CN103435486A

CN103435486A - 一种制备高纯度金银花中绿原酸的新方法

Info

Publication number: CN103435486A
Application number: CN2013104127810A
Authority: CN
Inventors: 苏刘花
Original assignee: Nanjing Zelang Agricultural Development Co Ltd
Current assignee: Nanjing Zelang Agricultural Development Co Ltd
Priority date: 2013-09-12
Filing date: 2013-09-12
Publication date: 2013-12-11

Abstract

本发明属于药用植物有效成分的提取分离技术领域，公开了一种制备高纯度绿原酸的新方法，其特征是采用了超声波提取、酶解、超滤膜过滤、大孔吸附树脂纯化等手段，最大限度地将金银花中的绿原酸分离提取出来，结晶，得由HPLC法测定含量≥99%的绿原酸。与现有技术相比，本发明采用先进的提取工艺，方法简单、易行，绿原酸的损失少、产率高，能耗小。

Description

一种制备高纯度金银花中绿原酸的新方法

技术领域

本发明属于药用植物有效成分的提取分离技术领域，尤其是涉及一种以中药材金银花为原料，采用现代分离技术制备高纯度绿原酸的新方法。

背景技术

金银花，又名忍冬，为忍冬科忍冬属植物忍冬及同属植物干燥花蕾或带初开的花，具有清热解毒，凉散风热的功效，用于各种热性病，如身热、发疹、发斑、热毒疮痈、咽喉肿痛等症，药用历史悠久。绿原酸是金银花中主要活性成分，又名氯原酸、咖啡鞣酸、3-咖啡酰奎酸；系统名：1,3,4,5-四羟基环己烷羧酸-（3,4-二羟基肉桂酸酯）。为白色精细粉末，熔点208℃，易溶于乙醇及丙酮，极微溶于乙酸乙酯，难溶于三氯甲烷、乙醚、苯等亲酯性有机溶剂。具有消除自由基、抗菌消炎、抗病毒、降糖、降压等多种功效，广泛应用于医药、日用化工、食品等领域。我国金银花资源丰富，北起东三省，南到广东、海南，东从山东，西到喜马拉雅山均有分布，故农谚讲：“涝死庄稼旱死草，冻死石榴晒伤瓜，不会影响金银花。”因此，以金银花为原料提取绿原酸具有广阔的开发前景。绿原酸的结构如下：

目前，制备绿原酸的方法主要采用常规提取法：水提、水提醇沉、稀醇提取、超临界萃取和大孔树脂柱吸附法等，这些方法均有许多不足之处，如水提法虽然提取较完全，但是需要加热，耗时较长，而且需要浓缩沉淀去杂等过程，在此过程中绿原酸损失较大；超临界流体萃取法费用较高，不利于工业化生产。而超声波提取法是一种物理破碎过程，利用超声波辐射压强产生强烈空化效应，使组织中细胞破裂，以利于溶剂浸透到植物细胞内部，从而使黄芪中的黄芪甲苷成分溶于溶剂之中。这种方法具有所需设备简单、操作方便、提取时间短、提取率高、无需加热、成本低廉等优点。

发明内容

本发明目的在于提供一种利用超声波辅助提取高纯度绿原酸的方法。该方法溶剂的用量少、提取时间短、工艺简单、无污染、产率高。

本发明包括以下步骤：

1.将金银花去杂、去霉变、清洁和晒干、粉碎，在金银花中加入一定量的30%～50%的乙醇，在30～50℃下超声波辅助提取20min～40min，反复提取2～4次，过滤，浓缩；

2.上述浓缩液加水溶解，调节PH值1～4加生物酶酶解，将酶处理后的混合物用高速离心机过滤，滤出滤液；滤液用其重量2%～4%倍的活性炭脱色，得到脱色后的滤液；

3.将脱色后的滤液进行超滤膜分离，超滤膜的膜分子量为10000～12000，控制流速5～10mL/min，并用蒸馏水进行洗滤，合并滤液，减压浓缩；

4.将浓缩液用乙醇溶解，上树脂柱，水洗，再用一定量的30%～50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥，得白色结晶粉末。

步骤2中生物酶可选纤维素酶、外切葡聚糖酶和β-葡聚糖苷酶中的一种，添加量为原料的0.15%～0.25%倍，酶解温度为30℃～50℃，时间60～80min，调节pH的酸可选盐酸和硫酸等。

步骤3中所用大孔吸附树脂型号可选D-101、SPD-100、SP-700和AB-8等。

本发明方法提取制备的绿原酸其纯度可达99%以上，提取总时间比一般的提取制备方法节约50%～60%的时间。

为了更好的理解本发明，下面对本发明的创新点说明如下：

超声波是一种高频率的机械波，超声场主要通过超声空化向体系提供能量。频率范围在15～60kHz。其原理主要是利用超声的空化作用对细胞膜的破坏，有助于有效成分的溶出与释放，超声波使提取液不断震荡，有助于溶质扩散，同时超声波的热效应使水温基本在57℃，对原料有水浴作用。因此，本发明采用超声波辅助提取金银花中的有效成分绿原酸，可以最大限度的使其溶出，提高产品的收率。

本发明制备的绿原酸颜色浅、纯度高，制备方法具有简单、时间短、溶剂用量少、产品质量稳定的特点。

具体实施方式：

下面结合具体实施案例对本发明做进一步的说明

实施例1：取预处理后的金银花1kg，置于超声波提取设备中，加入30%乙醇8L，在40℃下提取3次，每次20min，合并提取液，减压回收乙醇后，加水稀释，用稀盐酸调节PH值为3，加入0.2%倍的纤维素酶，混匀后30℃浸提60min，过滤滤液用其重量2%的活性炭脱色，得到脱色后的滤液；将脱色后的滤液用分子量为10000的超滤膜分离，控制流速5mL/min，并用蒸馏水进行洗滤，合并滤液，减压浓缩；将浓缩液用乙醇溶解，直接加入AB-8大孔吸附树脂柱，以8L的去离子水洗脱，再以30%乙醇5L进行洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥，得白色结晶粉末。经HPLC检测，其纯度为99.2%。

实施例2：取预处理后的金银花1kg，置于超声波提取设备中，加入50%乙醇10L，在30℃下提取4次，每次40min，合并提取液，减压回收乙醇后，加水稀释，用稀盐酸调节PH值为2，加入0.25%倍的外切葡聚糖酶，混匀后40℃浸提80min，过滤滤液用其重量3%的活性炭脱色，得到脱色后的滤液；将脱色后的滤液用分子量为12000的超滤膜分离，控制流速8mL/min，并用蒸馏水进行洗滤，合并滤液，减压浓缩；将浓缩液用乙醇溶解，直接加入AB-8大孔吸附树脂柱，以10L的去离子水洗脱，再以40%乙醇6L进行洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥，得白色结晶粉末。经HPLC检测，其纯度为99.1%。

实施例3：取预处理后的金银花1kg，置于超声波提取设备中，加入40%乙醇9L，在50℃下提取2次，每次30min，合并提取液，减压回收乙醇后，加水稀释，用稀盐酸调节PH值为4，加入0.15%倍的纤维素酶，混匀后50℃浸提70min，过滤滤液用其重量4%的活性炭脱色，得到脱色后的滤液；将脱色后的滤液用分子量为11000的超滤膜分离，控制流速10mL/min，并用蒸馏水进行洗滤，合并滤液，减压浓缩；将浓缩液用乙醇溶解，直接加入AB-8大孔吸附树脂柱，以9L的去离子水洗脱，再以50%乙醇7L进行洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥，得白色结晶粉末。经HPLC检测，其纯度为99.3%。

Claims

1.一种从药用植物金银花中制备高纯度绿原酸的方法，该方法包括以下步骤、：

（1）取金银花药材，预处理，用一定量的30%～50%的乙醇，在30～50℃下超声波辅助提取20min～40min，反复提取2～4次，过滤，将滤液浓缩后冷藏；

（2）上述浓缩液加水溶解，调节PH值1～4加生物酶酶解，将酶处理后的混合物用高速离心机过滤，滤出滤液，滤液用其重量2%～4%倍的活性炭脱色，得到脱色后的浓缩液；

（3）将脱色后的滤液进行超滤膜分离，控制流速5～10mL/min，并用蒸馏水进行洗滤，合并滤液，减压浓缩；

（4）将浓缩液用乙醇溶解，上树脂柱，水洗，再用一定量的30%～50%的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液浓缩、干燥，得白色结晶粉末，由HPLC法测定绿原酸含量大于99%，mp207～208℃。

2.根据权利要求1所述的金银花中绿原酸的制备方法，其特征在于：步骤1）中金银花的预处理包括去杂、去霉变、清洁和晒干、粉碎。

3.根据权利要求1所述的金银花中绿原酸的制备方法，其特征在于：步骤2）中生物酶可选纤维素酶、外切葡聚糖酶和β-葡聚糖苷酶中的一种，添加量为原料的0.15%～0.25%倍，酶解温度为30℃～50℃，时间60～80min，调节pH的酸可选盐酸和硫酸等。

4.根据权利要求1所述的金银花中绿原酸的制备方法，其特征在于：步骤3）和4）中纯化工艺采用超滤膜和大孔吸附树脂去杂纯化，超滤膜的膜分子量为10000～12000。

5.根据权利要求1所述的金银花中绿原酸的制备方法，其特征在于：步骤3）所用大孔吸附树脂型号可选D-101、SPD-100、SP-700和AB-8等。