CN102942455A

CN102942455A - 一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法

Info

Publication number: CN102942455A
Application number: CN2012104863326A
Authority: CN
Inventors: 余雁
Original assignee: Suzhou Polytechnic Institute of Agriculture
Current assignee: Suzhou Polytechnic Institute of Agriculture
Priority date: 2012-11-26
Filing date: 2012-11-26
Publication date: 2013-02-27
Anticipated expiration: 2032-11-26
Also published as: CN102942455B

Abstract

本发明涉及从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其以桑枝为原料，包括（ 1 ）、用醇体积含量为 65%~75% 的醇水溶液对桑枝进行提取，浓缩，干燥，得粗提物；（ 2 ）、用石油醚对所得粗提物进行脱脂处理，之后使用乙酸乙酯多次萃取，合并乙酸乙酯萃取液，真空减压回收溶剂，得流体状物质， 40 ℃以下真空干燥得半成品；（ 3 ）、将步骤（ 2 ）所得半成品用乙醇 - 水溶液完全溶解，与大孔树脂 D101 混合，吸收充分后，上柱，以乙醇 - 水溶液为洗脱液，进行梯度洗脱或等度分段洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，使用丙酮与石油醚的混合溶剂进行重结晶，得氧化芪三酚晶体。本发明能够从桑枝中高效提取氧化芪三酚，操作简单，成本低廉，适合大规模生产。

Description

一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法

技术领域

本发明涉及一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法。

背景技术

氧化芪三酚是一种环烯醚萜葡萄糖苷，具有多种有益的生物活性：如具有酪氨酸酶抑制活性、果蔬防腐抗菌活性、抗单纯疱疹病毒活性、抗水痘带状疱疹病毒活性及抗艾滋病病毒等活性，同时还具有抗炎消肿、抗氧化、抗细胞凋亡及神经保护等作用。

桑枝为桑科植物桑的嫩枝，桑枝占桑园年产干物质量的 64% 左右，是蚕桑资源中生物量占有比例最高的物质。然而，在传统的蚕桑生产中，少部分用作燃料，大部分桑枝条被废弃，不仅其资源价值没有得到很好开发，还污染了环境。

已知，桑枝随产地的不同而含有不同含量的氧化芪三酚（一般为 0.01‰～1‰，极少数品种能达到 1‰～4‰）。提供从桑枝中高效提取氧化芪三酚的方法将具有重要的经济和环境效益。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种从桑枝中高效提取氧化芪三酚的方法。

为解决上述技术问题，本发明采取如下技术方案：

一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其以桑枝为原料，包括依次进行的如下步骤：

（1）、用醇体积含量为65wt%~75wt%的醇水溶液对桑枝进行提取，浓缩提取液，干燥，得粗提物；

（2）、用石油醚对步骤（1）所得粗提物进行脱脂处理，之后使用乙酸乙酯多次萃取，合并乙酸乙酯萃取液，真空减压回收溶剂，得到流体状物质，40℃以下真空干燥得半成品；

（3）、将步骤（2）所得半成品用乙醇-水溶液完全溶解，与大孔树脂D101混合，吸收充分后，上柱，以乙醇-水溶液为洗脱液，进行梯度洗脱或等度分段洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，使用丙酮与石油醚的混合溶剂进行重结晶，得到氧化芪三酚晶体。

优选地，所述作为原料的桑枝为干燥的桑枝粉末。粉末大小可以为例如30~100目。

优选地，步骤（1）中，醇可以是甲醇、乙醇等常用于植物提取的醇，但优选为乙醇。所述提取可以在常温下进行。

优选地，步骤（2）中，所述真空干燥的温度为25℃~30℃。

优选地，在步骤（3）中，使用大孔树脂D101之前，对其进行预处理。预处理过程如下：先用一定量纯净水漂洗，再用95%（体积）乙醇浸泡12~36小时，然后用小流量的水淋洗，终点以流出的乙醇加水不显浑浊为标准，大量水洗净乙醇后，用2-3倍树脂体积的3-5wt%盐酸处理，水洗到接近中性，再用2-4倍树脂体积的3-5wt%的氢氧化钠处理，然后大量水洗至中性。

根据本发明的一个具体和优选方面，步骤（3）中，进行梯度洗脱，且将收集的氧化芪三酚质量分数为 40%~ 70%的洗脱液与收集的氧化芪三酚质量分数大于70%的洗脱液分别合并，浓缩，干燥以及重结晶。

根据本发明的又一具体和优选方面，步骤（3）中，进行等度分段洗脱，以10%的浓度差为一个间隔段，每段的洗脱体积为 2~3 个柱体积，洗脱液流速为 1~2 个柱体积/小时。

优选地，步骤（3）中进行重结晶时，向经过浓缩干燥后的洗脱液中，先加入纯丙酮，并加热至40℃~50℃，待溶解完全，匀速搅拌状态下加入分析纯石油醚，至溶液达到 1 ^o 浑浊状态，加热至40℃~55℃并在该温度下静置8~12小时后过滤，结晶体用丙酮与石油醚的混合溶剂至少洗涤 2 次，过滤，抽干，真空干燥，即得。

进一步优选地，前95% 石油醚加入速度为400~500ml/min，后5% 石油醚的加入速度为100 ~ 200ml/min。

优选地，步骤（3）中，加入的石油醚的温度为40℃~50℃。

优选地，步骤（3）中，重结晶时所用丙酮与石油醚的体积比为1:2~5。

进一步地，在步骤（3）中，向重结晶过程所产生的滤液中，加少许氧化芪三酚结晶，置室温以下静置，使重复析晶和过滤结晶，至结晶不再析出，过滤，得到高纯度的氧化芪三酚晶体。

根据本发明，步骤（1）中，醇水溶液的用量一般为桑枝的10~15倍（V/G）；步骤（3）中，丙酮的用量一般为洗脱液干重的8~12倍（V/G），结晶体真空干燥的温度为25℃~30℃，真空干燥时间为72~108小时。

由于以上技术方案的实施，本发明与现有技术相比具有如下优点：

（1）制备过程简单，易于操作；

（2）成本低廉，适合大规模生产，具有应用潜力。

具体实施方式

以下结合具体的实施例，对本发明做进一步详细的说明，但本发明不限于以下实施例。

以下实施例中氧化芪三酚的含量测定方法均采用液质联用。仪器：岛津 LCMS-2010 高效液相色谱－质谱联用仪。包括 2 台 LC-10ADvp 泵，FCV-10ALvp 四元低压梯度流路阀，DGU-14AM 线真空脱气机，CTO-10Avp 柱温箱，7725i 进样阀（Rheodyne，USA），SPD-M10Avp 二极管阵列检测器，质谱为 LCMS-2010 单级四极杆，电喷雾电离（ESI）离子源，数据采集和处理由 LCMS solution 2.02 软件完成。色谱柱为 Thermo Hypersil-Keystone （Bellefonte，PA，USA） C18 （5 μm，150×2.1 mm），柱温 40 ℃。流动相使用前经 0.22 μm 滤膜过滤并超声脱气，流速为 0.2 mL min-1。电喷雾电离（ESI），离子极性：positive ion （＋）；全离子扫描（SCAN），扫描范围：50-1000 （m/z）；探针（probe）温度：250 ℃（ESI）；曲型脱溶剂装置（CDL）温度：250 ℃（ESI＋）；加热块（block）温度200 ℃；曲型脱溶剂装置（CDL）电压：-45 V（ESI＋）；探针（probe）电压：4.5 kV（ESI＋）；检测电压 1.5 kV；Q-array 电压：DC 0V， RF 150V；雾化气体流速 2.5 L min-1（ESI）。紫外光谱扫描范围为 200 到 300 nm。

实施例1

一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其包括依次进行的下列步骤：

（1）、桑枝（湖南，黄鲁头老枝，氧化芪三酚含量1.1‰）阴凉处晾干（水分含量 10%），称取粉碎过筛（40 目）后的粉末 500kg，70% 乙醇-水溶液室温浸提 3 次（4000L×1、2500L×2、12hr×3，每 2hr 溶液循环/搅拌 10min），合并 3 次乙醇提取液，55℃真空减压浓缩至 100L 流体。

（2）、将步骤（1）所得100L流体用石油醚脱脂后，乙酸乙酯萃取 3次（100L×3），合并三次乙酸乙酯萃取液，真空减压回收溶剂，得到流体状物质，30℃下真空干燥，得到固体粉末 4.7kg，测其氧化芪三酚含量为 11.3%。

（3）、将步骤（2）所得固体粉末 6.5kg 加 35℃的30%乙醇水溶液，至完全溶解，与预处理（先用一定量纯净水漂洗，再用95%乙醇浸泡24小时，然后用小流量的水淋洗，终点以流出的乙醇加水不显浑浊为标准，大量水洗净乙醇后，用2-3倍树脂体积的3-5wt%盐酸处理，水洗到接近中性，再用2-4倍树脂体积的3-5wt%的氢氧化钠处理，然后大量水洗至中性）的大孔树脂D101混合，吸收充分，上柱；以乙醇-水溶液为洗脱液，进行梯度洗脱，收集氧化芪三酚质量分数 40% ~ 70% 的洗脱液，合并，浓缩，干燥，得310g粉末状的A洗脱组份；收集氧化芪三酚质量分数大于 70% 的洗脱液，合并浓缩，干燥，得500g粉末状的B洗脱组份；之后，对前述所得的A洗脱组份和B洗脱组份分别进行重结晶。重结晶过程如下：按洗脱组份干重计算，加入8~12倍量（V/G）的分析纯丙酮，加热至40~50℃，待溶解完全，匀速搅拌状态下加入体积为丙酮体积的3倍的分析纯石油醚，石油醚滴加速度为前 95% 石油醚加入速度约 400 ~ 500ml/min，后 5% 石油醚加入速度约100 ~ 200ml/min，滴加的石油醚的温度为约50℃，至溶液达到 1 ^o 浑浊状态，加热至 50℃，在该温度下静置 8 ~ 12 小时后，过滤，结晶体用 1 ~ 3 倍量丙酮-石油醚混合溶液至少洗涤 2 次，过滤，抽干，真空干燥 72小时，得氧化芪三酚晶体500克，经 HPLC 检测，氧化芪三酚含量为 97.5%。

实施例2

一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同实施例1，不同的是，在步骤（3）的重结晶过程中，全部石油醚以400 ~ 500ml/min的速率匀速加入。最后得到氧化芪三酚晶体487克，经 HPLC 检测，氧化芪三酚含量为97.5%。

实施例3

一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同实施例1，不同的是，步骤（3）洗脱采用的是等度分段洗脱，以 10% 的浓度差为一个间隔段，每段的洗脱体积为 2 个柱体积，洗脱液流速为 1 个柱体积/小时。最后得到氧化芪三酚晶体约500克，经 HPLC 检测，氧化芪三酚含量为 97.5%。

实施例4

一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同实施例1，不同的是，重结晶过程添加的石油醚与丙酮的体积比为2:1。最后得氧化芪三酚晶体490克，经 HPLC 检测，氧化芪三酚含量为 97.5%。

实施例5

一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其基本同实施例3，不同的是，重结晶过程添加的石油醚与丙酮的体积比为5:1。最后得氧化芪三酚晶体505克，经 HPLC 检测，氧化芪三酚含量为 97.5%。

以上对本发明做了详尽的描述，其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims

1. 一种从桑枝中提取氧化芪三酚的方法，其特征在于：以桑枝为原料，包括依次进行的如下步骤：

（1）、用醇体积含量为65%~75%的醇水溶液对桑枝进行提取，浓缩提取液，干燥，得粗提物；

2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述作为原料的桑枝为干燥的桑枝粉末。

3. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述的醇为乙醇，所述提取在常温下进行。

4. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（2）中，所述真空干燥的温度为25℃~30℃。

5. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，进行梯度洗脱，且将收集的氧化芪三酚质量分数为 40%~ 70% 的洗脱液与收集的氧化芪三酚质量分数大于 70% 的洗脱液分别合并，浓缩，干燥以及重结晶。

6. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，进行等度分段洗脱，以 10% 的浓度差为一个间隔段，每段的洗脱体积为 2~3 个柱体积，洗脱液流速为 1~2 个柱体积/小时。

7. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（3）中进行重结晶时，向经过浓缩干燥后的洗脱液中，先加入纯丙酮，并加热至40℃~50℃，待溶解完全，匀速搅拌状态下加入分析纯石油醚，至溶液达到 1^o浑浊状态，加热至40℃~55℃并在该温度下静置 8~12 小时后过滤，结晶体用丙酮与石油醚的混合溶剂至少洗涤 2 次，过滤，抽干，真空干燥，即得。

8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于：前95% 石油醚加入速度为400~500ml/min，后5% 石油醚的加入速度为100 ~ 200ml/min。

9. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，加入的石油醚的温度为40℃~50℃。

10. 根据权利要求1或7或8或9所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，重结晶时所用丙酮与石油醚的体积比为1:2~5。