CN102477055A

CN102477055A - 一种从大蓟中提取纯化柳穿鱼叶苷的方法

Info

Publication number: CN102477055A
Application number: CN2010105578109A
Authority: CN
Inventors: 李法庆; 刘东锋
Original assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Suzhou Baozetang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2010-11-25
Filing date: 2010-11-25
Publication date: 2012-05-30

Abstract

本发明属于天然药物化学领域，涉及一种从大蓟中提取纯化柳穿鱼叶苷的方法。以大蓟为原料，经C_1-4低碳醇冷浸提取，再经石油醚萃取、正丁醇萃取，浓缩，树脂吸附，洗脱液浓缩、干燥，稀碱液溶解，过滤，滤液加酸调pH，静置、离心，离心物反复重结晶即得产品。本发明产品纯度高、制备量大，工艺稳定可靠，特别适用于从大蓟中分离提纯大量高纯度的柳穿鱼叶苷。

Description

一种从大蓟中提取纯化柳穿鱼叶苷的方法

技术领域：

本发明属于天然药物化学领域，涉及天然药物成分的提取纯化方法，具体的说是一种从大蓟中提取纯化柳穿鱼叶苷的方法。

背景技术：

柳穿鱼叶苷(Pectolinarin)，分子式C₂₈H₃₄O₁₅；分子量622.56；

分子结构式：

大蓟为菊科植物蓟Cirsium japonzcum Fisch.ex DC.的干燥地上部分。味甘、苦，性凉。归心、肝经。主要功能为凉血止血，祛瘀消肿。用于衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外伤出血，痈肿疮毒。炒炭可用于衄血，吐血，尿血，便血，崩漏下血，外伤出血。

大蓟化学成分较为复杂，主要有黄酮及黄酮苷、挥发油及甾醇、长链炔烯醇等。现代药理研究表明，大蓟具有抑菌、凝血止血、降压、升压、抗肿瘤及增强免疫功能、提高乙醇代谢酶活性剂降低脂质过氧化物形成、杀线虫等作用，临床上用于治疗肺结核、高血压、月经过多、尿路结石尿血、痈疖初起、软化肌肉注射所致的硬结、对各种出血症有显著疗效，还用于治疗荨麻疹、乳腺炎、皮肤红肿结块、中毒发痒等病症。周文序等发表的文献“中药大、小蓟中柳穿鱼甙和芦丁的薄层扫描法定量分析”中，采用超声提取，聚酰胺薄膜展开，薄层扫描测定大蓟中柳穿鱼苷含量为0.781％-2.60％。

目前国内提取柳穿鱼叶苷的方法主要是通过乙醇回流提取，经大孔树脂或硅胶、聚酰胺柱层析吸附。例如在专利申请号为200910010324，发明名称为“一种柳穿鱼黄酮及其总黄酮的制备方法和用途”中公开的工艺流程是水或醇回流提取，HPD-600、AB-8或D101大孔树脂吸附，不同浓度的醇洗脱，再经硅胶色谱柱、聚酰胺色谱柱或凝胶色谱柱等。该方法用了大量的二氯甲烷、三氯甲烷、甲醇等有毒溶剂，且提取率低，成本较高。

发明内容：

本发明的目的是提供一种产品纯度高、制备量大，工艺稳定可靠，专属性强，可大规模生产柳穿鱼叶苷的方法。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种从大蓟中提取纯化柳穿鱼叶苷的方法，其特征在于：

1)提取：称取大蓟原药材，加入其重量4-12倍的低碳醇溶液冷浸提取1-3次，每次24-48小时，过滤，取滤液浓缩至无醇味；

2)萃取：取上述浓缩液加入到萃取器中，同时加入5-10倍沸程60-90℃的石油醚，水浴加热至60-95℃，回流萃取半小时，萃取2次，滤出石油醚至回收罐，进一步用水浴将水相加热至60-95℃，挥干残留石油醚；再将经石油醚处理好的水相加入到提取罐中，加入5-10倍正丁醇，水浴加热至60-95℃，回流萃取30-60min，趁热过滤，减压浓缩至稠膏状得浓缩物；

3)柱层析：将上述浓缩物用热水分散，上样于大孔树脂柱，以乙醇和水为流动相，梯度洗脱，乙醇的体积浓度比从0-80％变化，收集目标组分，浓缩、干燥得大孔树脂分离组分；

4)酸碱除杂：将上述大孔树脂分离组分用适量稀碱溶液溶解，过滤，滤液加酸调pH至4-6，放置沉淀，离心，收集离心物；

5)重结晶：将离心物用热乙醇溶解，冷却静置，过滤，粗晶再用甲醇反复重结晶即得产品。

所述步骤1)中C_1-4低碳醇可选甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇，体积百分比浓度为40-90％。

所述步骤3)中洗脱条件为：每次洗脱体积为3-6BV，流速为1-3BV/h。

本发明的技术特点是：产品纯度高、制备量大，酸碱处理、杂质少，工艺稳定可靠，专属性强，可大规模生产，所采用工艺易实现标准化、自动化，适用于产业化生产。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

将大蓟全草原药材粉碎，称取3kg置于提取罐中，加入8倍量的80％乙醇溶液冷浸2次，每次48小时，过滤，合并滤液，将滤液旋转蒸发至无醇味。将浓缩液加入到萃取器中，加入6倍量沸程为60-90℃的石油醚，水浴加热至60-95℃，回流萃取30分钟，萃取2次，将石油醚放出至回收罐，进一步水浴加热至60-95℃，挥干残余石油醚，将石油醚处理好的水相加入到提取罐中，加入8倍正丁醇，水浴加热至60-95℃，回流萃取40分钟，萃取2次，趁热过滤，减压浓缩至稠膏状得浓缩物，将浓缩物用热水分散，过5L的大孔树脂柱吸附，待吸附完全后，依次以10％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇洗脱，每次洗脱用量为3-6BV，薄层监测，收集目标流分，将洗脱液浓缩并干燥，用5％氨水溶解，过滤，滤液加盐酸调pH至5，放置沉淀，离心，放出上清液，将离心物用热乙醇溶解，冷丙酮结晶，滤出粗晶，再用甲醇重结晶即得柳穿鱼叶苷29.3g，含量97.7％。

实施例2：

将大蓟全草原药材粉碎，称取3kg置于提取罐中，加入10倍量的50％丙醇溶液冷浸3次，每次24小时，过滤，合并滤液，将滤液旋转蒸发至无醇味。将浓缩液加入到萃取器中，加入5倍量沸程为60-90℃的石油醚，水浴加热至95℃，回流萃取45分钟，萃取2次，将石油醚放出至回收罐，进一步水浴加热至95℃，挥干残余石油醚，将石油醚处理好的水相加入到提取罐中，加入7倍正丁醇，水浴加热至95℃，回流萃取30分钟，萃取2次，趁热过滤，减压浓缩至稠膏状得浓缩物，将浓缩物用热水分散，过5L的大孔树脂柱吸附，待吸附完全后，依次以10％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇洗脱，每次洗脱用量为3-6BV，薄层监测，收集目标流分，将洗脱液浓缩并干燥，用5％氨水溶解，过滤，滤液加盐酸调pH至4，放置沉淀，离心，放出上清液，将离心物用热乙醇溶解，冷丙酮结晶，滤出粗晶，再用甲醇重结晶即得柳穿鱼叶苷32g，含量96.5％。

实施例3：

将大蓟全草原药材粉碎，称取5kg置于提取罐中，加入4倍量的70％异丙醇醇溶液冷浸2次，每次36小时，过滤，合并滤液，将滤液旋转蒸发至无醇味。将浓缩液加入到萃取器中，加入8倍量沸程为60-90℃的石油醚，水浴加热至60℃，回流萃取60分钟，萃取2次，将石油醚放出至回收罐，进一步水浴加热至60℃，挥干残余石油醚，将石油醚处理好的水相加入到提取罐中，加入5倍正丁醇，水浴加热至60℃，回流萃取50分钟，萃取2次，趁热过滤，减压浓缩至稠膏状得浓缩物，将浓缩物用热水分散，过5L的大孔树脂柱吸附，待吸附完全后，依次以10％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇洗脱，每次洗脱用量为3-6BV，薄层监测，收集目标流分，将洗脱液浓缩并干燥，用5％氨水溶解，过滤，滤液加盐酸调pH至6，放置沉淀，离心，放出上清液，将离心物用热乙醇溶解，冷丙酮结晶，滤出粗晶，再用甲醇重结晶即得柳穿鱼叶苷33g，含量97.9％。

实施例4：

将大蓟全草原药材粉碎，称取10kg置于提取罐中，加入8倍量的90％丁醇溶液冷浸3次，每次24小时，过滤，合并滤液，将滤液旋转蒸发至无醇味。将浓缩液加入到萃取器中，加入10倍量沸程为60-90℃的石油醚，水浴加热至75℃，回流萃取45分钟，萃取2次，将石油醚放出至回收罐，进一步水浴加热至75℃，挥干残余石油醚，将石油醚处理好的水相加入到提取罐中，加入10倍正丁醇，水浴加热至75℃，回流萃取45分钟，萃取2次，趁热过滤，减压浓缩至稠膏状得浓缩物，将浓缩物用热水分散，过5L的大孔树脂柱吸附，待吸附完全后，依次以10％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇洗脱，每次洗脱用量为3-6BV，薄层监测，收集目标流分，将洗脱液浓缩并干燥，用5％氨水溶解，过滤，滤液加盐酸调pH至4，放置沉淀，离心，放出上清液，将离心物用热乙醇溶解，冷丙酮结晶，滤出粗晶，再用甲醇重结晶即得柳穿鱼叶苷178.8g，含量98.4％。

实施例5：

将大蓟全草原药材粉碎，称取25kg置于提取罐中，加入8倍量的85％甲醇溶液冷浸2次，每次48小时，过滤，合并滤液，将滤液旋转蒸发至无醇味。将浓缩液加入到萃取器中，加入7倍量沸程为60-90℃的石油醚，水浴加热至80℃，回流萃取50分钟，萃取2次，将石油醚放出至回收罐，进一步水浴加热至80℃，挥干残余石油醚，将石油醚处理好的水相加入到提取罐中，加入6倍正丁醇，水浴加热至80℃，回流萃取60分钟，萃取2次，趁热过滤，减压浓缩至稠膏状得浓缩物，将浓缩物用热水分散，过5L的大孔树脂柱吸附，待吸附完全后，依次以10％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇洗脱，每次洗脱用量为3-6BV，薄层监测，收集目标流分，将洗脱液浓缩并干燥，用5％氨水溶解，过滤，滤液加盐酸调pH至5，放置沉淀，离心，放出上清液，将离心物用热乙醇溶解，冷丙酮结晶，滤出粗晶，再用甲醇重结晶即得柳穿鱼叶苷521g，含量97.3％。

Claims

1.一种从大蓟中提取纯化柳穿鱼叶苷的方法，其特征在于：

2.根据权利要求1所述的提取纯化柳穿鱼叶苷的方法，其特征在于所述步骤1)中C_1-4低碳醇可选甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、丁醇，体积百分比浓度为40-90％。

3.根据权利要求1所述的提取纯化柳穿鱼叶苷的方法，其特征在于所述步骤3)中洗脱条件为：每次洗脱体积为3-6BV，流速为1-3BV/h。