CN103145548B - 快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法 - Google Patents

快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，其方法步骤如下：1）丹参饮片用常规方法热提取；2）提取液加酸调pH后加乙醇醇沉二次，回收乙醇至无醇味；3）醇提物用聚酰胺树脂吸附分离；4）收集丹参素流分，用活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，低温减压浓缩；5）用乙醇重结晶，即得高纯度的丹参素。通过上述方式，本发明工艺步骤简便易行，只采用一种树脂即可达到吸附、分离纯化一步完成，所使用的溶剂无毒，安全，可靠，产品纯度高、成本低，适合于工业化大生产。

Description

快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法
技术领域
本发明涉及医药应用领域，特别是涉及一种快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法。
背景技术
丹参为唇形科鼠尾草属植物( Salvia miltiorrhiza Bge.) 丹参的干燥根部及根茎, 具活血化瘀,凉血消肿, 清心除烦之功效。临床上证实丹参具有扩张血管、降血脂及抗动脉粥样硬化、抑制血小板凝聚及抗血栓形成、及保护心肌、增加冠脉流量、抗菌消炎、抗肿瘤等作用。丹参中的活性成分可以分为脂溶性的丹参酮类和水溶性的丹酚酸类, 其中, 丹参素、丹酚酸B,、原儿茶醛、 迷迭香酸为丹酚酸类的主要成分, 二氢丹参酮, 隐丹参酮, 丹参酮I , 丹参酮IIA为脂溶性的丹参酮类的主要成分, 现代药理学研究表明, 丹参中酚酸类和丹参酮类成分均具有显著的生物活性。
丹参素(danshensu，DSS)又名D(+)-ß-(3，4-二羟基苯基)乳酸，属于酚酸类化合物，由于分子中具有活泼的羟基，因此，丹参素的溶液很容易发生氧化反应。丹参素的相对分子质量为198.17，分子式为C9H1005。丹参素味苦，密度1.546，熔点84～86℃，难溶于氯仿、乙醚等有机溶剂，溶于水、乙醇。丹参素是一种药理活性广泛、高效、低毒的化合物，药理学试验表明，1、丹参素具有缩小心肌梗死范围、降低心肌梗死程度、减少心肌酶的释放和缩短病程的作用，同时对心肌缺血／再灌注损伤具有保护作用。2、丹参素可明显改善脑缺血神经功能缺损体征，减轻脑组织病理形态学损伤，降低神经细胞凋亡百分率。3、抗动脉粥样硬化、血栓形成作用。4、抗肿瘤作用。5、抗炎作用。总之，丹参素在心脑血管系统疾病和肿瘤防治等方面具有广阔开发前景和临床应用价值。
目前，提取分离丹参素的方法较多。其中高纯度丹参素的制备方法专利主要有：CN101289385A 从丹参中提取高纯度丹参素的方法；
CN101434534A 丹参素钠纯品的制备方法；
CN1868994A 一种丹参素钠的制备方法；
CN101445451A 一种高纯度丹参素钠的制备方法；
CN102336652A 一种规模化制备高纯度丹参素钠的方法；
CN102464581A 一种制备高纯度丹参素钠的方法。
上述的六项专利，样品的预处理过程无太大区别，都是采用常规的方法，即水提（或稀碱）、醇沉、水洗、浓缩成适当比重的清膏。主要的区别在于分离纯化所采用的树脂类型的不同，其中包括大孔吸附树脂柱，阴阳离子交换树脂柱等，采用一根柱或两个性质不同的树脂柱来串联完成，主要的作用是对样品进行吸附，以水为洗脱液，来除去水溶性杂质。单凭上述的手段，无法来达到丹参素的纯度要求，而专利的关键纯化步骤在于最后几步都采用了色谱分离技术手段，包括使用葡聚糖凝胶柱、硅胶柱、C18、C8、C4等手段，通过重结晶，使丹参素的达到很高的纯度。
上述的六项专利的不足之处在于操作过程复杂，实验条件要求苛刻，操作不易控制，由于多次采用了柱吸附分离过程，损失较大，使得产品收率较低，并在过程中引入了大量的有机溶剂，操作步骤仅限于实验室，产品不能实现产业化。
发明内容
本发明主要解决的技术问题是提供一种快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，能够使得丹参素纯化过程的步骤简化，缩短时间，避免溶剂毒性大的问题，提高产品收率，实现产业化生产。
为解决上述技术问题，本发明采用的一个技术方案是：提供一种快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，所述方法步骤如下：
1）、丹参饮片用常规方法热提取，时间1小时，提取两次，合并提取液；
2）、提取液用盐酸调pH至2，浓缩至相对密度为1.20，冷却，加乙醇醇沉二次，10℃以下静置4小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20至1.22的清膏；
3）、上述的清膏用聚酰胺树脂柱吸附分离；
4）、收集丹参素流分，用活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，于40-50℃低温减压（通氮气保护）浓缩至相对密度为1.15-1.18，冷冻干燥；
5）、用乙醇重结晶，即得高纯度的丹参素。
优选的是，所述的步骤1）常规方法是指采用水提醇沉的方法。
优选的是，所述的步骤2）醇沉浓度是第一次使含醇量达60%，第二次使含醇量达80%。
优选的是，所述的步骤3）聚酰胺树脂的粒度为60-100目，用量为： 树脂：清膏=10-20：1，树脂柱的径高比为1：20。
优选的是，所述的步骤3）吸附分离的洗脱液为10%-50%的甲酸或乙酸。
优选的是，所述的步骤4）活性炭的用量为溶液体积的2%-3%。
优选的是，所述的步骤4）低温减压过程通氮气保护。
本发明的有益效果是：本发明快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，本方法不需要大孔树脂的初步提纯，由于丹参素是多羟基酚酸类化合物，通过控制色谱分离条件，可以直接进行聚酰胺色谱分离，因此，可以收集到丹参素纯品流分，而不是混合物，这样使分离、纯化一步完成，使得操作简便易行。整个过程中只用了盐酸、乙醇、乙酸、活性炭，保证了产品安全、无毒。
具体实施方式
下面对本发明的较佳实施例进行详细阐述，以使本发明的优点和特征能更易于被本领域技术人员理解，从而对本发明的保护范围做出更为清楚明确的界定。
本发明实施例包括：
一种快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，所述方法步骤如下：
1）、丹参饮片采用水提醇沉的方法热提取，时间1小时，提取两次，合并提取液；
2）、提取液用盐酸调pH至2，浓缩至相对密度为1.20，冷却，加乙醇醇沉二次，醇沉浓度是第一次使含醇量达60%，第二次使含醇量达80%，10℃以下静置4小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20至1.22的清膏；
3）、上述的清膏用聚酰胺树脂柱吸附分离，聚酰胺树脂的粒度为60-100目，用量为： 树脂：清膏=10-20：1，树脂柱的径高比为1：20，吸附分离的洗脱液为10%-50%的甲酸或乙酸；
4）、收集丹参素流分，用溶液体积的2%-3%活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，于40-50℃低温减压通过通氮气保护浓缩至相对密度为1.15-1.18，冷冻干燥；
5）、用乙醇重结晶，即得高纯度的丹参素。
实施例 1 ：
丹参饮片 1 kg，加8Kg水煎煮2次，每次各1小时，合并煎液。用盐酸调pH至2并浓缩至相对密度为1.20的清膏，冷却，加乙醇使含醇量为60%，静置，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20的清膏，再加乙醇使含醇量为80%，10℃以下静置4小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.22的清膏。上聚酰胺树脂柱吸附（树脂用量为膏重的10倍，柱的径高比为1：20），以20% 甲酸洗脱，高效液相色谱跟踪监控，收集丹参素流分。加入2%的活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，于40-50℃低温减压（通氮气保护）浓缩至相对密度为1.15 ，冷冻干燥。用乙醇重结晶，即得纯度为98.6%的丹参素，收率为1.8%。
实施例 2 ：
丹参饮片 2 kg，加16Kg水煎煮2次，每次各1小时，合并煎液。用盐酸调pH至2并浓缩至相对密度为1.20的清膏，冷却，加乙醇使含醇量为60%，静置，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20的清膏，再乙醇使含醇量为80%，10℃以下静置4小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20的清膏。清膏上聚酰胺树脂柱（树脂用量为膏重的10倍，柱的径高比为1：20）吸附，以10% 乙酸洗脱，高效液相色谱跟踪监控，收集丹参素流分。加入3%的活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，于40-50℃低温减压（通氮气保护）浓缩至相对密度为1.15 ，冷冻干燥。用乙醇重结晶，即得纯度为的99.1%丹参素，收率为1.7%。
实施例 3 ：
丹参饮片 5 kg，加40Kg水煎煮2次，每次各1小时，合并煎液。用
盐酸调pH至2并浓缩至相对密度为1.20的清膏，冷却，加乙醇使含醇量为60%，静置，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20的清膏，再乙醇使含醇量为80%，10℃以下静置4小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20至1.22的清膏。清膏上聚酰胺树脂柱（树脂用量为膏重的15倍，柱的径高比为1：20）吸附，以30% 乙酸洗脱，高效液相色谱跟踪监控，收集丹参素流分。加入2%的活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，于40-50℃低温减压（通氮气保护）浓缩至相对密度为1.17 ，冷冻干燥。用乙醇重结晶，即得纯度为的98.8%丹参素，收率为2.0%。
实施例 4 ：
丹参饮片 5 kg，加40Kg水煎煮2次，每次各1小时，合并煎液。用
盐酸调pH至2并浓缩至相对密度为1.20的清膏，冷却，加乙醇使含醇量为60%，静置，过滤，滤液浓缩至相对密度为1.20的清膏，再乙醇使含醇量为80%，10℃以下静置4小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20至1.22的清膏。清膏上聚酰胺树脂柱（树脂用量为膏重的15倍，柱的径高比为1：20）吸附，以50% 乙酸洗脱，高效液相色谱跟踪监控，收集丹参素流分。加入3%的活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，于40-50℃低温减压（通氮气保护）浓缩至相对密度为1.18，冷冻干燥。用乙醇重结晶，即得纯度为的99.3%丹参素，收率为1.9%。
本发明快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，本方法不需要大孔树脂的初步提纯，由于丹参素是多羟基酚酸类化合物，通过控制色谱分离条件，可以直接进行聚酰胺色谱分离，因此，可以收集到丹参素纯品流分，而不是混合物，这样使分离、纯化一步完成，使得操作简便易行。整个过程中只用了盐酸、乙醇、乙酸、活性炭，保证了产品安全、无毒。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (3)

1.一种快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，其特征在于：所述方法步骤如下：
1）、丹参饮片用常规方法热提取，时间1小时，提取两次，合并提取液；
2）、提取液用盐酸调pH至2，浓缩至相对密度为1.20，冷却，加乙醇醇沉二次，10℃以下静置4小时，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，浓缩至相对密度为1.20至1.22的清膏；
3）、上述的清膏用聚酰胺树脂柱吸附后洗脱液分离；
4）、收集丹参素流分，用活性炭吸附后，过滤，滤液用碳酸氢钠调pH值为5-6，于40-50℃低温减压浓缩至相对密度为1.15-1.18，冷冻干燥；
5）、用乙醇重结晶，即得高纯度的丹参素；
所述的步骤2）醇沉浓度是第一次使含醇量达60%，第二次使含醇量达80%；
所述的步骤3）聚酰胺树脂的粒度为60-100目，用量为树脂：清膏=10-20：1，树脂柱的径高比为1：20；
所述的步骤3）吸附分离的洗脱液为10%-50%的甲酸或乙酸；
所述的步骤4）活性炭的用量为溶液体积的2%-3%。
2.根据权利要求1所述的快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，其特征在于：所述的步骤1）常规方法是指采用水提醇沉的方法。
3.根据权利要求1所述的快速分离纯化丹参药材中的丹参素的方法，其特征在于：所述的步骤4）低温减压过程通氮气保护。
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