CN104311691B - 一种苦瓜多糖的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种苦瓜多糖的提取方法。一种苦瓜多糖的提取方法，包括下述的步骤：将苦瓜清洗干净并晾干，再粉碎成苦瓜粉，在苦瓜粉中加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，在微波条件下酶解，酶解后浓缩并脱色，离心，取上清液浓缩醇沉，再离心，采用乙醇清洗沉淀，冷冻干燥后并粉碎，得苦瓜多糖。采用本发明的方法从苦瓜中提取多糖，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将苦瓜中的脂肪、纤维素酶解，将其中的多糖提取出来，提高了苦瓜的利用率，采用本发明的方法得到多糖不仅得率高，而且纯度也高。
Description
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种苦瓜多糖的提取方法。
背景技术
苦瓜有消暑解热、明目解毒、舒张血管、抗心率失常、抗癌、增强机体免疫力等作用，苦瓜中的活性成分主要是苦瓜多糖和苦瓜皂苷，苦瓜多糖是一种由鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖组成的杂多糖。苦瓜多糖具有以下的作用：苦瓜多糖及皂苷能通过协同增加糖贮存、协同增强抗氧化能力及组织供养能力保护胰岛素分泌功能等途径预防高血糖；苦瓜多糖能有效的清除自由基、超氧阴离子自由基，体现出显著的抗氧化性；苦瓜多糖还具有抗肿瘤作用，高中低剂量组均能显著抑制小鼠肿瘤的生长；苦瓜多糖对某些病原菌有显著的抑制作用，如金黄色葡萄球菌。
苦瓜多糖一般通过水溶醇沉法进行提取，提取的工艺流程总体上相差不大。主要的提取方法有常规法，超声波提取法，微波萃取法，双酶水解法等，其目的都是提高浸提效率，获得更多的苦瓜多糖粗品。
常规法主要是使用热水浸提，浸提的时间、温度、料水比都与提取的效率有关，刘金福等利用热水浸提苦瓜多糖，多糖粗品的提取率为13%左右，多糖含量为38.6%；
微波萃取技术是一种新型的萃取技术，袁媛等采用微波萃取苦瓜多糖，提取率为14.52%，多糖纯度为52.3%；
吴茄笛等将双酶水解法与常规法进行了对比，实验表明双酶法提取水溶性苦瓜多糖，工艺条件简单，多糖产率以及含量均有显著提高，其中与常规法相比含量提高了11.5%；
含多种阳离子的溶液中加入沉淀剂后，数种离子完全沉淀的方法称为共沉淀法，在制备单一物质时一般采用单相共沉淀法，即沉淀物为单一化合物，如果沉淀物为混合物时，称为混合物共沉淀法；
近年来超声波技术快速发展其应用于提取植物中的生物碱、苷类、黄酮类等生物活性物质的研究已有报道表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点，吴先辉提出用超声波提取苦瓜多糖，提取率可以达到15.48%，多糖纯度为53.76%；超声波场的强度由输出功效和频率决定，增加超声波功率可加快水的循环速度，强化传质，同时使细胞的破碎程度增加，有利于多糖的提取，但功率太大，可能造成多糖分子的降解，破坏多糖的活性。
上述的几种方法提取苦瓜多糖，其提取率都不太高，纯度也有提升的空间，因此需要针对上述的方法进行改进，设计一种提取率和纯度都较高的苦瓜多糖的提取方法。
发明内容
为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种得率和纯度较高的苦瓜多糖的提取方法。
本发明苦瓜多糖的提取方法是通过下述的技术方案来实现的：
一种苦瓜多糖的提取方法，包括下述的步骤：
将新鲜苦瓜清洗干净，晾干至其水分含量为1-3%，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的苦瓜过40-80目筛，得苦瓜粉；
将粉碎后的苦瓜粉，加水混匀，苦瓜与水的重量比例为1：6-12，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，中性蛋白酶的加入量为0.2-0.5%，酶解温度45℃、pH值6.8-7.2，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHZ，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下灭酶5-10min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得苦瓜粗多糖浓缩液；
在苦瓜粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖浓缩液重量的2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭；
离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70℃下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4-6%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
优选的，苦瓜与水的重量比例为1：9；
优选的，木瓜蛋白酶的用量是0.45%；
中性蛋白酶的添加量为0.4%。
优选的，一种苦瓜多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
将新鲜苦瓜清洗干净，晾干至其水分含量为1-3%，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的苦瓜过40-80目筛，得苦瓜粉；
将粉碎后的苦瓜粉，加水混匀，苦瓜与水的重量比例为1：9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量为0.45%，中性蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度45℃、pH值7.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得苦瓜粗多糖浓缩液；
在苦瓜粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
本发明中采用双酶酶解与微波相结合的方法，提高了苦瓜多糖的提取率和纯度。
本发明的有益效果在于，采用酶作用条件温和，采用各种不同的酶将苦瓜中的脂肪、纤维素酶解，同时从苦瓜中提取多糖，最大限度的利用苦瓜，而且采用本发明的方法得到的多糖，其得率和纯度高。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
以下的检测方法，如无特殊说明，采用苯酚-硫酸法测多糖的含量。
实施例1
一种苦瓜多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
将新鲜苦瓜清洗干净，晾干至其水分含量为2%左右，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的苦瓜过60目筛，得苦瓜粉；
将粉碎后的苦瓜粉，加水混匀，苦瓜与水的重量比例为1：9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量为0.45%，中性蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度45℃、pH值7.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得苦瓜粗多糖浓缩液；
在苦瓜粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
采用苯酚-硫酸法测得所得的多糖提取率为：18.92%，纯度为68.21%。
实施例2
一种苦瓜多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
将新鲜苦瓜清洗干净，晾干至其水分含量为1%，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的苦瓜过40目筛，得苦瓜粉；
将粉碎后的苦瓜粉，加水混匀，苦瓜与水的重量比例为1：9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量为0.2%，中性蛋白酶的加入量为0.2%，酶解温度45℃、pH值6.8，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶5min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得苦瓜粗多糖浓缩液；
在苦瓜粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占苦瓜粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
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取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
采用苯酚-硫酸法测得所得的多糖提取率为：18.01%，纯度为67.79%。
实施例3
一种苦瓜多糖的提取方法，该方法包括下述的步骤：
将新鲜苦瓜清洗干净，晾干至其水分含量为3%，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的苦瓜过40-80目筛，得苦瓜粉；
将粉碎后的苦瓜粉，加水混匀，苦瓜与水的重量比例为1：9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量为0.6%，中性蛋白酶的加入量为0.5%，酶解温度45℃、pH值7.2，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHZ，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩至酶解液至原体积的1/3，得苦瓜粗多糖浓缩液；
在苦瓜粗多糖的浓缩液中加入活性炭，活性炭占苦瓜粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%左右后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占超微粉碎后的苦瓜的重量百分比。
采用苯酚-硫酸法测得所得的多糖提取率为：18.46%，纯度为68.37%。
Claims (5)
1.一种苦瓜多糖的提取方法，包括下述的步骤：
将新鲜苦瓜清洗干净，晾干至其水分含量为1-3%，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的苦瓜过40-80目筛，得苦瓜粉；
将粉碎后的苦瓜粉，加水混匀，苦瓜与水的重量比例为1：6-12，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量为0.2-0.6%，中性蛋白酶的加入量为0.2-0.5%，酶解温度45℃、pH值6.8-7.2，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为400-600W，频率为800MHz，酶解0.1-0.5h，酶解后在100-105℃下灭酶5-10min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩酶解液至原体积的1/3，得苦瓜粗多糖浓缩液；
在苦瓜粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖浓缩液重量的2-6%，搅拌0.2-0.5h，过滤滤出活性炭；
离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在60-70℃下浓缩，浓缩至其浓度为60-70%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心10-20 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为4-6%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占粉碎后的苦瓜的重量百分比。
2.如权利要求1所述一种苦瓜多糖的提取方法，其特征在于，所述的苦瓜与水的重量比例为1：9。
3.如权利要求1所述的一种苦瓜多糖的提取方法，其特征在于，所述的木瓜蛋白酶的用量是0.45%。
4.如权利要求1所述的一种苦瓜多糖的提取方法，其特征在于，所述的中性蛋白酶的添加量为0.4%。
5.如权利要求1-4中任一项所述的一种苦瓜多糖的提取方法，其特征在于，所述的方法包括下述的步骤：
将新鲜苦瓜清洗干净，晾干至其水分含量为1-3%，放入粉碎机中粉碎，将粉碎后的苦瓜过40-80目筛，得苦瓜粉；
将粉碎后的苦瓜粉，加水混匀，苦瓜与水的重量比例为1：9，加入木瓜蛋白酶和中性蛋白酶，木瓜蛋白酶的加入量为0.45%，中性蛋白酶的加入量为0.4%，酶解温度45℃、pH值7.0，将上述的原料置于微波提取设备中提取，微波的功率为500W，频率为800MHz，酶解0.3h，酶解后在100℃下灭酶6min，得酶解液；
将上述的酶解液置于真空浓缩器中浓缩，减压低温浓缩酶解液至原体积的1/3，得苦瓜粗多糖浓缩液；
在苦瓜粗多糖的浓缩液中加入活性炭，所述的活性炭占苦瓜粗多糖浓缩液重量的4%，搅拌0.3h，过滤滤出活性炭；
离心15 min ，离心转速为4500 rpm，将上清液与沉淀分别收集；
取上清液过滤去渣，过滤后得到的滤液在65℃下浓缩，浓缩至其浓度为65%，浓缩液按1：4比例加入95%乙醇沉淀静置10-20小时、离心15 min ，离心转速为4500 rpm，收集沉淀并用乙醇反复清洗2-3次，冷冻干燥至水分含量为5%后，再在-1-4℃下进行粉碎，得可溶性多糖；
上述的加酶量均为酶占粉碎后的苦瓜的重量百分比。
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