CN101270103B - 一种丹酚酸b的提取方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种丹酚酸B的提取方法，所述方法包括：(1)取丹参药材用30～60％乙醇溶液提取1～4次，合并提取液，回收乙醇至无醇味、挥去乙醇的提取液去除沉淀物，得到滤液；(2)滤液上大孔吸附树脂树脂，蒸馏水洗脱至洗脱液澄清后，再用20～50％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；(3)乙醇洗脱液于40～70℃下浓缩，干燥，得到含有丹酚酸B的粉末。本发明的有益效果主要提现在：工艺过程简单，工艺参数更合理，易于操作，且成本较低，所得到粉末中丹酚酸B含量可达60％以上，得率在3％以上，有效地利用了丹参药材；所得丹酚酸B的提取物粉末加入一些常用辅料，经过简单工艺就可以制成胶囊剂、片剂等一些固体制剂，适宜工业化大规模生产。

Description

一种丹酚酸B的提取方法

(一)技术领域

本发明涉及一种中药丹参中丹酚酸B的提取方法。

(二)背景技术

中药丹参具有活血祛瘀、凉血消痈、清心除烦的功效。现代药理学研究表明，丹参能扩张冠状动脉、加血流量、抗心肌缺血、改善微循环、降低心肌耗氧量、改善心功能、降血压、降血脂、抗凝血、抗血栓、保肝、调节免疫等诸多功效。随着对丹参研究的深入，发现丹参中水溶性成分才是主要的活性成分，其中又以酚酸类成分活性最大，特别是丹酚酸A和丹酚酸B。由于丹酚酸A在丹参水溶性成分中所占含量很少，而丹酚酸B在丹参水溶性成分中含量很高，因此最大程度地从丹参中提取出丹酚酸B的量以及提高在提取物中丹酚酸B的含量才是真正有效地利用了丹参。

从目前公开的文献来看，对丹参大多采用水提取的方法。对于水溶性成分来说采用水提取是毫无疑问的，但对于丹酚酸B来说，水提取并不是最佳的提取方法。采用一定浓度的乙醇提取可以提取出比水提取更多的丹酚酸B的量，原因是丹酚酸B对热敏感，水提取时的高温将对已经提取出的丹酚酸B产生一定的破坏，使之分解。而一定浓度的醇提时温度低于水提取时的温度，因此对丹酚酸B带来的破坏则小很多。对于大于60℃，小于100℃的水提取则不能很好的提取出丹酚酸B。这几种提取情况可见图1～图6。对于丹参采用60℃以上的高浓度的乙醇提取则会带来过多的脂溶性成分，不利于丹酚酸B的纯化。

对于丹酚酸B的纯化，目前大多采用柱层析的方法，上大孔树脂或聚酰胺。对于丹参水提取还可采用调酸或醇沉的方法在上柱之前预处理，调酸和醇沉的确有可取之处，可以使杂质沉淀，但同时也损失了相当一部分丹酚酸B，因为在沉淀的过程中有一定量的丹酚酸B也沉淀了。如果过高的追求丹酚酸B的含量而采用两次柱层析或采用凝胶、柱色谱分离的方法制也不可取，前者大大减低了得率，后者则不适合大规模生产。

(三)发明内容

本发明目的是针对目前技术存在的缺陷和不足，提供一种更加合理有效的丹酚酸B的提取方法。

本发明采用的技术方案是：

一种丹酚酸B的提取方法，所述方法包括：

(1)取丹参药材用6～10倍质量的30～60％乙醇溶液提取1～4次，合并提取液，于40～70℃下回收乙醇至无醇味、挥去乙醇的提取液去除沉淀物，得到滤液；

(2)滤液上大孔吸附树脂树脂，蒸馏水洗脱至洗脱液澄清后，再用20～50％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；

(3)乙醇洗脱液于40～70℃下浓缩，干燥，得到含有丹酚酸B的粉末。

在上述步骤中，所述大孔吸附树脂树脂推荐D101-I大孔树脂或D1400大孔树脂。

步骤(1)中采用30％～60％乙醇提取2～3次，优选40％～50％乙醇提取，原因是40％～50％的提取出的丹B的量最多且含有脂溶性成分相对于60％乙醇提取来说较少一点。更为优选的，所述步骤(1)中以50％乙醇溶液提取。

步骤(1)中在40℃～70℃减压回收乙醇至无醇味，优选50℃～60℃，60℃以下对丹酚酸B影响很小，在减压回收乙醇这段时间内基本不会被分解破坏。

步骤(2)中采用20％～50％乙醇洗脱，洗脱终点判断方法：洗脱液加三氯化铁试剂无反应或洗脱液为3～5个柱体积，优选30％乙醇洗脱4个柱体积，用小于30％乙醇的洗脱需要较大的洗脱溶剂用量，大于30％乙醇洗脱则会带来较多的脂溶性成分，30％乙醇洗脱4个柱体积后丹酚酸B已绝大部分被洗脱，4个柱体积是最佳溶剂用量，所采用大孔树脂型号可采用本领域常见用于丹酚酸B提纯的大孔吸附树脂型号，本发明中优选为D101-I，D1400。

步骤(3)中在40℃～70℃减压浓缩，优选50℃～60℃，因为此温度对丹酚酸B影响甚小，在减压浓缩这段时间内基本不会被分解破坏。

通过本发明制备丹酚酸B的方法制得的提取物粉末中丹酚酸B的含量大于60％，且得率在3％以上。

优选的，所述步骤(1)中丹参药材用6～10倍质量的30～60％乙醇溶液提取2～3次，合并提取液再进行乙醇回收。

优选的，所述方法如下：

(1)取丹参药材用8倍质量的50％乙醇溶液提取2～3次，合并提取液，于50～60℃下回收乙醇至无醇味，离心或者过滤去除沉淀物，得到滤液；

(2)滤液上大孔吸附树脂树脂D101-I或D1400，先用蒸馏水洗脱至洗脱液澄清，再用3～5个柱体积的30％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；

(3)乙醇洗脱液于50～60℃下减压浓缩得浸膏，浸膏经干燥得含有丹酚酸B的粉末。

按照本发明方法获得的含丹酚酸B提取物可直接和辅料以1∶1的组合制成固体制剂，如片剂、胶囊剂等。辅料包括淀粉、微晶纤维素、微粉硅胶、交联羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁。

提取物和辅料以1∶1的用量组合混合均匀后，可采用胶囊填充机制成胶囊剂，也可采用粉末直接压片的方法制成片剂，采用粉末直接压片的方法优于传统的湿法制颗粒再压片，体现在：传统的湿法制颗粒再压片所使用的辅料量较大，在保证丹酚酸B含量的情况下需要做成较大的片子或增加服用片数，这些都不利于患者服用，且片子外观颜色较深，色差明显，不利于包衣做成薄膜衣片。而粉末直接压片不仅缩短工艺过程，降低成本，更有利于生产控制，且压出的片子外观光洁，颜色较淡，更有利于包衣做成薄膜衣片。

本发明的有益效果主要提现在：工艺过程简单，工艺参数更合理，易于操作，且成本较低，所得到粉末中丹酚酸B含量可达60％以上，得率在3％以上；得率对目前其他丹酚酸B制备方法来说较高，可以说是有效地利用了丹参药材。所得丹酚酸B的提取物粉末加入一些常用辅料，经过简单工艺就可以制成胶囊剂、片剂等一些固体制剂，适宜工业化大规模生产。

(四)附图说明

图1为丹参药材60℃水提取第一煎药液中丹酚酸B的含量色谱图；

图2为丹参药材60℃水提取第二煎药液中丹酚酸B的含量色谱图；

图3为丹参药材100℃水提取第一煎药液中丹酚酸B的含量色谱图；

图4为丹参药材100℃水提取第二煎药液中丹酚酸B的含量色谱图；

图5为丹参药材50％乙醇提取第一煎药液中丹酚酸B的含量色谱图；

图6为丹参药材50％乙醇提取第二煎药液中丹酚酸B的含量色谱图；

图7为实施例1中丹酚酸B含量测定色谱图；

图8为实施例2中丹酚酸B含量测定色谱图；

图9为实施例3中丹酚酸B含量测定色谱图；

图10为实施例4中丹酚酸B含量测定色谱图；

图11为实施例5中丹酚酸B含量测定色谱图；

图12为实施例6中丹酚酸B含量测定色谱图；

图13为丹酚酸B对照品色谱图。

(五)具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：

丹酚酸B含量检测方法：

照高效液相色谱法测定

仪器名称：agilent1100高效液相色谱仪

色谱柱：zorbax SB-C18

流动相：5％(v/v)醋酸溶液-乙腈(82∶18，v∶v)

流速：1.0ml/min

检测波长：285nm

柱温：25℃

对照品溶液的制备：精密称取60℃减压真空干燥5小时的丹酚酸B对照品适量，加水溶解制成11.2ug/mg的溶液，过滤。

供试品溶液的制备：取含丹酚酸B的提取物粉末0.1g，精密称定，置于50ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀。精密吸取2ml至25ml的容量瓶中，加水至刻度，摇匀，过滤。

对照品溶液和供试品溶液各进样20ul，测定。

实施例1：

取丹参药材50kg，加8倍质量50％乙醇提取2次，每次2小时，合并提取液。在60℃下减压回收乙醇至无醇味。用离心机离心去除沉淀，上D101-I大孔树脂，用水洗脱至水洗液无糖反应后，用30％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液在60℃以下减压浓缩至浸膏，喷雾干燥，得1.94kg黄色粉末，其中丹酚酸B含量64.9％(图7)，得率为3.88％。

实施例2：

取丹参药材50kg，加8倍质量40％乙醇提取2次，每次2小时，合并提取液。在60℃下减压回收乙醇至无醇味。用离心机离心去除沉淀，上D1400大孔树脂，用水洗脱至水洗液无糖反应后，用30％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液在60℃以下减压浓缩至浸膏，喷雾干燥，得2.01kg黄色粉末，其中丹酚酸B含量64.2％(图8)，得率为4％。

实施例3：

取丹参药材50kg，加8倍质量50％乙醇提取2次，每次2小时，合并提取液。在60℃下减压回收乙醇至无醇味。用离心机离心去除沉淀，上D1400大孔树脂，用水洗脱至水洗液无糖反应后，用30％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液在60℃以下减压浓缩至浸膏，喷雾干燥，得1.6kg黄色粉末，其中丹酚酸B含量67.5％(图9)，得率为3.2％。

实施例4：

取丹参药材50kg，加8倍质量50％乙醇提取2次，每次2小时，合并提取液。在60℃下减压回收乙醇至无醇味。用离心机离心去除沉淀，上D1400大孔树脂，用水洗脱至水洗液无糖反应后，用40％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液在60℃以下减压浓缩至浸膏，喷雾干燥，得1.82kg黄色粉末，其中丹酚酸B含量63.8％(图10)，得率为3.88％。

实施例5：

取丹参药材50kg，加8倍质量60％乙醇提取2次，每次2小时，合并提取液。在60℃下减压回收乙醇至无醇味。用离心机离心去除沉淀，上D101-I大孔树脂，用水洗脱至水洗液无糖反应后，用30％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液在60℃以下减压浓缩至浸膏，喷雾干燥，得1.54kg黄色粉末，其中丹酚酸B含量64％(图11)，得率为3.08％。

实施例6：

取丹参药材50kg，加8倍质量60％乙醇提取2次，每次2小时，合并提取液。在60℃下减压回收乙醇至无醇味。用离心机离心去除沉淀，上D1400大孔树脂，用水洗脱至水洗液无糖反应后，用40％乙醇洗脱4个柱体积，收集洗脱液在60℃以下减压浓缩至浸膏，喷雾干燥，得1.66kg黄色粉末，其中丹酚酸B含量60.5％(图12)，得率为3.32％。

实施例7(对比例)：

取丹参药材50kg，加8倍质量水60℃下提取2次，每次2小时，分别取第一煎药液和第二煎药液测定丹酚酸B，第一煎药液中含有丹酚酸B0.769kg(图1)，第二煎药液中含有丹酚酸B0.662kg(图2)。

取丹参药材50kg，加8倍质量水100℃下提取2次，每次2小时，分别取第一煎药液和第二煎药液测定丹酚酸B，第一煎药液中含有丹酚酸B1.17kg(图3)，第二煎药液中含有丹酚酸B0.462kg(图4)。

取丹参药材50kg，加8倍质量50％乙醇提取2次，每次2小时，分别取第一煎药液和第二煎药液测定丹酚酸B，第一煎药液中含有丹酚酸B1.454kg(图5)，第二煎药液中含有丹酚酸B0.704kg(图6)。

实施例8：

含丹酚酸B提取物的片剂制备

取实施例1丹酚酸B提取物1000g，加入淀粉400g，微晶纤维素400g，交联羧甲基纤维素钠100g，微粉硅胶90g，硬脂酸镁10g，充分混匀后压片，压出每片重0.2g的片子10000片，外观光洁，颜色较淡，有利于包衣做成薄膜衣片。

实施例9：

含丹酚酸B提取物的片剂制备

取实施例2丹酚酸B提取物1000g，加入淀粉450g，微晶纤维素450g，微粉硅胶90g，硬脂酸镁10g，充分混匀后压片，压出每片重0.2g的片子10000片，外观光洁，颜色较淡，有利于包衣做成薄膜衣片。

实施例10：

含丹酚酸B提取物的胶囊剂的制备

取实施例3丹酚酸B提取物1000g，加入淀粉450g，微晶纤维素450g，微粉硅胶100g，充分混匀后灌胶囊，制成每粒重0.2g的胶囊10000粒。

Claims (4)

1.一种丹酚酸B的提取方法，所述方法包括：

(1)取丹参药材用6～10倍质量的50％乙醇溶液提取1～4次，合并提取液，于40～70℃下回收乙醇至无醇味、挥去乙醇的提取液去除沉淀物，得到滤液；

(2)滤液上大孔吸附树脂树脂，蒸馏水洗脱至洗脱液澄清后，再用30％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；所述大孔吸附树脂树脂为D101-I大孔树脂或D1400大孔树脂；

(3)乙醇洗脱液于40～70℃下浓缩，干燥，得到含有丹酚酸B的粉末。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中于50～60℃下回收乙醇。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(3)中乙醇洗脱液于50～60℃下减压浓缩。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法如下：

(1)取丹参药材用8倍质量的50％乙醇溶液提取2～3次，合并提取液，于50～60℃下回收乙醇至无醇味，离心或者过滤去除沉淀物，得到滤液；

(2)滤液上大孔吸附树脂树脂D101-I或D1400，先用蒸馏水洗脱至洗脱液澄清，再用3～5个柱体积的30％乙醇溶液洗脱，收集乙醇洗脱液；

(3)乙醇洗脱液于50～60℃下减压浓缩得浸膏，浸膏经干燥得含有丹酚酸B的粉末。

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