CN108395420B - 一种羟基红花黄色素a的制备方法 - Google Patents

一种羟基红花黄色素a的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种羟基红花黄色素A的制备方法，具体的，本发明所述的羟基红花黄色素A的制备方法包括步骤：提供羟基红花黄色素A粗品C的溶液，对所述的溶液进行柱层析纯化，得到羟基红花黄色素A；其中，所述的柱层析使用的洗脱剂为5‑15％(v/v)乙醇水溶液；其所述的羟基红花黄色素A粗品C中，羟基红花黄色素A的含量＞30wt％。本发明制备的羟基红花黄色素A的纯度在99.5％以上，对设备要求低，操作简便，安全性高，成本低，产品纯度高，适于工业化、规模化生产。

Description

一种羟基红花黄色素A的制备方法
技术领域
本发明涉及天然药物提取领域，具体涉及一种羟基红花黄色素A的制备方法。
背景技术
羟基红花黄色素A是红花药理功效的最有效水溶性部位，具有抗血小板和抗心肌缺血作用，并具有抗凝血酶诱导的血小板聚集活性、抗炎活性、细胞保护活性、抗肿瘤活性。可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集与释放，可竞争性地抑制血小板激活因子与血小板受体的结合，是红花黄色素的活血化瘀有效成分。
现有研究中，关于羟基红花黄色素A的稳定性、药理作用、临床药物制剂的报道已有很多。研究发现羟基红花黄色素A干粉受热时，温度易不应高于50℃。目前关于一些关于从中药红花中提取分离羟基红花黄色素A的研究，如采用超声法提取，再经柱层析分离精制及冷冻干燥，制备得到羟基红花黄色素A干粉的方法，但该方法采用的超声法对设备的要求高、噪音污染大，不利工业化生产。研究中也有经加热提取、柱层析分离精制和冷冻或喷雾干燥制备得到羟基红花黄色素A干粉的方法，改方法提取时温度高，对设备要求高，能耗高，安全性较低，不利于环保，亦不利于羟基红花黄色素A的稳定。
因此，本领域亟需开发一种能够快速、低能耗、低成本、高纯度、安全性高和易于工业化制备羟基红花黄色素A的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够快速、低能耗、低成本制备高度度的羟基红花黄色素A的方法。
本发明的第一方面，提供一种羟基红花黄色素A的制备方法，包括步骤：
(a)提供羟基红花黄色素A粗品C的溶液，对所述的溶液进行柱层析纯化，得到羟基红花黄色素A；
其中，所述的柱层析使用的洗脱剂为5-15％(v/v)乙醇水溶液；
其所述的羟基红花黄色素A粗品C中，羟基红花黄色素A的含量＞30wt％。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的羟基红花黄色素A粗品C中羟基红花黄色素A的含量＜99wt％，优选＜90wt％，更优选＜70wt％，最优选＜60wt％。
在另一优选例中，所述的步骤(a)中，所述的溶液通过将羟基红花黄色素A粗品C用去离子水溶解得到。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述洗脱剂为6-15％(v/v)乙醇水溶液。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述柱层析步骤中使用的层析柱中的填料为葡聚糖凝胶填料。
在另一优选例中，所述的葡聚糖凝胶填料选自下组：Sephadex G50、SephadexLH20、Sephadex G15、Sephadex G20，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的羟基红花黄色素A粗品C与柱层析使用的层析柱中的填料重量比为1:6-18，优选为1:8-15。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的柱层析使用的层析柱的径高比为1:6-35；优选为1:10-25。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，纯化得到羟基红花黄色素A的纯度大于99.5wt％。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的纯化步骤包括：在所述柱层析步骤中，对含有羟基红花黄色素A的洗脱液进行减压浓缩和干燥。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的减压浓缩的温度为20-50℃，优选为30-40℃。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的干燥为冷冻干燥。
在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述洗脱剂的洗脱速度为3-10ml/min。
在另一优选例中，所述羟基红花黄色素A粗品C通过以下方法制备：
(b)对含有羟基红花黄色素A的粗品B的溶液进行柱层析，分离得到所述羟基红花黄色素A粗品C。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的溶液通过将羟基红花黄色素A的粗品B溶液溶于去离子水中得到。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的柱层析采用反相层析填料柱进行。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述反相层析填料柱的填料选自下组：ODS填料、十八烷基硅烷键合硅胶C18填料，或其组合。
在另一优选例中，所述在步骤(b)中，所述的柱层析中，所述的粗品B与所述柱层析使用的层析柱中的填料的重量比为1:4-20，优选为1:4-10。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的柱层析步骤中，使用的洗脱剂为5-40％(v/v)乙醇水溶液，优选5-20％(v/v)乙醇水溶液。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述柱层析包括步骤：收集羟基红花黄色素A浓度大于30％洗脱液。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的分离包括步骤：对所述柱层析得到的洗脱液进行减压浓缩。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的减压浓缩温度为20-60℃，优选为30-50℃。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的羟基红花黄色素A粗品C中，羟基红花黄色素的含量＞30wt％。
在另一优选例中，所述含有羟基红花黄色素A的粗品B通过以下方法制备：
(c)对红花水提物进行大孔树脂柱柱层析，分离得到羟基红花黄色素A的粗品B。
在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的大孔树脂柱的填料选自下组：XDA-8型大孔树脂填料、AB-8极性树脂填料，或其组合。
在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的红花水提物与柱层析使用的层析柱中的填料重量比为2-20:1，优选为2-10:1。
在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的柱层析包括步骤：洗脱先用水洗脱2-7倍柱体积，再用10-90％(v/v)的乙醇水溶液进行洗脱。
在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的柱层析包括步骤：洗脱先用水洗脱4-6倍柱体积，再用50-70％(v/v)的乙醇水溶液进行洗脱。
在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的分离包括步骤：对所述柱层析得到的洗脱液进行减压浓缩。
在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的减压浓缩在20-60℃下进行。
在另一优选例中，所述的红花水提物是通过以下方法制备的：
(d)用去离子水对红花药材进行提取，得到红花水提取。
在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的红花药材与去离子水的重量比例为1:10-35。
在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的红花药材与去离子水的重量比例为1:10-25。
在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述方法还包括步骤：提取后，对提取液进行减压浓缩。
在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的减压浓缩的温度为20-60℃，优选为30-50℃。
在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的红花水提物的相对密度为1.05-1.52，优选为1.17-1.45。
在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述方法还包括步骤：对所述红花药材进行浸泡，所述浸泡的温度为0-60℃，优选为18-40℃，更优选为室温。
在另一优选例中，所述浸泡的时间为12-24h。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为本发明实施例1制备的羟基红花黄色素A纯度检测的高效液相色谱图。
图2为本发明对比例2制备的羟基红花黄色素A纯度检测的高效液相色谱图。
具体实施方式
本发明经过广泛而深入的研究，得到了一种能够快速、低能耗、低成本、高纯度、安全性高和易于工业化制备羟基红花黄色素A的方法。本发明通过对含有羟基红花黄色素A的粗品进行柱层析纯化，去除杂质，得到纯化的羟基红花黄色素A。基于上述发现，发明人完成了本发明。
术语
如本文所用，术语“HPLC”是指高效液相色谱法。
羟基红花黄色素A的制备
羟基红花黄色素A是红花药理功效的有效成分，可抑制血小板激活因子诱发的血小板聚集与释放，可竞争性地抑制血小板激活因子与血小板受体的结合，是红花黄色素的活血化瘀有效成分，从红花中提取羟基红花黄色素A具有很强的医药价值和经济价值。
对此，本发明提供了一种提取分离制备高纯度羟基红花黄色素A的方法，该制备方法具有快速、低能耗、低成本、安全性高和易于工业化生产的优势。
本发明提供一种羟基红花黄色素A的制备方法，包括步骤：
(a)提供羟基红花黄色素A粗品C的溶液，对所述的溶液进行柱层析纯化，得到羟基红花黄色素A；
其中，所述的柱层析使用的洗脱剂为5-15％(v/v)乙醇水溶液；
其所述的羟基红花黄色素A粗品C中，羟基红花黄色素A的含量＞30wt％。
本发明所述的羟基红花黄色素A通过将羟基红花黄色素A粗品C进行纯化制备得到。所述的羟基红花黄色素A粗品C并没有特别的限制，可以从市场购买，也可以合成制备。
在本发明的一个实施例中，所述步骤(a)中，所述的羟基红花黄色素A粗品C中羟基红花黄色素A的含量＜99wt％，优选＜90wt％，更优选＜70wt％，最优选＜60wt％。在另一优选例中，所述的步骤(a)中，所述的溶液通过将羟基红花黄色素A粗品C用去离子水溶解得到。在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述洗脱剂为6-15％(v/v)乙醇水溶液。在另一优选实施例中，所述步骤(a)中，所述柱层析步骤中使用的层析柱中的填料为葡聚糖凝胶填料。在另一优选实施例中，所述的步骤(a)中，所述的葡聚糖凝胶填料选自下组：Sephadex G50、Sephadex LH-20、Sephadex G15、Sephadex G20，或其组合。在另一优选实施例中，所述的步骤(a)中，所述的羟基红花黄色素A粗品C与柱层析使用的层析柱中的填料重量比为1:6-18，优选为1:8-15。在另一优选实施例中，所述的步骤(a)中，所述的柱层析使用的层析柱的径高比为1:6-35，优选为1:10-25。在另一优选例中，所述步骤(a)中，纯化得到羟基红花黄色素A的纯度大于99.5wt％。在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的纯化步骤包括：在所述柱层析步骤中，对含有羟基红花黄色素A的洗脱液进行减压浓缩和干燥。在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的减压浓缩的温度为20-50℃，优选为30-40℃。在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述的干燥为冷冻干燥。在另一优选例中，所述步骤(a)中，所述洗脱剂的洗脱速度为3-10ml/min。
本发明提供了一种制备所述羟基红花黄色素A粗品C的方法，所述羟基红花黄色素A粗品C通过以下方法制备：
(b)对含有羟基红花黄色素A的粗品B的溶液进行柱层析，分离得到所述羟基红花黄色素A粗品C。
在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(b)中，所述的溶液通过将羟基红花黄色素A的粗品B溶于去离子水中。在另一个优选实施例中，所述步骤(b)中，所述的柱层析采用反相层析填料柱进行。在另一个优选实施例中，所述步骤(b)中，所述的柱层析采用的填料选自下组：ODS填料、十八烷基硅烷键合硅胶C18填料，或其组合。
在另一优选例中，所述在步骤(b)中，所述的柱层析中，所述的粗品B与所述柱层析使用的层析柱中的填料的重量比为1:4-20，优选为1:4-10。在另一优选实施例中，所述步骤(b)中，所述步骤(b)中，所述的柱层析步骤中，使用的洗脱剂为5-40％(v/v)乙醇水溶液，优选5-20％(v/v)乙醇水溶液。
在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述柱层析包括步骤：收集羟基红花黄色素A浓度大于30％洗脱液。在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的分离包括步骤：对所述柱层析得到的洗脱液进行减压浓缩。在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的减压浓缩温度为20-60℃，优选为30-50℃。在另一优选例中，所述步骤(b)中，所述的羟基红花黄色素A粗品C中，羟基红花黄色素的含量＞30wt％。
本发明提供了一种制备所述羟基红花黄色素A粗品B的方法，所述羟基红花黄色素A粗品B通过以下方法制备：
(c)对红花水提物进行大孔树脂柱柱层析，分离得到羟基红花黄色素A的粗品B。
在本发明的一个优选实施例中，所述步骤(c)中，所述的大孔树脂柱的填料选自下组：XDA-8型大孔树脂填料、AB-8极性树脂填料，或其组合。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的红花水提物与柱层析使用的层析柱中的填料重量比为2-20:1，优选为2-10:1。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的柱层析包括步骤：洗脱先用水洗脱2-7倍柱体积，再用10-90％(v/v)的乙醇水溶液进行洗脱。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的柱层析包括步骤：洗脱先用水洗脱4-6倍柱体积，再用50-70％(v/v)的乙醇水溶液进行洗脱。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的分离包括步骤：对所述柱层析得到的洗脱液进行减压浓缩。在另一优选例中，所述步骤(c)中，所述的减压浓缩在20-60℃下进行。
本发明还提供了一种制备所述的红花水提物方法，所述的红花水提物是通过以下方法制备的：
(d)用去离子水对红花药材进行提取，得到红花水提取。
在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的红花药材与去离子水的重量比例为1:10-35。在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的红花药材与去离子水的重量比例为1:10-25。在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述方法还包括步骤：提取后，对提取液进行减压浓缩。在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的减压浓缩的温度为20-60℃，优选为30-50℃。在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述的红花水提物的相对密度为1.05-1.52，优选为1.17-1.45。在另一优选例中，所述步骤(d)中，所述方法还包括步骤：对所述红花药材进行浸泡，所述浸泡的温度为0-60℃，优选为18-40℃，更优选为室温。在另一优选例中，所述浸泡的时间为12-24h。
本发明的主要优点
1、本发明从一种从中药红花中提取分离高纯度羟基红花黄色素A的制备方法具有快速、低耗能、低成本、高纯度、安全性高和易于工业化生产的优点。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
实施例1
将干燥红花药材，加入10倍于红花重量的去离子水，浸泡提取22h。提取液过滤，50℃下浓缩相对密度1.25，得溶液A。溶液A过XDA-8大孔树脂所投药材与填料重量比5:1，然后先用去离子水洗脱6个柱体积，再用70％乙醇水溶液洗脱；收集醇水洗脱部分，50℃下浓缩至干，得粉末B。取粉末B，加水溶解过C18柱，粉末B与填料重量1:4，用10％的乙醇水溶液洗脱；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于30％的醇水洗脱液，50℃浓缩干，得粉末C。取粉末C，加水溶解过Sephadex G50凝胶柱，柱床径高比1:10，用5％(v/v)乙醇水溶液洗脱，流速为3ml/min；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于99.5％醇水洗脱液，35℃下浓缩后冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A纯度99.5％以上的产品，收率为65.3％，羟基红花黄色素A纯度检测的高效液相色谱图如图1所示。
对比例1
将干燥红花药材，加入10倍于红花重量的去离子水，浸泡提取22h。提取液过滤，50℃下浓缩相对密度1.25，得溶液A。溶液A过XDA-8大孔树脂，所投药材与填料重量比5:1，然后先用去离子水洗脱6个柱体积，再用70％乙醇水溶液洗脱；收集醇水洗脱部分，50℃下浓缩至干，得粉末B。取粉末B，加水溶解过C18柱，粉末B与填料重量1:4，用10％的乙醇水溶液洗脱；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于30％的醇水洗脱液，50℃浓缩干，得粉末C。取粉末C，水溶解后进行硅胶柱层析，柱径高比为1:6，三氯甲烷:甲醇:水混合溶剂洗脱，得羟基红花黄色素A产品纯度最高为90％，收率5.2％。
实施例2
将干燥红花药材，加入20倍于红花重量的去离子水，浸泡提取15h。提取液过滤，55℃下浓缩至相对密度1.18，得溶液A。溶液A过XDA-8大孔树脂所投药材与填料重量比2:1，然后先用去离子水洗脱4个柱体积，再用50％乙醇水溶液洗脱；收集醇水洗脱部分，55℃下浓缩至干，得粉末B。取粉末B，加水溶解过C18柱，粉末B与填料重量1:10，用20％的乙醇水溶液洗脱；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于30％的醇水洗脱液，45℃浓缩干，得粉末C。取粉末C，加水溶解过Sephadex LH20凝胶柱，粉末C与填料重量1:10，柱床径高比1:25，用13％(v/v)乙醇水溶液洗脱，流速为10ml/min；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于99.5％醇水洗脱液，30℃下浓缩后冷冻干燥，即得羟基红花黄色素A纯度99.5％以上的产品，收率为70.5％。
对比例2
将干燥红花药材，加入20倍于红花重量的去离子水，浸泡提取15h。提取液过滤，55℃下浓缩至相对密度1.18，得溶液A。溶液A过XDA-8大孔树脂所投药材与填料重量比2:1，然后先用去离子水洗脱4个柱体积，再用50％乙醇水溶液洗脱；收集醇水洗脱部分，55℃下浓缩至干，得粉末B。取粉末B，加水溶解过C18柱，粉末B与填料重量1:10，用20％的乙醇水溶液洗脱；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于30％的醇水洗脱液，45℃浓缩干，得粉末C。粉末C以水溶解，过Sephadex G50凝胶柱，柱床径高比1:3，用50％甲醇洗脱，流速为1ml/min，得羟基红花黄色素A产品纯度最高为94％，收率仅为10.4％，从图2中可以看出，对比例2制备的羟基红花黄色素A的HPLC色谱峰中出现很多杂质峰。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种羟基红花黄色素A的制备方法，其特征在于，包括步骤：
(a)提供羟基红花黄色素A粗品C的溶液，对所述的溶液进行柱层析纯化，得到羟基红花黄色素A；
其中，所述的柱层析使用的洗脱剂为5-15％体积分数的乙醇水溶液；
其所述的羟基红花黄色素A粗品C中，羟基红花黄色素A的含量＞30wt％；
所述步骤(a)中，所述的溶液通过将羟基红花黄色素A粗品C用去离子水溶解得到；
所述步骤(a)中，所述柱层析步骤中使用的层析柱中的填料为葡聚糖凝胶填料，所述的葡聚糖凝胶填料选自下组：Sephadex G50、Sephadex LH20，或其组合；
所述步骤(a)中，所述的羟基红花黄色素A粗品C与柱层析使用的层析柱中的填料重量比为1:8-15；
所述步骤(a)中，所述的柱层析使用的层析柱的径高比为1:10-25；
所述步骤(a)中，所述洗脱剂的洗脱速度为3-10ml/min；
所述羟基红花黄色素A粗品C通过以下方法制备：
(b)对含有羟基红花黄色素A的粗品B的溶液进行柱层析，分离得到所述羟基红花黄色素A粗品C；
所述的溶液通过将羟基红花黄色素A的粗品B溶液溶于去离子水中得到；
所述步骤(b)中，所述的柱层析采用反相层析填料柱进行；
所述步骤(b)中，所述反相层析填料柱的填料为十八烷基硅烷键合硅胶C18填料；
所述在步骤(b)中，所述的柱层析中，所述的粗品B与所述柱层析使用的层析柱中的填料的重量比为1:4-10；
所述步骤(b)中，所述的柱层析步骤中，使用的洗脱剂为5-20％体积分数的乙醇水溶液；
所述步骤(b)中，所述柱层析包括步骤：收集羟基红花黄色素A浓度大于30％的洗脱液；
所述含有羟基红花黄色素A的粗品B通过以下方法制备：
(c)对红花水提物进行大孔树脂柱柱层析，分离得到羟基红花黄色素A的粗品B，所述的大孔树脂柱的填料为XDA-8型大孔树脂填料；
所述步骤(c)中，所述的柱层析包括步骤：洗脱先用水洗脱4-6倍柱体积，再用50-70％体积分数的乙醇水溶液进行洗脱；
所述步骤(c)中，所述的分离包括步骤：对所述柱层析得到的洗脱液进行减压浓缩；
所述步骤(c)中，所述的红花水提物与柱层析使用的层析柱中的填料重量比为2-10:1；
所述的红花水提物是通过以下方法制备的：
(d)用去离子水对红花药材进行提取，得到红花水提取物；
所述步骤(d)中，所述的红花药材与去离子水的重量比例为1:10-25；
所述步骤(d)中，所述的红花水提物的相对密度为1.17-1.45；
所述步骤(d)中，所述方法还包括步骤：对所述红花药材进行浸泡，所述浸泡的温度为18-40℃，所述浸泡的时间为12-24h。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中，所述的葡聚糖凝胶填料为Sephadex LH20；所述的柱层析使用的层析柱的径高比为1:25；所述洗脱剂的洗脱速度为10ml/min。
3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述在步骤(b)中，所述的柱层析中，所述的粗品B与所述柱层析使用的层析柱中的填料的重量比为1:10；使用的洗脱剂为20％体积分数的乙醇水溶液。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)中，所述的柱层析包括步骤：洗脱先用水洗脱4倍柱体积，再用50％体积分数的乙醇水溶液进行洗脱；所述的红花水提物与柱层析使用的层析柱中的填料重量比为2:1。
5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(a)中，所述的纯化步骤包括：在所述柱层析步骤中，对含有羟基红花黄色素A的洗脱液进行减压浓缩和干燥；所述的减压浓缩的温度为20-50℃。
6.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(b)中，所述的分离包括步骤：对所述柱层析得到的洗脱液进行减压浓缩；所述的减压浓缩的温度为30-50℃。
7.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(c)中，所述的减压浓缩在20-60℃下进行。
8.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述步骤(d)中，所述方法还包括步骤：提取后，对提取液进行减压浓缩；所述的减压浓缩的温度为30-50℃。
9.如权利要求1-4中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：
将干燥红花药材，加入10倍于红花重量的去离子水，浸泡提取22h；提取液过滤，50℃下浓缩相对密度1.25，得溶液A；溶液A过XDA-8大孔树脂所投药材与填料重量比5:1，然后先用去离子水洗脱6个柱体积，再用70％乙醇水溶液洗脱；收集醇水洗脱部分，50℃下浓缩至干，得粉末B；取粉末B，加水溶解过C18柱，粉末B与填料重量1:4，用10％的乙醇水溶液洗脱；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于30％的醇水洗脱液，50℃浓缩干，得粉末C；取粉末C，加水溶解过Sephadex G50凝胶柱，柱床径高比1:10，用5％体积分数乙醇水溶液洗脱，流速为3ml/min；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于99.5％醇水洗脱液，35℃下浓缩后冷冻干燥。
10.如权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述方法包括：
将干燥红花药材，加入20倍于红花重量的去离子水，浸泡提取15h；提取液过滤，55℃下浓缩至相对密度1.18，得溶液A；溶液A过XDA-8大孔树脂所投药材与填料重量比2:1，然后先用去离子水洗脱4个柱体积，再用50％乙醇水溶液洗脱；收集醇水洗脱部分，55℃下浓缩至干，得粉末B；取粉末B，加水溶解过C18柱，粉末B与填料重量1:10，用20％的乙醇水溶液洗脱；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于30％的醇水洗脱液，45℃浓缩干，得粉末C；取粉末C，加水溶解过Sephadex LH20凝胶柱，粉末C与填料重量1:10，柱床径高比1:25，用13％体积分数乙醇水溶液洗脱，流速为10ml/min；收集HPLC中羟基红花黄色素A纯度大于99.5％醇水洗脱液，30℃下浓缩后冷冻干燥。
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