CN102212091A - 一种高纯度栀子苷及其制剂的制备及临床应用 - Google Patents

Abstract

栀子是茜草科植物栀子的干燥成熟果实，它作为中药具有护肝、利胆、降压、清热、利寒、止泻等功能。栀子苷是从茜草科植物栀子的干燥成熟果实中运用高科技生产工艺提取精制而成的产品，为环烯醚萜苷类化合物。栀子苷用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病。目前，从栀子中提取栀子苷、栀子色素方法的报道很多，但存在很多问题，如产品中杂质含量偏高，无法满足国内外客户的要求；生产成本较高，收率低，经济效益较差；不适合工业化生产等。本发明解决了上述问题，从栀子中提取纯化得到高纯度的栀子苷，并制成适宜的制剂，如片剂、胶囊、颗粒等、注射液、粉针剂、大输液等，应用于临床，用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病。

Description

一种高纯度栀子苷及其制剂的制备及临床应用

一、技术领域

本发明属一种高纯度栀子苷及其制剂的制备及临床应用。

二、背景技术

栀子是茜草科植物栀子(Gardenia jasminoides Ellis)的干燥成熟果实，它作为中药具有护肝、利胆、降压、清热、利寒、止泻等功能。

栀子苷是从茜草科植物栀子的干燥成熟果实中运用高科技生产工艺提取精制而成的产品，为环烯醚萜苷类化合物。栀子苷有多种用途，是用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病的原料药物。

目前，从栀子中提取栀子色素、栀子苷方法的报道很多，但存在很多问题，如产品中杂质含量偏高，无法满足国内外客户的要求；生产成本较高，收率低，经济效益较差；不适合工业化生产等。

因此，从栀子中提取纯化得到高纯度的栀子苷，并制成适宜的制剂，如口服制剂(片剂、胶囊、颗粒等)、注射剂(注射液、粉针剂、大输液等)，应用于临床，用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病。

三、发明内容

1、一种高纯度栀子苷的提取纯化方法

(1)、栀子的粗提

取栀子，粉碎成粗粉，以40％乙醇渗漉，收集渗漉液，浓缩至体积与药材重量1∶1，抽滤，即得。栀子苷提取率90％左右。栀子黄用紫外初步得出提取率为90％左右。

经采用温浸(温度50度，温浸二次，第一次6倍量水，时间2小时，第二次4倍量水，时间1小时)对不同浓度的乙醇(30％，40％，50％，60％)发现40％的乙醇提取时，栀子苷和栀子黄收得量最高。以40％乙醇为溶剂，采用渗漉法对药材粉末进行渗漉，结果表明渗漉法与温浸法两种方法提取，所得两种成份收率无显著性差别，但渗漉法所用溶剂相对较少，成本稍低，因此采用渗漉法进行提取。

(2)、栀子苷和栀子黄的分离

取上述溶液与干树脂比以1∶2至1.5∶2上已处理好的AB-8大孔树脂柱，控制流速0.5-0.8ml/min，使栀子黄和栀子苷充分吸附，再以5倍溶液体积的水洗脱，弃去洗脱液，以5倍30％乙醇继续洗脱，收集洗脱液(为栀子苷组份)。将收集的30％乙醇洗脱液浓缩，干燥，研细，得栀子苷粗品(栀子苷含量60％以上)。或浓缩成与上样前相同体积的溶液，备用。

采用不同型号的大孔树脂(AB-8、D101，NKA-9，D301R)对样品溶液进行洗脱，结果发现，仅AB-8型大孔树脂可同时对栀子黄和栀子苷进行吸附，且吸附容量最大，以5倍以上的水进行洗脱均不能使栀子苷和栀子黄泄漏，而5倍量的水基本使样品溶液中多糖、部分绿原酸及大量的水溶性杂质洗掉，吸附在树脂上的主要剩下栀子黄、栀子苷和部分绿原酸，为下一步的分离提供了极大的方便。

实验表明，用30％乙醇可使柱上的栀子苷基本洗脱下来，而大量栀子黄还吸附在柱上，如果以20％的乙醇先洗脱，收集洗脱液可得到杂质较多的栀子苷(50％左右)，再以30％乙醇洗脱，所得栀子苷纯度更高(60％以上)，其中含少量绿原酸。

(3)、栀子黄的制备

2中30％乙醇洗脱后，以3倍样品溶液体积的0.5％氢氧化钠溶液洗脱，继续用水洗脱至洗脱液呈中性，弃去洗脱液，用4倍95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，真空干燥即得栀子黄，色价＞250、OD＜0.8。

以3倍溶液0.5％氢氧化钠溶液洗脱是为了除去吸附在柱上的绿原酸，洗后栀子黄中绿原酸含量极少。栀子黄作为副产品可用作食品添加剂、色素等。

(4)、大孔树脂的再生

将3中大孔树脂柱继续用乙醇洗脱至洗脱液几近无色，即可，下次使用前再用5倍以上水洗脱至几近无色。

(5)、栀子苷的初步精制

将2中所述细粉加适量水溶解，使体积与相应药材比例为1∶1，或2中溶液，上已处理好的AB-8大孔树脂柱，控制流速0.5-0.8ml/min，使栀子苷充分吸附，再以2倍溶液体积的水洗脱，弃去洗脱液，以3倍溶液0.25％氢氧化钠溶液洗脱，继续用水洗脱至洗脱液呈中性，弃去洗脱液，以30％乙醇继续洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，得栀子苷，含量达80％以上。

继续用4倍95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，即得栀子黄，色价＞300、OD＜0.4。

(5)、栀子苷的再次精制

取2或4中栀子苷粉，加入50倍的丙酮加热使栀子苷充分溶解，趁热过滤，取滤液回收丙酮并浓缩至1∶5，冷藏，有结晶析出，过滤，干燥，即得栀子苷纯品，含量95％以上。

(6)监控方法

A、高效液相色谱法

色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为真充剂，乙腈-水(12∶88)为流动相，检测波长238nm。

对照品溶液的配制：取栀子苷对照品，加水制成50ug/ml的溶液作为对照品溶液；供试品溶液的配制：取供试品溶液加水适当稀释成与对照品溶液相当的溶液，即得。分别取对照品溶液和供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，即得。

此方法可检测栀子苷的含量和栀子黄中含栀子苷的量。并可对洗脱过程进行全程监控，以确定栀子苷是否洗脱下来及洗脱终点的判断。

B、紫外分光光度法

取待测溶液用水适当稀释后在200-500nm处进行扫描，即得，根据栀子黄、栀子苷、绿原酸的最大吸收波长处(440、238、327)的吸收值比确定栀子黄洗脱程度。

2、栀子苷制成的制剂有片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、注射液，大输液、冻干针。

I、栀子苷制成的注射液(注射用浓溶液)

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入等渗调节剂，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至200ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装制成的注射液(注射用浓溶液)。

II、栀子苷加适量辅料制成的注射液(大输液)

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入等渗调节剂，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至10000ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装制成的注射液(大输液)。

III、栀子苷加适量辅料制成的粉针(冻干针)

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，加入填充剂，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至200ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装，冻干制成的注射剂(冻干针)。

IV、栀子苷制成的粉针(粉末分装)

(I)、干燥后分装

①处方

栀子苷20g

溶剂适量

                        

共制成100瓶

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，经或不经活性炭脱色、除热原，经微孔滤膜过滤，冻干或喷雾干燥，制成的无菌粉，将无菌粉按剂量无菌分装，制成的注射剂(粉针)。

(II)、直接粉末分装

栀子苷不加入或加入填充剂，混匀后进行无菌分装制成的粉针。

V、栀子苷加适量辅料制成的口服液

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入矫味剂及防腐剂适量，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至1000ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装制成的口服液。

VI、栀子苷加适量辅料制成固体制剂(片剂、胶囊、颗粒剂等)

①处方

栀子苷加中加入崩解剂、稀释剂、矫味剂中的一种或数种，混匀，加入粘合剂制软材，干燥后，整粒分装成颗粒剂；或加入润滑剂制成胶囊；或压片制成片剂。

3、栀子苷制成的制剂时所用的辅料

①配制样品的溶剂

配制样品的溶剂可以是水、乙醇、注射用油中至少一种；

②pH调节剂

pH调节剂可以是氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、依地酸钠、枸橼酸钠、碳酸钾、磷酸二氢钾(钠)、磷酸氢二钾(钠)、依地酸、盐酸、枸橼酸、门冬氨酸、葡萄糖酸、硫酸、硝酸、磷酸、亚硫酸中至少一种。

③填充剂

填充剂可以是右旋糖酐、环糊精类、甘露醇、山梨醇、氯化钠、葡萄糖、乳糖中至少一种。

④固体分散剂(崩解剂、稀释剂、矫味剂、粘合剂、润滑剂)

固体分散剂(崩解剂、稀释剂、矫味剂)可以是淀粉、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、食用香精中至少一种；粘合剂可以是水、淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮乙醇溶液中至少一种，润滑剂可以是硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉中至少一种。

④矫味剂

矫味剂可以上蔗糖、乳糖、木糖醇、阿司帕坦、甜菊素、安塞蜜等中的一种或数种。

⑤防腐剂

防腐剂可以是苯甲酸、苯甲酸钠、山梨醇等中的一种或数种。

4、栀子苷制成的制剂的临床应用

本栀子苷制成的制剂具有护肝、利胆、降压、清热、利寒、止泻等功能，应用于临床，用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病等疾病。

四、具体实施方式

实例1：

栀子苷的提取纯化

取栀子，粉碎成粗粉，以40％乙醇渗漉，收集渗漉液，浓缩至体积与药材重量1∶1，抽滤，即得。栀子苷提取率90％左右。栀子黄用紫外初步得出提取率为90％左右。

取上述溶液与干树脂比以1∶2至1.5∶2上已处理好的AB-8大孔树脂柱，控制流速0.5-0.8ml/min，使栀子黄和栀子苷充分吸附，再以5倍溶液体积的水洗脱，弃去洗脱液，以5倍30％乙醇继续洗脱，收集洗脱液(为栀子苷组份)。将收集的30％乙醇洗脱液浓缩，干燥，研细，得栀子苷粗品(栀子苷含量60％以上)。或浓缩成与上样前相同体积的溶液，备用。

取上述栀子苷粉，加入50倍的丙酮加热使栀子苷充分溶解，趁热过滤，取滤液回收丙酮并浓缩至1∶5，冷藏，有结晶析出，过滤，干燥，即得栀子苷纯品，含量95％以上。

实例2

注射用栀子苷的制备

①处方

②制备

取栀子苷加入适量水溶解，加入盐酸或氢氧化钠溶液调节pH值，3.5～9，加入甘露醇，经活性炭脱色、除热原，定容至200ml，经微孔滤膜过滤，无菌分装，冻干制成的注射剂(冻干针)。

实例3

①处方

栀子苷加中加入淀粉，羧甲淀粉钠，混匀，加入粘合剂制软材，干燥后，整粒；加入硬件脂酸镁适量混匀分装制成胶囊；或压片制成片剂。

Claims (4)

1.一种高纯度栀子苷的提取纯化方法

(1)、栀子的粗提

取栀子，粉碎成粗粉，以10-80％乙醇渗漉，收集渗漉液，浓缩至体积与药材重量1∶1-5∶1，抽滤，即得。或取栀子粉碎成粗粉，加1-20倍水加热煮沸提取，滤过，浓缩至体积与药材重量1∶1-5∶1，抽滤，即得。所用溶剂为乙醇、水、丙酮、乙酸乙酯等其中的一种或数种。

(2)、栀子苷和栀子黄的分离

取上述溶液与干树脂比以1∶2至1.5∶2上已处理好的AB-8大孔树脂柱，控制流速0.5-0.8ml/min，使栀子黄和栀子苷充分吸附，再以5倍溶液体积的水洗脱，弃去洗脱液，以5倍30％乙醇继续洗脱，收集洗脱液(为栀子苷组份)。将收集的30％乙醇洗脱液浓缩，干燥，研细，得栀子苷粗品(栀子苷含量60％以上)。或浓缩成与上样前相同体积的溶液，备用。所用树脂为大孔树脂，型号首选为AB-8，可以是D101；H103；DM11等。

(3)、栀子苷的初步精制

将2中所述细粉加适量水溶解，使体积与相应药材比例为1∶1，或2中溶液，上已处理好的AB-8大孔树脂柱，控制流速0.5-0.8ml/min，使栀子苷充分吸附，再以2倍溶液体积的水洗脱，弃去洗脱液，以3倍溶液0.25％氢氧化钠溶液洗脱，继续用水洗脱至洗脱液呈中性，弃去洗脱液，以30％乙醇继续洗脱，收集洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，得栀子苷，含量达80％以上。型号首选为AB-8，可以是D101；H103；DM11等。

继续用4倍95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，干燥，即得栀子黄，色价＞300、OD＜0.4。

(4)、栀子苷的再次精制

取2或4中栀子苷粉，加入50倍的丙酮加热使栀子苷充分溶解，趁热过滤，取滤液回收丙酮并浓缩至1∶5，冷藏，有结晶析出，过滤，干燥，即得栀子苷纯品，含量95％以上。精制溶剂首选丙酮，可以是乙酸乙酯、乙醇、甲醇等。

2.栀子苷制成的制剂有片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、注射液，大输液、冻干针。

I、栀子苷制成的注射液(注射用浓溶液)

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入等渗调节剂，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至100-1000ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装制成的注射液(注射用浓溶液)。

II、栀子苷加适量辅料制成的注射液(大输液)

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入等渗调节剂，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至5000-100000ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装制成的注射液(大输液)。

III、栀子苷加适量辅料制成的粉针(冻干针)

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，加入填充剂，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至100-1000ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装，冻干制成的注射剂(冻干针)。

IV、栀子苷制成的粉针(粉末分装)

(I)、干燥后分装

①处方

栀子苷  1-100g

溶剂    适量

                              

共制成  100瓶

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，经或不经活性炭脱色、除热原，经微孔滤膜过滤，冻干或喷雾干燥，制成的无菌粉，将无菌粉按剂量无菌分装，制成的注射剂(粉针)。

(II)、直接粉末分装

栀子苷不加入或加入填充剂，混匀后进行无菌分装制成的粉针。

V、栀子苷加适量辅料制成的口服液

①处方

②制备

取栀子苷加入适当溶剂溶解，加入矫味剂及防腐剂适量，加入酸或酸性盐或碱或碱性盐调节pH值，1.5～12，经或不经活性炭脱色、除热原，定容至1000ml，经微孔滤膜过滤，灭菌或无菌分装制成的口服液。

VI、栀子苷加适量辅料制成固体制剂(片剂、胶囊、颗粒剂等)

①处方

栀子苷加中加入崩解剂、稀释剂、矫味剂中的一种或数种，混匀，加入粘合剂制软材，干燥后，整粒分装成颗粒剂；或加入润滑剂制成胶囊；或压片制成片剂。

3.栀子苷制成的制剂时所用的辅料

①配制样品的溶剂

配制样品的溶剂可以是水、乙醇、注射用油中至少一种；

②pH调节剂

pH调节剂可以是氢氧化钠、氢氧化钾、氨水、碳酸钠、碳酸氢钠、依地酸钠、枸橼酸钠、碳酸钾、磷酸二氢钾(钠)、磷酸氢二钾(钠)、依地酸、盐酸、枸橼酸、门冬氨酸、葡萄糖酸、硫酸、硝酸、磷酸、亚硫酸中至少一种。

③填充剂

填充剂可以是右旋糖酐、环糊精类、甘露醇、山梨醇、氯化钠、葡萄糖、乳糖中至少一种。

④固体分散剂(崩解剂、稀释剂、矫味剂、粘合剂、润滑剂)

固体分散剂(崩解剂、稀释剂、矫味剂)可以是淀粉、羟丙甲纤维素、羟丙基纤维素、乳糖、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、食用香精中至少一种；粘合剂可以是水、淀粉浆、聚乙烯吡咯烷酮乙醇溶液中至少一种，润滑剂可以是硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉中至少一种。

④矫味剂

矫味剂可以上蔗糖、乳糖、木糖醇、阿司帕坦、甜菊素、安塞蜜等中的一种或数种。

⑤防腐剂

防腐剂可以是苯甲酸、苯甲酸钠、山梨醇等中的一种或数种。

4.栀子苷制成的制剂的临床应用

本栀子苷制成的制剂具有护肝、利胆、降压、清热、利寒、止泻等功能，应用于临床，用于治疗心脑血管、肝胆等疾病及糖尿病等疾病。