CN108272837A - 一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，包括以下步骤：粉碎：将沙棘叶用水清洗后，干燥，粉碎过筛，制成粉末；浸提：将沙棘叶粉末浸泡于离子液体的水溶液中，辅以微波作用，继续浸提0.5‑1h，结束后离心去除滤渣得滤液；浓缩：将滤液经过滤、浓缩，得浓缩液；纯化：向浓缩液中加4‑6倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80‑90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。本发明通过采用离子液体的水溶液浸提，微波辅助的方法从沙棘叶中提取黄酮类化合物，达到提取效率高、节能的效果，而且较好的保持其生物活性，更适合工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及化合物的提取方法，尤其涉及一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，属于天然植物化学提取技术领域。
背景技术
沙棘是胡颓子科沙棘属的一种野生浆果植物，又名醋溜、沙枣、黑刺，是世界上公认的珍贵食用和药用植物。研究表明，高海拔地区的沙棘中黄酮类化合物含量较高，叶中黄酮类化合物主要以苷的形式存在，主要由异鼠李素、槲皮素、山奈酚和杨梅素等四种苷元及其苷类化合物。黄酮类化合物具有多种生物活性，如免疫激活、抗氧化、降血脂、降胆固醇及雌激素作用，在抗病毒、逆转肿瘤细胞多药耐药性、诱导肿瘤细胞凋亡等研究中表现出显著活性，被广泛应用于医药、食品等领域。
目前，黄酮类化合物的提取主要采用温浸法、溶剂提取法、微波处理法、超声波处理法、超临界流体萃取法等。水提法，工艺简单、设备投资省、但提取率低、分离困难；溶剂提取法，大多数有机溶剂易燃易爆且具有毒性或具有刺激性；微波提取法提取率高，对被提取物具有高选择性、速度快；CO2超临界萃取法，提取效率高、有效成分损失少，但设备投资大、成本高。
但对沙棘叶中黄酮类化合物的提取及研究还很欠缺，沙棘这一丰富的资源有待于深入研究和开发利用。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种效率高，能有效保持生物活性的沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，包括以下步骤：
1)、粉碎：将沙棘叶用水清洗后，干燥，粉碎，过40-60目筛，制成粉末；
2)、浸提：将步骤1)中所得沙棘叶粉末按1kg:20-140L的比例浸泡于离子液体的水溶液中，于40-70℃浸泡0.5-1h，辅以微波作用3-5min，微波功率为400W，温度为35-60℃，继续浸提0.5-1h，结束后离心去除滤渣得滤液；
浸提的优选操作为：将步骤1)中所得沙棘叶粉末按1kg:50-100L的比例浸泡于离子液体的水溶液中，于40-60℃浸泡0.5-1h，辅以微波作用5min，功率为400W，温度为50℃，继续浸提0.5-1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
3)、浓缩：将步骤2)所得滤液用1μm滤膜进行过滤后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
4)、纯化：向步骤3)所得浓缩液中加4-6倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80-90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
本发明的有益效果在于，通过采用离子液体的水溶液浸提，微波辅助的方法从沙棘叶中提取黄酮类化合物，达到提取效率高、节能的效果，而且较好的保持其生物活性，更适合工业化生产。
进一步：步骤2)中所述离子液体水溶液为溴化-1-乙基-吡啶盐、溴化-1-丁基-吡啶盐、溴化-1-己基-吡啶盐、溴化-1-辛基-吡啶盐、溴化-1-癸基-吡啶盐或溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液；所述离子液体水溶液的浓度为0.2-1mol/L。
采用上述进一步的的有益效果为：使得黄酮类化合物得到充分提取。
进一步：步骤1)中所述沙棘叶的干燥方式为自然晒干、真空恒温干燥、冷冻干燥、红外干燥或炒制干燥。
采用上述进一步的的有益效果为：使沙棘叶充分干燥，提高黄酮类化合物的提取纯度。
进一步：步骤4)中所述大孔吸附树脂柱洗脱的操作为：浓缩液与树脂体积比为1L:1.5-3L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60-80％乙醇洗脱。
采用上述进一步的的有益效果为：彻底洗脱杂质，进一步纯化所得黄酮类化合物。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，自然晒干，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L1mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:1.5L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例2
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，自然晒干，粉碎制成粉末，然后过60目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入20L1mol/L溴化-1-乙基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用3min，微波功率为400W，温度为35℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:1.5L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例3
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，红外干燥，粉碎制成粉末，然后过60目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入140L1mol/L溴化-1-丁基-吡啶盐的水溶液，于70℃浸泡1h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为60℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:3L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用80％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例4
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，炒制干燥，粉碎制成粉末，然后过50目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入70L1mol/L溴化-1-己基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.8h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为40℃，继续浸提0.7h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加6倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:2L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用70％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于82℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例5
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，自然晒干，粉碎制成粉末，然后过50目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入100L1mol/L溴化-1-辛基-吡啶盐-吡啶盐的水溶液，于55℃浸泡0.6h，辅以微波作用3min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加5倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:2L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用80％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例6
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，自然晒干，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入100L1mol/L溴化-1-癸基-吡啶盐的水溶液，于60℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加5倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:3L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例7
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，60℃真空干燥，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L1mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:1.5L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于88℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例8
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，炒制干燥，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L1mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:1.5L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于82℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例9
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，冷冻干燥，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L1mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:1.5L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例10
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，自然晒干，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L1mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:1.5L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例11
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，红外干燥，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L1mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:3L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例12
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，炒制干燥，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L0.2mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:2L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例13
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，冷冻干燥，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L0.4mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:3L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例14
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，60℃恒温干燥，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L0.6mol/L溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:2.5L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于85℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
实施例15
(1)粉碎：将沙棘叶用水清洗后，自然晒干，粉碎制成粉末，然后过40目筛。
(2)浸提：称取1kg步骤1中所得沙棘叶粉末，加入50L0.8mol/LL溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液，于40℃浸泡0.5h，辅以微波作用5min，微波功率为400W，温度为50℃，继续浸提1h，结束后离心去除滤渣得滤液。
(3)浓缩：将步骤2所得滤液用1μm滤膜进行过滤，然后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液；
(4)纯化：向浓缩液中加4倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱，浓缩液与树脂体积之比为1L:2L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60％乙醇洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
对比例
取沙棘叶用水清洗后，自然晒干，粉碎制成粉末，取粗粉1g，精密称定，加60％乙醇15ml,加热回流2小时，放冷，过滤，残渣分别加60％乙醇13ml,加热回流2次，每次1小时，过滤，合并滤液，残渣用60％乙醇洗涤，洗液并入同一容器中，于80℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
性能测试
称取1kg沙棘叶粉末分别按实施例1-15以及对比例提供的方法提取黄酮类化合物，利用氯化铝比色法测定黄酮类化合物含量，计算提取率，结果见表1。
表1 实施例1-15及对比例黄酮类化合物提取率
| 实施例 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 | 6 | 7 | 8 |
| 提取率 | 3.65％ | 3.35％ | 2.88％ | 3.31％ | 3.51％ | 3.57％ | 3.54％ | 3.21％ |
| 实施例 | 9 | 10 | 11 | 12 | 13 | 14 | 15 | 对比例 |
| 提取率 | 3.36％ | 3.42％ | 3.11％ | 2.06％ | 2.13％ | 2.78％ | 3.16％ | 2.02％ |
由表1可知，本发明从沙棘叶中提取黄酮类化合物的方法，提取效率明显高于常规提取方法。
沙棘叶总黄酮的生物活性研究
采用滤纸片法对沙棘叶总黄酮的抑菌活性进行了测定,所测定的MIC值结果见表2.
表2 实施例1-15及对比例黄酮类化合物MIC值
由表2可知,本发明从沙棘叶中提取黄酮类化合物对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌有较好的抑菌作用，表现出了较高的生物活性。
上述实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
Claims (10)
1.一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)、粉碎：将沙棘叶用水清洗后，干燥，粉碎过筛，制成粉末；
2)、浸提：将步骤1)中所得沙棘叶粉末浸泡于离子液体水溶液中浸提，结束后离心去除滤渣得滤液；
3)、浓缩：将步骤2)所得滤液经过滤、浓缩，得浓缩液；
4)、纯化：向步骤3)所得浓缩液中加4-6倍于浓缩液的水溶解，转入大孔吸附树脂柱洗脱，待洗脱液无色时停止接收，将接收得到的洗脱液于80-90℃的水浴上蒸除溶剂析出晶体，得沙棘叶黄酮类化合物。
2.根据权利要求1所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，步骤2)中所述离子液体水溶液为溴化-1-乙基-吡啶盐、溴化-1-丁基-吡啶盐、溴化-1-己基-吡啶盐、溴化-1-辛基-吡啶盐、溴化-1-癸基-吡啶盐或溴化-1-十二烷基-吡啶盐的水溶液。
3.根据权利要求1-2任一项所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，所述离子液体水溶液的浓度为0.2-1mol/L。
4.根据权利要求1所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，步骤1)中所述沙棘叶的干燥方式为自然晒干、真空恒温干燥、冷冻干燥、红外干燥或炒制干燥。
5.根据权利要求1所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，步骤1)中所述过筛所用的筛网目数为40-60目。
6.根据权利要求1所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，步骤2)中所述浸提的操作为：将沙棘叶粉末按1kg:20-140L的比例浸泡于离子液体水溶液中，浸提0.5-1h后，辅以微波作用3-5min，继续浸提0.5-1h。
7.根据权利要求6所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，所述离子液体的浸提温度为40-70℃。
8.根据权利要求6所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，所述的微波作用的功率为400W，温度为35-60℃。
9.根据权利要求1所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，步骤3)中所述过滤、浓缩的操作为：用孔径为1μm的滤膜进行过滤后旋转蒸发至原体积的1/5，得浓缩液。
10.根据权利要求1所述的一种沙棘叶中黄酮类化合物的提取方法，其特征在于，步骤4)中所述大孔吸附树脂柱洗脱的操作为：浓缩液与树脂体积比为1L:1.5-3L，先用水洗脱，待洗脱液在450-550nm波长范围内扫描出现吸收峰后改用60-80％乙醇洗脱。
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