CN103690587B

CN103690587B - 三萜皂苷组份的制备方法

Info

Publication number: CN103690587B
Application number: CN201310699840.7A
Authority: CN
Inventors: 邢倩倩; 李振宇; 金郁; 傅青; 李志东
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2013-12-18
Filing date: 2013-12-18
Publication date: 2015-12-30
Anticipated expiration: 2033-12-18
Also published as: CN103690587A

Abstract

本发明涉及一种三萜皂苷组份的制备方法，其工艺包括提取、脱色和反相色谱纯化，以桔梗、柴胡、商陆及苦瓜四种药材作为；根据其所包含三萜皂苷结构上糖配基的个数多少，在提取时分别采用水提醇沉和脱脂后醇提的方法；三萜皂苷的糖配基数目在五个以上时，宜采用水提醇沉的工艺，如桔梗；当糖配基的数目在五个及以下范围时宜采用石油醚脱脂后乙醇回流提取的工艺，如柴胡、商陆、苦瓜；提取液再经活性炭回流脱色和反相色谱纯化得到三萜皂苷组份。本发明的制备工艺通用性好、易操作、成本低、适合工业化生产。

Description

三萜皂苷组份的制备方法

【技术领域】

本发明属于医药技术领域，涉及一种从不同中药材(桔梗、柴胡、商陆、苦瓜)中提取分离三萜皂苷组份的方法，特别涉及一种依次用活性炭脱色、反相色谱分离制备三萜皂苷组份的方法。

【背景技术】

三萜皂苷是由三萜皂苷元连接糖、糖醛酸及其他有机酸组成的一类化合物。常见的组成三萜皂苷的糖有葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖等，糖醛酸有葡萄糖醛酸等。三萜皂苷根据母核结构主要分为四环三萜皂苷和五环三萜皂苷。四环三萜皂苷母核结构包括达玛烷型、葫芦烷型、甘遂烷型、羊毛脂烷型和环阿屯烷型。五环三萜皂苷母核结构包括齐墩果烷型、乌苏烷型、羽扇豆烷型和何帕烷型。其中主要以达玛烷型、葫芦烷型和齐墩果烷型为主。三萜皂苷主要存在于双子叶植物，同时也有少数存在于单子叶植物中，在豆科、五加科、桔梗科、远志科、葫芦科、毛茛科、石竹科、伞形科、鼠李科和报春花科等植物中分布较多。本专利涉及到的桔梗、柴胡、商陆、苦瓜四种药材分别属于桔梗科、伞形科、商陆科和葫芦科。三萜皂苷具有多种重要的生物活性和广泛的药理作用，如：抗癌、抗炎、抗过敏、治疗白血病、抗病毒、降血糖及防治心脑血管疾病等。三萜皂苷目前已成为天然产物研究中最活跃和进展最快的领域。

近年来对三萜皂苷的研究主要集中于分离分析、结构鉴定和药理活性等方面。在分离分析方面，针对三萜皂苷的提取方法应用最多的仍是传统溶剂提取法，主要涉及到的溶剂为水、醇及一定比例的醇水混合溶剂。提取方式主要是煎煮、回流和超声辅助提取，其他提取方法也在三萜皂苷的提取中有所应用，如微波辅助提取法、超临界流体萃取法，以及针对一些酸碱性突出的三萜皂苷的酸碱提取法等。三萜皂苷的分离纯化方面，涉及到的方法主要包括溶剂萃取法，如使用正丁醇萃取三萜皂苷或是使用石油醚等弱极性萃取除去杂质等，大孔吸附树脂柱色谱、柱层析色谱等。通常涉及到的方法仅是针对某种特定药材中的三萜皂苷，通用性不强。三萜皂苷虽然分布在各科植物中，结构丰富，但在色谱上的分离行为比较类似，因此，可以针对三萜皂苷建立一种通用性强的，高效分离方法。

【发明内容】

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种简单方便的适用于多种药材的三萜皂苷组分的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

一种三萜皂苷类组分的制备方法，其具体步骤为：

(1)水提醇沉：由于桔梗药材中所含的三萜皂苷糖配基数目较多，采用水提醇沉的方法；将桔梗药材粉碎后加水煎煮两次，合并两次提取液，将提取液旋蒸浓缩后加入乙醇至含醇质量分数为75％，充分搅拌后静置，过滤，取滤液；

所述的提取步骤是加入8～12倍量水提取两次，每次0.5～1.5小时；

所述的静置条件为：在0～4℃下静置，静置时间为18～26小时；

(2)除脂提取：由于柴胡、商陆、苦瓜含三萜皂苷的糖配基数目较少，采用脱酯醇提的方法；将柴胡、商陆、苦瓜药材粉碎后加石油醚超声，得除脂后药渣，将除脂后药渣加乙醇提取，得提取液；

所述的除脂步骤是加入8～12倍量石油醚超声0.5～1.5小时；

所述的提取步骤是加入8～12倍量乙醇提取0.5～2小时；

(3)活性炭脱色：将醇沉后桔梗提取液滤液和柴胡、商陆、苦瓜提取液的醇体积百分数调整到85～98％范围后，加活性炭脱色；

所述的活性炭为药用型活性炭，购于上海活性炭厂有限公司的药用型活性炭；

所述的活性炭的量为调整好的醇体积百分数为85～98％的溶液体积的0.1～0.5％；

(4)反相色谱纯化：将脱色后的滤液旋蒸除去乙醇，使用反相色谱除去非皂苷物质，上样量与填料的质量比为1∶10～1∶5，首先用体积分数为10～30％的甲醇水溶液洗去强极性物质，再用体积分数为60～100％甲醇水溶液洗脱三萜皂苷部分，最后用甲醇洗脱保留在反相填料上的弱极性物质从而保证填料的循环使用；每次洗脱体积为3～6个柱体积，收集合并有效洗脱液，减压浓缩得三萜皂苷组份。

所述的上样量为过活性炭后得到的液体旋蒸冻干后得到的固体的量；

所述的填料为反相色谱填料；

所述的强极性物质为在反相色谱上保留很弱的一部分物质，需要较小浓度的有机溶剂即可洗脱下来；

所述的弱极性物质为在反相色谱上保留很强，需要很大浓度有机溶剂才可洗脱下来；

所述的反相色谱填料粒径为5～60μm；

所述的三萜皂苷组份主要为相应中药材中所包含的大部分三萜皂苷化合物；

与现有技术相比，本发明的积极效果是：

(1)本发明旨在根据三萜皂苷结构特点和色谱保留特性制定一种通用性强的高效分离纯化方法用于制备高纯度三萜皂苷组分。

(2)本发明涉及到的三萜皂苷工艺以反相色谱纯化为核心，在提取和前处理方面充分考虑了与反相色谱工艺的配合和衔接，提高反相色谱纯化的效率和填料的循环反复使用。

(3)方法简单易行，操作简便：本发明涉及的制备三萜皂苷组分的方法，仪器自动化程度高，操作方便简单，可适用于大规模生产。

【具体实施方式】

以下提供本发明一种三萜皂苷组份的制备方法的具体实施方式。

实施例1

桔梗药材100g，粉碎后加10倍量水煎煮2次，每次1小时，合并提取液旋蒸至100mL，向提取液中加入乙醇至乙醇浓度为80％，边滴加边搅拌，滴加完成后在4℃下静置过夜约24小时。沉淀完全后，抽滤得滤液，活性炭的用量按滤液体积的0.2％计算，加入1.35g活性炭，在80℃下回流30分钟，趁热抽滤得滤液。将滤液旋蒸除去乙醇后加水至140mL溶解，使用20g的反相色谱柱处理4次。先用10％甲醇洗脱5倍柱体积，将大部分强极性杂质除去，然后再用60％甲醇洗脱5倍柱体积，对桔梗三萜皂苷组分进行洗脱并收集冻干，得0.90g三萜皂苷组分。最后用甲醇再洗脱3倍柱体积，洗脱保留在反相填料上的残留杂质，保证柱子的重复使用。

实施例2

柴胡药材100g，粉碎后加8倍量石油醚超声1小时除脂，抽滤得药渣。药渣加10倍量乙醇回流1小时得醇提液，根据醇提液体积加入0.2％用量的活性炭1.58g，回流30分钟，抽滤得滤液，旋蒸除去乙醇后加水至50mL溶解，使用20g的反相柱色谱处理3次。先用10％甲醇洗脱4倍柱体积，将大部分强极性杂质去除，然后再用70％甲醇洗脱5倍柱体积，对柴胡中三萜皂苷组分进行洗脱并收集冻干得1.24g三萜皂苷组分。最后用甲醇再洗脱3倍柱体积，洗脱保留在反相填料上的残留杂质，保证柱子的重复使用。

实施例3

商陆药材100g，粉碎后加8倍量石油醚超声1小时除脂，抽滤得药渣。药渣加10倍量乙醇回流1小时得醇提液，根据醇提液体积加入0.2％用量的活性炭1.50g，回流30分钟，抽滤得滤液。将滤液旋蒸除去乙醇，加水至55mL溶解。使用20g的反相色谱柱处理3次。先用30％甲醇洗脱5倍柱体积，将大部分强极性杂质去除，然后用60％甲醇洗脱5倍柱体积，对商陆中三萜皂苷组分进行洗脱并收集冻干得0.41g三萜皂苷组分。最后用甲醇再洗脱5倍柱体积，洗脱保留在反相填料上的残留杂质，保证柱子的重复使用。

实施例4

苦瓜药材100g，粉碎后加8倍量石油醚超声1小时除脂，抽滤得药渣。药渣加10倍量乙醇回流1小时得醇提液。根据醇提液体积加入0.2％用量的活性炭为1.57g，回流30分钟，抽滤得滤液，旋蒸除去乙醇加水至55mL溶解。使用20g的反相柱色谱处理3次。先用30％甲醇洗脱5倍柱体积，将大部分强极性杂质去除，然后用100％甲醇洗脱5倍柱体积，对苦瓜三萜皂苷组分进行洗脱并收集冻干得1.39g三萜皂苷组分。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围内。

Claims

1.一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，其具体步骤为：

(2)活性炭脱色：将醇沉后桔梗提取液滤液的醇体积百分数调整到85～98％范围后，加活性炭脱色；

(3)反相色谱纯化：将脱色后的滤液旋蒸除去乙醇，使用反相色谱除去非皂苷物质，上样量与填料的质量比为1:10～1:5，首先用体积分数为10～30％的甲醇水溶液洗去强极性物质，再用体积分数为60～100％甲醇水溶液洗脱三萜皂苷部分，最后用甲醇洗脱保留在反相填料上的弱极性物质从而保证填料的循环使用；每次洗脱体积为3～6个柱体积，收集合并有效洗脱液，减压浓缩得三萜皂苷组份。

2.如权利要求1所述的一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的提取步骤是加入8～12倍量水提取两次，每次0.5～1.5小时。

3.如权利要求1所述的一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(1)中，所述的静置条件为：在0～4℃下静置，静置时间为18～26小时。

4.如权利要求1所述的一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的活性炭为药用型活性炭。

5.如权利要求1所述的一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(2)中，所述的活性炭的量为调整好的醇体积百分数为85～98％的溶液体积的0.1～0.5％。

6.如权利要求1所述的一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的填料为反相色谱填料。

7.如权利要求1所述的一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的反相色谱填料粒径为5～60μm。

8.如权利要求1所述的一种三萜皂苷类组分的制备方法，其特征在于，在所述的步骤(3)中，所述的三萜皂苷组份主要为相应中药材中所包含的大部分三萜皂苷化合物。