CN101058597A

CN101058597A - 朱砂根皂苷单体的制备工艺

Info

Publication number: CN101058597A
Application number: CN 200710049252
Authority: CN
Inventors: 马明东; 蒲尚饶; 甄铧
Original assignee: Sichuan Agricultural University
Current assignee: Sichuan Agricultural University
Priority date: 2007-06-08
Filing date: 2007-06-08
Publication date: 2007-10-24

Abstract

本发明公开了一种以中药朱砂根为原料制备朱砂根皂苷单体的新工艺，本发明经过有机溶剂提取，水沉离心，大孔吸附树脂富集总皂苷，硅胶柱层析分离纯化和重结晶精制等步骤。由本发明制得的朱砂根皂苷纯度大于99％，可以作为朱砂根皂苷对照品及用于以朱砂根皂苷为有效成分的各种药物制剂。本发明朱砂根皂苷单体制备工艺收率高，产品质量稳定，生产成本低，工艺简便，适合工业化生产。

Description

朱砂根皂苷单体的制备工艺

技术领域

本发明涉及一种以中药朱砂根为原料制备朱砂根皂苷单体的新工艺。

背景技术

中国药典收载的朱砂根药材为紫金牛科紫金牛属植物(Ardisia crenata.)的干燥根。朱砂根药材具有清热解毒，散瘀止痛，抑制癌细胞增殖，直接杀伤癌细胞等功效。

朱砂根的主要化学成分有三萜皂苷，苯酚类和香豆素类。三萜类主要有朱砂根皂苷、朱砂根皂苷a和朱砂根皂苷b。其中朱砂根皂苷是朱砂根中的主要活性成分之一，是目前评价朱砂根质量及朱砂根制剂质量的重要指标性成分。朱砂根皂苷的分子结构式如图1所示。

朱砂根皂苷在朱砂根中含量为2～3％，但提取分离十分困难，这是朱砂根皂苷未能研制出单体制剂应用于临床的主要原因之一，有关朱砂根皂苷制备方法的文献报道较少，一篇是用大孔树脂制备朱砂根皂苷半成品的报道(尤晓宏等，朱砂根皂苷的提取，大连轻工业学院学报，2006，25(1)：23-25)，另一篇是朱砂根成分分析的报道(Wang Maotian，et al，Planta Med，1992，58：205)。另外中国专利ZL99105451.2公开了一种朱砂根及同属植物中三萜总皂苷及其制备方法，其制备工艺为：将朱砂根或同属植物根洗净，粉碎过20目筛，称取1公斤放入回流提取器内，加入10％～100％乙醇或甲醇，加热回流30～60分钟，滤出提取液，残渣按此方法再提取一遍，滤出提取液与第一次提取液合并，将合并提取液降压浓缩至1立升，离心25分钟倾出上清液，加入到4升大孔树脂柱上，先以清水冲洗25升，再以50％～100％乙醇洗脱20升并收集洗脱液，将洗脱液减压浓缩在1.5～1.6升，然后真空干燥，取出粉碎成细粉，加入细粉的10倍量85％～100％乙醇，搅拌溶解放置过夜，离心15分钟倾出上清液，减压浓缩至90～100ml，减压真空干燥，取出粉碎，得到朱砂根三萜总皂苷。该工艺所要解决的技术问题是如何生产朱砂根总皂苷(朱砂根中各种皂苷的混合物)，而不是制备朱砂根皂苷单体的工艺。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提供一种朱砂根皂苷单体的制备工艺，该制备工艺大大降低生产成本，且生产工艺简便，产品质量稳定，适合工业化大规模生产。

本发明所提出的技术问题是这样解决的：提供一种朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于：将朱砂根粉碎成粗粉，在多功能提取罐中，加50～90％的甲醇加热回流提取2～5次，每次提取60～180分钟，合并提取液，减压回收溶剂，将浓缩水液加入4～6倍原料重量体积的80～90℃左右的热水中，搅拌保温10～20分钟，静置12小时，离心，分出上清液。再将上清液上大孔树脂柱，上样流速为2～5BV/h，药液上完后，用3～10倍量树脂床体积的水洗涤，再以3～10倍量树脂床体积的70～95％甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回加收甲醇至适量，加入原料5～10％重的硅胶混匀，减压烘干得粗提物拌料，将拌料通过硅胶柱进行色谱柱层析，用有机混合液洗涤与洗脱，定量收集，TCL检测，收集合并合格部分，浓缩回收溶剂至适量体积(混合溶剂调整比例后可重复使用)，放置结晶，真空抽滤，晶体用乙醚洗涤，甲醇或乙醇重结晶一次即得朱砂根皂苷单体，产品含量大于99％。

按照本发明所提供的朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于，所述大孔树脂柱为非极性大孔树脂，可以是D101、HPD100、D140中的一种，树脂用量为药液的0.5～5倍。

按照本发明所提供的朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于，在进行色谱柱层析步骤中所用的洗脱剂为二氯甲烷、乙酸乙酯和醇的混合液，所用显色剂为10％硫酸乙醇液，加热显色。

按照本发明所提供的朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于，所述洗脱剂中二氯甲烷、乙酸乙酯和醇的体积比为4-2-1。

大孔吸附树脂是20世纪60年代发展起来的一类新型吸附剂，它是一类不含交换基团且具有大孔网状结构的高分子材料。其理化性质稳定，不溶于酸、碱及常用有机溶剂，对有机物的吸附选择性好，不受无机盐类、强离子及低分子化合物存在的影响。它的吸附作用是通过表面吸附、表面电性或形成氢键而达到。自问世以来，大孔吸附树脂已广泛应用于环保、化工、食品和医药等领域。大医药领域中大孔吸附树脂常用于富集、分离和纯化样品。

非极性大孔吸附树脂对朱砂根皂苷有很好的吸附选择性，通过大孔吸附树脂可以富集朱砂根皂苷，去除部分色素及糖类等杂质。

朱砂根皂苷在朱砂根中的含量在2～3％左右，但朱砂根中的三萜总皂苷类似物较多，难以分离纯化。通过硅胶柱色谱可以将其类似物分离，但硅胶柱色谱为正相色谱，而朱砂根皂苷易容于甲醇、乙醇、水等极性溶剂，难溶于氯仿、石油醚等弱极性溶剂。因此，采用拌料上柱，解决了朱砂根皂苷粗品在弱极性溶剂中溶解较差的问题，同时也避免了大规模制备中常见的堵柱现象。本发明的原理之一即是基于此，通过该工艺可以分离得到纯度大于99％的朱砂根皂苷单体，且大大提高朱砂根皂苷的收率。

本工艺优点：1、根据文献报道和申请人所做的一系列实验结果，朱砂根皂苷用甲醇或乙醇作溶剂回流提取比冷浸渍提取更为完全，因此收率比冷提要高许多，且大大缩短了制备时间；2、用离心沉降脱脂，避免了用有机溶剂脱脂常见的乳化，不易分层，生产成本高，设备安全条件高等不利于工业化操作的因素。同时大大降低了生产成本；3、用大孔吸附树脂富集皂苷，可以除去大部分杂质，洗脱浓缩后样品量大幅度减少，因此大大降低了硅胶柱色谱的工作量，同时也更有利于硅胶柱层析，降低生产成本；4、朱砂根皂苷的分离采用其它分离方法如反复萃取，反复结晶，虽然也能分离到朱砂根纯品，但收率很低，生产成本很高，所使用的有机溶剂又大多易燃易爆，毒性很强，不易操作，产品质量不稳定，很难适合工业化生产。采用硅胶柱色谱可使产品纯度达99％以上，大大降低生产成本，且生产工艺简便，产品质量稳定，适合工业化大规模生产，这是本工艺的最大优点。

附图说明

图1是朱砂根皂苷的分子结构图；

图2是本发明所提供的工作流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施1：

如图2所示，工作流程如下：取朱砂根药材10kg，粉碎成粗粉，在多功能提取罐中，加入80％甲醇加热回流提取3次，第一次120分钟，第二、三次各90分钟，合并提取液，减压回收溶剂，将浓缩水液加入4～6倍原料重量体积的80～90℃左右的热水中，搅拌保温10～20分钟，静置12小时，离心，分出上清液。再将上清液上大孔树脂柱(10kg)，上样流速为2～5BV/h，药液上完后，用3倍量树脂床体积的水洗涤，再以3倍量树脂床体积的90％甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回加收甲醇至适量，加入0.5kg硅胶混匀，减压烘干得粗提物拌料，将拌料通过硅胶柱进行色谱柱层析(硅胶为100～200目的粗孔硅胶，用量为4kg，层析柱1根，规格为150×1000)，用有机混合液洗涤与洗脱，定量收集，TCL检测(展开剂为二氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇＝4-2-1的混合液，显色剂为10％硫酸乙醇液，加热显色)，收集合并合格部分，浓缩回收溶剂至适量体积(混合溶剂调整比例后可重复使用)，放置结晶，真空抽滤，晶体用乙醚洗涤，甲醇或乙醇重结晶一次即得朱砂根皂苷单体160g，收率1.6％，产品中朱砂根皂苷含量99.2％。

实施例2：

取朱砂根药材20kg，粉碎成粗粉，在多功能提取罐中，加入90％甲醇加热回流提取3次，每次各90分钟，合并提取液，减压回收溶剂，将浓缩水液加入4～6倍原料重量体积的80～90℃左右的热水中，搅拌保温10～20分钟，静置12小时，离心，分出上清液。再将上清液上大孔树脂柱(20kg)，上样流速为2～5BV/h，药液上完后，用4倍量树脂床体积的水洗涤，再以4倍量树脂床体积的90％甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回加收甲醇至适量，加入1kg硅胶混匀，减压烘干得粗提物拌料，将拌料通过硅胶柱进行色谱柱层析(硅胶为100～200目的粗孔硅胶，用量为8kg，层析柱2根，规格为150×1000)，用有机混合液洗涤与洗脱，定量收集，TCL检测(展开剂为二氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇＝4-2-1的混合液，显色剂为10％硫酸乙醇液，加热显色)，收集合并合格部分，浓缩回收溶剂至适量体积(混合溶剂调整比例后可重复使用)，放置结晶，真空抽滤，晶体用乙醚洗涤，甲醇或乙醇重结晶一次即得朱砂根皂苷单体316g，收率1.58％，产品中朱砂根皂苷含量99.4％。

实施例3：

取朱砂根药材100kg，粉碎成粗粉，在多功能提取罐中，加入90％甲醇加热回流提取3次，第一次120分钟，第二、三次各90分钟，合并提取液，减压回收溶剂，将浓缩水液加入4～6倍原料重量体积的80～90℃左右的热水中，搅拌保温10～20分钟，静置12小时，离心，分出上清液。再将上清液上大孔树脂柱(100kg)，上样流速为2～5BV/h，药液上完后，用4倍量树脂床体积的水洗涤，再以5倍量树脂床体积的90％甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回加收甲醇至适量，加入5kg硅胶混匀，减压烘干得粗提物拌料，将拌料通过硅胶柱进行色谱柱层析(硅胶为100～200目的粗孔硅胶，用量为40kg，层析柱1根，规格为300×3000)，用有机混合液洗涤与洗脱，定量收集，TCL检测(展开剂为二氯甲烷—乙酸乙酯—甲醇＝4-2-1的混合液，显色剂为10％硫酸乙醇液，加热显色)，收集合并合格部分，浓缩回收溶剂至适量体积(混合溶剂调整比例后可重复使用)，放置结晶，真空抽滤，晶体用乙醚洗涤，甲醇或乙醇重结晶一次即得朱砂根皂苷单体1604g，收率1.6％，产品中朱砂根皂苷含量99.2％。

Claims

1、一种朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于：将朱砂根粉碎成粗粉，在多功能提取罐中，加50～90％的甲醇加热回流提取2～5次，每次提取60～180分钟，合并提取液，减压回收溶剂，将浓缩水液加入4～6倍原料重量体积的80～90℃左右的热水中，搅拌保温10～20分钟，静置12小时，离心，分出上清液，再将上清液上大孔树脂柱，上样流速为2～5BV/h，药液上完后，用3～10倍量树脂床体积的水洗涤，再以3～10倍量树脂床体积的70～95％甲醇洗脱，收集洗脱液，减压回加收甲醇至适量，加入原料5～10％重的硅胶混匀，减压烘干得粗提物拌料，将拌料通过硅胶柱进行色谱柱层析，用有机混合液洗涤与洗脱，定量收集，TCL检测，收集合并合格部分，浓缩回收溶剂至适量体积(混合溶剂调整比例后可重复使用)，放置结晶，真空抽滤，晶体用乙醚洗涤，甲醇或乙醇重结晶一次即得朱砂根皂苷单体，产品含量大于99％。

2、根据权利要求1所述的朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于，所述大孔树脂柱为非极性大孔树脂，可以是D101、HPD100、D140中的一种，树脂用量为药液的0.5～5倍。

3、根据权利要求1所述的朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于，在进行色谱柱层析步骤中所用的洗脱剂为二氯甲烷、乙酸乙酯和醇的混合液，所用显色剂为10％硫酸乙醇液，加热显色。

4、根据权利要求3所述的朱砂根皂苷单体的制备工艺，其特征在于，所述洗脱剂中二氯甲烷、乙酸乙酯和醇的重量比为4-2-1。