CN103405516B - 一种水溶性好的何首乌提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种水溶性好的何首乌提取物及其制备方法。所述的制备方法包括以下步骤：1)以何首乌为原料，破碎，用45～55％体积的乙醇回流提取，提取液回收乙醇，浓缩，得到浓缩液；2)向浓缩液中加入原料重量0.2～0.3％的复合酶，于40～50℃条件下保温酶解3～5h，灭酶，离心，收集上清液；3)将上清液用0.4～0.5μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；4)将收集的滤液过大孔树脂柱，先水洗树脂柱至流出液澄清，然后用60～70％体积的乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得到水溶性好的何首乌提取物，其中二苯乙烯苷的含量为5～60％。以上述工艺结合可以降低提取物中蒽醌类化合物含量并提高二苯乙烯苷的提取率。
Description
技术领域
本发明涉及植物中活性成分提取，具体涉及水溶性好的何首乌提取物及其制备方法。
背景技术
何首乌，又称首乌、赤首乌，为寥科植物何首乌(polygonum multiflorumthunb)的干燥块根。何首乌主要含有三类有效成分：二苯乙烯苷类化合物、蒽醌类化合物及聚合原花青素，此外还含有卵磷酯和多种微量元素。其中二苯乙烯苷类化合物是何首乌的特有成分，目前已发现的二苯乙烯苷单体包括2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-o-β-D-葡萄糖苷(简称二苯乙烯苷)、2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2，3-二-o-β-D-葡萄糖苷(即何首乌丙素)、2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-2-o-(6”-O-α-D-吡喃葡萄糖)-β-D-吡喃葡萄糖苷、2，3，5，4’-四羟基二苯乙烯-O-(6”-o-乙酰基)-β-D-葡萄糖苷等。而其中的蒽醌类化合物具有一定毒性，如大黄酸、大黄酚、大黄素、大黄素甲醚等，如服用量过大会对胃肠产生刺激作用，出现肠鸣、恶心、腹痛、腹泻、呕吐等毒副作用，严重者可出现阵发性强直性痉挛、躁动不安、抽搐，甚至发生呼吸麻痹。
何首乌在中国传统医药中用于治疗肝脏和肾脏不适已有很长的历史，并且中医认为“头发之光泽与肾功能有关”，何首乌因其使头发黑亮的能力而被作为化妆品通过口服或外用而得到广泛应用。而现有的何首乌提取物，如果没有经过进一步的分离、纯化处理(如结晶、硅胶层析等)，其中的大分子物质及其它杂质较多，虽然二苯乙烯苷类化合物本身具有较好的水溶性，但由于提取物中其它类物质及大量杂质的存在大大降低了提取物的水溶性，因而导致这类水溶性不高的何首乌提取物不能直接应用于工业生产，势必需要增加过滤或醇溶等工序，而增加这些工序在提高成本的同时还有可能降低提取物中原有活性成分的含量。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种二苯乙烯苷含量高且水溶性好的何首乌提取物及其制备方法。
本发明所述的水溶性好的何首乌提取物的制备方法，包括以下步骤：
1)以何首乌为原料，破碎，用45～55％体积的乙醇回流提取，提取液回收乙醇，浓缩，得到浓缩液；
2)向浓缩液中加入原料重量0.2～0.3％的复合酶，于40～50℃条件下保温酶解3～5h，灭酶，离心，收集上清液；
3)将上清液用0.4～0.5μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；
4)将收集的滤液过大孔树脂柱，先水洗树脂柱至流出液澄清，然后用60～70％体积的乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得到水溶性好的何首乌提取物，其中二苯乙烯苷的含量为5～60％。
上述制备方法中：
步骤1)中，优选是将原料破碎至5～20mm的粒度，回流提取的温度通常为80～85℃，次数一般为1～3次，每次提取时乙醇的加入量可以是原料重量的5～10倍，每次提取的时间为1～2h。
步骤2)中，复合酶的酶活力为90～120FGB/g；酶解完成后，通过将酶解液煮沸4～8min达到灭酶的目的。
步骤4)中，所述大孔树脂为聚苯乙烯型，具体型号可以是D101、D102、HP-20、AB-8或DM131等。
上述制备方法中所述的浓缩均为真空浓缩，通常是在温度为50～70℃、真空度为0.06～0.1Mpa的条件下进行，其中步骤1)中通常是浓缩至提取液体积的1/5～1/10，步骤4)中通常是浓缩至10～18波美度；所述的干燥采用常规的喷雾干燥。
本发明还包括由上述方法制备得到的水溶性好的何首乌提取物。
申请人将由上述方法制得的何首乌提取物配成质量浓度为75％的水溶液，在10000r/min条件下离心5min没有沉淀产生。
与现有技术相比，本发明通过增加酶解以将何首乌提取液中的大分子物质，如果胶、蛋白、纤维素等转化为小分子物质以提高何首乌提取物的水溶性，之后再通过过陶瓷膜步骤以进一步提高提取物的水溶性(产品的水溶性在99.5％以上)，以使最终获得的提取物产品可以原料方式直接加入到生产过程中，而不必进行其它工序以避免成本的增加及有效成分含量的降低；另一方面，本发明采用先用特定浓度的乙醇进行提取、再酶解、再上柱洗脱这样的工艺结合可以降低提取物中蒽醌类化合物含量并提高二苯乙烯苷的提取率，以使获得的提取物中具有更高含量的二苯乙烯苷，含量在5～60％。
附图说明
图1为本发明实施例1制得的何首乌提取物样品的高效液相色谱图；
图2为二苯乙烯苷对照品的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
以下各实施例中，乙醇的浓度均为体积浓度。
实施例1
1)以破碎后的何首乌为原料，称取400Kg置于提取罐中，加入10倍原料重量的55％乙醇，控制温度为80℃，第一次回流提取2h，然后压出药液，药渣再加入8倍原料重量的55％乙醇，回流提取2h，压出药液，合并二次药液，得到提取液；提取液置于60℃、0.06Mpa条件下浓缩至提取液体积的1/10，得到浓缩液；
2)向浓缩液中加入原料重量0.2％的复合酶(Viscozyme复合植物水解酶，丹麦诺维信(中国)投资有限公司，酶活力为100FGB/g(酶活单位FGB/g为生产方标注方式))，于50℃条件下保温酶解4h，所得酶解液煮沸5min灭酶，离心，收集上清液；
3)上清液用孔径为0.5μm的氧化铝陶瓷膜过滤，收集滤液；
4)将收集的滤液进D101大孔树脂柱层析，先水洗树脂柱至流出液澄清，然后用65％乙醇洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液；洗脱液于60℃、0.06Mpa条件下浓缩至15波美，喷雾干燥，得到何首乌提取物。
对上述所得提取物进行检测，其中二苯乙烯苷的含量为56.30％(HPLC法，对照品由上海时代生物科技有限公司提供，下同)，其色谱图如图1所示，图2为对照品的色谱图。
取上述所得提取物75g配成质量浓度为75％的水溶液，在10000r/min条件下离心5min没有沉淀产生。
实施例2
1)以破碎后的何首乌为原料，称取400Kg置于提取罐中，加入8倍原料重量的45％乙醇，控制温度为85℃，第一次回流提取2h，然后压出药液，药渣再加入6倍原料重量的45％乙醇，回流提取1h，压出药液，药渣再加入5倍原料重量的45％乙醇，回流提取1h，压出药液，合并三次药液，得到提取液；提取液置于50℃、0.1Mpa条件下浓缩至提取液体积的1/8，得到浓缩液；
2)向浓缩液中加入原料重量0.25％的复合酶(Viscozyme复合植物水解酶，丹麦诺维信(中国)投资有限公司，酶活力为100FGB/g)，于45℃条件下保温酶解5h，所得酶解液煮沸6min灭酶，离心，收集上清液；
3)将上清液用孔径为0.4μm的氧化铝陶瓷膜过滤，收集滤液；
4)将收集的滤液进AB-8大孔树脂柱层析，先水洗树脂柱至流出液澄清，然后用70％乙醇洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液；洗脱液于50℃、0.1Mpa条件下浓缩至12波美，喷雾干燥，得到何首乌提取物。
对上述所得提取物进行检测，其中二苯乙烯苷的含量为54.12％(HPLC法)。
取上述所得提取物75g配成质量浓度为75％的水溶液，在10000r/min条件下离心5min没有沉淀产生。
实施例3
1)以破碎后的何首乌为原料，称取400Kg置于提取罐中，加入9倍原料重量的50％乙醇，控制温度为82℃，第一次回流提取2h，然后压出药液，药渣再加入5倍原料重量的50％乙醇，回流提取1.5h，压出药液，合并二次药液，得到提取液；提取液置于70℃、0.08Mpa条件下浓缩至提取液体积的1/6得到浓缩液；
2)向浓缩液中加入原料重量0.3％的复合酶(Viscozyme复合植物水解酶，丹麦诺维信(中国)投资有限公司，酶活力为100FGB/g)，于40℃条件下保温酶解4.5h，所得酶解液煮沸4min灭酶，离心，收集上清液；
3)上清液用孔径为0.45μm的氧化铝陶瓷膜过滤，收集滤液；
4)将收集的滤液进HP-20大孔树脂柱层析，先水洗树脂柱至流出液澄清，然后用60％乙醇洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液；洗脱液于55℃、0.1Mpa条件下浓缩至18波美，喷雾干燥，得到何首乌提取物。
对上述所得提取物进行检测，其中二苯乙烯苷的含量为53.78％(HPLC法)。
取上述所得提取物75g配成质量浓度为75％的水溶液，在10000r/min条件下离心5min没有沉淀产生。
实施例4
1)以破碎后的何首乌为原料，称取400Kg置于提取罐中，加入6倍原料重量的45％乙醇，控制温度为85℃，第一次回流提取2h，然后压出药液，药渣再加入6倍原料重量的45％乙醇，回流提取1h，压出药液，合并二次药液，得到提取液；提取液置于65℃、0.1Mpa条件下浓缩至提取液体积的1/5得到浓缩液；
2)向浓缩液中加入原料重量0.23％的复合酶(Viscozyme复合植物水解酶，丹麦诺维信(中国)投资有限公司，酶活力为100FGB/g)，于48℃条件下保温酶解3h，所得酶解液煮沸8min灭酶，离心，收集上清液；
3)上清液用孔径为0.5μm的氧化铝陶瓷膜过滤，收集滤液；
4)将收集的滤液进DM131大孔树脂柱层析，先水洗树脂柱至流出液澄清，然后用60％乙醇洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液；洗脱液于65℃、0.1Mpa条件下浓缩至10波美，喷雾干燥，得到何首乌提取物。
对上述所得提取物进行检测，其中二苯乙烯苷的含量为48.52％(HPLC法)。
取上述所得提取物75g配成质量浓度为75％的水溶液，在10000r/min条件下离心5min没有沉淀产生。
Claims (4)
1.一种水溶性好的何首乌提取物的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
1)以何首乌为原料，破碎，用45～55％体积的乙醇回流提取，提取液回收乙醇，浓缩，得到浓缩液；
2)向浓缩液中加入原料重量0.2～0.3％的Viscozyme复合植物水解酶，于40～50℃条件下保温酶解3～5h，灭酶，离心，收集上清液；
3)将上清液用0.4～0.5μm的陶瓷膜过滤，收集滤液；
4)将收集的滤液过大孔树脂柱，先水洗树脂柱至流出液澄清，然后用60～70％体积的乙醇洗脱，洗脱液浓缩、干燥，得到水溶性好的何首乌提取物，其中二苯乙烯苷的含量为5～60％。
2.根据权利要求1所述的水溶性好的何首乌提取物的制备方法，其特征在于：步骤1)中，提取的次数为1～3次，每次提取的时间为1～2h。
3.根据权利要求1所述的水溶性好的何首乌提取物的制备方法，其特征在于：步骤2)中，复合酶的酶活力为90～120FGB/g。
4.根据权利要求1所述的水溶性好的何首乌提取物的制备方法，其特征在于：步骤4)中，所述大孔树脂为聚苯乙烯型。
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| 何首乌中二苯乙烯苷的开发与应用;袁媛等;《辽宁中医药大学学报》;20070531;第9卷(第3期);第196页表1、图1 * |
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