CN101875676A - 一种酶法提取白芍中芍药苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及中药有效成分提取技术领域，具体涉及一种白芍中芍药苷的提取、分离方法。本发明要克服现有技术存在的工艺复杂、有机溶剂耗量大、操作困难、收率低的问题。其解决方案，依次包括下述步骤，(1)提取：用纤维素酶-果胶酶双酶酶解白芍；(2)大孔树脂吸附：收集70%乙醇洗脱液，进行真空浓缩；(3)干燥：将经真空浓缩的芍药苷液，真空干燥12h，得到芍药苷(97%)产品。本发明的优点是工艺简单，流程短；操作温度低，有效成分损失少；操作简单，成本低，收率高，纯度好，易于实现工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及中药有效成分提取技术领域，具体涉及一种酶法提取白芍中芍药苷的方法。
背景技术
白芍是毛茛科植物芍药(PaeonialactifloraPall)的干燥根，主要活性成分为芍药苷。《中国药典》2000年版一部记载白芍具有养血柔肝，缓中止痛，敛阴收汗之功效。是宋代经典名方四物汤(熟地黄、当归、白芍、川芎)中的主药之一，白芍的主要有效成分为芍药苷(paeoniflorin)、芍药内酯苷(albiforin)、羟基芍药苷(oxypaeoniflorin)、苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin)和苯甲酰羟基芍药苷(benzoyloxypaeoniflorin)等单萜苷类化合物，简称芍药总苷，其中芍药苷(Paeoniflorin)约占70%以上。
现代药理学研究表明，芍药苷具有抗炎、镇痛、抗惊厥和免疫调节等作用，临床应用广泛，疗效确切，同时其还具有扩张冠状动脉，增加冠脉流量，对抗急性心肌缺血，抑制血小板凝聚及降低血压等药理作用，而目前芍药苷提取方法是：白芍原料经粉碎后用甲醇、乙醇、水或含水醇溶液回流提取，浓缩回收醇后，将浓缩膏悬浮于水中，采用大孔树脂吸附，再经醇溶液洗脱，洗脱液浓缩后得到芍药苷（Paeoniflorin），然而此种方法存在的问题是：流程长，溶剂耗量大，温度高，收率低(2.0%左右)。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，以白芍为原料，采用酶法进行提取、分离，以克服现有技术存在的流程长，溶剂耗量大，温度高，收率低的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：
将白芍原料粉碎，溶于水中（固液比1:3～1:10），在35-60℃，pH4-7条件下，添加纤维素酶5-50u/g，果胶酶5-50u/g，处理1-3h；
(2)离心分离：
将酶解液放入离心机，5000rpm离心分离20min，取上清液；
(3)吸附：
将所得上清液浓缩过滤，上大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用70%乙醇洗脱，收集3倍柱体积乙醇洗脱液；
(4)浓缩：
将收集的乙醇洗脱液减压浓缩并回收乙醇；
(5)真空干燥：
将浓缩浸膏置于60℃真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。
上述步骤(1)中：白芍原料与水的固液比为1：5，调整pH为5，加入纤维素酶10u/g，果胶酶30u/g，酶解温度45℃，酶解时间2.5ｈ。效果较佳。
与现有技术相比，本发明的优点是：
1、本工艺简单，减少了传统的多次回流提取过程，只进行低温酶解释放芍药苷，从而使得工艺过程简单。流程短。
2、传统的回流提取方式，采用温度在100℃，处理时间也较长，因而可能对原料中的有效成分会产生破坏作用，本发明的操作温度低，对有效成分破坏少。
3、成本低；不需要加热回流，操作简单，并且主要溶剂为水，再用乙醇洗脱后可反复回收利用，从而减少溶剂消耗，是的生产成本降低，易于实现工业化生产。
4、本发明收率可达3.5%，纯度可达97%。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1：
一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：称取白芍原料0.8kg，将原料粉碎并过100目筛，溶于2.4kg水中，用1mol/L盐酸调整pH值为6，添加纤维素酶5u/g，果胶酶15u/g，酶解温度40℃，酶解时间3ｈ后放置室温，经高效液相（HPLC）检测，提取液中含有芍药苷0.03g；
(2)离心分离：
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清液；
(3)吸附：
将所得上清液浓缩过滤后，上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率1.8mL/min，再用70%乙醇洗脱，洗脱速率2.2mL/min，收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩：
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
(5)真空干燥：
将浓缩浸膏置于60℃真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相（HPLC）检测，芍药苷得率达到2.8%，纯度为96%。
实施例2：
一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：称取白芍原料1kg，将原料粉碎并过100目筛，溶于5kg水中，用1mol/L盐酸调整pH为5，加入纤维素酶10u/g，果胶酶30u/g，酶解温度45℃，酶解时间2.5ｈ后放置室温，经高效液相（HPLC）检测，提取液中含有芍药苷0.03g；
(2)离心分离：
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清液；
(3)吸附：
将所得上清液浓缩过滤后，上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率1.8mL/min，再用70%乙醇洗脱，洗脱速率2.2mL/min，收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩：
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
(5)真空干燥：
将浓缩浸膏置于60℃真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相（HPLC）检测，芍药苷得率达到3.5%，纯度为97%。
实施例3：
一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：称取白芍原料1.5kg，将原料粉碎并过100目筛，溶于9kg水中，用1mol/L氢氧化钠调整pH为7，加入纤维素酶25u/g，果胶酶35u/g，，酶解温度60℃，酶解时间2ｈ后放置室温，经高效液相（HPLC）检测，提取液中含有芍药苷0.04g；
(2)离心分离：
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清液；
(3)吸附：
所得上清液浓缩过滤后，上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率1.8mL/min，再用70%乙醇洗脱，洗脱速率2.2mL/min，收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩：
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；(5)真空干燥：
(5)真空干燥：
将浓缩浸膏置于60℃真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相（HPLC）检测，芍药苷得率达到3.0%，纯度为95%。
实施例4：
一种酶法提取白芍中芍药苷的方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：称取白芍原料1.5kg，将原料粉碎并过100目筛，溶于12kg水中，用1mol/L盐酸调整pH为4，添加纤维素酶35u/g，果胶酶50u/g，酶解温度35℃，酶解时间1ｈ后放置室温，经高效液相（HPLC）检测，提取液中含有芍药苷0.05g；
(2)离心分离：
将酶解液放入离心机离心分离，离心机转速为5000转/min，时间15min后，收集上清液；
(3)吸附：
将所得上清液浓缩过滤后，上D101大孔吸附树脂，先用水洗脱，洗脱速率1.8mL/min，再用70%乙醇洗脱，洗脱速率2.2mL/min，收集3倍柱体积的乙醇洗脱液；
(4)浓缩：
将所得乙醇洗脱液减压浓缩，回收乙醇；
(5)真空干燥：
将浓缩浸膏置于60℃真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。经高效液相（HPLC）检测，芍药苷得率达到3.2%，纯度为96%。
上述实施例以实施例2为最佳。
Claims (3)
1.一种芍药苷的提取、分离方法，依次包括下述步骤，
(1)提取：
将白芍原料粉碎，溶于水中（固液比1:3～1:10），在35-60℃，pH4-8条件下，添加纤维素酶5-50u/g，果胶酶5-50u/g，处理1-3h；
(2)离心分离：
将酶解液放入离心机，5000rpm离心分离20min，取上清液；
(3)大孔树脂吸附：
将所得上清液浓缩过滤，上大孔吸附树脂，先用水洗脱，再用70%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，收集3倍柱体积；
(3)浓缩：
将收集的乙醇洗脱液减压浓缩并回收乙醇；
(4)真空干燥：
将浓缩浸膏置于60℃真空干燥箱中，干燥12h，即得芍药总苷。
2.根据权利要求1所述的一种芍药苷的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤(1)中：白芍经粉碎后，过100目筛后105℃干燥24h，取一定量白芍粉用蒸馏水溶解，并加入5u/g纤维素酶和30u/g果胶酶，调整pH5.0，45℃条件下酶解2.5h，得到白芍酶解液。
3.根据权利要求1所述的一种白芍中芍药苷的提取、分离方法，其特征在于，所述步骤(3)中：浓缩液上到大孔树脂柱上，进行吸附上样，上完后先用水洗脱杂质，洗脱2倍柱体积，而后采用70%乙醇溶液洗脱并收集3倍柱体积洗脱液。
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