CN104311615A

CN104311615A - 从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法

Info

Publication number: CN104311615A
Application number: CN201410519597.0A
Authority: CN
Inventors: 梁俊玉; 杨强; 马小梅; 陈燕; 杜鑫雨; 张继; 王俊龙; 孔维宝
Original assignee: Northwest Normal University
Current assignee: Nanjing Boyuan Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2014-09-30
Filing date: 2014-09-30
Publication date: 2015-01-28
Anticipated expiration: 2034-09-30
Also published as: CN104311615B

Abstract

本发明提供了一种从陇蜀杜鹃叶中提取并分离棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷的方法，属植物有效活性成分提取分离技术领域。本发明将陇蜀杜鹃叶粉碎后，先用石油醚进行热回流以除去色素及脂溶性杂质；再用乙醇溶液浸提，过滤，得粗提取物；粗提取物用水溶解后，经聚酰胺柱层析分离，乙醇溶液洗脱，并分别收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，95%乙醇重结晶，得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷（收率为0.1%～0.3%）和金丝桃苷（收率为0.3%～0.6%）。高效液相色谱分析表明，分离棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷纯度为90％～98％。

Description

从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法

技术领域

本发明涉及一种棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷的提取与分离技术，尤其涉及从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷的方法，属于植物有效活性成分提取分离技术领域。

背景技术

陇蜀杜鹃（Rhododendron przewalskii Maxim.）为杜鹃花科植物，藏药称为达玛，在我国主要分布于陕西、甘肃、青海及四川等地，储量较大。具有清肺泻火、止咳化痰作用，治疗咳嗽痰喘、老年慢性支气管炎、高血压和冠心病等疾病。陇蜀杜鹃叶中主要成分为金丝桃苷，具有镇痛，抗氧化，保护心肌、肝脏作用，对脑缺血再灌、脑梗塞都显示良好的保护作用，还具有明显的抗炎作用、较强的止咳作用和抗乙肝病毒作用，具有广泛药理活性和潜在而良好的应用前景。根据已有资料，陇蜀杜鹃叶中金丝桃苷含量在0.6%以上，比贯叶连翘、黄蜀葵花、金华葵花含量低，但是比云南山楂（0.289%），地榆（0.052%～0.291%），毛果杜鹃（0.1565%），满山红（0.26%）要高出很多，且陇蜀杜鹃在国内资源丰富、分布较为广泛，原料易得，对金丝桃苷的进一步开发和利用具有重要定意义。

CN2008101959227提供了一种用黄蜀葵花为原料，经萃取和大孔树脂吸附、结晶得到金丝桃苷的方法。CN2012104245579提供了利用大孔树脂和反相硅胶从罗布麻叶中同时制备金丝桃苷和异槲皮苷的方法。CN2012100382948提供了一种利用大孔树脂和硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析，从山香圆叶或贯叶金丝桃中提取、分离金丝桃苷的方法及其制备药物的用途。CN2010101580449提供了一种利用大孔吸附树脂、聚酰胺柱层析、硅胶柱层析方法，从山里红或山楂叶分离金丝桃苷的方法。CN2011100915755提供了一种利用大孔吸附树脂、Sephadex LH-20凝胶及ODS-C18反相中压硅胶柱层析，从鹿蹄草中分离纯化高熊果酚苷、金丝桃苷的方法。以上方法工艺复杂，有效成分丢失量大，时间长，成本高。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术中存在的问题，提供一种工艺流程简单，成本较低，收率高，绿色环保，适合工业化生产的提取方法。

本发明从陇蜀杜鹃叶中提取并分离棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷的方法，是将陇蜀杜鹃叶粉碎后，先用石油醚进行热回流以除去色素及脂溶性杂质；再用乙醇溶液浸提，过滤，得粗提取物；粗提取物用水溶解后，经聚酰胺柱层析分离，乙醇溶液洗脱，并分别收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶、重结晶，得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷。具体工艺包括：

（1）石油醚除杂：将陇蜀杜鹃叶粉碎，过40～60目筛；加入石油醚（料液比为1:5～1:10 g /mL），于50℃～80℃回流1h～5h，过滤，取出药渣晾干；

（2）乙醇溶液浸提：将晾干的药渣用乙醇溶液（体积浓度20％～90％）于50℃～100℃浸提0.5h～3h，过滤，得粗提物；粗提物的得率可达30%～60%；

（3）聚酰胺柱层析分离：将粗提物用水溶解并加入聚酰胺（聚酰胺与金丝桃苷粗提物的质量比为10:1～10:3），采用静态吸附法吸附至饱和后，滤出聚酰胺，装柱；用水冲洗至无molish反应后用乙醇溶液进行洗脱（乙醇溶液的浓度30％～90％）；并分别收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，95%乙醇重结晶，得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷。金丝桃苷的收率为0.3%～0.6%，棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的收率为0.1%～0.3%。

由核磁共振仪（INOVA 400NB 型核磁共振仪（美国Varian公司））测试，本申请提取的两种化合物的性质和核磁共振数据如下：

金丝桃苷：黄色粉末（乙醇），分子式C₂₁H₂₀O₁₂。¹H-NMR(400 MHz,DMSO) δ: 6.21 (1H,d,J = 1.6 Hz,H-6), 6.41 (1H, d, J = 2.0 Hz, H-8), 7.53 (1H, d, J =2.0 Hz, H-2′), 6.81 (1H, d, J = 8.4 Hz, H-5′), 7.67 (1H,dd, J = 8.4, 2.0 Hz, H-6′), 5.39 (1H, d, J = 7.2 Hz,H-1″), 3.30～3.60 (m), 12.64 (1H, s, OH)；¹³C-NMR(100 MHz,DMSO) δ: 156.5 (C-2), 133.8 (C-3),177.8 (C-4), 161.5 (C-5), 99.0 (C-6), 164.4 (C-7), 93.8(C-8), 156.6 (C-9), 104.2 (C-10), 121.4 (C-1′), 115.5(C-2′), 145.1 (C-3′), 148.8 (C-4′), 116.2 (C-5′), 122.3(C-6′), 102.1 (Gal-1), 71.05 (Gal-2), 73.5 (Gal-3), 68.2(Gal-4), 76.1 (Gal-5), 60.4 (Gal-6)；

棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷：黄色粉末（乙醇），分子式C₂₀H₁₈O₁₂。¹H-NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ: 6.28 (1H, s, H-6), 7.64 (1H,s, H-2′), 6.82 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-5′), 7.75 (1H, d,J= 8.4 Hz, H-6′), 5.38 (1H, d, J = 7.6 Hz, H-1″),3.23～3.66 (m)；¹³C-NMR (100 MHz,MHz, DMSO-d6) δ:156.4 (C-2), 133.5 (C-3), 178.1 (C-4), 153.0 (C-5), 98.8(C-6), 153.4 (C-7), 125.2 (C-8), 145.1 (C-9), 103.9(C-10), 122.5 (C-1′), 115.3 (C-2′), 145.1 (C-3′), 148.7(C-4′), 116.5 (C-5′), 121.7 (C-6′), 102.1 (Gal-1),71.5 (Gal-2), 73.4 (Gal-3), 68.2 (Gal-4), 76.1(Gal-5), 60.4 (Gal-6)。

对照参考文献，确定分离得到的化合物为棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷。

由高效液相色谱分析仪分析（高效液相色谱条件：色谱柱为Kromasil-C18柱；流动相为甲醇-0.5％磷酸水溶液（40:60）；流速0.8ml/min;柱温25℃；检测波长360nm），本发明从陇蜀杜鹃叶中提取并分离棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷纯度为90％～98％。

综上所述，本发明相对现有技术以下有益效果：

1、本发明采取聚酰胺静态吸附法，从而使陇蜀杜鹃叶的粗提取物中的金丝桃苷尽可能完全被聚酰胺吸附，有效提高了金丝桃苷的收率和产品的纯度；

2、在得到金丝桃苷的同时，分离得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷，最大限度的提取了原料中的的各活性物质，提高资源的利用率；

3、发明所采用的原料陇蜀杜鹃在国内资源丰富、分布较为广泛，原料易得；所用部位为叶，其所含的金丝桃苷含量较高，故可以极大降低原料采集的难度与成本；而且不破坏环境，有利于可持续发展；

4、本发明工艺简单，耗费资源少；所用试剂种类较少，廉价且无毒，成本低，对环境和工作人员无危害性，绿色环保。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明提取并分离金丝桃苷的方法作进一步说明。

实施例1

（1）将陇蜀杜鹃叶粉碎，过40目筛。称取100g，加入石油醚1000mL，在70℃下热回流2h，取出药渣晾干；

（2）将晾干的药渣加入体积浓度30％的乙醇溶液2500mL，在80℃下热浸提1.0h后，过滤；浓缩滤液至近干，即得金丝桃苷粗提物；

（3）取金丝桃苷粗提物30g，用适量水溶解后加入200g聚酰胺，静态吸附至饱和状态；

（4）滤出聚酰胺，用水装柱后先用水洗脱至无molish反应，再用质体积浓度80％的乙醇洗脱至无金丝桃苷流出；收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，95%乙醇重结晶，先后分别得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷；金丝桃苷的收率为0.45%，棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的收率为0.16%

（5）高效液相色谱分析：所得棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷纯度均为96％。

实施例2

（1）同实施例1；

（2）同实施例1；

（3）取金丝桃苷粗提物30g，用适量水溶解后加入150g聚酰胺，静态吸附至饱和状态；

（4）滤出聚酰胺，用水装柱后先用水洗脱至无molish反应，再用质量浓度20％的乙醇洗脱至无金丝桃苷流出；收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，95%乙醇重结晶，先后分别得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷；金丝桃苷的收率为0.4%，棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的收率为0.12%

（5）高效液相色谱分析：所得棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷纯度均为95％。

实施例3

（1）同实施例1；

（2）将晾干的药渣加入体积浓度40％的乙醇溶液2000mL，在80℃下热回流提取1.0h后，过滤；浓缩滤液至近干，即得金丝桃苷粗提物；

（3）取金丝桃苷粗提物15g，用适量水溶解后加入100g聚酰胺，静态吸附至饱和状态；

（4）滤出聚酰胺，用水装柱后先用水洗脱至无molish反应，再用质量浓度60％的乙醇洗脱至无金丝桃苷流出；收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，95%乙醇重结晶，先后分别得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷；金丝桃苷的收率为0.51%，棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的收率为0.19%

（5）高效液相色谱分析：所得棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷纯度均为98％。

Claims

1.从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，是将陇蜀杜鹃叶粉碎后，先用石油醚进行热回流以除去色素及脂溶性杂质；再用乙醇溶液浸提，过滤，得粗提取物；粗提取物用水溶解后，经聚酰胺柱层析分离，乙醇溶液洗脱，并分别收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，95%乙醇重结晶，得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷。

2.如权利要求1或2从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，其特征在于：包括以下工艺步骤：

（1）石油醚除杂：将陇蜀杜鹃叶粉碎，过40～60目筛；加入石油醚，于50℃～80℃回流1h～5h，过滤，取出药渣晾干；

（2）乙醇溶液浸提：将晾干的药渣用乙醇溶液于50℃～100℃浸提0.5h～3h，过滤，得金丝桃苷粗提物；

（3）聚酰胺柱层析分离：将金丝桃苷粗提物用水溶解，并加入聚酰胺，采用静态吸附法吸附至饱和后，滤出聚酰胺，装柱；用水冲洗至无molish反应后用乙醇溶液进行洗脱；并分别收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，重结晶，得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷和金丝桃苷。

3.如权利要求1或2所述从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，其特征在于：步骤（1）中，陇蜀杜鹃叶粉与石油醚的料液比为1:5～1:10 g /mL。

4.如权利要求1或2所述从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，其特征在于：步骤（2）中，乙醇溶液的体积浓度为20%～90%。

5.如权利要求1或2所述从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，其特征在于：步骤（2）中，药渣与乙醇溶液的料液比为1:5～1:35g/mL。

6.如权利要求1或2所述从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，其特征在于：步骤（3）中，用水洗脱聚酰胺柱时，金丝桃苷粗提物上样量与水的料液比为1:1000～10:1000 g /mL。

7.如权利要求1或2所述从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，其特征在于：步骤（3）中，聚酰胺与金丝桃苷粗提物的质量比为10:1～10:3。

8.如权利要求1或2所述从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，其特征在于：步骤（3）中，作为洗脱剂的乙醇溶液的体积百分数为30%～90%。