CN107141365B - 一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于桑黄多糖的提纯技术领域,提供了一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法。该方法通过将桑黄子实体冷冻研磨细化,在去离子水中分散溶胀,加入表面活性剂使得微细桑黄完全分散形成乳液,置于反应釜中。在保证乳液稳定性的前提下将其加热至一定温度,然后对乳液进行反复加压、真空,使得桑黄多糖高效溶出。然后通过加入盐使乳液破坏,离心收集上清液,得到桑黄多糖。与传统方法相比,该发明提取纯化效率高,对桑黄多糖的损伤小,较佳的保留了桑黄多糖的活性,得到的纯化桑黄多糖适合于肿瘤用药。
Description
技术领域
本发明涉及桑黄多糖的提纯技术领域,尤其是涉及一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法。
背景技术
名贵中药桑黄的显著药效主要源于其中的活性多糖。桑黄多糖通常是从子实体、菌丝体及发酵液中分离得到,一般由10个分子以上的单糖通过糖苷键连接而成,可通过控制细胞分裂及分化,调节细胞生长和衰老而起到活性作用。由于子实体的质地较硬,成分复杂,导致桑黄多糖的提取困难较大,通常的提取方法为水提取法,包括热水提取法、酶提取法、微波提取法、超声提取法等。稀酸提取法、稀碱提取法、盐提取法及其联合应用,也常用于桑黄多糖的提取。
近年来,许多学者对桑黄多糖的提取纯化方法进行研究,试图采用一些新方法,以提高多糖的提取效率,并提高其活性及药用价值。Ma等发明了低压低温提取高活性桑黄多糖的方法,通过液体发酵法获得桑黄菌丝体,与去离子水按比例混合均匀,在-0.04~-0.07MPa的压力,50~60℃的温度下提取1~3h,提取液经离心分离、醇沉,得到具有活性的桑黄多糖。该方法与热水浸提法和超声协助提取法相比,在提高桑黄多糖得率的同时,能很好的保持桑黄多糖的活性结构,获得高活性的桑黄多糖。Sun等采用超声萃取法从桑黄子实体中提取桑黄粗多糖,用高速逆流色谱法进一步纯化桑黄多糖,可提高桑黄粗多糖的得率,可达生药的6%。而且进一步纯化桑黄多糖后其纯度大幅提高,可达75%左右。Yang等采用桑黄子实体为原料,经粉碎,提取,沉淀等工艺分离得到的一种β葡甘聚糖ZDT,重均分子量在88~102万道尔顿之间,多糖质量百分含量超过90%。该提取工艺使用聚维酮K30代替乙醇,同样体积的提取液聚维酮K30用量只有乙醇的五十分之一,大大降低了生产成本,所得多糖ZDT具有显著的抗肿瘤活性。Zou等首先采用液体培养获得桑黄多糖发酵液,然后经纱布或板框滤布固液分离后,发酵滤液先采用无级陶瓷膜系统分离,获得桑黄多糖清液,再采用分子量为5000级的超滤有机膜系统纯化浓缩,得桑黄多糖浓缩液,浓缩液还可进一步采用冷冻干燥或喷雾干燥方法制备桑黄多糖干粉。整个过程不添加有机溶剂乙醇沉淀获得多糖,可快速分离浓缩,具有节能、无污染、降低成本、缩短时间等优点,可应用于工业生产。Wang等将桑黄栽培废料烘干并粉碎得到桑黄栽培废料干粉,与碱性乙醇溶液混合,然后超声处理20~40min,过滤得到滤液和滤渣。向滤渣中加入去离子水,混合均匀,调节pH值至4~6,加入纤维素酶和葡萄糖氧化酶组合而成的复合酶,在45~55℃下酶解,酶解液经离心处理分离得上清液和沉淀物。得到的滤液经旋转蒸发后除去乙醇,加入乙酸乙酯进行萃取,分液,上层液经减压浓缩干燥得到桑黄黄酮。得到的上清液用旋转蒸发仪减压浓缩后进行醇沉,离心,得上清液和沉淀物,沉淀物即为桑黄多糖,由此可制得桑黄黄酮和桑黄多糖。
在上述已有的研究的基础上,本发明旨在进一步提高桑黄多糖的提纯效率,并保护好其结构,减少损伤,提高桑黄多糖的药用活性。
发明内容
本发明的目的是提供一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,可以解决传统方法多糖分离纯化较为困难的缺陷,最主要的,创造性的应用反复加减压的方法进行提纯,可保证提纯过程在较低温度下进行,以减小桑黄多糖的损伤,保留其活性,同时桑黄多糖的溶出效率高,得率高。
本发明涉及的具体技术方案如下:
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,通过将桑黄子实体冷冻研磨细化,在去离子水中分散溶胀,加入表面活性剂使得微细桑黄完全分散形成乳液,置于反应釜中。在保证乳液稳定性的前提下将其加热至一定温度,然后对乳液进行反复加压、真空,使得桑黄多糖高效溶出。然后通过加入盐使乳液破坏,离心收集上清液,得到桑黄多糖。制备的具体步骤如下:
(1)将桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,置于研磨机中低速研磨,使其细化,然后加入去离子水中,使其分散溶胀,然后加入表面活性剂,使其完全分散,形成一定质量浓度的乳液,置于反应釜中;
(2)将步骤(1)所得的乳液加热,加热温度不宜过高,以免乳液不稳定,然后对其施加高压,保持一定时间后释放压力,转而对乳液抽空真,并保持一定时间;重复上述加压减压过程至少5次,可使微粒中的桑黄多糖高效溶出;
(3)在经步骤(2)反复处理后的乳液中加入无机盐,使乳液破乳,然后离心处理,取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
优选的,步骤(1)所述低速研磨的研磨转速不高于30r/min;
优选的,步骤(1)所述研磨后的桑黄颗粒粒径为0.5~1mm;
优选的,步骤(1)所述桑黄乳液的质量浓度为15~25g/L;
优选的,步骤(1)所述表面活性剂为硬脂酸或硬脂酸钠;
优选的,步骤(1)所述表面活性剂的加入质量为桑黄质量的2%~3%;
优选的,步骤(2)所述乳液的加热温度为40~60℃;
优选的,步骤(2)所述高压处理的压力为20~25MPa,时间为5~10min;
优选的,步骤(2)所述真空处理的压力为-0.05~-0.03MPa,时间为2~2.5h;
优选的,步骤(3)所述无机盐为钠盐或钾盐,如氯化钾、氯化钠;
优选的,步骤(3)所述离心处理的转速为3000~4000r/min,时间为10~15min。
桑黄多糖通常由桑黄子实体分离提纯而得,但桑黄子实体质地较硬,成份复杂,致使多糖分离纯化较为困难。常用的溶剂浸提法包含热水浸提、碱水浸提等,都存在着桑黄多糖得率低,提取温度高易破坏多糖结构的缺陷。微波提取法效率高,多糖得率高,但不适于大批量生产。酶解法既能提高提纯效率,又能保护桑黄多糖的结构,但其成本较高,阻碍其应用。本发明通过将桑黄子实体冷冻研磨细化,在去离子水中分散溶胀,借助表面活性剂完全分散形成乳液。在保证乳液稳定性的前提下加热,并进行反复加压、真空,使得桑黄多糖高效溶出,然后通过加入盐使乳液破坏,离心收集上清液,得到桑黄多糖。整个过程的加热温度较低,能保证桑黄多糖的活性不被破坏。反复加压及抽真空处理,能促进多糖的溶出,提高提纯效率。因此,本发明的提纯方法能有效避免其他方法的各种缺陷。
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,与现有技术相比,其突出的特点和优异的效果在于:
1.本发明先将桑黄子实体冷冻研磨细化,有利于增大其比表面积,增大与液体的接触面,从而桑黄多糖更容易溶出,提纯效率大大提高。
2.本发明的整个提纯过程都在较低的温度下进行,仅40~60℃,有利于保护桑黄多糖的结构,因而提纯得到的多糖活性更高。
3.本发明采用高压和真空交替反复处理的方法,有利于促进桑黄多糖的溶出,提高多糖得率。
4.本发明的提纯过程不使用且不产生有毒有害物质,环保健康。
5.本发明采用的提纯方法简单易行,成本较低,便于实现大规模生产。
具体实施方式
以下通过具体实施方式对本发明作进一步的详细说明,但不应将此理解为本发明的范围仅限于以下的实例。在不脱离本发明上述方法思想的情况下,根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更,均应包含在本发明的范围内。
实施例1
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其提纯桑黄多糖的具体过程如下:
首先,将25kg桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,并置于研磨机中以25r/min的转速研磨,使其细化至0.5~1mm的粒径。然后加入到1000L去离子水中,使其分散溶胀。然后加入0.5kg硬脂酸,使其完全分散,形成稳定乳液,再置于反应釜中;再保证乳液稳定性的前提下,将其加热到60℃。然后对其施加20MPa的高压,保持8min后释放压力,转而对乳液抽空真,真空度为-0.05MPa,并保持2h。重复上述加压减压过程5次,使微粒中的桑黄多糖高效溶出;然后向处理后的乳液中加入氯化钠,使乳液破乳,然后以4000r/min的速度离心处理,10min后取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
经实际验证,实施例1提取出的桑黄多糖损失小,活性高,提纯效率高。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算出桑黄多糖的得率如表1所示。
实施例2
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其提纯桑黄多糖的具体过程如下:
首先,将20kg桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,并置于研磨机中以25r/min的转速研磨,使其细化至0.5~1mm的粒径。然后加入到1000L去离子水中,使其分散溶胀。然后加入0.4kg硬脂酸钠,使其完全分散,形成稳定乳液,再置于反应釜中;再保证乳液稳定性的前提下,将其加热到50℃。然后对其施加23MPa的高压,保持10min后释放压力,转而对乳液抽空真,真空度为-0.04MPa,并保持2.5h。重复上述加压减压过程5次,使微粒中的桑黄多糖高效溶出;然后向处理后的乳液中加入氯化钾,使乳液破乳,然后以3000r/min的速度离心处理,10min后取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
经实际验证,实施例2提取出的桑黄多糖损失小,活性高,提纯效率高。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算出桑黄多糖的得率如表1所示。
实施例3
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其提纯桑黄多糖的具体过程如下:
首先,将15kg桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,并置于研磨机中以25r/min的转速研磨,使其细化至0.5~1mm的粒径。然后加入到1000L去离子水中,使其分散溶胀。然后加入0.3kg硬脂酸,使其完全分散,形成稳定乳液,再置于反应釜中;再保证乳液稳定性的前提下,将其加热到40℃。然后对其施加25MPa的高压,保持5min后释放压力,转而对乳液抽空真,真空度为-0.03MPa,并保持2h。重复上述加压减压过程5次,使微粒中的桑黄多糖高效溶出;然后向处理后的乳液中加入氯化钠,使乳液破乳,然后以4000r/min的速度离心处理,15min后取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
经实际验证,实施例3提取出的桑黄多糖损失小,活性高,提纯效率高。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算出桑黄多糖的得率如表1所示。
实施例4
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其提纯桑黄多糖的具体过程如下:
首先,将25kg桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,并置于研磨机中以25r/min的转速研磨,使其细化至0.5~1mm的粒径。然后加入到1000L去离子水中,使其分散溶胀。然后加入0.5kg硬脂酸钠,使其完全分散,形成稳定乳液,再置于反应釜中;再保证乳液稳定性的前提下,将其加热到60℃。然后对其施加22MPa的高压,保持7min后释放压力,转而对乳液抽空真,真空度为-0.05MPaMPa,并保持2.5h。重复上述加压减压过程5次,使微粒中的桑黄多糖高效溶出;然后向处理后的乳液中加入氯化钾,使乳液破乳,然后以3500r/min的速度离心处理,12min后取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
经实际验证,实施例4提取出的桑黄多糖损失小,活性高,提纯效率高。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算出桑黄多糖的得率如表1所示。
实施例5
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其提纯桑黄多糖的具体过程如下:
首先,将20kg桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,并置于研磨机中以25r/min的转速研磨,使其细化至0.5~1mm的粒径。然后加入到1000L去离子水中,使其分散溶胀。然后加入0.4kg硬脂酸,使其完全分散,形成稳定乳液,再置于反应釜中;再保证乳液稳定性的前提下,将其加热到50℃。然后对其施加20MPa的高压,保持10min后释放压力,转而对乳液抽空真,真空度为-0.03MPa,并保持2h。重复上述加压减压过程5次,使微粒中的桑黄多糖高效溶出;然后向处理后的乳液中加入氯化钠,使乳液破乳,然后以4000r/min的速度离心处理,10min后取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
经实际验证,实施例5提取出的桑黄多糖损失小,活性高,提纯效率高。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算出桑黄多糖的得率如表1所示。
实施例6
一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其提纯桑黄多糖的具体过程如下:
首先,将15kg桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,并置于研磨机中以25r/min的转速研磨,使其细化至0.5~1mm的粒径。然后加入到1000L去离子水中,使其分散溶胀。然后加入0.3kg硬脂酸钠,使其完全分散,形成稳定乳液,再置于反应釜中;再保证乳液稳定性的前提下,将其加热到60℃。然后对其施加250MPa的高压,保持10min后释放压力,转而对乳液抽空真,真空度为-0.05MPaMPa,并保持2.5h。重复上述加压减压过程5次,使微粒中的桑黄多糖高效溶出;然后向处理后的乳液中加入氯化钾,使乳液破乳,然后以3000r/min的速度离心处理,15min后取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
经实际验证,实施例6提取出的桑黄多糖损失小,活性高,提纯效率高。采用苯酚-硫酸法测定多糖含量,计算出桑黄多糖的得率如表1所示。
表1:
具体实施例 | 桑黄多糖得率(%) |
实施例1 | 5.86 |
实施例2 | 4.56 |
实施例3 | 5.13 |
实施例4 | 4.82 |
实施例5 | 4.48 |
实施例6 | 5.67 |
Claims (8)
1.一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于,通过将桑黄子实体冷冻研磨细化,在去离子水中分散溶胀,加入表面活性剂使得微细桑黄完全分散形成乳液,置于反应釜中,在保证乳液稳定性的前提下将其加热至一定温度,然后对乳液进行反复加压、真空,使得桑黄多糖高效溶出,然后通过加入盐使乳液破坏,离心收集上清液,得到桑黄多糖;制备的具体步骤如下:
(1)将桑黄子实体液氮冷冻至0℃以下,置于研磨机中低速研磨,使其细化,然后加入去离子水中,使其分散溶胀,然后加入表面活性剂,使其完全分散,形成一定质量浓度的乳液,置于反应釜中;
(2)将步骤(1)所得的乳液加热,加热温度不宜过高,以免乳液不稳定,然后对其施加高压,保持一定时间后释放压力,转而对乳液抽空真,并保持一定时间;重复上述加压减压过程至少5次,可使微粒中的桑黄多糖高效溶出;所述乳液加热的温度为40~60℃;所述高压处理的压力为20~25MPa,时间为5~10min;所述真空处理的压力为-0.05~-0.03MPa,时间为2~2.5h;
(3)在经步骤(2)反复处理后的乳液中加入无机盐,使乳液破乳,然后离心处理,取上清液,经提取即可得到桑黄多糖。
2.根据权利要求1所述一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于:步骤(1)所述低速研磨的研磨转速不高于30r/min。
3.根据权利要求1所述一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于:步骤(1)所述研磨后的桑黄颗粒粒径为0.5~1mm。
4.根据权利要求1所述一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于:步骤(1)所述桑黄乳液的质量浓度为15~25g/L。
5.根据权利要求1所述一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于:步骤(1)所述表面活性剂为硬脂酸或硬脂酸钠。
6.根据权利要求1所述一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于:步骤(1)所述表面活性剂的加入质量为桑黄质量的2%~3%。
7.根据权利要求1所述一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于:步骤(3)所述无机盐为钠盐或钾盐。
8.根据权利要求1所述一种反复加减压高效提纯桑黄多糖的方法,其特征在于:步骤(3)所述离心处理的转速为3000~4000r/min,时间为10~15min。
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