CN113264969B - 一种熟地黄中毛蕊花糖苷的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种熟地黄中毛蕊花糖苷的制备方法，包括提取、干燥、纯化，馏分收集和浓缩步骤，使用液相色谱柱对熟地黄提取物直接进行分离纯化，操作简单，转移率高，只需在相应时间收集洗脱液即可获取高纯度毛蕊花糖苷；大大降低了毛蕊花糖苷的提取难度，缩短制备时间，提高生产效率。
Description
技术领域
本发明属于植物提取物分析领域，具体涉及一种熟地黄中毛蕊花糖苷的制备方法。
背景技术
地黄(学名：Rehmannia glutinosa Libosch.)为玄参科地黄属多年生草本植物，生于海拔50～1100m的山坡及路旁荒地等处。根茎肉质，鲜时黄色，在栽培条件下，茎紫红色。叶片卵形至长椭圆形，叶脉在上面凹陷，花在茎顶部略排列成总状花序，花冠外紫红色，内黄紫色，药室矩圆形，蒴果卵形至长卵形，花果期4-7月。熟地黄为玄参科植物地黄或怀庆地黄的根茎，经加工蒸晒而成。不规则的块状，内外均呈漆黑色，外表皱缩不平。质柔软，断面滋润，中心部往往可看到光亮的油脂状块，粘性甚大，味甜。
熟地黄中主要含有环烯醚萜类成分、苯乙醇苷类、单萜、氨基酸、糖类、5-羟基野菰酸、琥珀酸、二羟基-β-紫罗兰酮、尿嘧啶等。现代研究证明具有促进造血、降血糖、增强记忆、增强免疫等作用，被广泛用于药品和保健食品中。
毛蕊花糖苷是苯乙醇苷类成分，现代研究证明苯乙醇苷类成分与熟地黄药理作用密切相关，目前的毛蕊花糖苷提取物主要通过加热提取、膜分离、树脂纯化、生物转化、化学催化等方法处理，这些方法有工艺复杂、操作不方便、周期长、效率低等缺点。
发明内容
本发明的目的在于，提出一种熟地黄中毛蕊花糖苷的制备方法，解决现有毛蕊花糖苷制备困难的问题。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种熟地黄中毛蕊花糖苷的制备方法，包括以下操作步骤：
提取：取熟地黄药材切成小块，加入乙醇后加热精选回流提取，粗滤后获得熟地黄提取液；
干燥：对熟地黄粗提液进行浓缩干燥，去除乙醇，得到熟地黄提取物；
纯化：向熟地黄提取物中加入乙腈溶解，过滤后使用倒入色谱柱进行洗脱；
洗脱液收集：收集相应时间的洗脱液，即得毛蕊花糖苷洗脱液；
浓缩：对毛蕊花糖苷洗脱液进行浓缩，即得毛蕊花糖苷。
优选的是，所述提取步骤中，乙醇浓度为85％-95％。
优选的是，所述提取步骤中，熟地黄药材质量(g)与乙醇体积(ml)比为：熟地黄药材质量(g)∶乙醇体积(ml)＝1∶16-18。
优选的是，所述提取步骤中的回流提取操作步骤为，在70℃～75℃下加热回流提取2-3次，每次1.8-2.2小时。
优选的是，所述纯化步骤中，熟地黄提取物中加入40-60倍量16％-18％乙腈进行超声溶解。
优选的是，所述纯化操作步骤中，使用C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.1％-0.2％乙酸，流速18-22mL/min，洗脱梯度如下：
| 时间(min) | 乙腈(％) | 0.1％-0.2％乙酸(％) |
| 0 | 5-10 | 90-95 |
| 8 | 20-25 | 75-80 |
| 16 | 40-45 | 55-60 |
| 20 | 50-56 | 44-50 |
| 40 | 90-99 | 1-10 |
优选的是，所述洗脱液收集步骤中，收集17.4-17.6min流出的洗脱液。
优选的是，所述浓缩步骤中，采用负压蒸发浓缩，温度为55-65℃。
本发明具有如下有益效果：
一、工艺简单，生产周期短：毛蕊花糖苷常规工艺，提取后需要先进行大孔树脂进行吸附除杂再进行后续处理。而本发明将熟地黄提取液直接浓缩干燥后上制备液相进行分离纯化，从而得到高纯度的毛蕊花糖苷，同时达到了简化工艺、缩短周期的目的。同时，液相溶剂体系采用单一有机溶剂(乙腈)，具有节约成本、速度快、效率高等特点
二、高转移率：毛蕊花糖苷常规工艺，需要将熟地黄提取液浓缩后经过大孔树脂纯化、高温灭酶等操作，毛蕊花糖苷损耗较大，而本发明将熟地黄提取液浓缩干燥后直接上高效制备液相进行分离纯化，提高了毛蕊花糖苷的转移率。
三、产物纯度高：熟地黄提取物经过高效制备液相分离纯化，得到高纯度的毛蕊花糖苷单体(纯度均大于99％)。
具体实施方式
实施例1
提取：取100g熟地黄药材，加85％乙醇提取3次，每次用量为1600mL，70℃下提取2小时，滤网粗滤，收集并合并滤液即得熟地黄提取液。
干燥：将上述熟地黄提取液55℃减压浓缩干燥，得到熟地黄提取物18g。
纯化：取干燥后的熟地黄提取物加入40倍量17％乙腈超声溶解，过微孔滤膜后倒入C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.1％乙酸按梯度洗脱，流速20mL/min，柱温38℃，洗脱梯度如下：
洗脱液收集：收集17.5-17.6min流出的洗脱液；
浓缩：将洗脱液减压真空浓缩干燥,温度为55℃，即得毛蕊花糖成品。
实施例2
提取：取100g熟地黄药材，加88％乙醇提取3次，每次用量为1700mL，73℃下提取2小时，滤网粗滤，收集并合并滤液即得熟地黄提取液。
干燥：将上述熟地黄提取液55℃减压浓缩干燥，得到熟地黄提取物18.6g。
纯化：取干燥后的熟地黄提取物加入50倍量17％乙腈超声溶解，过微孔滤膜后倒入C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.1％乙酸梯度洗脱，流速18mL/min，柱温35℃，洗脱梯度如下：
| 时间(min) | 乙腈(％) | 0.2％乙酸(％) |
| 0 | 7 | 93 |
| 8 | 22 | 78 |
| 16 | 42 | 58 |
| 20 | 52 | 48 |
| 40 | 92 | 8 |
洗脱液收集：收集17.4-17.5min流出的洗脱液；
浓缩：将洗脱液减压真空浓缩干燥,温度为55℃，即得毛蕊花糖成品。
实施例3
提取：取100g熟地黄药材，加88％乙醇提取3次，每次用量为1700mL，73℃下提取2小时，滤网粗滤，收集并合并滤液即得熟地黄提取液。
干燥：将上述熟地黄提取液55℃减压浓缩干燥，得到熟地黄提取物17.4g。
纯化：取干燥后的熟地黄提取物加入60倍量18％乙腈超声溶解，过微孔滤膜后倒入C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.1％乙酸梯度洗脱，流速22mL/min，柱温40℃，洗脱梯度如下：。
| 时间(min) | 乙腈(％) | 0.1％乙酸(％) |
| 0 | 10 | 90 |
| 8 | 25 | 75 |
| 16 | 45 | 55 |
| 20 | 56 | 44 |
| 40 | 99 | 1 |
洗脱液收集：收集17.4-17.5min流出的洗脱液；
浓缩：将洗脱液减压真空浓缩干燥,温度为65℃，即得毛蕊花糖成品。
对各实施例中的产品进行称量，测定纯度并计算产率，最终结果如表1
表1
| 样品 | 成品质量(mg) | 产率(％) | 纯度(％) |
| 实施例1 | 40 | 0.04 | 99.46 |
| 实施例2 | 35 | 0.035 | 99.34 |
| 实施例3 | 37 | 0.037 | 99.21 |
从各实施例的最终产物的纯度数据可以看出，使用本发明方法从熟地黄中提取出的毛蕊花糖苷纯度极高，几乎不含其它杂质。
Claims (2)
1.一种熟地黄中毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：包括以下操作步骤：
提取：取熟地黄药材切成小块，加入浓度为85％-95％的乙醇后加热精选回流提取，粗滤后获得熟地黄提取液；熟地黄药材质量与乙醇体积比为1∶16-18g/ml；在70℃～75℃下加热回流提取2-3次，每次1.8-2.2小时；
干燥：对熟地黄粗提液进行浓缩干燥，去除乙醇，得到熟地黄提取物；
纯化：向熟地黄提取物中加入40-60倍量16％-18％乙腈进行超声溶解，过滤后使用倒入色谱柱进行洗脱，使用C18反相色谱柱，流动相为乙腈—0.1％-0.2％乙酸，流速18-22mL/min，洗脱梯度如下：
；
洗脱液收集：收集17.4-17.6min流出的洗脱液，即得毛蕊花糖苷洗脱液；
浓缩：对毛蕊花糖苷洗脱液进行浓缩，即得毛蕊花糖苷。
2.根据权利要求1所述一种熟地黄中毛蕊花糖苷的制备方法，其特征在于：所述浓缩步骤中，采用负压蒸发浓缩，温度为55-65℃。
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| CN106065024A (zh) * | 2015-10-30 | 2016-11-02 | 浙江工业大学 | 一种从中药地黄中提取分离毛蕊花糖苷的方法 |
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