CN103613629A - 从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷iie的方法 - Google Patents
从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷iie的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103613629A CN103613629A CN201310619288.6A CN201310619288A CN103613629A CN 103613629 A CN103613629 A CN 103613629A CN 201310619288 A CN201310619288 A CN 201310619288A CN 103613629 A CN103613629 A CN 103613629A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- momordia grosvenori
- grosvenori aglycone
- purity
- iie
- aglycone iie
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Images
Landscapes
- Steroid Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，具体步骤为：先将新鲜罗汉果去皮，破碎，加入甲醇/乙醇浸提，滤过，得醇浸膏；再将醇浸膏悬浮于水，过D101树脂，分别用水和甲醇/乙醇水溶液洗脱，收集、回收洗脱液，得到粗皂苷；粗皂苷进行硅胶柱层析，氯仿-甲醇洗脱，收集得到罗汉果苷IIE粗品，再进行HP-20ss树脂柱层析，分别用水和60%甲醇水溶液洗脱，得到纯度为85-91%的罗汉果苷IIE，低纯度的罗汉果苷IIE回收，重新用HP-20ss树脂柱纯化；用制备液相色谱仪对85-91%的罗汉果苷IIE进行制备，得到纯度大于98%的罗汉果苷IIE。本发明工艺简单，具有纯度高，收率高等优点。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域的提取方法，具体说是一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法。
技术背景
罗汉果，为葫芦科植物罗汉果属多年生草质藤本植物罗汉果的果实，为一常用中药，具有清热解暑、入肺止咳作用，临床上可用于治疗高血压、肺结核、哮喘、胃炎、百日咳、急慢性支气管炎和急慢性扁桃体炎等多种疾病。
罗汉果葫芦烷型糖苷是其中主要的有效成分，具有化学防癌、抑制肠麦芽糖酶和血糖升高等作用，是目前罗汉果开发应用最多的一类成分。而罗汉果苷IIE是未成熟罗汉果的主要皂苷成分，味道极苦，随着罗汉果的生长，其相继转变为罗汉果苷III、罗汉果苷IV等，最终主要成为味道极甜并具有多种药理活性的罗汉果苷V。由此可见罗汉果苷IIE是生物合成罗汉果苷V的前体化合物。同时研究还表明罗汉果多糖苷在动物体内代谢过程中会脱去葡萄糖基转化成罗汉果苷IIE和罗汉果醇，因此罗汉果苷IIE引起越来越多研究者的关注。
目前尚未有系统提取分离罗汉果苷IIE的研究方法。
发明内容
本发明的目的是提供一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，工艺简单，具有纯度高，收率高，生产成本低等优点。
本发明通过以下技术方案实现，具体包括如下步骤：
（1）先将30-45天左右的新鲜罗汉果去皮，破碎，加入5-10倍的甲醇/乙醇浸提7-10天，滤过，回收甲醇/乙醇得醇浸膏；上述操作可重复1-2次；
（2）将醇浸膏悬浮于水，上D101树脂柱层析，水洗去除杂质，然后用80-100%的甲醇/乙醇洗至无罗汉果苷IIE洗出，醇洗脱液浓缩得到粗皂苷；
（3）粗皂苷进行硅胶柱层析，干法上样，氯仿-甲醇洗脱，收集含罗汉果苷IIE的组分，合并，回收溶剂，得罗汉果苷IIE粗品；
（4）取罗汉果苷IIE粗品，用水溶解，进行HP-20ss树脂柱层析，水洗，60%乙醇洗脱，收集纯度在85-91%流分，合并，回收溶剂，即得到纯度为85-91%的罗汉果苷IIE；
（5）取纯度85-91%的罗汉果苷IIE，溶解于甲醇/乙醇，用制备型高效液相色谱仪，C18色谱柱进行制备，以乙腈-水为流动相，收集罗汉果苷IIE色谱峰对应的流分，合并，回收溶剂，得到纯度大于98%的罗汉果苷IIE。其IR、MS、1H-NMR、13C-NMR数据与罗汉果苷IIE一致。
步骤（2）中所述的醇浸膏悬浮于水，水用量为醇浸膏重量的2-4倍。
步骤（2）中所述的醇浸膏通过D101柱，D101树脂的用量为醇浸膏重量的20-60倍。
步骤（2）中所述水洗至无罗汉果苷IIE洗出的检测条件为，用硅胶G薄层检测，展开剂选用CHCl3-MeOH-H20，配比是8：2：0.1，10% H2SO4乙醇溶液为显色剂，罗汉果苷IIE的Rf为0.59-0.62。
步骤（3）所述的硅胶柱中，干法上样时拌样的样品与硅胶的比例为1：1（重量/重量），装柱的硅胶用量为粗皂苷重量的30-100倍，氯仿-甲醇洗脱各比例为25：1-7：1。
步骤（4）所述的HP-20ss树脂柱，树脂用量为罗汉果苷IIE粗品重量的50-200倍。
步骤（4）中收集含罗汉果苷IIE在85-91%的组分，其收集检测方法为高效液相色谱法，检测条件为：采用C18色谱柱，以乙腈-水梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为0.8ml/min。
步骤（5）所述制备型高效液相色谱制备法的制备条件为，以C18为色谱柱填充剂，以乙腈-水梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为10ml/min；检测方法同步骤（4）。
本发明有益效果是：在进行罗汉果皂苷分离纯化时，多数采用C18材料，鲜有用HP-20ss树脂进行细分的，后者比前者的优势在于流速比较快，同时实验表明其在分离罗汉果苷IIE的效果也很好，利用两次洗脱就能得到含量大于85%的产品。最后采用制备型高效液相色谱进行制备，结果表明所用条件可以在很短时间内获得高纯度单体化合物。因此该分离工艺新颖、操作方便、收得率高、产品纯度高、纯化效果好的，利用此工艺可获得了大量的高纯度罗汉果苷IIE。
附图说明
图1为本发明罗汉果苷IIE的结构图；
图2为实施例罗汉果苷IIE制备液相色谱图；
图3为实施例罗汉果苷IIE纯度检测液相色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明内容作进一步的说明，但不是对本发明的限定。
实施例1
一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，包括如下步骤：
（1）采集40天左右的新鲜罗汉果5kg，去皮，破碎，加入30L甲醇浸提7天，滤过，回收滤液中的甲醇（甲醇可再次用于药材提取），得醇浸膏170g；
（2）取醇浸膏，加入600ml水悬浮，通过装有4000克D101树脂柱，用6L水洗脱，然后用甲醇洗脱至无罗汉果苷IIE洗出；硅胶G薄层检测，展开剂选用CHCl3-MeOH-H20，配比是8：2：0.1，10% H2SO4乙醇溶液为显色剂，罗汉果苷IIE的Rf为0.59，回收甲醇得到未成熟罗汉果粗皂苷13.1g；
（3）粗皂苷进行硅胶柱层析（硅胶用量为550g，200-300目；柱直径为4.5cm，干法装柱，干法上样），氯仿-甲醇洗脱（25：1-7：1），流速为4 ml/min，每份收集50ml，收集含罗汉果苷IIE的组分（检测方法同步骤（2）），合并，回收溶剂，得到罗汉果苷IIE粗品5.7g；
（4）取罗汉果苷IIE粗品进行HP-20ss树脂柱层析（树脂用量为500g），水洗，弃去水洗液；60%甲醇洗，流速3ml/min，每份收集15ml，对每一流分进行高效液相检测；检测方法：Agilent 1200高效液相色谱仪， ZORBAX SB-C18 柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm），流动相为水-乙腈（梯度洗脱，0-20 min：13.5％-35％乙腈），流速0.8 ml/min，紫外检测波长203 nm，柱温30℃；合并纯度大于87%的组分，减压浓缩，即得到纯度大于87%的罗汉果苷IIE 2.4g；
（5）取纯度大于87%的罗汉果苷IIE，用40ml甲醇溶解，微孔滤膜滤过，Shimadzu制备色谱仪，Inertsil ODS-3 色谱柱(20×250 mm, 5μm)；柱温: 35 °C；流速：10 ml/min；检测波长：203 nm；流动相水和乙腈（梯度洗脱，0-9min：40%-48%乙腈，9-15min：48%-50%乙腈）；进样量：2 ml。收集纯度大于99%的流分，合并，回收溶剂，得到纯度大于99%的罗汉果苷IIE 1.35g。其IR、MS、1H-NMR、13C-NMR数据与文献中罗汉果苷IIE一致。参照图1-3。
实施例2
一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，包括如下步骤：
（1）采集35天左右的新鲜罗汉果5kg，去皮，破碎，加入35L甲醇浸提8天，过滤，回收滤液中的甲醇，得醇浸膏170g；
（2）取醇浸膏，加入750ml水悬浮，通过装有5000克D101树脂柱，柱直径为8cm，首先用水洗脱，接着用80%甲醇洗脱至罗汉果苷IIE完全洗出；用硅胶G薄层检测，展开剂选用CHCl3-MeOH-H20，配比是8：2：0.1，10% H2SO4乙醇溶液为显色剂，罗汉果苷IIE的Rf为0.6，回收甲醇得到未成熟罗汉果粗皂苷12.5g；
（3）利用硅胶柱层析对粗皂苷进行分离（200-300目硅胶用量为505g，柱直径为4.5cm，干法装柱，干法上样），利用氯仿-甲醇洗脱（20：1-8：1），流速为4ml/min，每份收集50ml，收集、合并含罗汉果苷IIE的组分（检测方法同步骤（2）），合并，回收溶剂，得到罗汉果苷IIE粗品5.6g；
（4）取罗汉果苷IIE粗品进行HP-20ss树脂柱层析（树脂用量为500g），水洗，弃去水洗液；60%甲醇洗，流速3ml/min，每份收集15ml，采用高效液相色谱法检测流分；检测方法：Agilent 1200高效液相色谱仪， ZORBAX SB-C18 柱（4.6 mm×250 mm, 5 μm），流动相为水-乙腈（梯度洗脱，0-20 min：13.5％-35％乙腈），流速0.8 ml/min，紫外检测波长203 nm，柱温30℃；合并纯度大于91%的组分，减压浓缩即得到纯度大于91%的罗汉果苷IIE2.3g；
（5）用35ml甲醇溶解纯度大于91%的罗汉果苷IIE，微孔滤膜滤过，Shimadzu制备色谱仪，Inertsil ODS-3 色谱柱(20×250 mm, 5μm)；柱温: 35 °C；流速：10 ml/min；检测波长：203 nm；流动相水和乙腈（梯度洗脱，0-9min：40%-48%乙腈，9-15min：48%-50%乙腈）；进样量：2 ml。收集、合并纯度大于98.6%的流分，回收溶剂，得到纯度大于98.6%的罗汉果苷IIE1.3g。其IR、MS、1H-NMR、13C-NMR数据与文献中罗汉果苷IIE一致。
Claims (8)
1.一种从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是具体包括如下步骤：
（1）先将30-45天左右的新鲜罗汉果去皮，破碎，加入5-10倍的甲醇/乙醇浸提7-10天，滤过，回收甲醇/乙醇得醇浸膏；
（2）将醇浸膏悬浮于水，上D101树脂柱层析，水洗去除杂质，然后用80-100%的甲醇/乙醇洗至无罗汉果苷IIE洗出，醇洗脱液浓缩得到粗皂苷；
（3）粗皂苷进行硅胶柱层析，干法上样，氯仿-甲醇洗脱，收集含罗汉果苷IIE的组分，合并，回收溶剂，得罗汉果苷IIE粗品；
（4）取罗汉果苷IIE粗品，用水溶解，进行HP-20ss树脂柱层析，水洗，60%乙醇洗脱，收集纯度在85-91%流分，合并，回收溶剂，即得到纯度为85-91%的罗汉果苷IIE；
（5）取纯度85-91%的罗汉果苷IIE，溶解于甲醇/乙醇，用制备型高效液相色谱仪，C18色谱柱进行制备，以乙腈-水为流动相，收集罗汉果苷IIE色谱峰对应的流分，回收溶剂，即得到纯度大于98%的罗汉果苷IIE。
2.如权利要求1从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是，步骤（2）中所述的醇浸膏悬浮于水，水用量为醇浸膏重量的2-4倍。
3.如权利要求1从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是，步骤（2）中所述的醇浸膏通过D101柱，D101树脂的用量为醇浸膏重量的20-60倍。
4.如权利要求1从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是，步骤（2）中所述水洗至无罗汉果苷IIE洗出的检测条件为，用硅胶G薄层检测，展开剂选用CHCl3-MeOH-H20，配比是8：2：0.1，10% H2SO4乙醇溶液为显色剂，罗汉果苷IIE的Rf为0.59-0.62。
5.如权利要求1从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是，步骤（3）所述的硅胶柱中，干法上样时拌样的样品与硅胶的比例为1：1（重量/重量），装柱的硅胶用量为粗皂苷重量的30-100倍，氯仿-甲醇洗脱各比例为25：1-7：1。
6.如权利要求1从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是，步骤（4）所述的HP-20ss树脂柱，树脂用量为罗汉果苷IIE粗品重量的50-200倍。
7.如权利要求1从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是，步骤（4）中收集含罗汉果苷IIE在85-91%的组分，其收集检测方法为高效液相色谱法，检测条件为：采用C18色谱柱，以乙腈-水梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为0.8ml/min。
8.如权利要求1从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷IIE的方法，其特征是，步骤（5）所述制备型高效液相色谱制备法的制备条件为，以C18为色谱柱填充剂，以乙腈-水梯度洗脱，检测波长为203nm，流速为10ml/min；检测方法同步骤（4）。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310619288.6A CN103613629A (zh) | 2013-11-29 | 2013-11-29 | 从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷iie的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310619288.6A CN103613629A (zh) | 2013-11-29 | 2013-11-29 | 从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷iie的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103613629A true CN103613629A (zh) | 2014-03-05 |
Family
ID=50164358
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310619288.6A Pending CN103613629A (zh) | 2013-11-29 | 2013-11-29 | 从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷iie的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103613629A (zh) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105784882A (zh) * | 2016-04-15 | 2016-07-20 | 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 | 一种ase提取罗汉果中罗汉果皂苷v的方法 |
| CN106722839A (zh) * | 2016-12-05 | 2017-05-31 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种罗汉果苦味剂的制作方法 |
| CN111728978A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-10-02 | 湖南农业大学 | 罗汉果苷iie在制备抗氧化食品、保健品或药品中的应用 |
| CN111728977A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-10-02 | 湖南天香生态兰花有限公司 | 罗汉果苷iie在制备消炎食品、保健品或药品中的应用 |
-
2013
- 2013-11-29 CN CN201310619288.6A patent/CN103613629A/zh active Pending
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| DIANPENG LI，ET AL.: "Cucurbitane Glycosides from Unripe Fruits of Lo Han Kuo (Siraitia grosvenori)", 《CHEM.PHARM.BULL.》 * |
| 杨秀伟等: "罗汉果中一新葫芦烷型三萜皂苷-光果木鳖皂苷I", 《中草药》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105784882A (zh) * | 2016-04-15 | 2016-07-20 | 广西壮族自治区梧州食品药品检验所 | 一种ase提取罗汉果中罗汉果皂苷v的方法 |
| CN106722839A (zh) * | 2016-12-05 | 2017-05-31 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种罗汉果苦味剂的制作方法 |
| CN111728978A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-10-02 | 湖南农业大学 | 罗汉果苷iie在制备抗氧化食品、保健品或药品中的应用 |
| CN111728977A (zh) * | 2020-05-29 | 2020-10-02 | 湖南天香生态兰花有限公司 | 罗汉果苷iie在制备消炎食品、保健品或药品中的应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101029071B (zh) | 从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷v的方法 | |
| CN101220062A (zh) | 一种同时制备甜菊苷和莱鲍迪苷a的方法 | |
| CN104086425A (zh) | 一种同时提取并分离烟草绿原酸、茄尼醇、生物碱、芸香苷的方法 | |
| WO2008138243A1 (fr) | Procédé de préparation de l'icariine | |
| CN103483402A (zh) | 甜菊苷及莱鲍迪苷a的提纯制备方法 | |
| CN104306428B (zh) | 一种从绞股蓝中提取纯化绞股蓝皂苷的方法 | |
| CN102234245A (zh) | 一种莱菔子素的制备方法 | |
| CN102617673B (zh) | 一种从胡柚白皮层分离纯化柚皮苷和新橙皮苷的方法 | |
| CN103613629A (zh) | 从罗汉果中制备高纯度罗汉果苷iie的方法 | |
| CN109295121A (zh) | 一种酶解法制备淫羊藿苷的方法 | |
| CN103408610B (zh) | 从梨树叶中提取熊果苷的方法 | |
| CN102942611A (zh) | 制备高纯度赛门苷ⅰ的方法 | |
| CN102977165B (zh) | 罗汉果黄素的优化提纯制备方法 | |
| CN109096351A (zh) | 一种娑罗子皂苷提取工艺 | |
| CN101284861B (zh) | 一种三萜皂苷类化合物及制备方法及用途 | |
| CN102920727B (zh) | 制备富含牡荆素鼠李糖苷和牡荆素葡萄糖苷提取物的方法 | |
| CN102250183B (zh) | 一种以人参花蕾为原材料制备高纯度人参皂苷Re的方法 | |
| CN101407536A (zh) | 一种溶剂结晶法制备高纯度积雪草苷的工艺 | |
| CN104311615B (zh) | 从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素‑3‑O‑β‑D‑半乳糖苷的方法 | |
| CN103739648A (zh) | 一种玉叶金花苷u的制备方法 | |
| CN103113439A (zh) | 从对叶大戟中制备山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的方法 | |
| CN107050095B (zh) | 一种绞股蓝皂苷侧链寡糖的制备方法 | |
| CN101879265A (zh) | 一种虎眼万年青总皂苷、多糖的联产工艺 | |
| CN1869059B (zh) | 从人参叶中制备人参皂苷单体的方法 | |
| CN101747402B (zh) | 一种富集纯化费菜中熊果酸的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20140305 |