CN102443036A - 一种从积雪草中提纯积雪草酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从积雪草中提纯积雪草酸的方法，方法是以积雪草药材为原料，加生物酶自然解，酶解物用70-99％醇溶液提取1-3次，提取液减压回收乙醇，浓缩液加石油醚脱脂，粗提物溶解加大孔树脂拌样，干法上大孔树脂柱，不同浓度乙醇溶液洗脱，浓缩结晶，结晶物再用甲醇、丙酮回流溶解重结晶，干燥即得产品。本工艺操作简单，树脂可反复使用，所得产品含量高、收率高、成本低，适合工业生产。
Description
技术领域：
本发明涉及一种从积雪草中提积雪草酸的方法，特别是涉及一种采用酶法提取和大孔树脂纯化积雪草酸的方法。
背景技术：
积雪草酸，乌苏烷型五环三萜酸类物质。
分子式：C48H78O5。
积雪草酸不溶于石油醚和水，溶于甲醇、乙醇、丁醇、丁酮，略溶于丙酮，微溶于苯、氯仿、乙醚等有机溶剂。
积雪草为伞形科植物积雪草的干燥全草，又称落得打、崩大碗、半边钱，在我国作为药用植物使用已经有二千余年历史，为《中国药典》收载的常用中药。国内积雪草资源十分丰富，几乎遍布长江流域以南地区。积雪草具有清热利湿、解毒消肿之功效，适用于湿热黄疸、中暑腹泻、痈肿疮毒、跌打损伤。积雪草的药理作用与它的化学成分是密不可分的。积雪草的化学成分十分复杂，其主要成分有三萜类、多炔烯烃类黄酮类和挥发油类。积雪草的化学成分中，三萜皂苷及其皂苷元是生物活性研究较深入的一大类组分，积雪草原草中含有大量三萜酸和三萜皂苷(主要为积雪草酸和积雪草苷)。积雪草酸是积雪草中含量较高的乌苏烷型五环三萜酸。研究表明积雪草酸具有治疗皮肤创伤、抗抑郁、抗阿尔茨海默病以及保肝、保护心脑血管和诱导肿瘤细胞凋亡等多种作用。资料表明，积雪草酸是积雪草苷在胃肠道内代谢的活性形式，给药时用积雪草酸来代替积雪草苷，则使作用更直接，另外积雪草酸还可以制备一系列的衍生物，均具有活性作用。如专利(申请号：200310108854.3)“积雪草酸及其衍生物在制备抗抑郁药物中的应用”，所以从积雪草中提取积雪草酸具有重要意义。
目前，现有提取积雪草酸方法较少，多为从积雪草直接提取积雪草酸或从积雪草苷水解制备积雪草酸。如专利(申请号200810163172.5)“一种积雪草苷碱水解制备积雪草酸的方法”，该专利公开的方法是积雪草苷碱水解制备积雪草酸，该方法虽工艺过程简单，但提取率低，含量不高。而传统的从积雪草中直接提取积雪草酸的方法往往萃取时间长，需要使用大量溶剂，而且提取率较低，含量不是很高。
发明内容：
本发明要解决技术问题是提供一种从积雪草中提取积雪草酸的方法，本工艺简单易操作，产品收率高、含量高、成本低。
本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：
一种从积雪草中提纯积雪草酸的方法，其特征在于包含以下步骤：
1)酶解：把积雪草粉碎10～60目，加入酸水(pH为4～6)使完全润湿，再加生物酶，自然酶解2～5天；
2)提取：上述酶解物用7-15倍量70-99％乙醇溶液回流提取1-2小时，提取1-3次，过提取液滤过减压回收乙醇，浓缩液再加1-3倍量石油醚脱脂，离心得到粗提物；
3)大孔树脂分离纯化：上述粗提物用无水乙醇回流溶解，过滤，滤液加入树脂，回收试剂，干样上大孔树脂柱，用不同浓度乙醇溶液洗脱，洗脱液减压醇浓度至20-40％，放置结晶；
4)重结晶：上述结晶物滤出，依次用无水甲醇、丙酮回流溶解溶解，放置结晶，滤出干燥即得积雪草酸。
所述步骤1)中使用的酶可选纤维素酶、β-葡聚酶和淀粉酶中的一种或多种，酶用量为0.4％～1％。
所述步骤2)中醇为甲醇或乙醇溶液。
所述步骤3)中大孔树脂可选NKA-9、NKA-2、X-5、D-4006中的一种。
所述步骤3)中梯度洗脱溶液为3-8BV20-40％乙醇溶液→4-7BV60-90％乙醇溶液。
本发明采用酶解提取，条件温和，不会破坏苷元的结构，酶解原料也有提取；采用大孔树脂分离，不同浓度乙醇洗脱，除去多种杂质，而且树脂可再生重复利用，减少了污染，降低了成本，本工艺具有工业化意义。
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式：
具体实施方式：
实施例1：
取积雪草药材粉碎至60目，称取1kg，加适量盐酸水溶液(pH5)润湿，加入纤维素酶10g拌匀，自然酶解3天，酶解原料用7L90％乙醇溶液回流提取1小时，提取3次，提取液滤过减压回收乙醇，加入2L石油醚震荡，转入分液漏斗，除去石油醚层，放出离心得粗提物53g，用无水乙醇溶解，过滤，滤液加入50gNKA-2大孔树脂树脂，回收乙醇。取50g NKA-2大孔树脂装柱，干样加入树脂柱上部，取1.5L40％乙醇溶液洗脱杂质，再取2L90％乙醇溶液洗脱有效成分，减压回收至乙醇40％，放置结晶，滤过得结晶物15g，结晶物用无水甲醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶物，再用丙酮重结晶(操作同甲醇)，干燥得积雪草酸5g，含量98.1％。
实施例2：
取积雪草药材粉碎至10目，称取1kg，加适量硫酸水溶液(pH6)润湿，加入β-葡聚酶4g拌匀，自然酶解5天，酶解原料用10L70％甲醇溶液回流提取2小时，提取2次，提取液滤过减压回收乙醇，加入3L石油醚震荡，转入分液漏斗，除去石油醚层，放出离心得粗提物65g，用无水乙醇溶解，过滤，滤液加入70gNKA-9大孔树脂树脂，回收乙醇。取50gNKA-9大孔树脂装柱，干样加入树脂柱上部，取4L20％乙醇溶液洗脱杂质，再取3L70％乙醇溶液洗脱有效成分，减压回收至乙醇30％，放置结晶，滤过得结晶物18g，结晶物用无水甲醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶物，再用丙酮重结晶(操作同甲醇)，干燥得积雪草酸4.2g，含量97％。
实施例3：
取积雪草药材粉碎至40目，称取1kg，加适量柠檬酸水溶液(pH4)润湿，加入淀粉酶8g拌匀，自然酶解4天，酶解原料用15L99％甲醇溶液回流提取2小时，提取液滤过减压回收乙醇，加入1L石油醚震荡，转入分液漏斗，除去石油醚层，放出离心得粗提物45g，用无水乙醇溶解，过滤，滤液加入50g X-5大孔树脂树脂，回收乙醇。取50g X-5大孔树脂装柱，干样加入树脂柱上部，取3L30％乙醇溶液洗脱杂质，再取2.5L80％乙醇溶液洗脱有效成分，减压回收至乙醇40％，放置结晶，滤过得结晶物12g，结晶物用无水甲醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶物，再用丙酮重结晶(操作同甲醇)，干燥得积雪草酸4g，含量98.8％。
实施例4：
取积雪草药材粉碎至40目，称取1kg，加适量磷酸水溶液(pH5)润湿，加入纤维素酶和淀粉酶7g拌匀，自然酶解4天，酶解原料用8L95％乙醇溶液回流提取1小时，提取2次，提取液滤过减压回收乙醇，加入3L石油醚震荡，转入分液漏斗，除去石油醚层，放出离心得粗提物47g，用无水乙醇溶解，过滤，滤液加入50g D-4006大孔树脂树脂，回收乙醇。取500LD-4006大孔树脂装柱，干样加入树脂柱上部，取2L40％乙醇溶液洗脱杂质，再取2L80％乙醇溶液洗脱有效成分，减压回收至乙醇40％，放置结晶，滤过得结晶物14g，结晶物用无水甲醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶物，再用丙酮重结晶(操作同甲醇)，干燥得积雪草酸4.3g，含量98.5％。
实施例5：
取积雪草药材粉碎至40目，称取5kg，加适量硫酸水溶液(pH5)润湿，加入淀粉酶50g拌匀，自然酶解3天，酶解原料用35L90％甲醇溶液回流提取1小时，提取三次，提取液滤过减压回收乙醇，转入萃取罐中加入10L石油醚脱脂，除去石油醚，放出离心得粗提物320g，用无水乙醇溶解，过滤，滤液加入300gNKA-2大孔树脂树脂，回收乙醇。取3LNKA-2大孔树脂装柱，干样加入树脂柱上部，取9L40％乙醇溶液洗脱杂质，再取12L90％乙醇溶液洗脱有效成分，减压回收至乙醇40％，放置结晶，滤过得结晶物67g，结晶物用无水甲醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶物，再用丙酮重结晶(操作同甲醇)，干燥得积雪草酸23g，含量98.2％。
实施例6：
取积雪草药材粉碎至60目，称取10kg，加适量盐酸水溶液(pH5)润湿，加入纤维素酶和β-葡聚酶80g拌匀，自然酶解4天，酶解原料用90L90％乙醇溶液回流提取1小时，提取2次，提取液滤过减压回收乙醇，转入萃取罐中加入15L石油醚脱脂，除去石油醚，放出离心得粗提物650g，用无水乙醇溶解，过滤，滤液加入700gNKA-9大孔树脂树脂，回收乙醇。取6L NKA-2大孔树脂装柱，干样加入树脂柱上部，取25L40％乙醇溶液洗脱杂质，再取24L90％乙醇溶液洗脱有效成分，减压回收至乙醇40％，放置结晶，滤过得结晶物115g，结晶物用无水甲醇回流溶解，放置结晶，滤出结晶物，再用丙酮重结晶(操作同甲醇)，干燥得积雪草酸52g，含量98％。
Claims (5)
1.一种从积雪草中提纯积雪草酸的方法，其特征在于包含以下步骤：
1)酶解：把积雪草粉碎10～60目，加入酸水(pH为4～6)使完全润湿，再加生物酶，自然酶解3～5天；
2)提取：上述酶解物用7-15倍量70-99％醇溶液回流提取1-2小时，提取1-3次，提取液滤过减压回收乙醇，浓缩液再加1-3倍量石油醚脱脂，离心得到粗提物；
3)大孔树脂分离纯化：上述粗提物用无水乙醇回流溶解，过滤，滤液加入树脂，回收试剂，干样上大孔树脂柱，用不同浓度乙醇溶液洗脱，洗脱液减压醇浓度至20-40％，放置结晶；
4)重结晶：上述结晶物滤出，依次用无水甲醇、丙酮回流溶解，放置结晶，滤出干燥即得积雪草酸。
2.如权利要求1所述从积雪草中提纯积雪草酸的方法，其特征在于所述步骤1)中使用的酶可选纤维素酶、β-葡聚酶和淀粉酶中的一种或多种，酶用量为0.4％～1％。
3.如权利要求1所述从积雪草中提纯积雪草酸的方法，其特征在于所述步骤2)中醇为甲醇或乙醇溶液。
4.如权利要求1所述从积雪草中提纯积雪草酸的方法，其特征在于所述步骤3)中大孔树脂可选NKA-9、NKA-2、X-5、D4006中的一种。
5.如权利要求1所述从积雪草中提纯积雪草酸的方法，其特征在于所述步骤3)中梯度洗脱溶液为3-8BV20-40％醇溶液→4-7BV60-90％乙醇溶液。
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