施例２の工程を利用して連続して二つのバッチを製造し、その工程製品の一致性を観察するほか、本工程で製造する製品の異なる剤量のｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎の動物に対する試験状況により検討を行ない、その結果を表４に示す。表４は異なるバッチのＢＭＥＣ−１及びその使用剤量のｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎の動物に対する影響を示す。

（サンプル数＝５、数値は平均値±標準差で表示、ｄ−ガラクトサミングループと ^*ｐ＜０．０５， ^** ｐ＜０．０１，^*** ｐ＜０．００１を比較、グループｔ−ｔｅｓｔで分析し、ＧＯＴとＧＰＴの下降程度は３０％あるいはそれ以上であり、即ち顕著な肝臓保護効果を具備することを示す）
実施例２で製造したバッチ１のBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物（コード番号ＢＭＥＣ−１）１０００×３ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、ｄ−ガラクトサミンが誘発する血清中の高いＧＯＴとＧＰＴ値は、参考薬物対照グループ（グアニン３００×３ｍｇ／ｋｇを経口投与、ＧＯＴとＧＰＴ値はそれぞれ４９％及び４１％降下）に較べ、明らかな降下作用を有する（ＧＯＴとＧＰＴ値がそれぞれ５７％及び６０％の降下を達成）。この結果から判断し、肝臓の保護及び修復機能方面に対して、Boehmeria frtescents Thunberg 水抽出後にエタノール沈殿後の上澄み液（ＢＭＥＣ−１）は有効にｄ−ガラクトサミンが誘発する肝損傷を防止できる。
同様に、実施例２で製造したバッチ２のBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物（コード番号ＢＭＥＣ−１）１０００×３ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、ｄ−ガラクトサミンが誘発する血清中の高いＧＯＴとＧＰＴ値は、参考薬物対照グループ（グアニン３００×３ｍｇ／ｋｇを経口投与、ＧＯＴとＧＰＴ値はそれぞれ４２％及び４９％降下）に較べ、明らかな降下作用を有する（ＧＯＴとＧＰＴ値がそれぞれ４８％及び５４％の降下を達成）。この結果から判断し、肝臓の保護及び修復機能方面に対して、Boehmeria frtescents Thunberg 水抽出後にエタノール沈殿後の上澄み液（ＢＭＥＣ−１）は有効にｄ−ガラクトサミンが誘発する肝損傷を防止できる。
剤量方面では、二つのバッチのサンプルの試験データはいずれもこの肝臓保護の動物試験モード中において、ＢＭＥＣ−１が剤量反応（三種類の剤量：１００×３ｍｇ／ｋｇ、３００×３ｍｇ／ｋｇ、１０００×３ｍｇ／ｋｇ）を有し、肝臓保護の降下は剤量の増加により高まることを示す。
（ｄ）表５は再純化工程（実施例３）で製造したBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物（ＢＭＥＣ−１０１）及び使用する剤量のｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎の動物に対する影響を示す。
Boehmeria frtescents Thunberg 抽出物の活性成分は有効に保留と濃縮され、服用剤量は大幅に下げることができる。本発明は実施例２の工程を修正及び改良して実施例３とすることができ、これにより更に純化した活性組合せ物を開発でき、並びにｄ−ガラクトサミン誘発急性肝炎の動物に対する試験を行ない、その結果を表５に示す。

（サンプル数＝６、数値は平均値±標準差で表示、 ^*ｐ＜０．０５， ^** ｐ＜０．０１，^*** ｐ＜０．００１とｄ−ガラクトサミングループを比較、Ｓｈｅｆｆｅ’ｓｔｅｓｔ後に独立サンプルに単変因変異数分析ｏｎｅｗａｙＡＮＯＶＡを行なう）
実施例３で製造したBoehmeria frtescents Thunberg 水抽出後にエタノール及び樹脂で部分純化した製品（ＢＭＥＣ−１０１）を５０×３ｍｇ／ｋｇを経口投与した後、ｄ−ガラクトサミンが誘発する血清中の高いＧＯＴとＧＰＴ値は、明らかな降下作用を有する（ＧＯＴとＧＰＴ値はそれぞれ８０％及び３６％降下）。参考薬物対照グループ（グアニン３００×３ｍｇ／ｋｇを経口投与、ＧＯＴとＧＰＴ値はそれぞれ７０％及び７９％降下；シリマリン２００×３ｍｇ／ｋｇ経口投与、ＧＯＴとＧＰＴ値はそれぞれ７１％及び８８％降下）に較べ、本発明の実施例３で製造した製品（ＢＭＥＣ−１０１）は肝臓の保護と修復機能を具備することが示される。且つその服用剤量は僅かに５０×３ｍｇ／ｋｇであり、シリマリンの２００×３ｍｇ／ｋｇ、グアニンの３００×３ｍｇ／ｋｇの対照グループ、及びＢＭＥＣ−１の５００×３ｍｇ／ｋｇに較べて少なく、ＢＭＥＣ−１０１は良好な肝臓保護効果を有する。低剤量で効果を達成できることから、Boehmeria frtescents Thunberg より抽出した活性成分が有効に保留及び濃縮されていることが示される。
（ｅ）病理組織標本

（肝損傷評価：０＝未観測ａｂｓｅｎｔ；１＝軽微程度ｔｒａｃｅ；２＝微弱程度ｗｅａｋ；３＝温和程度ｍｏｄｅｒａｔｅ；４＝厳重程度ｓｔｒｏｎｇ）
（肝繊維評価：０＝正常；１＝膠原繊維増生，ただし中隔の形成はない；２＝中央静脈と門脈区の両者が分離；３＝完全な中隔形成，中間は相互に接続し並びに肝臓が多くの節片に分割されるが、中隔は非常に薄い；４＝完全な中隔形成，且つ中隔が厚くなる，肝硬変）
表６と図１から図６に示されるように、毒薬グループのｄ−ガラクトサミンが誘発する肝損傷は細胞発炎、細胞壊死と胆管増生の現象を形成しうる（図２）。且つ軽微な脂肪変性、及び中央静脈と門脈の両者を分ける肝繊維化程度が観測される。薬物グループ（ＢＭＥＣ−１（図５）及びＢＭＥＣ−１０１（図６））、参考薬物グループ（シリマリン（図３）、グアニン（図４））及び毒薬グループ（ｄ−ガラクトサミン（図２））と比較すると、表６と表１からＢＭＥＣ−１０１とＢＭＥＣ−１の両者は気張様変性と有糸分裂部分のいずれにも損傷の状況を観察できない。且つＢＭＥＣ−１０１処理の剤量は僅かに５０ｍｇ／ｋｇであり、シリマリン（２００ｍｇ／ｋｇ）とグアニン（３００ｍｇ／ｋｇ）対照グループに較べ、ＢＭＥＣ−１０１はシリマリンよりも良好な肝臓保護効果を有することが示され、また、活性成分が有効に保留及び濃縮されていることが示される。脂肪変性、肝繊維化、細胞発炎、細胞壊死及び胆管増生の方面で、両者は参考薬物グループと同様、毒薬グループと比較して、軽微或いは微弱程度の損害しか現出しない。
上述の結果から、本発明により製造されるBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物は、血清中のＧＯＴとＧＰＴ値に対して明らかな降下作用を有し、即ち損害を受けた肝臓に対して修復の作用を有し、且つ降下比例は伝統的な抽出物を遥かに超え、その修復効果が良好であることが示され、またBoehmeria frtescents Thunberg 抽出物の活性成分が有効に保留及び濃縮されていることが示される。これから、本発明の製造方法は新規性を有し、且つ大量に有効物質を抽出でき、並びに有効物質を完全に保存し、それに活性を喪失させないことが分かる。
このほか、本発明は有毒の有機溶媒による抽出を行なわず、医薬レベルのエタノール及び水で植物中の有効物質を抽出純化しており、人体に対して無害である。且つこの技術の属する分野の者なら分かるように、僅かにエタノールを使用するだけでは良好な抽出効果を得られない。本発明は大量の有効物質を得られるエタノール濃度の正確な範囲を見つけ、且つ動物実験でその効果が確実で良好であることを証明した。この技術の提示により、有毒なメタノール、クロロホルム或いはアセトン等の溶剤を使用することがなく、肝臓病治療に有効な製品を得ることができ、ゆえに本発明はこの技術領域の革命的技術である。また濃縮工程での濃縮物の固形含有率は有効物質比例を高めるのに相当重要であることが発見されたが、これはまた周知の技術では記載されていない技術である。

総合すると、本発明はその目的、手段、作用効果のいずれにおいても従来の技術とは異なっており、肝臓病治療用医薬組成物及びその製造方法の革新的技術を提供するものである。

本発明の病理組織標本写真である。本発明の病理組織標本写真である。本発明の病理組織標本写真である。本発明の病理組織標本写真である。本発明の病理組織標本写真である。本発明の病理組織標本写真である。

Claims

肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、
（ａ）植物を粉砕後、水で湿潤させ並びに煎煮し水抽出液を形成する工程、
（ｂ）該水抽出液を濃縮して第１濃縮液となす工程、
（ｃ）該第１濃縮液にエタノールを加えて沈殿物を生成させ、分離した固相と液相を形成し、液相層を収集する工程、
（ｄ）液相層を濃縮して第２濃縮液となす工程、
そのうち、該植物は学名Boehmeria frtescents Thunberg 、Boehmeria nivea 或いはイラクサ科の植物より選択することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ａ）の工程で湿潤時間は８−２４時間とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ａ）の工程で前記植物を複数回煮沸及び攪拌し、毎回水抽出液を収集することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｂ）の工程で水抽出液を濃縮して固形含有率１−５０重量％の濃縮液とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｃ）の工程で９５％エタノールを加え、並びにエタノールの最終濃度を４０〜８０重量％とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｃ）の工程で遠心濾過方式で固相と液相を分離することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｄ）の工程の濃縮で固形含有率５〜５０重量％の濃縮液を形成することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、第２濃縮液を乾燥、粉砕、造粒並びにカプセル封入する工程を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項８記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、第２濃縮液の乾燥は冷凍乾燥或いは噴霧造粒乾燥或いは流動ベッド乾燥とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｄ）の工程の後に、更に、
（ｅ）第２濃縮液を大孔吸着樹脂或いはイオン交換樹脂に通す工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１０記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｅ）の工程の後に、更に、
（ｆ）水、水／エタノール混合液、及びエタノールで溶離させる工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１１記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｆ）の工程の後に、更に、
（ｇ）水／エタノール混合液の溶離留分とエタノール溶離留分を収集並びに合併する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１２記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｇ）の工程の後に、更に、
（ｈ）合併した溶離留分を濃縮して第３濃縮液となす工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１３記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｈ）の工程の後に、更に、
（ｉ）第３濃縮液を乾燥並びに粉砕する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
請求項１４記載の肝臓病治療用医薬組成物の製造方法において、（ｉ）の工程の乾燥は冷凍乾燥或いは噴霧造粒乾燥或いは流動ベッド乾燥とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物の製造方法。
肝臓病治療用医薬組成物であり、
（ａ）学名Boehmeria frtescents Thunberg 、Boehmeria nivea 或いはイラクサ科の植物より選択した植物を粉砕し、水で８〜２４時間湿潤させた後、煎煮して水抽出液を形成する工程、
（ｂ）水抽出液を濃縮して第１濃縮液を形成する工程、
（ｃ）該第１濃縮液にエタノールを加えて沈殿物を生成させ、分離した固相と液相を形成し、液相層を収集する工程、
（ｄ）液相層を濃縮して第２濃縮液となし、その後、該第２濃縮液を乾燥させる工程、以上の工程により製造されることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ａ）の工程で前記植物を複数回煮沸及び攪拌し、毎回水抽出液を収集することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｂ）の工程で水抽出液を濃縮して固形含有率１−５０重量％の濃縮液とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｃ）の工程で９５％エタノールを加え、並びにエタノールの最終濃度を４０〜８０重量％とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｃ）の工程で遠心濾過方式で固相と液相を分離することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｄ）の工程の濃縮で固形含有率５〜５０重量％の濃縮液を形成することを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、第２濃縮液を乾燥、粉砕、造粒並びにカプセル封入する工程を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項１６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｄ）の工程の後に、更に、
（ｅ）第２濃縮液を大孔吸着樹脂或いはイオン交換樹脂に通す工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２３記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｅ）の工程の後に、更に、
（ｆ）水、水／エタノール混合液、及びエタノールで溶離させる工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２４記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｆ）の工程の後に、更に、
（ｇ）水／エタノール混合液の溶離留分とエタノール溶離留分を収集並びに合併する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２５記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｇ）の工程の後に、更に、
（ｈ）合併した溶離留分を濃縮して第３濃縮液となす工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２６記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｈ）の工程の後に、更に、
（ｉ）第３濃縮液を乾燥並びに粉砕する工程、
を更に具えたことを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。
請求項２７記載の肝臓病治療用医薬組成物において、（ｉ）の工程の乾燥は冷凍乾燥或いは噴霧造粒乾燥或いは流動ベッド乾燥とすることを特徴とする、肝臓病治療用医薬組成物。