CN104189100B - 一种双水相萃取苁蓉苯乙醇苷的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种双水相萃取苁蓉苯乙醇苷的方法。其包括以下步骤：1)将苁蓉原料粉末加入双水相体系；2)萃取；3)移取苯乙醇苷富集相，浓缩干燥，得到苁蓉苯乙醇苷提取物。本发明从苁蓉提取苯乙醇苷，方法简单，提取率高，易放大进行连续性生产操作，能耗低，提取物苯乙醇苷含量高。克服了现有从苁蓉中提取苁蓉苯乙醇苷的方法操作繁琐、费时、提取率低、提取的苯乙醇苷品质不高等缺点。

Description

一种双水相萃取苁蓉苯乙醇苷的方法

技术领域

本发明属于天然产物有效成分的分离纯化领域，具体涉及一种双水相萃取苁蓉苯乙醇苷工艺。

背景技术

肉苁蓉Cistanche deserticola Y.C.Ma又名荒漠肉苁蓉、苁蓉或大芸，甜大芸，寸芸，梭梭大芸等，为列当科(Orobanchaceae)肉苁蓉属(Cistanche Hoffmg.et Link)多年生寄生植物。肉苁蓉属植物共约有20种，分布于欧亚大陆温暖的干燥或半干旱地区，历史考证在我国境内发现8个种和1个变种，经屠鹏飞等人考证调查后，确定我国目前肉苁蓉属植物分为4个种包括管花肉苁蓉(Cistanche tubulosa(Schrenk)Wight)、荒漠肉苁蓉(C.deserticola，Y.C.Ma)、盐生肉苁蓉(C.salsa(C.A.Mey.)G.Beck)、沙苁蓉(C.sinensisG.Beck)和1个变种，其来源于白花盐苁蓉(C.salsa var.albifora P.F.YU et Z.C.Lou)，主要分布于我国内蒙古、甘肃、新疆等地。

肉苁蓉史载于《神农本草经》，以其肉质茎入药，具有多种生物活性，被誉为“沙漠人参”。在中国和日本，肉苁蓉肉质茎作为一种补益药已经经历了上千年的历史。目前现代医学已发现荒漠肉苁蓉具有广阔的药用功能。已发现的相关药理生理活性有：激素调节作用、提高性功能作用、通便作用、肝保护作用、神经保护作用、心肌缺血保护、免疫调节作用、促进骨形成、增强体力、视力保护，抗氧化作用、抗自由基、抗凋亡、抗衰老作用、抗疲劳、抗炎、抗肿瘤，抗老年痴呆症，提高记忆力等功效。因此以肉苁蓉为基础的药物开发具有很高的价值。肉苁蓉主要化学成分有：苯乙醇苷类、苯甲醇苷类、环烯醚萜类、单萜类、木脂素和苯丙醇类、生物碱类、氨基酸、糖类、甾醇和挥发油类成分。其中苯乙醇苷类被认为是肉苁蓉中主要的活性成分。苯乙醇苷类成分(Phenylethanoid Glycosides，PhGs)通常是以葡萄糖为母核的含有酯键及氧苷键的天然糖苷，广泛存在于双子叶植物中。由于PhGs的紫外吸收能力很强，故其适用于高相液相法以及紫外分光光度法进行分析，并且由于多数化合物糖上都连有咖啡酰基或阿魏酰基，国内外学者又称其为苯丙素类化合物。目前荒漠肉苁蓉共分离得到22个苯乙醇苷类成分，包括一个单糖苷，十四个双糖苷和七个三糖苷。苯乙醇苷成分具有抗氧化、清除自由基、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、强心、DNA损伤修复、抗辐射等功能。该成分中多种物质也具有其他用途，如作为应激性机能障碍改善剂，用于化妆品以防止各种类型的脱发，治疗慢性便秘，消除子宫肌瘤等疾病。

双水相萃取技术是于六十年代首先由瑞典的P.A.Albertsson等提出的，近三十年得到广泛重视，已涉及酶、核酸、生长激素、病毒等各种活性有效成分的分离及提纯。其具有活性损失小、分离步骤少、操作条件温和且不存有机溶剂残留的问题等优点，因而在天然产物中有效成分的提取方面具有应用前景。

混合两种水溶性不同的化合物的水溶液时，当化合物浓度达到一定值，体系会自然地分成互不相溶的两相。这一现象早在1896年就由Beijerinck观察到：当明胶与琼脂或明胶与可溶性淀粉的水溶液混合时，得到一个浑浊不透明的溶液，它随之分成两个液相，这就是双水相体系。双水相体系的形成主要是由于化合物之间的不相溶性，造成相互无法渗透，不能形成均一相，从而具有分离倾向，在一定条件下即可分为二相。一般认为只要两化合物水溶液的憎水程度有所差异，混合时就可发生相分离，且憎水程度相差越大，相分离倾向也就越大。

尽管采用双水相萃取技术从天然产物中提取有效成分的文献报道不是很多，但已有的实例已充分表明了其良好的应用前景。东北林业大学符韵林，张东阳等(2013年)建立了一种双水相系统从鸽子豆根中分离富集染料木黄酮和芹黄素的方法。防化研究所毕鹏禹等(2013年)建立了一种高效环境又好的从黄芩中分离富集黄芩苷的双水相浮选方法。双水相系统分离技术，所形成的两相大部分是水，两相界面张力很小，为有效成分的溶解和萃取提供了适宜的环境；相际间的质量传递快，所需操作时间较短。操作方便，条件温和。所用的聚合物如聚乙二醇等对活性有效成分有稳定作用。易于工程放大和连续操作，可以用于规模化生产制备，能够完成较大处理量的操作。

从中药中提取天然成分的首要条件是被提取物能够快速、高效地进入提取介质，由于中药有效成分多为胞内产物，提取过程中一般需要破坏原料细胞壁。超声波对各种成分提取的强化作用主要源于其空化作用，空化中微小气泡的爆裂产生的极大压力使被破碎物细胞壁及整个生物体的破裂在瞬间完成，缩短了破碎时间，同时超声波产生的振动作用加强了胞内物质的释放、扩散及溶解，显著提高提取效率。因此超声辅助天然产物提取也是未来发展的重要技术。

就目前的肉苁蓉苯乙醇苷提取方法来看，多集中采用传统溶剂提取，同时微波辅助、超声辅助等方法。这些方法各有优缺点，传统溶剂提取能耗高、耗时长、效率较低，微波提取技术效果比传统的方法好，但由于微波采用的热效应提取原理，有效成分损失大，不利于肉苁蓉功效成分的综合利用，并且工业化放大有困难。而超声辅助提取的效率明显优于微波辅助，因此超声辅助提取应是天然产物提取的发展方向。并且考虑到后续分离的成本，应该在提取阶段就选择分离效果好，纯度高，有效成分损失少的分离方法与工艺。而在这方面近年出现的双水相提取方法则有较明显优势的，经过研究认为双水相结合超声波法在中药材活性成分提取分离中会有更深的应用和研究前景。基于以上各种原因，本发明提供了一种超声辅助双水相萃取肉苁蓉苯乙醇苷的方法，克服了以上方法高能耗，高损失，低效率，低质量的缺点，为肉苁蓉苯乙醇苷的生产提供了绿色，低成本，高质量的生产途径。

发明内容

本发明的目的在于提供一种双水相萃苁蓉苯乙醇苷的方法，克服目前苁蓉苯乙醇苷生产过程中的不足和缺点。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一种双水相萃取苁蓉苯乙醇苷的方法，其包括以下步骤：

1)将苁蓉原料粉末加入双水相体系；

2)萃取；

3)移取苯乙醇苷富集相，浓缩干燥，得到苁蓉苯乙醇苷提取物。

所述苯乙醇苷富集相为双水相体系中含有乙醇或PEG的相。

所述苁蓉原料粉末的粉碎度为10-80目，优选20-40目，更优选30目。

所述苁蓉原料为肉苁蓉、管花肉苁蓉、盐生肉苁蓉、沙苁蓉和白花盐苁蓉中的一种或至少两种的混合物。

所述双水相体系为选自乙醇/硫酸铵、乙醇/磷酸氢二钾、乙醇/柠檬酸钠或PEG/硫酸铵体系中的一种。所述乙醇/硫酸铵、乙醇/磷酸氢二钾、乙醇/柠檬酸钠或PEG/硫酸铵，指所述双水相体系中两种水相的两种溶质。

优选地，所述双水相体系为无水乙醇/硫酸铵体系，其中基于所述双水相体系，乙醇质量分数为15％-40％，优选18％-30％，更优选20％；基于所述双水相体系，硫酸铵质量分数为14％-40％，优选18％-30％，更优选23％。

所述苁蓉原料粉末与所述双水相体系按重量计比值为1：5-1：50，例如1：15，优选1：20-1：40，例如1：35，更优选1：30。

所述萃取采用搅拌震荡和/或超声辅助的提取方法。

所述超声辅助提取的时间为10-90分钟，例如80，优选30-60分钟，例如50，更优选40分钟；所述超声辅助提取功率100-3000W，例如2500W，优选200-2000W，例如1000W，更优选800W；所述超声辅助提取频率10-100kHz，例如20kHz，优选30-80kHz，例如48kHz，更优选40kHz；提取温度20-80℃，例如25℃，优选30-70℃，例如50℃，更优选40℃。

所述苯乙醇苷富集相的浓缩干燥采用选自真空浓缩干燥、喷雾干燥、鼓风干燥和冷冻干燥中的一种；

优选地，所述浓缩干燥采用喷雾干燥，其进风温度为160-230℃，例如210℃，优选170-200℃，例如180℃，更优选175℃。

移取苯乙醇苷富集相之后，剩余的双水相体系进行回收，所述回收包括回收无机盐，所述回收无机盐的方法为结晶法。所述回收双水相体系包括回收有机物，所述中回收有机物的方法包括减压蒸馏法。

本发明的双水相萃取肉苁蓉苯乙醇苷的方法，具有以下有益效果：

采用双水相萃取技术，提取快速回收率高，效率高；

采用双水相萃取技术，易于放大生产，成本低，污染少；

采用采用双水相萃取技术，产品质量高品质好，苯乙醇苷含量较传统溶剂萃取法高3倍；

提取完毕后的双水相体系回收利用，使用效率高，条件温和易控制。

本发明所述的双水相萃取肉苁蓉苯乙醇苷的方法，具有温和的生产条件、技术易放大，生产快速、溶剂易回收利用，绿色环保无污染，苯乙醇苷品质高等优点。

附图说明

图1为松果菊苷对照品紫外吸收光谱图。

图2为总苯乙醇苷提取物紫外吸收光谱图。

图3为松果菊苷对照品高效液相色谱图。

图4为总苯乙醇苷高效液相色谱图。

具体实施方式

下面结合附图并通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。

实施例1

1)将肉苁蓉粉碎至20目，密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为15％，磷酸氢二钾分数为30％，将称取5g肉苁蓉药材粉末加入到双水相体系中，料液比1/20。

3)搅拌下提取80min，其中提取温度为45℃。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，回收磷酸氢二钾，最后在40℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.68g。

实施例2

1)将管花肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为40％，磷酸氢二钾分数为14％，将称取5g管花肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/5。

3)搅拌下提取80min，其中提取温度为45℃。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为50℃，回收磷酸氢二钾，最后在50℃下真空干燥，得到管花苁蓉苯乙醇苷提取物1.97g。

实施例3

1)将肉苁蓉粉碎至80目，密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为23％，磷酸氢二钾分数为22％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取80min，其中提取温度为20℃。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为60℃，回收磷酸氢二钾，最后在60℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.99g。

实施例4

1)将管花肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为25％，磷酸氢二钾分数为20％，将称取5g管花肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取10min，其中提取温度为80℃，

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，回收磷酸氢二钾，最后在进行喷雾干燥，进风温度160℃，得到管花苁蓉苯乙醇苷提取物1.56g。

实施例5

1)将肉苁蓉粉碎，过60目筛后密封保存。

2)在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为18％，硫酸铵分数为30％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)超声波提取80min，其中提取温度为60℃，超声波功率为3000W，超声波频率30kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为80℃，回收硫酸铵，最后在70℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.76g。

实施例6

1)将肉苁蓉粉碎至30目，密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为15％，硫酸铵分数为40％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取40min，其中提取温度为40℃，超声波功率为100W，超声波频率80kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，回收硫酸铵，最后在进行喷雾干燥，进风温度200℃，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.74g。

实施例7

1)将肉苁蓉粉碎，过50目筛后密封保存。

2)在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为22％，硫酸铵分数为23％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)搅拌震荡提取80min，其中提取温度为70℃。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为80℃，回收硫酸铵，最后在70℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.76g。

实施例8

1)将肉苁蓉粉碎，过80目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为15％，硫酸铵分数为30％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/50。

3)搅拌震荡提取40min，其中提取温度为25℃，超声波功率为200W，超声波频率50kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，回收硫酸铵，最后在进行喷雾干燥，进风温度160℃，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.74g。

实施例9

1)将肉苁蓉粉碎，过70目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为40％，硫酸铵分数为14％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)超声波的辅助下提取40min，其中提取温度为50℃，超声波功率为800W，超声波频率80kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，回收硫酸铵，最后在60℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.89g。

实施例10

1)将肉苁蓉粉碎，过80目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为18％，磷酸氢二钾分数为30％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取40min，其中提取温度为25℃，超声波功率为300W，超声波频率40kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，回收磷酸氢二钾，最后在进行喷雾干燥，进风温度210℃，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.84g。

实施例11

1)将管花苁蓉粉碎，过45目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为30％，硫酸铵分数为18％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)超声波的辅助下提取40min，其中提取温度为50℃，超声波功率为800W，超声波频率80kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃℃，回收硫酸铵，最后在70℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物1.89g。

实施例12

1)将肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为24％，硫酸铵分数为20％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取40min，其中提取温度为60℃，超声波功率为100W，超声波频率80kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为80℃，回收硫酸铵，最后在70℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.79g。

实施例13

1)将肉苁蓉粉碎至35目，密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为15％，硫酸铵分数为26％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取80min，其中提取温度为60℃，超声波功率为3000W，超声波频率10kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为60℃，回收硫酸铵，最后在65℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.68g。

实施例14

1)将肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为24％，硫酸铵分数为20％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取50min，其中提取温度为60℃，超声波功率为500W，超声波频率40kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为80℃，回收硫酸铵，最后在200℃下喷雾，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.93g。

实施例15

1)将管花苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为15％，硫酸铵分数为26％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取80min，其中提取温度为50℃，超声波功率为2000W，超声波频率40kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为60℃，回收硫酸铵，最后在65℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物2.08g。

实施例16

1)将荒漠肉苁蓉、管花肉苁蓉、盐生肉苁蓉、沙苁蓉和白花盐苁蓉混合粉碎。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为20％，硫酸铵分数为24％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)超声波的辅助下提取40min，其中提取温度为40℃，超声波功率为300W，超声波频率50kHz，

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，最后在60℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.76g。

实施例17

1)将管花肉苁蓉、盐生肉苁蓉、沙苁蓉和白花盐苁蓉混合粉碎。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为18％，硫酸铵分数为49％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取25min，其中提取温度为20℃，超声波功率为200W，超声波频率30kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为70℃，结晶法回收硫酸铵，最后在80℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.59g。

实施例18

1)将盐生肉苁蓉粉碎。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为20％，硫酸铵分数为24％，将称取5g盐生肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取40min，其中提取温度为40℃，超声波功率为300W，超声波频率50kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，最后在60℃下真空干燥，得到盐生肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.76g。

实施例19

1)将沙苁蓉粉碎。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为15％，硫酸铵分数为30％，将称取5g沙苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取25min，其中提取温度为20℃，超声波功率为700W，超声波频率100kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为70℃，结晶法回收硫酸铵，最后在80℃下真空干燥，得到沙苁蓉苯乙醇苷提取物0.75g。

实施例20

1)将白花苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为40％，硫酸铵分数为14％，将称取5g白花苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)超声波的辅助下提取60min，其中提取温度为60℃，超声波功率为800W，超声波频率30kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，最后在230℃喷雾干燥，得到白花苁蓉肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.94g。

实施例21

1)将盐生肉苁蓉、沙苁蓉和白花盐苁蓉混合粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为26％，柠檬酸钠分数为23％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取50min，其中提取温度为40℃，超声波功率为500W，超声波频率70kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.78g。

实施例22

1)将沙苁蓉和白花盐苁蓉混合粉碎，密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，PEG质量分数为15％，硫酸铵分数为35％，将称取5g肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)超声波的辅助下提取30min，其中提取温度为50℃，超声波功率为500W，超声波频率50kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.91g。

实施例23

1)将管花肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，PEG质量分数为24％，硫酸铵分数为23％，将称取5g管花肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取25-80min，其中提取温度为60℃，超声波功率为800W，超声波频率10kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，得到管花肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.77g。

实施例24

1)将盐生肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，PEG质量分数为15％，硫酸铵分数为35％，将称取5g盐生肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取90min，其中提取温度为50℃，超声波功率为500W，超声波频率50kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，得到盐生肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.86g。

实施例25

1)将管花肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为20％，硫酸铵分数为23％，将称取5g管花肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取25-80min，其中提取温度为40℃，超声波功率为400W，超声波频率40kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，得到管花肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.77g。

实施例26

1)将盐生肉苁蓉粉碎，过40目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，PEG质量分数为30％，硫酸铵分数为18％，将称取5g盐生肉苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取50min，其中提取温度为50℃，超声波功率为500W，超声波频率50kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，得到盐生肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.86g。

实施例27

1)将沙苁蓉和白花盐苁蓉混合粉碎，过80目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为24％，硫酸铵分数为23％，将称取5g沙苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取50min，其中提取温度为70℃，超声波功率为300W，超声波频率40kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，进风温度170，得到沙苁蓉苯乙醇苷提取物0.74g。

实施例28

1)将白花盐苁蓉粉碎，过10目筛后密封保存。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，PEG质量分数为15％，硫酸铵分数为35％，将称取5g白花盐苁蓉粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取50min，其中提取温度为40℃，超声波功率为500W，超声波频率50kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，结晶法回收硫酸铵，对其进行喷雾干燥，得到白花盐苁蓉苯乙醇苷提取物0.83g。

实施例29

1)将肉苁蓉药材粉碎。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为20％，硫酸铵分数为24％，将称取5g肉苁蓉药材粉末加入到双水相体系中，料液比1/30。

3)搅拌震荡下提取40min，其中提取温度为40℃。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为40℃，最后在60℃下真空干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.76g。

实施例30

1)将肉苁蓉药材粉碎至10目。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为15％，硫酸铵分数为49％，将称取5g肉苁蓉药材粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取25min，其中提取温度为20℃，超声波功率为200W，超声波频率30kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为70℃，结晶法回收硫酸铵，最后在进风温度175℃喷雾干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.59g。

实施例31

1)将肉苁蓉药材粉碎。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为20％，硫酸铵分数为24％，将称取5g肉苁蓉药材粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)搅拌震荡下提取30min，其中提取温度为30℃。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为60℃，最后在进风温度170℃喷雾干燥，得到肉苁蓉苯乙醇苷提取物0.76g。

实施例32

1)将肉苁蓉药材粉碎。

2)双水相体系的建立，在该双水相体系中，基于双水相体系，乙醇质量分数为22％，硫酸铵分数为22％，将称取5g肉苁蓉药材粉末加入到双水相体系中，料液比1/40。

3)超声波的辅助下提取25min，其中提取温度为70℃，超声波功率为200W，超声波频率30kHz。

4)取苯乙醇苷富集相，对其进行减压蒸馏，减压蒸馏的温度为50℃，结晶法回收硫酸铵，最后在60℃下真空干燥，得到苁蓉苯乙醇苷提取物0.59g。

实施例33按照实施例1-32任意之一方法制备的苯乙醇苷在改善记忆或神经保护产品中的应用

按照银杏叶提取物：枸杞子提取物：苯乙醇苷＝2：5：4配比，将三种物质混合，灭菌，压片，制备成改善记忆苁蓉片。

实施例34

采用高效液相法测定由本发明所述方法制得的苁蓉苯乙醇苷提取物中主要成分松果菊苷，紫外分光光度法测定总苯乙醇苷(采用松果菊苷为标品)。所得的全波长扫描和高效液相色谱图见附图。

图1为松果菊苷对照品紫外吸收光谱图，最大吸收波长为(332nm)。

图2为总苯乙醇苷提取物紫外吸收光谱图，最大吸收波长为(332nm)，证实所得的苁蓉苯乙醇苷提取物中的主要成分为松果菊苷。

图3为松果菊苷对照品高效液相色谱图，保留时间为16.2min。

图4为总苯乙醇苷高效液相色谱图，保留时间为16.2min，证实所得的苁蓉苯乙醇苷提取物中的主要成分为松果菊苷。

本发明所述的双水相萃取肉苁蓉苯乙醇苷的方法，具有温和的生产条件、技术易放大，生产快速、溶剂易回收利用，绿色环保无污染，苯乙醇苷品质高等优点。

申请人声明，本发明通过上述实施例来说明本发明的详细方法，但本发明并不局限于上述详细方法，即不意味着本发明必须依赖上述详细方法才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了，对本发明的任何改进，对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等，均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

Claims (14)

1.一种双水相萃取苁蓉苯乙醇苷的方法，其包括以下步骤：

1)将苁蓉原料粉末加入双水相体系，所述双水相体系为选自乙醇/硫酸铵、乙醇/磷酸氢二钾中的一种；

所述双水相体系为乙醇/硫酸铵体系时，其中，基于所述双水相体系，乙醇质量分数为15％-40％；基于所述双水相体系，硫酸铵质量分数为14％-40％；所述苁蓉原料粉末与所述双水相体系按重量计比值为1：20-1：50；

2)萃取；所述萃取采用搅拌震荡和/或超声辅助的提取方法；所述超声辅助提取的时间为25-90分钟；所述超声辅助提取功率100-3000W；所述超声辅助提取频率10-80kHz；提取温度20-60℃；

3)移取苯乙醇苷富集相之后，剩余的双水相体系进行回收，所述回收包括回收无机盐和有机物，所述回收无机盐的方法为结晶法，所述回收有机物的方法为减压蒸馏法，浓缩干燥，得到苁蓉苯乙醇苷提取物。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苁蓉原料粉末的粉碎度为10-80目。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苁蓉原料粉末的粉碎度为20-40目。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苁蓉原料粉末的粉碎度为30目。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双水相体系为乙醇/硫酸铵体系，其中，基于所述双水相体系，乙醇质量分数为18％-30％；基于所述双水相体系，硫酸铵质量分数为18％-30％。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述双水相体系为乙醇/硫酸铵体系，其中，基于所述双水相体系，乙醇质量分数为20％；基于所述双水相体系，硫酸铵质量分数为23％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苁蓉原料粉末与所述双水相体系按重量计比值为1：20-1：40。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苁蓉原料粉末与所述双水相体系按重量计比值为1：30。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声辅助提取的时间为30-60分钟；所述超声辅助提取功率200-2000W；所述超声辅助提取频率30-80kHz；提取温度25-60℃。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述超声辅助提取的时间为40分钟；所述超声辅助提取功率800W；所述超声辅助提取频率40kHz；提取温度40℃。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述苯乙醇苷富集相的浓缩干燥采用选自真空浓缩干燥、喷雾干燥、鼓风干燥和冷冻干燥中的一种。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓缩干燥采用喷雾干燥，其进风温度为160-230℃。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓缩干燥采用喷雾干燥，其进风温度为170-200℃。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述浓缩干燥采用喷雾干燥，其进风温度为175℃。