CN101817831A - 一种从冬凌草中提取纯化冬凌草甲素的方法 - Google Patents

Abstract

一种从冬凌草中提取纯化冬凌草的新工艺是采用60-70％甲醇50-60℃提取2-3次，活性炭脱色，减压浓缩至醇浓度20-3％打孔树脂吸附，75-85％甲醇洗脱，浓缩后石油醚、乙酸乙酯分步萃取，回收乙酸乙酯萃取液，加入少量石油醚，放置结晶，再用70％和90％依次回流饱和溶解结晶。该工艺简单易操作。

Description

一种从冬凌草中提取纯化冬凌草甲素的方法

技术领域：

本发明涉及一种从冬凌草中提取纯化冬凌草甲素的方法，该方法是一种采用低醇状态树脂吸附和萃取结晶纯化冬凌草甲素的方法。

背景技术：

冬凌草甲素又叫冬凌草素、延命草宁。

分子式：C20H28O6

分子量：364.43

物理性质：熔点248℃-250℃，微溶于水，溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。

冬凌草甲素是中药冬凌草中提出分离出来的一种四环二萜类化合物。冬凌草甲素在癌症治疗中的作用已引起了人们的重视，现已发现其对肺癌、前列腺癌、乳腺癌等多种细胞株均有抑制作用。

冬凌草又名冰凌草、延命草、彩花草等，为唇形科香茶属多年生草本或亚灌木。

冬凌草具有清热解毒、消炎止痛、健胃活血之效。目前，我国对冬凌草研究开发已取得良好开端，已研制出冬凌草保健茶、冬凌草片、冬凌草针剂等产品。

冬凌草自古以来太行山区的民间常年当作茶叶饮用。因其清热解毒、清咽利喉、消止痛的功能盛行于当地，被誉为“神奇草”。1972年，中国食管癌研究中心，发现冬凌草具有独特的抗食管癌，贲门癌、原发性肝癌功效，从此被广泛应用于临床.

《现代中药学大辞典》记载，冬凌草的性味和功用为：苦、甘、微寒，清热、解毒、活血止痛，用于咽喉肿痛、扁桃体炎、蛇虫咬伤、风湿骨痛等。主要成分有挥发油和二萜类冬凌草甲素、乙素、丙素、丁素、戊素、辛素等。还含有无机元素铁、锌、硒等。主要作用有：抗肿瘤、抗菌作用和解热降燥等功效。

现有公开提取纯化冬凌草甲素的方法，多是冬凌草甲素的提取分离法目前主要有乙醚提取法、乙醇回流提取法及混合试剂提取法。分离纯化方法多是硅胶柱分离和重结晶。如专利02139049.5(中请号)“一种冬凌草甲素的制备方法”公开的方法采用二氯甲烷丙醇乙醇等混合溶剂提取、石油醚脱脂、硅胶柱分离、甲醇重结晶等方法。该工艺所得产品纯度高，但是，有毒挥发性试剂的用量大，不适合工业化。还有专利200610003497.8(申请号)公开的方法是采用95％乙醇提取、硅胶短柱分离、重结晶等方法。该方法硅胶用量大，不适合工业化。专利03151477.4(申请号)“一种从冬凌草中提取冬凌草甲素的工艺方法”公开的方法采用乙醇提取浓缩水再溶、大孔树脂吸附、硅胶氧化镁混合柱分离、重结晶等方法，该法适合工业化，但是冬凌草甲素水溶效果差，树脂吸附富集效果差，收率低。

发明内容：

本发明要解决上述技术缺陷，提供一种提取纯化冬凌草甲素的新方法。该方法能够减少有毒试剂的用量，提高产品收率，降低生产成本。

为了解决上述技术问题，本发明提取技术方案如下：

一种从斑蝥中制备斑蝥素的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)甲醇提取：将冬凌草原料粉碎20-40目，加入60-70％甲醇溶液提取，提取2-3次，合并提取液；

2)脱色浓缩：将上述提取液加入其量的0.5-1％活性炭回流脱色0.5-1小时，滤过，减压浓缩至醇浓度20-30％，放出，得浓缩液；

3)大空树脂富集：将上述浓缩液通过大空树脂柱吸附，甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；

4)萃取：减压浓缩洗脱液密度1.2-1.25，放入萃取罐中，加入石油醚萃取，放出石油醚层，再加入乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液；

5)结晶：减压浓缩乙酸乙酯至小体积，加入石油醚，放结晶，滤过，得粗结晶；

6)重结晶：将上述粗结晶70％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶，再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶，干燥即得产品。

所述甲醇提取条件：每次加入原料的6-8倍量，温度50-60℃，提取时间1-2小时。

所述的大空树脂可选ADS-17或ADS-7的一种。

所述的大空树脂洗脱条件：吸附流速为树脂体积的1-1/2(小时)，饱和吸附后5-6量柱体积水洗脱杂质，5-6倍柱体积量75-85％甲醇溶液洗脱。

所述的萃取条件：石油醚每次加入量为浓缩液量的1/3-1/4，萃取2-3次，乙酸乙酯每次加入量为浓缩液量的1/3-1/2，萃取2-3次。

所述的结晶条件：乙酸乙酯萃取液浓缩原体积的1/3-1/4，石油醚加入量为萃取浓缩液量的1/10-1/15。

综上所述，本发明存在以下优点：低浓度甲醇低温提取，减少三萜类物质的溶出，效率高；浓度醇中树脂吸附，有效成分选择性好；不同试剂重结晶，除杂效果好，适合工业化。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取冬凌草原料20千克(冬凌草甲素含量0.7％)粉碎20目，投入500L提取罐中，加入160L70％甲醇溶液，加入至50℃，保温动态提取2小时，抽滤提取液，加入120L70％甲醇，50℃保温动态提取1小时，抽滤溶液，再加入120L70％50℃保温动态提取1小时，抽滤，合并三次滤液得360L，加入3.6千克活性炭回流脱色1小时，过滤，减压回收甲醇至醇浓度30％，放出，冷却室温。取ADS-17树脂5千克装柱，活化。把浓缩液以5L/h流速加入树脂柱吸附，(吸附过程高效液相监测)饱和吸附后，先用30L水以10L/h流速洗脱杂质，再用30L75％甲醇以2.5L/h流速洗脱冬凌草甲素，收集洗脱液，减压浓缩致密度1.2，放出得1.5L浓缩液，放入萃取器中，加500ml石油醚萃取，放出石油醚萃取层，再加等量石油醚萃取，放出石油醚萃取液后，每次加500ml乙酸乙酯，萃取三次，收集乙酸乙酯萃取液1.5L。减压回收乙酸乙酯萃取液至500ml，加入50ml石油醚，放置结晶。滤出结晶用70％的乙醇回流饱和溶解，放置结晶，结晶物滤出，合并结晶物再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶物低温干燥得产品85克，含量98.2％(高效液相测)。

实施例2：

取冬凌草原料20千克(冬凌草甲素含量0.7％)粉碎40目，投入500L提取罐中，加入160L60％甲醇溶液，加入至60℃，保温动态提取2小时，抽滤提取液，加入120L60％甲醇，50℃保温动态提取1小时，提取两次抽滤溶液，抽滤，合并三次滤液得360L，加入1.8千克活性炭回流脱色0.5小时，过滤，减压回收甲醇至醇浓度20％，放出，冷却室温。取ADS-7树脂7千克装柱，活化。把浓缩液以7L/h流速加入树脂柱吸附，(吸附过程高效液相监测)饱和吸附后，先用35L水以15L/h流速洗脱杂质，再用35L85％甲醇以3L/h流速洗脱冬凌草甲素，收集洗脱液，减压浓缩致密度1.25，放出得1.3L浓缩液，放入萃取器中，加400ml石油醚萃取，放出石油醚萃取层，再每次加300ml石油醚萃取两次，放出石油醚萃取液后，每次加750ml乙酸乙酯，萃取两次，收集乙酸乙酯萃取液1.5L。减压回收乙酸乙酯萃取液至450ml，加入30ml石油醚，放置结晶。滤出结晶用70％的乙醇回流饱和溶解，放置结晶，结晶物滤出，合并结晶物再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶物低温干燥得产品85克，含量98％(高效液相测)

实施例3：

取冬凌草原料20千克(冬凌草甲素含量0.7％)粉碎20目，投入500L提取罐中，加入160L70％甲醇溶液，加入至60℃，保温动态提取2小时，抽滤提取液，加入160L70％甲醇，60℃保温动态提取1小时，抽滤溶液，，合并滤液得280L，加入1.6千克活性炭回流脱色0.5小时，过滤，减压回收甲醇至醇浓度30％，放出，冷却室温。取ADS-17树脂5千克装柱，活化。把浓缩液以2.5L/h流速加入树脂柱吸附，(吸附过程高效液相监测)饱和吸附后，先用30L水以15L/h流速洗脱杂质，再用25L85％甲醇以3L/h流速洗脱冬凌草甲素，收集洗脱液，减压浓缩致密度1.22，放出得1.4L浓缩液，放入萃取器中，加350ml石油醚萃取，放出石油醚萃取层，再加等量石油醚萃取两次，放出石油醚萃取液后，每次加450ml乙酸乙酯，萃取三次，收集乙酸乙酯萃取液1.35L。减压回收乙酸乙酯萃取液至450ml，加入40ml石油醚，放置结晶。滤出结晶用70％的乙醇回流饱和溶解，放置结晶，结晶物滤出，合并结晶物再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶物低温干燥得产品87克，含量98％(高效液相测)

实施例4：

取冬凌草原料20千克(冬凌草甲素含量0.7％)粉碎40目，投入500L提取罐中，加入160L70％甲醇溶液，加入至60℃，保温动态提取2小时，抽滤提取液，加入120L70％甲醇，50℃保温动态提取1小时，抽滤溶液，再加入120L70％50℃保温动态提取1小时，抽滤，合并三次滤液得360L，加入1.8千克活性炭回流脱色1小时，过滤，减压回收甲醇至醇浓度20％，放出，冷却室温。取ADS-17树脂5千克装柱，活化。把浓缩液以4L/h流速加入树脂柱吸附，(吸附过程高效液相监测)饱和吸附后，先用25L水以5L/h流速洗脱杂质，再用30L75％甲醇以3L/h流速洗脱冬凌草甲素，收集洗脱液，减压浓缩致密度1.21，放出得1.5L浓缩液，放入萃取器中，每次加500ml石油醚萃取三次，放出石油醚萃取层，，每次加500ml乙酸乙酯，萃取三次，收集乙酸乙酯萃取液1.5L。减压回收乙酸乙酯萃取液至500ml，加入40ml石油醚，放置结晶。滤出结晶用70％的乙醇回流饱和溶解，放置结晶，结晶物滤出，合并结晶物再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶物低温干燥得产品86克，含量98％(高效液相测)

实施例5：

取冬凌草原料20千克(冬凌草甲素含量0.5％)粉碎20目，投入500L提取罐中，加入160L70％甲醇溶液，加入至60℃，保温动态提取2小时，抽滤提取液，加入120L70％甲醇，60℃保温动态提取1小时，抽滤溶液，再加入120L70％60℃保温动态提取1小时，抽滤，合并三次滤液得360L，加入3.6千克活性炭回流脱色1小时，过滤，减压回收甲醇至醇浓度30％，放出，冷却室温。取ADS-7树脂7千克装柱，活化。把浓缩液以7L/h流速加入树脂柱吸附，(吸附过程高效液相监测)饱和吸附后，先用42L水以10L/h流速洗脱杂质，再用42L80％甲醇以5L/h流速洗脱冬凌草甲素，收集洗脱液，减压浓缩致密度1.25，放出得1.4L浓缩液，放入萃取器中，加450ml石油醚萃取，放出石油醚萃取层，再加等量石油醚萃取，放出石油醚萃取液后，每次加700ml乙酸乙酯，萃取三次，收集乙酸乙酯萃取液2.1L。减压回收乙酸乙酯萃取液至1000ml，加入80ml石油醚，放置结晶。滤出结晶用70％的乙醇回流饱和溶解，放置结晶，结晶物滤出，合并结晶物再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶物低温干燥得产品58克，含量98％(高效液相测)

实施例6：

取冬凌草原料20千克(冬凌草甲素含量0.5％)粉碎40目，投入500L提取罐中，加入160L60％甲醇溶液，加入至60℃，保温动态提取2小时，抽滤提取液，加入160L60％甲醇，60℃保温动态提取1小时，抽滤溶液，合并滤液得280L，加入1.4千克活性炭回流脱色0.5小时，过滤，减压回收甲醇至醇浓度20％，放出，冷却室温。取ADS-17树脂5千克装柱，活化。把浓缩液以4L/h流速加入树脂柱吸附，(吸附过程高效液相监测)饱和吸附后，先用30L水以15L/h流速洗脱杂质，再用25L85％甲醇以5L/h流速洗脱冬凌草甲素，收集洗脱液，减压浓缩致密度1.2l，放出得1.5L浓缩液，放入萃取器中，加450ml石油醚萃取，放出石油醚萃取层，再加等量石油醚萃取，放出石油醚萃取液后，每次加750ml乙酸乙酯，萃取两次，收集乙酸乙酯萃取液1.5L。减压回收乙酸乙酯萃取液至400ml，加入30ml石油醚，放置结晶。滤出结晶用70％的乙醇回流饱和溶解，放置结晶，结晶物滤出，合并结晶物再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶物低温干燥得产品60克，含量98.2％(高效液相测)。

Claims (6)

1.一种从冬凌草中提取纯化冬凌草甲素的方法，其特征在于包含以下步骤：

1)甲醇提取：将冬凌草原料粉碎20-40目，加入60-70％甲醇溶液提取，提取2-3次，合并提取液；

2)脱色浓缩：将上述提取液加入其量的0.5-1％活性炭回流脱色，滤过，减压浓缩至醇浓度20-30％，放出，得浓缩液；

3)大空树脂富集：将上述浓缩液通过大空树脂柱吸附，甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；

4)萃取：减压浓缩洗脱液密度1.2-1.25，放入萃取罐中，加入石油醚萃取，放出石油醚层，再加入乙酸乙酯萃取，收集乙酸乙酯萃取液；

5)结晶：减压浓缩乙酸乙酯至小体积，加入石油醚，放结晶，滤过，得粗结晶；

6)重结晶：将上述粗结晶70％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶，再用90％乙醇回流饱和溶解，放置结晶，滤出结晶，干燥即得产品。

2.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于所述甲醇提取条件：每次加入原料的6-8倍量，温度50-60℃，提取时间1-2小时。

3.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于所述的大空树脂可选ADS-17或ADS-7的一种。

4.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于所述的大空树脂洗脱条件：吸附流速为树脂体积的1-1/2(小时)，饱和吸附后5-6量柱体积水洗脱杂质，5-6倍柱体积量75-85％甲醇溶液洗脱。

5.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于所述的萃取条件：石油醚每次加入量为浓缩液量的1/3-1/4，萃取2-3次，乙酸乙酯每次加入量为浓缩液量的1/3-1/2，萃取2-3次。

6.如权利要求1所述的提取纯化方法，其特征在于所述的结晶条件：乙酸乙酯萃取液浓缩原体积的1/3-1/4，石油醚加入量为萃取浓缩液量的1/10-1/15。