CN110066841B - 一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，包括如下步骤：Q1：将赤芍切成片状，冷冻干燥后，超声波破壁处理，得到赤芍中药材粉；Q2：取果胶酶、纤维素酶和淀粉酶，以及酶激活剂聚醚并与赤芍中药材粉混合置于反应罐酶解得到赤芍酶解液；Q3：按照体积比1:1:50取取酵母菌发酵液、短刺小克银汉酶发酵液和赤芍酶解液置于酶解罐内反应，得到赤芍发酵液；Q4：赤芍发酵液中加入纯化水，搅拌提取，分离提取液和滤渣；Q5：提取液使用大孔树脂吸附后洗涤、洗脱，收集赤芍洗脱液；调节洗脱液pH值，浓缩回收处理；冷冻干燥，得芍药内酯苷提取物；其可有效提高赤芍中芍药内酯苷的提取得率。

Description

一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法
技术领域
本发明属于中药提取技术领域，涉及一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法。
背景技术
近年来中草药的生产与提取方法实现了一定程度的发展和机械化，有关中草药的提取方法研究论文也有很多，然而传统中草药被认为杂质多、有效成分含量不稳定且较低的问题，不能与现代医学接轨，制约了现代中药的发展。
芍药苷和芍药内酯苷是从传统中药材赤芍中提取出的有效成分，具有抑制血小板聚集、抗凝和抗血栓、抗动脉粥样硬化和保护心肌细胞等作用。传统提取芍药苷和芍药内酯苷的方法为芍药醇提方法，其赤芍中有效物质的提取率低。传统中草药有效物质的提取是很重要的单元操作，是大多传统中草药研究中的起点。提取方法与成果的好坏，直接关系到后续实验进展的难易。提取方法可以视为现代中草药实验的重要环节。因此，研究并优化传统中草药有效物质提取方法十分必要。
发明内容
本发明解决的技术问题在于提供一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，可有效提高赤芍中芍药内酯苷的提取得率。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，包括如下步骤：
Q1：将赤芍中药材洗净并冷冻干燥后，进行超声波破壁处理，得到破壁的待提取赤芍中药材粉；
Q2：按照比例每千克赤芍中药材粉，分别取0.02～0.05g果胶酶、0.02～0.05g纤维素酶和0.02～0.05g淀粉酶；再取酶激活剂聚醚并与赤芍中药材粉混合并在反应罐内酶解，酶解温度在35～55℃范围梯度变化，得到赤芍酶解液；果胶酶、纤维素酶与淀粉酶的混合酶与酶激活剂聚醚的质量比为0.3～0.5％；
Q3：1×108～1010cfu/ml的酵母菌发酵液和1×108～1010cfu/ml的短刺小克银汉霉菌发酵液，并与赤芍酶解液混合，然后在酶解罐内发酵，发酵温度为28～35℃，得到赤芍发酵液；酵母菌发酵液、短刺小克银汉霉菌发酵液和赤芍酶解液的体积比为1:1:50；
Q4：向赤芍发酵液中加入纯化水，充分搅拌提取，分离提取液和滤渣；
Q5：提取液依次使用大孔树脂吸附法进行吸附、用体积浓度为40％的乙醇和纯化水洗涤、以体积浓度为95％的乙醇溶液洗脱，之后收集赤芍洗脱液；调节洗脱液pH值为2～4，于40～60℃下浓缩回收处理60～90min使洗脱液浓缩，然后冷冻干燥，得芍药内酯苷提取物。
进一步的，步骤Q1中赤芍中药材切成3～5mm片状后，置于-10～-50℃条件下冷冻干燥2～5h；然后在-5～-15℃下进行超声波破壁处理，超声波破壁的超声波功率为800～1000w，时间为40～50min。
进一步的，步骤Q2具体包括如下步骤：
Q21：称取果胶酶、纤维素酶、淀粉酶与酶激活剂聚醚，并与赤芍中药材粉混合均匀，得酶药混合物；
Q22：酶药混合物均匀的铺设在反应罐内，关闭反应罐；
Q23：控制反应罐内的温度，在反应罐内酶解2～3h，然后恢复反应罐内压力至常压状态，得到赤芍酶解液。
进一步的，步骤Q23中依次35℃酶解0.5h，45℃酶解1h，55℃酶解1h。
进一步的，步骤Q23中反应罐内的压力为0.4～0.6Mpa，pH为4～5。
进一步的，步骤Q3具体包括如下步骤：
Q31：取酵母菌、短刺小克银汉酶发酵液和赤芍酶解液，按照1:1:50体积比进行混合均匀，得混合物置于酶解罐内；
Q32：控制酶解罐内的温度发酵2～3h后，恢复酶解罐内压力至常压状态，得到并取出赤芍发酵液。
进一步的，步骤Q32中酶解罐内的pH为5～8。
进一步的，步骤Q4重复2～3次，步骤Q4中纯化水的温度为50～70℃，每次加入的纯化水与赤芍发酵液的体积比为6～10:1。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明提供的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，与传统芍药醇提方法相比，将赤芍制成赤芍中药材粉后，通过果胶酶、纤维素酶、淀粉酶及酶激活剂聚醚的酶解作用后，得到赤芍酶解液，赤芍酶解液再通过酵母菌与短刺小克银汉酶进行发酵后再进行提取，该提取方法同时利用微生物转化技术对芍药苷进行微生物转化得到芍药内脂苷，即有效提高了中药赤芍中活性成分芍药内酯苷的提取得率。
具体实施方式
下面给出具体的实施例。
实施例1
一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，包括如下步骤：
Q1：将赤芍中药材洗净后，切成3mm片状，置于-25℃条件下，冷冻干燥2h后，在-10℃低温下进行超声波破壁处理，得到破壁的待提取赤芍中药材粉；超声波破壁的超声波功率为800w，时间为40min。
Q2：将赤芍中药材粉进行酶解反应处理；具体包括如下步骤：
Q21：按照比例每千克赤芍中药材粉，称取0.05g果胶酶、0.05g纤维素酶和0.05g淀粉酶；再称取酶激活剂聚醚并与赤芍中药材粉混合搅拌均匀，得酶药混合物；果胶酶、纤维素酶与淀粉酶的混合酶与酶激活剂聚醚的质量比为0.5％；
Q22：酶混合物均匀的铺设在反应罐内，关闭反应罐；
Q23：调节反应罐内的温度至35℃，压力至0.5MPa，pH为4.5，酶解0.5h；调节反应罐内的温度至45℃，压力至0.5MPa，pH为4.5，酶解1h；调节反应罐内的温度至55℃，压力至0.5MPa，pH为4.5，酶解1h；然后恢复反应罐内压力至常压，得到赤芍酶解液；
Q3：赤芍酶解液的发酵反应处理；具体包括以下步骤：
Q31：按照体积比1:1:50取酵母菌发酵液、短刺小克银汉酶发酵液和赤芍酶解液并混合均匀，得混合物置于酶解罐内；酵母菌发酵液和短刺小克银汉霉菌发酵液的菌的个数均为1×109cfu/ml；
Q32：调节酶解罐内的温度为30℃，pH为6.5，发酵16h后，恢复反应罐内压力至常压状态，得到并取出赤芍发酵液。
Q4：向赤芍发酵液中加入50℃的纯化水，充分搅拌提取，分离提取液和滤渣，重复3次；每次加入的纯化水与赤芍发酵液的体积比为8:1。
Q5：使用大孔树脂吸附法吸附富集、用体积浓度为40％的乙醇和纯化水洗涤，再以体积浓度为95％的乙醇溶液洗脱实现浓缩，得到洗脱液；收集洗脱液后调节洗脱液的pH值为3，于50℃下浓缩回收处理75min；冷冻干燥，得芍药内酯苷提取物。
用HPLC测芍药内酯苷含量，结果表明芍药内酯苷得率为2.36％。
实施例2
一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，包括如下步骤：
Q1：将赤芍中药材洗净后，切成4mm片状，置于-50℃条件下，冷冻干燥4h后，在-5℃低温下进行超声波破壁处理，得到破壁的待提取赤芍中药材粉；超声波破壁的超声波功率为900w，时间为50min。
Q2：将赤芍中药材粉进行酶解反应处理；具体包括如下步骤：
Q21：按照比例每千克赤芍中药材粉，称取0.02g果胶酶、0.02g纤维素酶和0.02g淀粉酶；再称取酶激活剂聚醚并与赤芍中药材粉混合搅拌均匀，得酶药混合物；果胶酶、纤维素酶与淀粉酶的混合酶与酶激活剂聚醚的质量比为0.4％；
Q22：酶混合物均匀的铺设在反应罐内，关闭反应罐；
Q23：调节反应罐内的温度至35℃，压力至0.4MPa，pH为4，酶解0.5h；调节反应罐内的温度至45℃，压力至0.4MPa，pH为4，酶解0.5h；调节反应罐内的温度至55℃，压力至0.4MPa，pH为4，酶解1h；然后恢复反应罐内压力至常压，得到赤芍酶解液；
Q3：赤芍酶解液的发酵反应处理；具体包括以下步骤：
Q31：按照体积比1:1:50取酵母菌发酵液、短刺小克银汉酶发酵液和赤芍酶解液并混合均匀，得混合物置于酶解罐内；酵母菌发酵液和短刺小克银汉霉菌发酵液的菌的个数均为1×108cfu/ml；
Q32：调节酶解罐内的温度为28℃，pH为5，发酵12h后，恢复反应罐内压力至常压状态，得到并取出赤芍发酵液。
Q4：向赤芍发酵液中加入60℃的纯化水，充分搅拌提取，分离提取液和滤渣，重复2次；每次加入的纯化水与赤芍发酵液的体积比为6:1；
Q5：使用大孔树脂吸附法吸附富集、用体积浓度为40％的乙醇和纯化水洗涤，再以体积浓度为95％的乙醇溶液洗脱实现浓缩，得到洗脱液；收集洗脱液后调节洗脱液的pH值为2，于60℃下浓缩回收处理60min；冷冻干燥，得芍药内酯苷提取物。
用HPLC分析芍药内酯苷含量，结果表明芍药内酯苷提取得率为2.30％。
实施例3
一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，包括如下步骤：
Q1：将赤芍中药材洗净后，切成5mm片状，置于-10℃条件下，冷冻干燥5h后，在-15℃低温下进行超声波破壁处理，得到破壁的待提取赤芍中药材粉；超声波破壁的超声波功率为1000w，时间为45min。
Q2：将赤芍中药材粉进行酶解反应处理；具体包括如下步骤：
Q21：按照比例每千克赤芍中药材粉，称取0.03g果胶酶、0.03g纤维素酶和0.03g淀粉酶；再称取酶激活剂聚醚并与赤芍中药材粉混合搅拌均匀，得酶药混合物；果胶酶、纤维素酶与淀粉酶的混合酶与酶激活剂聚醚的质量比为0.3％；
Q22：酶混合物均匀的铺设在反应罐内，关闭反应罐；
Q23：调节反应罐内的温度至35℃，压力至0.6MPa，pH为5，酶解1h；调节反应罐内的温度至45℃，压力至0.6MPa，pH为5，酶解1h；调节反应罐内的温度至55℃，压力至0.6MPa，pH为5，酶解1h；然后恢复反应罐内压力至常压，得到赤芍酶解液；
Q3：赤芍酶解液的发酵反应处理；具体包括以下步骤：
Q31：按照体积比1:1:50取酵母菌发酵液、短刺小克银汉酶发酵液和赤芍酶解液并混合均匀，得混合物置于酶解罐内；酵母菌发酵液和短刺小克银汉霉菌发酵液的菌的个数均为1×1010cfu/ml；
Q32：调节酶解罐内的温度为35℃，pH为8，发酵20h后，恢复反应罐内压力至常压状态，得到并取出赤芍发酵液。
Q4：向赤芍发酵液中加入70℃的纯化水，充分搅拌提取，分离提取液和滤渣，重复2次；每次加入的纯化水与赤芍发酵液的体积比为10:1。
Q5：使用大孔树脂吸附法吸附富集、用体积浓度为40％的乙醇和纯化水洗涤，再以体积浓度为95％的乙醇溶液洗脱实现浓缩，得到洗脱液；收集洗脱液后调节洗脱液的pH值为4，于40℃下浓缩回收处理90min；冷冻干燥，得芍药内酯苷提取物。
用HPLC测芍药内酯苷含量，结果表明芍药内酯苷提取得率为2.40％。
以上给出的实施例是实现本发明较优的例子，本发明不限于上述实施例。本领域的技术人员根据本发明技术方案的技术特征所做出的任何非本质的添加、替换，均属于本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，包括如下步骤：
Q1：将赤芍中药材洗净并冷冻干燥后，进行超声波破壁处理，得到破壁的待提取赤芍中药材粉；
Q2：按照比例每千克赤芍中药材粉，分别取0.02～0.05g果胶酶、0.02～0.05g纤维素酶和0.02～0.05g淀粉酶；再取酶激活剂聚醚并与赤芍中药材粉混合并在反应罐内酶解，酶解温度在35～55℃范围梯度变化，得到赤芍酶解液；果胶酶、纤维素酶与淀粉酶的混合酶与酶激活剂聚醚的质量比为0.3～0.5％；
Q3：取1×108～1010cfu/ml的酵母菌发酵液和1×108～1010cfu/ml的短刺小克银汉霉菌发酵液，并与赤芍酶解液混合，然后在酶解罐内发酵，发酵温度为28～35℃，得到赤芍发酵液；酵母菌发酵液发酵液、短刺小克银汉霉菌发酵液和赤芍酶解液的体积比为1:1:50；
Q4：向赤芍发酵液中加入纯化水，充分搅拌提取，分离提取液和滤渣；
Q5：提取液依次使用大孔树脂吸附法进行吸附、用体积浓度为40％的乙醇和纯化水洗涤、以体积浓度为95％的乙醇溶液洗脱，之后收集赤芍洗脱液；调节洗脱液pH值为2～4，于40～60℃下浓缩回收处理60～90min使洗脱液浓缩，然后冷冻干燥，得芍药内酯苷提取物。
2.根据权利要求1所述的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，所述步骤Q1中赤芍中药材切成3～5mm片状后，置于-10～-50℃条件下冷冻干燥2～5h；然后在-5～-15℃下进行超声波破壁处理，超声波破壁的超声波功率为800～1000w，时间为40～50min。
3.根据权利要求1所述的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，所述步骤Q2具体包括如下步骤：
Q21：称取果胶酶、纤维素酶、淀粉酶与酶激活剂聚醚，并与赤芍中药材粉混合均匀，得酶药混合物；
Q22：酶药混合物均匀的铺设在反应罐内，关闭反应罐；
Q23：控制反应罐内的温度，在反应罐内酶解2～3h，然后恢复反应罐内压力至常压状态，得到赤芍酶解液。
4.根据权利要求3所述的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，所述步骤Q23中依次35℃酶解0.5h，45℃酶解1h，55℃酶解1h。
5.根据权利要求3所述的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，所述步骤Q23中反应罐内的压力为0.4～0.6Mpa，pH为4～5。
6.根据权利要求1所述的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，所述步骤Q3具体包括如下步骤：
Q31：取酵母菌、短刺小克银汉酶发酵液和赤芍酶解液，按照1:1:50体积比进行混合均匀，得混合物置于酶解罐内；
Q32：控制酶解罐内的温度发酵2～3h后，恢复酶解罐内压力至常压状态，得到并取出赤芍发酵液。
7.根据权利要求6所述的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，所述步骤Q32中酶解罐内的pH为5～8。
8.根据权利要求1所述的一种提高赤芍有效成分芍药内酯苷提取得率的方法，其特征在于，所述步骤Q4重复2～3次，步骤Q4中纯化水的温度为50～70℃，每次加入的纯化水与赤芍发酵液的体积比为6～10:1。
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