CN104402949A

CN104402949A - 一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法

Info

Publication number: CN104402949A
Application number: CN201410802940.2A
Authority: CN
Inventors: 刘香萍; 韩玉静; 李国良; 曲善民; 罗英花; 杨智明; 杨伟光
Original assignee: Heilongjiang Bayi Agricultural University
Current assignee: Heilongjiang Bayi Agricultural University
Priority date: 2014-12-12
Filing date: 2014-12-12
Publication date: 2015-03-11
Anticipated expiration: 2034-12-12
Also published as: CN104402949B

Abstract

本发明公开了一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，以紫丁香(Syringa oblata Lindl.)小枝为原料，采用匀浆法提取，大孔树脂柱吸附后，再以两种不同浓度乙醇溶液梯度洗脱，然后分别用硅胶柱层析分离，重结晶，可得紫丁香苷晶体及橄榄苦苷晶体。本发明包括紫丁香中紫丁香苷、橄榄苦苷的提取、大孔树脂和硅胶柱分离等工艺，具有原料成本低、工艺简单、所用溶剂和树脂均可回收使用等优点；本发明所得两种产物纯度均大于95％，适宜进行大规模工业化生产。

Description

一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法

技术领域

本发明涉及天然产物化学领域，具体涉及一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法。

背景技术

紫丁香苷、橄榄苦苷均具有多方面药理活性，因而具有广泛的医疗应用前景。

紫丁香苷又名刺五加苷B，为刺五加的主要药用成分之一，是一种强的抗肝毒药物。目前紫丁香苷主要来源于刺五加，而刺五加为国家三级保护植物，其加工利用受到严格的限制。已有研究表明，紫丁香苷在紫丁香中的含量是刺五加的2倍以上；橄榄苦苷主要从油橄榄叶中分离。油橄榄主要分布于地中海国家，我国近年虽有引种，但资源量十分有限，所以从其他植物资源中进行橄榄苦苷制备的尝试具有重要意义。因此利用本发明从紫丁香中分离紫丁香苷、橄榄苦苷，不仅原料来源广泛，且可充分利用园林修剪所废弃的紫丁香枝条，为制药业及化妆品等领域提供高品质原料。

目前，尚未有从紫丁香中同时快速提取分离高纯度紫丁香苷和橄榄苦苷两个成分的相关研究。

公开号为CN101643484的中国专利公开了一种高纯度紫丁香苷、制备方法及应用，其通过溶解刺五加膏、大孔吸附树脂层析、脱色、大孔吸附树脂层析、结晶、重结晶，得到高纯度的紫丁香苷。其步骤繁杂，两次层析富集，一次脱色，两次结晶，不但增加吸附剂的成本，也加长了生产周期，增加了提取成本。

公开号为CN101328198的中国专利公开了一种紫丁香苷的提取分离方法，该方法将白丁香(Syringa oblata Lindl.var.alba Hort.ex Rehd.)枝粉碎，利用煎煮法从白丁香中提取紫丁香苷，将紫丁香苷提取液用XDA-1或AB-8大孔吸附树脂柱以20％～60％的乙醇溶液洗脱，再用硅胶柱层析分离，制得纯度97％以上的紫丁香苷晶体。该方法粉碎过程及煎煮过程分别进行，耗能增加，且煎煮2～3次，每次耗时1～3h，生产周期过长，生产成本增加。

公开号为CN101307079的中国专利公开了一种从铁冬青中提取分离紫丁香苷的方法，其将药材粉碎成细粉，用苯回流提取，将提取后的药渣晾干，加入丙酮再回流提取，合并滤液，浓缩提取液，静置，有白色粉末析出，待析出完全后过滤，用丙酮洗涤析出物，将析出物用丙酮-甲醇的混合溶液反复重结晶，最后再用甲醇重结晶，即可得到紫丁香苷的白色针晶。该方法多次使用苯、丙酮等高毒性有机溶剂，将产生环境污染及生产人员中毒等危害。

公开号为CN101003557的中国专利公开了富含高纯度橄榄苦苷的油橄榄叶提取物的制备方法，其采用不同类型多次膜分离耦合技术和介质吸附耦合技术代替传统溶剂萃取法，分离得到含量大于50％的富含橄榄苦苷的油橄榄叶提取物。但该方法所得橄榄苦苷含量较低，影响了其进一步应用。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，以拓宽紫丁香苷、橄榄苦苷的提取原料，为制药业及化妆品企业提供高纯度原料。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，包括如下步骤：

S1、将干燥的紫丁香小枝切短至1～2cm，加入10～20倍量浓度为30～60％乙醇溶液匀浆提取2～3次，每次匀浆5～10min，将提取的溶液合并后过滤、减压浓缩回收乙醇，得提取液；

S2、将步骤S1所得的提取液用大孔树脂柱以2～3BV/h流速吸附后，用浓度为15％～25％的乙醇4～6BV及浓度为35～45％的乙醇溶液6～8BV进行梯度洗脱，可将吸附的紫丁香苷、橄榄苦苷分别洗脱下来；合并相同浓度的乙醇洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥分别得紫丁香苷粗品、橄榄苦苷粗品；

S3、将步骤S2所得的紫丁香苷粗品干法上硅胶柱层析，用乙酸乙酯、甲醇、水混合液作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后用甲醇重结晶2～3次，得纯度大于97％的紫丁香苷晶体；

S4、将步骤S2所得的橄榄苦苷粗品干法上硅胶柱层析，用乙酸乙酯、甲醇、水混合液作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后静置，析出橄榄苦苷结晶，用无水乙醇重结晶2～3次，得纯度大于95％的橄榄苦苷晶体。

优选的，所述步骤S2中洗脱的流速为2～4BV/h。

优选的，所述的大孔树脂为D101、HPD-100B或HPD400A中的一种。

优选的，所述步骤S3、S4中乙酸乙酯、甲醇、水的比例12∶1∶0.2。

优选的，所述步骤S3、S4中乙酸乙酯、甲醇、水的比例为16∶1∶0.2。

本发明具有以下有益效果：

开辟了紫丁香苷、橄榄苦苷制备新途径，其生产工艺简单，所用试剂及树脂可回收利用，能耗低，适用于工业化生产；产品得率高，纯度高，其中，紫丁香苷的纯度大于95％，橄榄苦苷的纯度大于97％。

附图说明

图1为本发明实施例大孔树脂柱洗脱液中的紫丁香苷液相色谱图。

图2为本发明实施例大孔树脂柱洗脱液中的橄榄苦苷液相色谱图。

图3为本发明实施例硅胶分离纯化后所得紫丁香苷液相色谱图。

图4为本发明实施例硅胶分离纯化后所得橄榄苦苷液相色谱图。

具体实施方式

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

本发明实施例提供了一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，包括如下步骤：

S2、将步骤S1所得的提取液用大孔树脂柱以2～3BV/h流速吸附后，用浓度为15％～25％的乙醇4～6BV及浓度为35～45％的乙醇溶液6～8BV进行梯度洗脱，可将吸附的紫丁香苷、橄榄苦苷分别洗脱下来；合并相同浓度的乙醇洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥分别得紫丁香苷粗品、橄榄苦苷粗品；图1为大孔树脂柱洗脱液中的紫丁香苷液相色谱图；图2为大孔树脂柱洗脱液中的橄榄苦苷液相色谱图，其中，横坐标为保留时间，纵坐标为信号响应值。

S3、将步骤S2所得的紫丁香苷粗品干法上硅胶柱层析，用乙酸乙酯、甲醇、水混合液作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后用甲醇重结晶2～3次，得纯度大于97％的紫丁香苷晶体；图3为硅胶分离纯化后所得紫丁香苷液相色谱图。

S4、将步骤S2所得的橄榄苦苷粗品干法上硅胶柱层析，用乙酸乙酯、甲醇、水混合液作为洗脱剂进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后静置，析出橄榄苦苷结晶，用无水乙醇重结晶2～3次，得纯度大于95％的橄榄苦苷晶体，图4为硅胶分离纯化后所得橄榄苦苷液相色谱图。

所述步骤S2中洗脱的流速为2～4BV/h。所述的大孔树脂为D101、HPD-100B或HPD400A中的一种。

实施例1

S11、提取液制备

取紫丁香(Syringa oblata Lindl.)小枝1kg，粉碎后用40％乙醇溶液匀浆提取3次，每次10min，料液比1∶10(kg/L)，提取液合并过滤，浓缩至4L。

S12、大孔树脂分离

将浓缩后提取液用HPD-100B大孔树脂柱以3BV/h的流速吸附，再用体积浓度为20％和40％的乙醇溶液陆续先后洗脱，分段收集洗脱液，采用薄层色谱硅胶预制板(HSGF₂₅₄)快速定性检测。

S13、将收集获得的20％乙醇水溶液的洗脱液浓缩、干燥得紫丁香苷粗品，乙酸乙酯溶解后与少量硅胶搅拌后干法上样过硅胶柱。硅胶柱以乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比12∶1∶0.2进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后析出结晶，用无水乙醇重结晶1次，得紫丁香苷晶体2.71g。用高效液相色谱检测其纯度为98.48％。

S14、将收集获得的40％乙醇水溶液的洗脱液浓缩、干燥得橄榄苦苷粗品，乙酸乙酯溶解后与少量硅胶搅拌后干法上样过硅胶柱。硅胶柱以乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比16∶1∶0.2进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后干燥。再用无水乙醇溶解，结晶，重结晶2次，得橄榄苦苷晶体3.26g。用高效液相色谱检测其纯度为97.39％。

实施例2

S21、提取液制备

取紫丁香(Syringa oblata Lindl.)小枝0.5kg，粉碎后用30％乙醇溶液匀浆提取2次，每次8min，料液比1∶20(kg/L)，提取液合并过滤，浓缩至2L。

S22、大孔树脂分离

将浓缩后提取液用HPD-400A大孔树脂柱以2BV/h的流速吸附，再用体积浓度为25％和50％的乙醇溶液陆续先后洗脱，分段收集洗脱液，采用薄层色谱硅胶预制板(HSGF₂₅₄)快速定性检测。

S23、将收集获得的25％乙醇水溶液的洗脱液浓缩、干燥，乙酸乙酯搅拌后干法上样过硅胶柱。以乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比12∶1∶0.2进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后析出结晶，用无水乙醇重结晶2次，得紫丁香苷晶体1.34g。用高效液相色谱检测其纯度为95.61％。

S24、将收集获得的50％乙醇水溶液的洗脱液浓缩、干燥，乙酸乙酯搅拌后干法上样过硅胶柱。以乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比16∶1∶0.2进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后干燥。再用无水乙醇溶解，结晶，重结晶2次，得橄榄苦苷晶体1.63g。用高效液相色谱检测其纯度为98.11％。

实施例3

S31、提取液制备

取紫丁香(Syringa oblata Lindl.)小枝0.5kg，粉碎后用50％乙醇溶液匀浆提取3次，每次6min，料液比1∶10(kg/L)，提取液合并过滤，浓缩至1.5L。

S32、大孔树脂分离

将浓缩后提取液用D101大孔树脂柱以4BV/h的流速吸附，再用体积浓度为20％和50％的乙醇溶液陆续先后洗脱，分段收集洗脱液，采用薄层色谱硅胶预制板(HSGF₂₅₄)快速定性检测。

S33、将收集获得的20％乙醇水溶液的洗脱液浓缩、干燥，乙酸乙酯搅拌后干法上样过硅胶柱。以乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比12∶1∶0.2进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后析出结晶，用无水乙醇重结晶2次，得紫丁香苷晶体1.52g。用高效液相色谱检测其纯度为96.75％。

S34、将收集获得的50％乙醇水溶液的洗脱液浓缩、干燥，乙酸乙酯搅拌后干法上样过硅胶柱。以乙酸乙酯∶甲醇∶水体积比16∶1∶0.2进行洗脱，收集洗脱液，浓缩后干燥。再用无水乙醇溶解，结晶，重结晶3次，得橄榄苦苷晶体2.06g。用高效液相色谱检测其纯度为98.18％。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims

1.一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，其特征在于，包括如下步骤：

S2、将步骤S1所得的提取液用大孔树脂柱以2～3BV/h流速吸附后，用浓度为15％～25％的乙醇4～6BV及浓度为35～45％的乙醇溶液6～8BV进行梯度洗脱，合并相同浓度的乙醇洗脱液，减压浓缩后冷冻干燥分别得紫丁香苷粗品、橄榄苦苷粗品；

2.根据权利要求1所述的一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述步骤S2中洗脱的流速为2～4BV/h。

3.根据权利要求1所述的一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述的大孔树脂为D101、HPD-100B或HPD400A中的一种。

4.根据权利要求1所述的一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述步骤S3、S4中乙酸乙酯、甲醇、水的比例12∶1∶0.2。

5.根据权利要求1所述的一种从紫丁香中同时分离制备紫丁香苷和橄榄苦苷的方法，其特征在于，所述步骤S3、S4中乙酸乙酯、甲醇、水的比例为16∶1∶0.2。