CN102268052A - 一种山茶苷a的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种山茶苷A的制备方法，以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，置于液体动态连续逆流提取装置中醇提，合并提取液，回收乙醇，采用膜分离进行纯化，透过液上大孔树脂，吸附完成后，水和醇溶液洗脱，收集目标流分，浓缩，干燥即得粗品，采用高速逆流色谱法分离粗品中的山茶苷A。本方法工艺流程简单，提取效率高，十分利于工业化生产，且制备过程中，污染少，成本低，制备的山茶苷A纯度达到98%以上。
Description
技术领域
本发明属于中药领域，涉及一种山茶苷A的制备方法，特别是涉及一种应用高速逆流色谱法纯化山茶苷A的方法。
背景技术
亮叶杨桐（Adinandra nitida Merr. ex Li），又名亮叶红淡木，俗称石芽菜，为山茶科杨桐属植物，主要分布于我国广西、广东和贵州等地区，资源丰富。亮叶杨桐具有消炎、解毒、退热、止血和降压等多种功效，民间常用来防止各种炎症、无名肿瘤和外伤等，效果显著。近年来，研究显示亮叶杨桐叶中黄酮含量超过30%以上，并且有明显的抗氧化、降血脂、抗菌、抗高血压等功效。其中山茶苷A是亮叶杨桐叶中主要的黄酮类物质，含量可达25%以上。
中国专利（申请号为200810062110.5）“山茶苷A和山茶苷B的制备方法及用途”，该专利以石崖茶为原料，用水醇溶剂系统提取，减压浓缩，以中极性有机溶剂萃取脱脂，水相继续浓缩石崖茶总黄酮，将总黄酮经水醇系统重结晶得到山茶苷A，将总黄酮用碳酸钾是山茶苷A转化成山茶苷B后通过阳离子交换层析或直接用水醇系统重结晶，得到山茶苷B，该方法提取率低、样品损失量大、周期长。
袁尔东等（食品工业科技，2008，4（29）：212-214）采用大孔树脂分离纯化得到91.7%的山茶苷A，该方法所获得的上茶苷A纯度不能达到对照品的要求。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种山茶苷A的制备方法，应用高速逆流色谱分离纯化山茶苷A，操作简单、样品损失少、产品纯度高。
为了实现上述目的，本发明的技术方案如下：
一种山茶苷A的制备方法，其特征在于具体步骤如下：
（1）提取：以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，置于液体动态连续逆流提取装置中醇提，以60-85%的食用乙醇溶液为提取溶剂，在40-65℃的提取温度下，提取2-3次，合并提取液；
（2）膜分离：上述提取液回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，得到透过液；
（3）柱层析：透过液上大孔树脂，吸附完成后，用水和40-60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品；
（4）高速逆流色谱分离：采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到山茶苷A。
所述步骤（1）中液体动态连续逆流装置为多个提取装置串联或并联或串并联合用，每次提取乙醇溶液用量为原料质量的3-5倍（v/w）。
所述步骤（2）中膜材料为聚醚砜膜或聚砜膜，微滤膜孔径为0.2-0.45μm，超滤膜截留分子量为30000-1000，操作压力为0.1-0.15Mpa。
所述步骤（3）中的大孔吸附树脂为AB-8、D3520、HPD100或ADS-7型。
所述步骤（4）中高速逆流色谱法分离溶剂系统选用正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液，体积比为（1-3）：（3-5）：（1-3）：（4-6），溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，流动相流速控制在1.5-2.5ml/min，主机转速控制在750-900r/min。
本发明的有益效果是：
（1）利用液体动态连续逆流提取技术，通过循环的提取液不断地将有效成分提取出来，大大缩短了提取周期和溶剂的用量。
（2）采用膜分离、大孔吸附树脂和高速逆流色谱技术相结合分离制备山茶苷A，工艺简单、成本低、产品含量高。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。
具体实施方式
实施例1：
以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，取3kg，平均置于3个串联的提取装置中，加入12L60%的食用乙醇溶液，在40℃的提取温度下，提取3次，每次2h，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0.15Mpa，得到透过液，通过AB-8型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用50%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为1：3：1：4配制正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至800r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在1.5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到山茶苷A，含量98.8%。
实施例2：
以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，取3kg，平均置于3个串联的提取装置中，加入15L85%的食用乙醇溶液，在40℃的提取温度下，提取2次，每次3h，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0.15Mpa，得到透过液，通过HPD100型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用40%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为2：3：3：5配制正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至850r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在1.5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到山茶苷A，含量98.5%。
实施例3：
以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，取5kg，平均置于5个串联的提取装置中，加入25L80%的食用乙醇溶液，在50℃的提取温度下，提取2次，每次4h，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0.15Mpa，得到透过液，通过ADS-7型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用45%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为3：4：3：5配制正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至750r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2.5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到山茶苷A，含量98.6%。
实施例4：
以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，取5kg，平均置于5个串联的提取装置中，加入25L70%的食用乙醇溶液，在65℃的提取温度下，提取3次，每次3h，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0.1Mpa，得到透过液，通过D3520型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用40%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为1：3：1：4配制正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至800r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到山茶苷A，含量98.1%。
实施例5：
以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，取5kg，平均置于5个串联的提取装置中，加入25L80%的食用乙醇溶液，在55℃的提取温度下，提取2次，每次4h，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0.1Mpa，得到透过液，通过ADS-7型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为2：5：2：4配制正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至900r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到山茶苷A，含量98.2%。
实施例6：
以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，取5kg，平均置于5个串联的提取装置中，加入20L60%的食用乙醇溶液，在65℃的提取温度下，提取2次，每次4h，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为0.15Mpa，得到透过液，通过HPD100型大孔吸附树脂柱，吸附完成后，先用水洗脱至无色，再用60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品，采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，按体积比为3：5：3：6配制正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液溶剂系统，溶剂系统混匀后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，将固定相充满高速逆流色谱柱，开启主机转速调至850r/min，泵入下相作流动相，动态平衡后，流动相流速控制在2.5ml/min，将粗品溶于下相由进样阀进样，HPLC检测，收集目标成分，减压浓缩干燥流分，得到山茶苷A，含量98.3%。
Claims (5)
1.一种山茶苷A的制备方法，其特征在于具体步骤如下：
（1）提取：以亮叶杨桐叶为原料，粉碎，置于液体动态连续逆流提取装置中醇提，以60-85%的食用乙醇溶液为提取溶剂，在40-65℃的提取温度下，提取2-3次，合并提取液；
（2）膜分离：上述提取液回收乙醇，离心取上清液，在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，得到透过液；
（3）柱层析：透过液上大孔树脂，吸附完成后，用水和40-60%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩干燥得到山茶苷A粗品；
（4）高速逆流色谱分离：采用高速逆流色谱法对所得粗品进行分离纯化，制备得到山茶苷A。
2.根据权利要求1所述的一种山茶苷A的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中液体动态连续逆流装置为多个提取装置串联或并联或串并联合用，每次提取乙醇溶液用量为原料质量的3-5倍（v/w）。
3.根据权利要求1所述的一种山茶苷A的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中膜材料为聚醚砜膜或聚砜膜，微滤膜孔径为0.2-0.45μm，超滤膜截留分子量为30000-1000，操作压力为0.1-0.15Mpa。
4.根据权利要求1所述的一种山茶苷A的制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中
的大孔吸附树脂为AB-8、D3520、HPD100或ADS-7型。
5.根据权利要求1所述的一种山茶苷A的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中高速逆流色谱法分离溶剂系统选用正己烷-正丁醇-甲醇-0.5%乙酸水溶液，体积比为（1-3）：（3-5）：（1-3）：（4-6），溶剂系统配制后静置分层，以上相为固定相，下相为流动相，流动相流速控制在1.5-2.5ml/min，主机转速控制在750-900r/min。
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| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20111207 |