CN102617468A

CN102617468A - 一种超声辅助提取高乌甲素的方法

Info

Publication number: CN102617468A
Application number: CN2012100583415A
Authority: CN
Inventors: 马君义; 张继; 蔺彦斌; 王贵银; 王曼婷; 赵保堂
Original assignee: Northwest Normal University
Current assignee: Northwest Normal University
Priority date: 2012-03-07
Filing date: 2012-03-07
Publication date: 2012-08-01

Abstract

本发明公开了一种超声辅助提取高乌甲素的方法，属于中药制备技术领域，其包括如下步骤：1)药材预处理、2)超声提取、3)制备酸水液、4)萃取、5)结晶。本发明利用超声波产生的高速、强烈的空化效应和搅拌作用将高乌甲素从高乌头中提取出来，具有工艺简单、操作方便、高效节能的特点，生产周期短、成本低廉、得率高，易于产业化；操作过程中没有使用氯仿、苯等有毒溶剂，绿色环保，对产品无污染。

Description

一种超声辅助提取高乌甲素的方法

技术领域

本发明涉及一种提取高乌甲素的方法，具体涉及一种超声辅助提取高乌甲素的方法。

背景技术

高乌头(Aconitum Sinomontanum Nakai)是毛茛科乌头属多年生草本植物，主要分布于四川、甘肃、青海、陕西、山西以及河北等地，为镇痛药物的良好药源植物。

高乌甲素是从高乌头根中提取的一种二萜类生物碱，具有较强的镇痛作用，其镇痛强度是氨基比林的七倍，与度冷丁的镇痛效果相当，并有显著的抗炎消肿、降温解热、局部麻醉和神经阻滞作用，为国内首创的非成瘾性镇痛新药，且无致畸作用，也不会发生蓄积中毒，广泛用于癌痛和术后镇痛，总有效率达90.82％，是卫生部《癌症病人三阶梯止痛疗法指导原则》中规定的非成瘾性中枢神经系统镇痛药。新近发现，高乌甲素及其盐还能有效提高乌头碱诱发的大鼠心律失常的阈值，能显著改善犬心肌缺血性心律失常，降低心律失常的发生率；对小鼠肝癌的抑瘤率达11.20～53.08％，对小鼠S₁₈₀的抑瘤率达29.81～53.96％。鉴于高乌甲素重要的药理作用，有必要对高乌甲素的提取工艺进行深入研究，为新药开发提供优质药源。

对高乌头中高乌甲素的提取方法已有相关文献报道，专利ZL93100499.3授权了一种“高乌甲素的提取工艺”，所述提取方法为用乙醇浸泡高乌头根，经加热回流后过滤、滤液浓缩、析晶、过滤、滤渣干燥等环节制备高乌甲素。该方法克服了使用毒性大且成本高的有机溶剂苯、氯仿，提取的高乌甲素得率为0.6％，但乙醇用量高达40～60倍(V/W)，加热回流时间长达24小时，能耗大，提取的高乌甲素杂质多、纯度低；专利CNCN1706831公开了一种“氢溴酸高乌甲素的制备方法”，该发明将高乌头块根粉碎，经乙醇冷浸渗漉、浓缩、酸化、碱化、氯仿萃取、乙醇结晶等工艺而制得高乌甲素，产品得率为0.33％，纯度达99.5％，但该方法乙醇浸泡时间长达120～240小时，生产周期长，而且使用了有毒致癌的有机溶媒氯仿，所得产品中存在溶剂残留；专利CN1817865公开了一种“高乌甲素及其氢溴酸盐的制备工艺”，该工艺采用乙醇回流提取5小时，或酸水渗漉提取3～10天，或乙醇浸渍法提取获得高乌甲素粗提物，粗提物酸化液经阳离子交换树脂或大孔吸附树脂或氧化铝吸附，碱化后再经水、氯仿与乙醇洗脱，结晶而得到纯度不低于98％的高乌甲素，但该法仍然使用了有毒致癌的有机溶媒氯仿，所得产品中存在溶剂残留，生产周期同样比较长，得率低，成本高；CN1951922公开了一种“拉巴乌头碱氢溴酸盐的制备方法”，该方法将高乌头根粉碎，用酸性乙醇渗漉法、酸水渗漉法提取。酸性乙醇渗漉液减压浓缩后用碱化剂调pH9～9.8，用三氯甲烷萃取；酸水渗漉液加碱化剂调pH10～10.9，沉淀物用三氯甲烷萃取或用1-2倍于沉淀物量的三氯甲烷溶解后过大孔树脂柱，再用乙醇-三氯甲烷洗脱。萃取液或洗脱液浓缩，乙醇稀释、静置、分离，得生物总碱，将生物总碱用乙醇重结晶制得拉巴乌头碱精制品，该方法使用了有毒溶剂三氯甲烷，所得产品中存在溶剂残留；CN101967124A公开了“一种高乌甲素分离纯化方法”，该方法是一种集乙醇超声提取、逆流上阳离子树脂柱、酸水洗脱、碱调中性并透析或膜过滤脱盐处理后经中性氧化铝柱分离、丙酮-乙醇(1∶1)重结晶等方法于一体的高乌甲素分离纯化方法，高乌甲素得率为0.57％，纯度达98.16％，但该法过程仍较为繁琐，成本高。

综上所述，已报道的高乌甲素的提取方法存在以下的几个问题：(1)使用有毒致癌有机溶剂氯仿或苯萃取、产品存在溶剂残留，安全性差；(2)操作过程较为繁琐，费时、成本高且提取效率较低。

超声辅助提取是利用超声波产生的高速、强烈的空化效应和搅拌作用破坏药材的细胞，使溶剂渗透到药材细胞中而提取有效成分的一种绿色、环保、高效、节能的提取方法，具有提取时间短，提取效率高的优点，采用超声辅助提取高乌头中高乌甲素的方法至今未见相关文献报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于提供一种超声辅助提取高乌甲素的方法。该工艺以高乌头根为原料，利用超声波产生的高速、强烈的空化效应和搅拌作用破坏高乌头根的细胞，使溶剂渗透到细胞中而提取高乌甲素的方法；该方法具有操作简单、成本低廉、绿色环保、高效节能的特点。

为解决上述问题，本发明一种超声辅助提取高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)药材预处理

将经过净选、干燥后高乌头块根粉碎，过60-80目筛，得到高乌头药粉；

2)超声提取

将高乌头药粉与体积分数为95％的乙醇按质量体积比为1g∶10～20mL浸泡12～36小时，在功率150～250W，温度40～60℃的条件下，超声提取30～50分钟；抽滤得到滤液；

3)制备酸水液

将步骤2)所得滤液减压浓缩至无乙醇，冷却至室温；加入盐酸，溶解，使密度为1.00～1.30，静置，过滤，得到酸水液；

4)萃取

将步骤3)所得酸水液用石油醚萃取，萃取3次，分离并合萃余液；将所得萃余液用浓氨水调节pH至9～10得碱水液；用乙酸乙酯萃取，萃取3次，分离并合并乙酸乙酯萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯，冷却至室温得高乌甲素提取物；

5)结晶

将步骤4)所得高乌甲素提取物用无水乙醇溶解，静置，析出结晶，过滤，用预冷的无水乙醇洗涤结晶，即得白色的高乌甲素。

进一步地，步骤2)中所述抽滤的条件为：真空度0.07～0.09MPa；抽滤后所得滤渣重复步骤2)再提取一次，合并2次滤液。

进一步地，步骤3)中所述减压浓缩的条件为：真空度为0.07～0.09MPa，温度为45～55℃。

进一步地，步骤3)中所述盐酸浓度为0.1mol·L^-1，pH值为1～2。

进一步地，步骤3)中所述静置的时间为1～2小时。

进一步地，步骤4)中所述石油醚的沸程为60～90℃。

进一步地，步骤4)中所述酸水液与石油醚体积比为1∶1～3；所述碱水液与乙酸乙酯体积比为1∶1～3。

进一步地，步骤4)中所述减压浓缩的条件为：真空度为0.07～0.09MPa，温度为40～50℃。

进一步地，步骤5)中所述高乌甲素提取物与无水乙醇的质量体积比为1g∶5～15mL。

进一步地，所述低温静置的时间为24～72小时。

本发明具有如下有益效果：

1.本发明利用超声波产生的高速、强烈的空化效应和搅拌作用将高乌甲素从高乌头中提取出来，与文献报道的提取方法相比，具有工艺简单、操作方便、高效节能的特点。

2.本发明操作过程中没有使用氯仿、苯等有毒溶剂，而使用的乙酸乙酯、乙醇等溶剂绿色环保，对产品无污染，可实现回收再利用，产品无溶剂残留。

3.本发明生产周期短、成本低廉、得率高，易于产业化。

附图说明

下面结合附图对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明

图1为本发明的工艺流程图。

图2为实施例2中制备的高乌甲素的红外光谱图。

图3为实施例2中制备的高乌甲素的RP-HPLC图。

图4为高乌甲素的结构图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步处理，但本发明并不限于以下实施例。

表1为实施例1～3和对比例1～3中的超声辅助提取与索氏提取、传统浸提的比较。

图1为本发明的工艺流程图。

图4为高乌甲素的结构图。

实施例1

本发明一种超声辅助提取高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)药材预处理

将高乌头块根粉碎，过60目筛，得到高乌头药粉；

2)超声提取

将高乌头药粉与体积分数为95％的乙醇按质量体积比为1g∶10mL浸泡12小时，使用超声波清洗器(KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司)，在功率150W，温度40℃的条件下，超声提取30分钟；在真空度0.07MPa的条件下抽滤，将所得滤渣重复步骤2)再提取一次，合并2次滤液抽滤得到滤液；

3)制备酸水液

将步骤2)所得滤液在真空度为0.07MPa，温度为50℃条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)进行减压浓缩无乙醇，冷却至室温；加入0.1mol·L^-1，pH值为1～2的盐酸，溶解，使密度为1.00～1.30，静置1小时，过滤，得到酸水液；

4)萃取

将步骤3)所得酸水液用沸程为60～90℃的石油醚萃取；所述酸水液与石油醚的体积比为1，萃取3次，分离并合并萃余液；用浓氨水调节pH至9～10得碱水液；用乙酸乙酯萃取，萃取3次，分离并合并乙酸乙酯萃取液；所述碱水液与乙酸乙酯的体积比为1，在40℃，真空度为0.07MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙酸乙酯，冷却至室温得高乌甲素提取物；

5)结晶

将步骤4)所得高乌甲素提取物用无水乙醇溶解，高乌甲素与无水乙醇的质量体积比为1∶5，静置24小时，析出结晶，过滤，用预冷的无水乙醇洗涤结晶，得到白色的高乌甲素。

实施例2

本发明一种超声辅助提取高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)药材预处理

将高乌头块根粉碎，过80目筛，得到高乌头药粉；

2)超声提取

将高乌头药粉与体积分数为95％的乙醇按质量体积比为1g∶20mL浸泡36小时，使用超声波清洗器(KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司)，在功率250W，温度60℃的条件下，超声提取40分钟；在真空度0.08MPa的条件下抽滤，将所得滤渣重复步骤2)再提取一次，合并2次滤液抽滤得到滤液；

3)制备酸水液

将步骤2)所得滤液在真空度为0.08MPa，温度为50℃条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙醇，冷却至室温；加入0.1mol·L^-1，pH值为1～2的盐酸，溶解，使密度为1.00～1.30，静置2小时，过滤，得到酸水液；

4)萃取

将步骤3)所得酸水液用沸程为60～90℃的石油醚萃取；所述酸水液与石油醚的体积比为1∶3，萃取3次，分离并合并萃余液；用浓氨水调节pH至9～10得碱水液；用乙酸乙酯萃取，萃取3次，分离并合并乙酸乙酯萃取液；所述碱水液与乙酸乙酯的体积比为1∶3，在40℃，真空度为0.08MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙酸乙酯，冷却至室温得高乌甲素提取物；

5)结晶

将步骤4)所得高乌甲素提取物用无水乙醇溶解，高乌甲素与无水乙醇的质量体积比为1∶10，静置72小时，析出结晶，过滤，用预冷的无水乙醇洗涤结晶，得到白色的高乌甲素。

图2为制备的高乌甲素的红外光谱图。在图中可以看出，在3440cm^-1处出现-OH特征峰；在3263cm^-1处出现-NH-特征峰，可以说明CH₃CO-NH-存在；在1590cm^-1，761cm^-1处为二取代苯的特征峰；1264cm^-1处出现醚键特征峰，可以说明-O-CH₃存在；1692cm^-1处出现羰基特征峰，可以推断CH₃CO-NH-或-O-CO-存在。

图3为制备的高乌甲素的RP-HPLC图。

RP-HPLC条件：美国戴安公司UltiMate 3000高效液相色谱仪；色谱柱：AT Lichrom ODS-BP C₁₈色谱柱(4.60mm×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.2mol·L-1磷酸二氢钠(0.2％三乙胺，pH4.0)＝80∶20(V∶V)；流速：1.0mL/min；紫外检测波长：252nm；柱温：30℃；进样量：20μL)。

实施例3

本发明一种超声辅助提取高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)药材预处理

将高乌头块根粉碎，过60目筛，得到高乌头药粉；

2)超声提取

将高乌头药粉与体积分数为95％的乙醇按质量体积比为1g∶15mL浸泡24小时，使用超声波清洗器(KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司)，在功率200W，温度50℃的条件下，超声提取50分钟；在真空度0.09MPa的条件下抽滤，将所得滤渣重复步骤2)再提取一次，合并2次滤液抽滤得到滤液；

3)制备酸水液

将步骤2)所得滤液在真空度为0.09MPa，温度为50℃条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙醇，冷却至室温；加入0.1mo l·L^-1，pH值为1～2的盐酸，溶解，使密度为1.00～1.30，静置1.5小时，过滤，得到酸水液；

4)萃取

将步骤3)所得酸水液用沸程为60～90℃的石油醚萃取；所述酸水液与石油醚的体积比为1∶2，萃取3次，分离并合并萃余液；用浓氨水调节pH至9～10得碱水液；用乙酸乙酯萃取，萃取3次，分离并合并乙酸乙酯萃取液；所述碱水液与乙酸乙酯的体积比为1∶2，在40℃，真空度为0.09MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙酸乙酯，冷却至室温得高乌甲素提取物；

5)结晶

将步骤4)所得高乌甲素提取物用无水乙醇溶解，高乌甲素与无水乙醇的质量体积比为1∶15，静置48小时，析出结晶，过滤，用预冷的无水乙醇洗涤结晶，得到白色的高乌甲素。

实施例4

本发明一种超声辅助提取高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)药材预处理

将高乌头块根粉碎，过60目筛，得到高乌头药粉；

2)超声提取

将高乌头药粉与体积分数为95％的乙醇按质量体积比为1g∶20mL浸泡24小时，使用超声波清洗器(KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司)，在功率200W，温度50℃的条件下，超声提取50分钟；在真空度0.08MPa的条件下抽滤，将所得滤渣重复步骤2)再提取一次，合并2次滤液抽滤得到滤液；

3)制备酸水液

将步骤2)所得滤液在真空度为0.09MPa，温度为45℃条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙醇，冷却至室温；加入0.1mol·L^-1，pH值为1～2的盐酸，溶解，使密度为1.00～1.30，静置1.5小时，过滤，得到酸水液；

4)萃取

将步骤3)所得酸水液用沸程为60～90℃的石油醚萃取；所述酸水液与石油醚的体积比为1∶3，萃取3次，分离并合并萃余液；用浓氨水调节pH至9～10得碱水液；用乙酸乙酯萃取，萃取3次，分离并合并乙酸乙酯萃取液；所述碱水液与乙酸乙酯的体积比为1∶2，在50℃，真空度为0.09MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙酸乙酯，冷却至室温得高乌甲素提取物；

5)结晶

实施例5

本发明一种超声辅助提取高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)药材预处理

将高乌头块根粉碎，过60目筛，得到高乌头药粉；

2)超声提取

将高乌头药粉与体积分数为95％的乙醇按质量体积比为1g∶15mL浸泡36小时，使用超声波清洗器(KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司)，在功率250W，温度60℃的条件下，超声提取40分钟；在真空度0.09MPa的条件下抽滤，将所得滤渣重复步骤2)再提取一次，合并2次滤液抽滤得到滤液；

3)制备酸水液

将步骤2)所得滤液在真空度为0.08MPa，温度为55℃条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙醇，冷却至室温；加入0.1mol·L^-1，pH值为1～2的盐酸，溶解，使密度为1.00～1.30，静置1.5小时，过滤，得到酸水液；

4)萃取

将步骤3)所得酸水液用沸程为60～90℃的石油醚萃取；所述酸水液与石油醚的体积比为1∶2，萃取3次，分离并合并萃余液；用浓氨水调节pH至9～10得碱水液；用乙酸乙酯萃取，萃取3次，分离并合并乙酸乙酯萃取液；所述碱水液与乙酸乙酯的体积比为1∶3，在45℃，真空度为0.09MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙酸乙酯，冷却至室温得高乌甲素提取物；

5)结晶

对比实施例1

酸性乙醇索氏提取高乌头中高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)将净选、干燥后的高乌头块根粉碎，过60目筛；称取一定量的高乌头药粉包裹于滤纸并置索氏提取器中，加入酸性乙醇(用盐酸调节95％乙醇的pH为2)，所述高乌头药粉与酸性乙醇的质量体积比为1g∶15mL。连接索氏提取装置，加热至溶媒回流后，在温度80℃下连续提取5小时，冷却至室温，过滤得滤液；

2)将步骤1)所得滤液在真空度0.08MPa，温度50℃的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙醇，冷却至室温得酸水浓缩液，用氨水调节浓缩液的pH至9，得碱水液；

3)将步骤2)所得碱水液用氯仿逆流萃取，碱水液与氯仿体积比为1∶1，萃取3次，分离并合并氯仿萃取液，在温度50℃，真空度0.08MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩萃取液至无氯仿，冷却至室温得高乌甲素提取物；

4)将步骤3)所得高乌甲素提取物用质量体积比为1g∶10mL的无水乙醇溶解，低温静置48小时，析出结晶，过滤，用预冷的无水乙醇反复洗涤结晶，即得高乌甲素。

对比实施例2

乙醇索氏提取高乌头中高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)将净选、干燥后高乌头块根粉碎，过60目筛；称取一定量的高乌头药粉包裹于滤纸并置索氏提取器中，加入95％乙醇，所述高乌头药粉与乙醇的质量体积比为1g∶20mL。连接索氏提取装置，加热至溶媒回流后，在温度80℃下连续提取5小时，冷却至室温，过滤得滤液；

2)将步骤1)所得滤液在真空度0.08MPa，温度50℃的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至无乙醇，冷却至室温得流浸膏；

3)将步骤2)所得流浸膏用10倍体积氯仿逆流萃取3次，分离并合并氯仿萃取液，在温度50℃，真空度0.08MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩萃取液至无氯仿，冷却至室温得高乌甲素提取物；

对比实施例3

酸水传统浸提高乌头中高乌甲素的方法，包括如下步骤：

1)将净选、干燥后高乌头块根粉碎，过60目筛；称取一定量的高乌头药粉置于锥形瓶中，加入酸水(用盐酸调节蒸馏水的pH为2)，所述高乌头药粉与酸水的质量体积比为1g∶20mL，搅拌提取5小时，过滤得滤液；

2)将步骤1)所得滤液在真空度0.08MPa，温度75℃的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩至滤液体积的1/3，冷却至室温得酸水浓缩液，用氨水调节浓缩液的pH至9，得碱水液；

3)将步骤2)所得碱水液用氯仿逆流萃取，碱水液与萃取溶剂体积比为1∶1，萃取3次，分离并合并氯仿萃取液，在温度50℃，真空度0.08MPa的条件下用旋转蒸发仪(N-1001S-WA型旋转蒸发仪，日本东京理化)减压浓缩萃取液至无氯仿，冷却至室温得高乌甲素提取物；

表1

通过表1可以看出，本发明能耗低、绿色环保、无有毒有害溶剂残留，杂质少，得率高，最高为0.797％，经高效液相色谱分析，提取的高乌甲素质量分数达98％以上。

显然，本发明的上述实施例仅仅是为清楚地说明本发明所作的举例，而并非是对本发明的实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无法对所有的实施方式予以穷举。凡是属于本发明的技术方案所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明的保护范围之列。

Claims

1.一种超声辅助提取高乌甲素的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)药材预处理

将高乌头块根粉碎，过60-80目筛，得到高乌头药粉；

2)超声提取

3)制备酸水液

4)萃取

将步骤3)所得酸水液用石油醚萃取，得到的萃余液用浓氨水调节pH至9～10得碱水液；用乙酸乙酯萃取，得到的萃取液减压浓缩至无乙酸乙酯，冷却至室温得高乌甲素提取物；

5)结晶

将步骤4)所得高乌甲素提取物用无水乙醇溶解，静置，析出结晶，过滤，用预冷的无水乙醇洗涤结晶，得到高乌甲素。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述抽滤的条件为：真空度0.07～0.09MPa。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述减压浓缩的条件为：真空度为0.07～0.09MPa，温度为45～55℃。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述盐酸浓度为0.1mol·L^-1，pH值为1～2。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述静置的时间为1～2小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述石油醚的沸程为60～90℃。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述酸水液与石油醚体积比为1∶1～3；所述碱水液与乙酸乙酯的体积比为1∶1～3。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述减压浓缩的条件为：真空度为0.07～0.09MPa，温度为40～50℃。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤5)中所述高乌甲素提取物与无水乙醇的质量体积比为1g∶5～15mL。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述低温静置的时间为24～72小时。