CN101333240A - 一种提取分离高纯度柴胡皂苷a的制备工艺 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种提取分离高纯度的柴胡皂苷A的制备工艺及柴胡皂苷A与药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物。柴胡皂苷A的制备工艺其特征在于：将柴胡药材，粉碎，加入适量溶剂提取，滤过，浓缩，浓缩液先后采用大孔树脂柱色谱及高速逆流色谱进行分离制备高浓度的柴胡皂苷A。本发明工艺稳定，成品中柴胡皂苷A含量高，采用高效液相法测定柴胡皂苷A为97％以上。

Description

一种提取分离高纯度柴胡皂苷A的制备工艺

技术领域：

本发明属于中药部位或成分的提取分离方法，具体而言，本发明涉及中药柴胡中有效成分柴胡皂苷A的提取分离制备方法。

背景技术：

柴胡为常用中药，在对全国330位国家级名中医进行临床经验的调查研究发现，各名中医擅长使用的药物序列中，柴胡位居第三。柴胡具有和解退热，疏肝解郁、升举阳气之功效。柴胡主要有效成分为柴胡皂苷及柴胡挥发油。据文献研究发现：在柴胡皂苷中，柴胡皂苷A、D含量最高，药理作用最为显著，具有明显的抗炎、解热、镇痛及保肝等作用；柴胡皂苷B药理作用较弱；柴胡皂苷C在体内无药理活性。现常采用水提取、醇提取、溶剂萃取、简单柱分离等对柴胡皂苷A进行提取分离，由于技术落后，市售品柴胡皂苷A的含量仅有10％，难以满足需要，本发明克服了现有技术中的不足，提供了一种提取分离高纯度柴胡皂苷A的制备工艺。

发明内容：

本发明的目的是提供一种制备高纯度的柴胡皂苷A的提取分离方法。成品中柴胡皂苷A含量高，采用高效液相法测定柴胡皂苷A为97％以上。

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：

取柴胡药材，粉碎过10目筛，加入5～25倍量的提取溶剂1，加热提取1～4次，每次0.5～3小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成相对密度1.10～1.20(65℃测)的浓缩液，将浓缩液置入大孔吸附树脂分离柱中，采用湿法装柱，用溶剂2洗涤树脂柱至水洗液呈无色，洗液弃去，用溶剂3以进行洗脱收集第1条色带的洗脱液，减压浓缩至相对密度1.10～1.20(65℃测)的浓缩液。然后采用高速逆流色谱分离浓缩液，在室温下将系统1、系统2分别置于两个分液漏斗中振摇，放置，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满固定相后，再让仪器以800～1500r/min转动，同时将流动相以0～5ml/min的流速泵入。待流动相从出液端流出且两相在色谱中达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器。在210nm波长处对流出液连续检测，与柴胡皂苷A标准图谱对应，收集液蒸除溶剂，干燥，得样品。

溶剂1包括但不限于水、乙醇、甲醇、丙酮等及各溶剂的混合溶剂。溶剂2包括但不限于苯、乙醚、石油醚等及各溶剂的混合溶剂。溶剂3包括但不限于水、乙醇、甲醇、丙酮等及各溶剂的混合溶剂。系统1包括但不限于水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、环己烷、乙醚等各溶剂的混合溶剂。系统2包括但不限于水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、环己烷、乙醚等各溶剂的混合溶剂。

具体实施方式：

为更好的理解本发明，下面通过具体的实施例进一步阐述本发明，但不应被理解为对本发明有任何的限制。

实施例1：取柴胡药材，粉碎过10目筛，加入10倍量的75％乙醇，加热提取3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成相对密度1.10～1.20(65℃测)的浓缩液，将浓缩液置入大孔吸附树脂分离柱中，采用湿法装柱，用乙醚-石油醚＝5∶3洗涤树脂柱至水洗液呈无色，洗液弃去，用95％乙醇以进行洗脱，收集第1条色带的洗脱液，减压浓缩至相对密度1.10～1.20(65℃测)的浓缩液。然后采用高速逆流色谱分离浓缩液，在室温下分别将系统1(乙醚-正丁醇-乙醇-水＝5∶3∶7∶5)，系统2(乙醚-丙酮-乙醇-水＝3∶4∶6∶4)置于两个分液漏斗中振摇，放置，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满固定相后，再让仪器以1000r/min转动，同时将流动相以1.8ml/min的流速泵入。待流动相从出液端流出且两相在色谱中达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器。在210nm波长处对流出液连续检测，与柴胡皂苷A标准图谱对应，收集液蒸除溶剂，干燥，得样品。

实施例2：取柴胡药材，粉碎过10目筛，加入15倍量的65％乙醇，加热提取2次，每次1.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成相对密度1.10～1.20(65℃测)的浓缩液，将浓缩液置入大孔吸附树脂分离柱中，采用湿法装柱，用苯-石油醚＝7∶3洗涤树脂柱至水洗液呈无色，洗液弃去，用85％乙醇以进行洗脱，收集第1条色带的洗脱液，减压浓缩至相对密度1.10～1.20(65℃测)的浓缩液。然后采用高速逆流色谱分离浓缩液，在室温下分别将系统1(乙醚-乙醇-水＝5∶6∶3)，系统2(氯仿-乙醇-水＝3∶7∶3)置于两个分液漏斗中振摇，放置，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满固定相后，再让仪器以1200r/min转动，同时将流动相以2.0ml/min的流速泵入。待流动相从出液端流出且两相在色谱中达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器。在210nm波长处对流出液连续检测，与柴胡皂苷A标准图谱对应，收集液蒸除溶剂，干燥，得样品。

实施例3

片剂的制备

处方：柴胡皂苷A  20g    糊精  125g

微晶纤维素25mg    羧乙基纤维素钠  28g

硬脂酸镁  2.0g

将柴胡皂苷A、糊精、微晶纤维素、羧乙基纤维素钠粉碎过80目筛，混均，加入75％乙醇适量制软材，过20目筛制粒。50℃干燥。干颗粒过18目筛整粒，加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀，压成1000片。

实施例4

胶囊剂的制备

处方：柴胡皂苷A     20g    淀粉          128g

      羧甲基淀粉钠  20g    羧乙基纤维素钠30g

      硬脂酸镁      2.0g

将柴胡皂苷A、糊精、微晶纤维素、羧乙基纤维素钠粉碎过80目筛，混均，加入70％乙醇适量制软材，过40目筛制粒。50℃干燥。干颗粒过40目筛整粒，加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀，制成胶囊1000粒。

实施例5

分散片的制备

处方：柴胡皂苷A     20g    淀粉        58g

      微晶纤维素    70g    羧甲基淀粉钠20g

      羧乙基纤维素钠30g    硬脂酸镁    2.0g

将柴胡皂苷A、糊精、微晶纤维素、羧乙基纤维素钠粉碎过80目筛，混均，加入85％乙醇适量制软材，过20目筛制粒。50℃干燥。干颗粒过20目筛整粒，加入处方量的硬脂酸镁，混合均匀，制成胶囊1000粒。

实施例6

软胶囊的制备

处方：柴胡皂苷A  20g        pEG400    140g

      蜂蜡       40g        明胶      100g

      甘油       35g        水        100g

称取处方量明胶、甘油、水置煮胶罐中，加热至80℃，搅拌2小时，将胶液抽真空，除去气泡，60℃保温待用。将处方量pEG400、蜂蜡加热溶化，混合均匀，加入处方量的柴胡皂苷A，混匀，测试混合油密度μ。利用公式0.2(g)÷μ(g/m1)×16.23计算出量滴，将胶液和混合好的内容物装入制囊机中，温度控制在45℃～50℃，用计算好的量滴进行灌装。用95％乙醇清洗灌装好的软胶囊。

实施例7

注射剂的制备

处方：柴胡皂苷A  2g

丙三醇           40g

注射用水         1000ml

称取处方量丙三醇加入约400ml注射用水混匀，搅拌加入处方量的柴胡皂苷A，混匀使成澄清透明溶液，加入注射用水至1000ml，经0.22μm微孔滤膜过滤，分装封口，于120℃流通蒸汽灭菌30分钟即得。

实施例8

注射剂的制备

处方：柴胡皂苷A  2g

      丙三醇     40g

      注射用水   1000ml

称取处方量丙三醇加入约400ml注射用水混匀，搅拌加入处方量的柴胡皂苷A，混匀使成澄清透明溶液，加入注射用水至1000ml，经0.22μm微孔滤膜过滤，分装封口，于120℃流通蒸汽灭菌30分钟即得。

实施例9

缓释片的制备

处方：柴胡皂苷A      20g    玉米淀粉       108g

      微晶纤维素     20g    羟乙基纤维素L型5g

      羟乙基纤维素H型45g    硬脂酸镁       2g

将柴胡皂苷A溶于适量乙醇中，与玉米淀粉、微晶纤维素、羟乙基纤维素混合，以200r/min的转速搅拌3min。加入适量蒸馏水，再搅拌2min制成颗粒，干燥，压成1000片。

Claims (10)

1、一种制备高纯度的柴胡皂苷A的提取分离工艺及柴胡皂苷A与药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物。其提取分离工艺特征在于将柴胡药材，粉碎过10目筛，加入5～25倍量的提取溶剂1，加热提取1～4次，每次0.5～3.5小时，滤过，合并滤液，减压浓缩成相对密度1.10～1.20(65℃测)的浓缩液，浓缩液先后采用大孔树脂柱色谱分离及高速逆流色谱分离制备高浓度的柴胡皂苷A，其成品中柴胡皂苷A含量按重量百分比计算为97％以上。其药物组合物特征在于所述的柴胡皂苷A与药学上可以接受的药物载体混合形成的药物组合物。

2、权利要求1所述大孔树脂柱色谱分离，其特征在于采用湿法装柱，将浓缩液置入大孔吸附树脂柱中，用溶剂2洗涤树脂柱至水洗液呈无色，洗液弃去，用溶剂3以进行洗脱，收集第1条色带的洗脱液，减压浓缩至相对密度1.10～1.20(65℃测)。

3、权利要求1所述高速逆流色谱分离，其特征在于在室温下将系统1、系统2分别置于两个分液漏斗中振摇，放置，分别取上、下相，将上相作为固定相，下相作为流动相，将固定相泵入色谱柱中，使柱中充满固定相后，再让仪器以800～1500r/min转动，同时将流动相以0～5ml/min的流速泵入。待流动相从出液端流出且两相在色谱中达到动态平衡后，将样品溶液注入色谱系统中，同时在出液端接紫外检测器。在210nm波长处对流出液连续检测，与柴胡皂苷A标准图谱对应，收集液蒸除溶剂，干燥，得样品。

4、权利要求1所述溶剂1包括但不限于水、乙醇、甲醇、丙酮等及各溶剂的混合溶剂。

5、权利要求2所述溶剂2包括但不限于苯、乙醚、石油醚等及各溶剂的混合溶剂。

6、权利要求2所述溶剂3包括但不限于水、乙醇、甲醇、丙酮等及各溶剂的混合溶剂。

7、权利要求3所述系统1包括但不限于水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、环己烷、乙醚等各溶剂的混合溶剂。

8、权利要求3所述系统2包括但不限于水、甲醇、乙醇、正丁醇、乙酸乙酯、氯仿、正己烷、环己烷、乙醚等各溶剂的混合溶剂。

9、权利要求1的药物组合物包括但不限于丸剂、散剂、颗粒剂、片剂、分散片、滴丸剂、胶囊剂、口服液、糖浆剂、软胶囊剂、凝胶剂、软膏剂、橡胶膏剂、巴布剂、贴剂、滴鼻剂、滴眼剂、注射剂、气雾剂、喷雾剂、栓剂、橡胶膏剂、缓释制剂、速释制剂、控释制剂、靶向给药制剂。

10、权利要求9所述的缓释制剂、速释制剂、控释制剂、靶向给药制剂为柴胡皂苷A与药学上可以接受的药物载体混合形成的可用于口服、外用、注射用等不同给药途径的各种制剂。