CN103936837A

CN103936837A - 一种高效提纯纽莫康定b0的方法

Info

Publication number: CN103936837A
Application number: CN201410051009.5A
Authority: CN
Inventors: 王其龙; 朱海; 吴长军; 施成; 张致慧
Original assignee: BORUI BIOMEDICINE TAIXING Co Ltd
Current assignee: BORUI BIOMEDICINE TAIXING Co Ltd; Brightgene Bio Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2014-02-14
Filing date: 2014-02-14
Publication date: 2014-07-23
Anticipated expiration: 2034-02-14
Also published as: CN103936837B

Abstract

本发明公开了一种高效提纯纽莫康定B₀纯度的方法，包括：（1）将含有纽莫康定B₀的发酵液pH调至2.0～4.0，过滤，浸提纽莫康定B₀的浸提液；（2）浸提液浓缩后加入硅藻土裹晶，再加入水搅拌，离心；（3）离心固体用乙醇溶解，加入活性炭脱色过滤；（4）滤液浓缩，加入氯仿过硅胶柱，收集纽莫康定B₀的过柱液；（5）纽莫康定B₀的过柱液浓缩至干，在多相溶剂体系下结晶，得到纽莫康定B₀。本发明的纽莫康定B₀的提取方法可以大大减少树脂柱使用和冲洗的溶剂量，而且通过活性炭能有效去除色素，通过硅胶柱层析能够有效的去除相关物质C₀，提取的纯度可达到99%。同时工艺简便易行，成本大幅度降低，易于实现工业化生产。

Description

一种高效提纯纽莫康定B0的方法

技术领域

本发明属于药物化学领域，具体涉及一种高效提纯纽莫康定B₀的方法。

背景技术

Pneumocandins B₀ （简称PB0）是由霉菌Glarea lozoyensis发酵合成的次级代谢产物。Glarea lozoyensis发酵产物除目标产物之外，有C₀等组份，还包括有大量的色素等其他杂质，因此PB0的提取纯化工艺难度较大。

中国发明专利200910133118.0公开了制备纽莫康定B₀的方法，主要步骤是：a)离心纽莫康定B₀发酵液，取菌丝体，用甲醇浸提纽莫康定B₀；b）降甲醇浸提液蒸干，再用正丁醇浸提纽莫康定B₀；c）将正丁醇浸提液蒸干，再用70～80%甲醇浸提纽莫康定B₀，过酸性氧化铝柱，收集流出液；d）将纽莫康定B₀收集蒸干后，用60～70%甲醇溶解，上HP20吸附树脂，用85～95%甲醇洗脱，收集洗脱液纽莫康定B₀纯度在50～65%间；e）将纽莫康定B₀收集液蒸干，溶于反相树脂YPR-II，用85～95%甲醇洗脱，收集纽莫康定B₀纯度大于90%；f）将纽莫康定B₀收集液蒸干后，用甲醇溶解，滴加少量水使之过饱和结晶析出，制得纽莫康定B₀，纯度可达到96%。

中国专利201110266790.4公开了一种纽莫康定B₀的提取纯化方法，主要包括：a）将含有纽莫康定B₀的发酵液pH值调至2.0～4.0，过滤，菌渣用低分子醇浸提，得浸提液；b）调整浸提液的醇浓度至30～50%(V/V), pH为6.0～8.0；c）用吸附树脂吸附浸提液后，依次用水、30～50%(V/V)丙酮-水溶液冲洗树脂，然后用pH值为3.0～5.0的50%～80%(V/V)丙酮-酸溶液洗脱树脂，收集富含纽莫康定B₀的洗脱液；d）纽莫康定B₀洗脱液加水稀释至丙酮浓度为30～50%(V/V), 用吸附树脂吸附，用水冲洗树脂后用低分子醇洗脱，收集富含纽莫康定B₀的洗脱液；e）以常规方法结晶得纽莫康定B₀。

现有技术主要采用的是树脂柱工艺，均未对相关物质C₀的检测和控制进行描述，C₀（见图1, R1位为羟基，R2位为氢）是纽莫康定B₀（R₂位为羟基，R1位为氢）的异构体，在结构上的差异表现为一个羟基位置的不同；C₀杂质不能在反相色谱中与纽莫康定B₀分离，只有通过正相色谱分离。发酵液中的C₀杂质一般10%，如果不能得到有效的控制，最后得到的是纽莫康定B₀和C₀的混合物。C₀杂质能参与后续反应，严重影响醋酸卡泊芬净的质量。通过本专利，能够有效的控制C₀的含量，降到C₀≤0.2%。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种提取纯化产业化成本低、周期短，且能有效控制相关物质C₀的高效提纯纽莫康定B₀的方法。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，包括以下步骤：

（1）将含有纽莫康定B₀的发酵液pH调至2.0～4.0，过滤，菌渣用低分子醇浸提，得浸提液；

（2）将步骤（1）所得的浸提液蒸馏出低分子醇，并浓缩至浓缩混合物中液体所含的纽莫康定B₀ ≤100mg/L，然后向浸提液浓缩混合物中加入硅藻土裹晶，加去离子水离心得到含有纽莫康定B₀的白色固体；

（3）将步骤（2）所得的离心固体加入乙醇溶解，充分搅拌，再加入活性炭，充分搅拌脱色，过滤得到无色滤液；

（4）将步骤（3）所得的无色滤液浓缩至纽莫康定B₀含量为250000～300000mg/L，加入氯仿混合均匀，过硅胶柱，并用氯仿与甲醇的混合液对硅胶柱进行预洗、洗脱，收集洗脱液；

（5）将步骤（4）所得的洗脱液浓缩至氯仿含量≤0.5%，然后将洗脱液浓缩混合物加入多相体系中结晶，得到潮晶，并在温度45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa的条件下干燥得成品。

所述步骤（2）中硅藻土的目数为100～150，所述硅藻土的加入重量为浸提液浓缩混合物重量的3～6倍，并使硅藻土充分吸附浸提液浓缩混合物中的纽莫康定B₀；所述去离子水的加入重量为浸提液浓缩混合物与硅藻土的重量之和，加入去离子水后并充分搅拌。

所述步骤（3）中加入的乙醇的重量为离心固体重量的2～4倍；所述活性炭的目数为140～200，所述活性炭的加入重量为离心固体重量的0.05～0.1倍。

所述步骤（4）中过硅胶柱上柱液为滤液浓缩得到的滤液浓缩混合物加入氯仿并充分搅拌、溶解制成的氯仿溶液，加入氯仿的量为滤液浓缩得到滤液浓缩混合物重量的3～6倍。

所述步骤（4）中硅胶柱使用的硅胶目数为200～400，所述硅胶使用量为滤液浓缩混合物重量的2～3倍；装柱溶剂为氯仿，装柱所使用的氯仿量为硅胶重量的1～2倍；冲柱溶剂为氯仿，冲柱所使用的氯仿量为滤液浓缩混合物重量的3～8倍；上柱量为硅胶使用量的0.1～0.2倍。

所述步骤（4）中对吸附完全的硅胶柱预洗所使用的氯仿与甲醇的混合液中氯仿与甲醇的质量比为5：1，所述预洗的终点为预洗液中无前杂；对预洗后的硅胶柱进行洗脱所使用的氯仿与甲醇的混合液中氯仿与甲醇的质量比为3：1，所述洗脱的终点为洗脱液中无纽莫康定B₀。

所述预洗液中前杂和洗脱液中纽莫康定B₀测定均采用TLC监控，硅胶板为正相硅胶板；所述预洗液中前杂测定时TLC点板展开剂为氯仿与甲醇按质量比8:1组成的混合液；所述洗脱液中纽莫康定B₀测定时TLC点板展开剂为氯仿与甲醇按质量比2:1组成的混合液；所述TLC点板显色剂为磷钼酸，热风枪烘烤显色。

所述步骤（5）中多相溶剂体系为乙酸乙酯、异丙醇、石油醚的一种或几种的组合；所述多相溶剂的量为洗脱液浓缩混合物重量的5～8倍。

所述步骤（5）中结晶溶解温度为50～60℃，析晶温度为0～5℃；所述干燥的条件为温度为45.0～50.0℃；真空度≤-0.07MPa，干燥时间为18～24h；干燥后固体水份≤2%。

步骤（2）、（4）、（5）中的所述的浓缩为真空条件下，浓缩温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa。

所述纽莫康定B₀的分子结构式为：

.

本发明提供的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，具有以下有益效果：

（1）浸提液浓缩混合物经裹晶、离心、加乙醇溶解后采用活性炭脱色去除色素，将红棕色转变成无色液体，有效去除了液体中的色素，提高了产品纯度与质量。

（2）无色滤液浓缩后使用硅胶过柱，不使用传统工艺的树脂过柱，能有效去除大部分的杂质，同时进一步降低了成本。

（3）洗脱液浓缩混合物采用在多相溶剂体系中结晶能进一步去除杂质，尤其是

对相关物质C₀有显著的去除效果，提高了产品质量。综上，本发明能有效去除反应体系中的色素、杂质，尤其是对相关物质C₀

去除效果明显，获得的产品质量较高，而且整个工艺流程简便易行，成本大幅度

降低，易于实现工业化生产。

附图说明

图1是本发明的工艺流程图。

具体实施方式

下面参照附图并结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

实施例1

11吨发酵液先转移到酸化罐，用草酸将发酵液的pH值调至2.0～4.0，板框压滤。得菌渣1200kg，加入6吨75%的乙醇溶液，搅拌6小时，再次板框压滤，得浸提液6吨。

浸提液再次转移到1000L搪瓷釜中，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa真空浓缩，浓缩过程中，观察料液变浑浊后，取样离心，清液送检含量，当清液中纽莫康定B₀含量48mg/L时停止浓缩，得浸提液浓缩混合物50kg；浸提液浓缩混合物中加入200kg规格为100目的硅藻土充分吸附，裹晶，再加入250kg去离子水搅拌，离心，得到含有纽莫康定B₀的白色固体，收集离心固体260kg。

将260 kg离心固体用800kg的乙醇溶解，搅拌1小时，加入20kg规格为140目的活性炭，搅拌2小时，脱色，过滤得无色滤液。

无色滤液在釜内控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa下浓缩，浓缩至纽莫康定B₀含量为285000mg/L，得到滤液浓缩混合物重量80kg。

500L硅胶柱湿法装柱，称取160kg规格为200目的硅胶，加入300kg氯仿搅拌均匀装柱，用240kg氯仿冲柱，出口处收集420kg的氯仿时冲柱结束，准备上样；

样品溶解：将滤液浓缩混合物中加入240kg重量的氯仿，混合均匀，制得上柱样品溶液；

上样吸附：将溶解好的样品通过已装好的硅胶柱吸附；每次上样的样品溶液为20kg，吸附过程出口阀全开，自然流速；以氯仿：甲醇质量比5:1进行预洗，出口阀全开，自然流速，预洗至经TLC检测无前杂；使用氯仿：甲醇质量比3:1进行洗脱，出口阀全开，自然流速，洗脱至经TLC检测无产品后停止；使用HPLC方法检测收集C₀≤5.0%的产品，收集合格的洗脱液总重900kg。

将洗脱液进釜，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa减压浓缩至氯仿含量≤0.5%，得到干粉，称重15kg，即为纽莫康定B₀粗品。

粗品加入100kg的多相溶剂体系，溶剂体系为由乙酸乙酯、异丙醇、石油醚按83：12：5组成的混合液，升温至50~60℃，搅拌溶解，降温至0~5℃结晶2小时；析晶，离心，得固体潮晶；将潮晶放入真空干燥箱，控制浓缩温度45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa，干燥20h，即得到成品14.5kg，水份1.13%；

制得的成品用HPLC方法分析相关物质C₀ 正相纯度0.02%，纽莫康定B₀正相纯度99.98%，反相纯度99.1%。

TLC薄层色谱检测方法为：

预洗液中前杂测定时TLC点板，硅胶板为正相硅胶板，展开剂为氯仿与甲醇按质量比8:1组成的混合液，显色剂为磷钼酸，热风枪烘烤显色。

洗脱液中纽莫康定B₀测定时TLC点板，硅胶板为正相硅胶板，展开剂为氯仿与甲醇按质量比2:1组成的混合液，显色剂为磷钼酸，热风枪烘烤显色。

HPLC高效液相色谱检测方法为：

①反相方法：

成品样品处理用无水乙醇

测定柱：C18柱，4.6mm×250 mm×5 um，柱温：25℃；采用梯度洗脱，流动相A相为乙腈，B相为0.05mol/L磷酸二氢钠水溶液，梯度见下表所示；流速为1.0mL/min；检测器为DAD或VWD，测定波长210nm；溶样溶剂为60%甲醇水溶液，进样浓度为1.5mg/mL，进样量为10uL。

梯度洗脱表

.

纽莫康定B0的保留时间t_R=24.6min，理论塔板数N=14000。

②正相方法

样品处理用流动相

测定柱：SiO₂柱，4.6mm×250 mm×5 um，柱温：25℃；采用等度洗脱，流动相为氯仿：乙醇=75:25（V/V）；流速为1.0mL/min；检测器为DAD或VWD，测定波长234nm (276nm)；溶样溶剂为流动相，进样浓度为500mg/L，进样量为10uL，运行时间为25min。

纽莫康定B₀的保留时间t_R=12.4min，相关物质C₀的保留时间t=18.4min，理论塔板数N=3200。

实施例2

11吨发酵液先转移到酸化罐，用草酸将发酵液的pH值调至2.0～4.0，板框压滤。得菌渣1200kg，加入6吨75%的乙醇溶液，搅拌6小时，再次板框压滤，得浸提液5.8吨。

浸提液再次转移到1000L搪瓷釜中，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa真空浓缩，浓缩过程中，观察料液变浑浊后，取样离心，清液送检含量，当清液中纽莫康定B₀含量30mg/L时停止浓缩，得浸提液浓缩混合物46kg；浸提液浓缩混合物中加入260kg规格为100目的硅藻土充分吸附，裹晶，再加入306kg去离子水搅拌，离心，得到含有纽莫康定B₀的白色固体，收集离心固体320kg。

将320kg离心固体用740kg的乙醇溶解，搅拌1小时，加入18kg规格为140目的活性炭，搅拌2小时，脱色，过滤得无色滤液。

将无色滤液在釜内控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa下浓缩，浓缩至纽莫康定B₀含量为265000mg/L，得到滤液浓缩混合物重量60kg。

500L硅胶柱湿法装柱，称取120kg规格为200目的硅胶，加入200kg氯仿搅拌均匀装柱，用280kg氯仿冲柱，出口处收集360kg的氯仿时冲柱结束，准备上样；

样品溶解：将滤液浓缩混合物中加入240kg重量的氯仿，混合均匀，即得上柱样品溶液；

上样吸附：将溶解好的样品通过已装好的硅胶柱吸附；每次上样的产品量15kg，吸附过程出口阀全开，自然流速；以氯仿：甲醇质量比5:1进行预洗，出口阀全开，自然流速，预洗至经TLC检测无前杂；使用氯仿：甲醇质量比3:1进行洗脱，出口阀全开，自然流速，洗脱至经TLC检测无产品后停止；使用HPLC方法检测收集C0≤5.0%的产品，合格的洗脱液总重800kg。

将洗脱液进釜，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa减压浓缩至氯仿含量≤0.5%，得到干粉，称重14kg，即为纽莫康定B₀粗品。

粗品加入90kg的多相溶剂体系，溶剂体系为由乙酸乙酯、异丙醇、石油醚按83：12：5组成的混合液，升温至50~60℃，搅拌溶解，降温至0~5℃结晶2小时；析晶，离心，得固体潮晶；将潮晶放入真空干燥箱，控制浓缩温度45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa，干燥20h，即得到成品13.6kg，水份1.03%，相关物质C₀ 正相纯度0.01%，纽莫康定B₀正相纯度99.99%，反相纯度99.2%。

实施例3

11吨发酵液先转移到酸化罐，用草酸将发酵液的pH值调至2.0～4.0，板框压滤。得菌渣1200kg，加入6吨75%的乙醇溶液，搅拌6小时，再次板框压滤，得浸提液6.2吨。

浸提液再次转移到1000L搪瓷釜中，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa真空浓缩，浓缩过程中，观察料液变浑浊后，取样离心，清液送检含量，当清液中纽莫康定B₀含量62mg/L时停止浓缩，得浸提液浓缩混合物56kg；浸提液浓缩混合物中加入300kg规格为100目的硅藻土充分吸附，裹晶，再加入356kg去离子水搅拌，离心，得到含有纽莫康定B₀的白色固体，收集离心固体380kg。

将380kg离心固体用820kg的乙醇溶解，搅拌1小时，加入22kg规格为140目的活性炭，搅拌2小时，脱色，过滤得无色滤液。

将无色滤液在釜内控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa下浓缩，浓缩至285000mg/L，得到滤液浓缩混合物重量85kg。

500L硅胶柱湿法装柱，称取200kg规格为200目的硅胶，加入340kg氯仿搅拌均匀装柱，用260kg氯仿冲柱，出口处收集440kg的氯仿时冲柱结束，准备上样；

样品溶解：将滤液浓缩混合物中加入340kg重量的氯仿，混合均匀，即得上柱样品溶液；

上样吸附：将溶解好的样品通过已装好的硅胶柱吸附；每次上样的产品量30kg，吸附过程出口阀全开，自然流速；以氯仿：甲醇质量比5:1进行预洗，出口阀全开，自然流速，预洗至经TLC检测无前杂；使用氯仿：甲醇质量比3:1进行洗脱，出口阀全开，自然流速，洗脱至经TLC检测无产品后停止；使用HPLC方法检测收集C₀≤5.0%的产品，收集合格的洗脱液总重1000kg。

将洗脱液进釜，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa减压浓缩至氯仿含量≤0.5%，得到干粉，称重16kg，即为纽莫康定B₀粗品。

粗品加入110kg的多相溶剂体系，溶剂体系为由乙酸乙酯、异丙醇、石油醚按83：12：5组成的混合液，升温至50~60℃，搅拌溶解，降温至0~5℃结晶2小时；析晶，离心，得固体潮晶；将潮晶放入真空干燥箱，控制浓缩温度45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa，干燥20h，即得到成品15.5kg，水份1.12%；有关物质C₀ 正相纯度0.02%，纽莫康定B₀正相纯度99.98%，反相纯度99.3%。

实施例4

11吨发酵液先转移到酸化罐，用草酸将发酵液的pH值调至2.0～4.0，板框压滤。得菌渣1200kg，加入6吨75%的乙醇溶液，搅拌6小时，再次板框压滤，得浸提液6.1吨。

浸提液再次转移到1000L搪瓷釜中，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa真空浓缩，浓缩过程中，观察料液变浑浊后，取样离心，清液送检含量，当清液中纽莫康定B₀含量100mg/L时停止浓缩，得浸提液浓缩混合物52kg；浸提液浓缩混合物中加入312kg规格为150目的硅藻土充分吸附，裹晶，再加入364kg去离子水搅拌，离心，得到含有纽莫康定B₀的白色固体，收集离心固体375kg。

将375kg离心固体用1500kg的乙醇溶解，搅拌1小时，加入37.5kg规格为200目的活性炭，搅拌2小时，脱色，过滤得无色滤液。

将无色滤液在釜内控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa下浓缩，浓缩至300000mg/L，得到滤液浓缩混合物重量82kg。

1000L硅胶柱湿法装柱，称取246kg规格为400目的硅胶，加入492kg氯仿搅拌均匀装柱，用656kg氯仿冲柱，出口处收集850kg的氯仿时冲柱结束，准备上样；

样品溶解：将滤液浓缩混合物中加入492kg重量的氯仿，混合均匀，即得上柱样品溶液；

上样吸附：将溶解好的样品通过已装好的硅胶柱吸附；每次上样的产品量49.2kg，吸附过程出口阀全开，自然流速；以氯仿：甲醇质量比5:1进行预洗，出口阀全开，自然流速，预洗至经TLC检测无前杂；使用氯仿：甲醇质量比3:1进行洗脱，出口阀全开，自然流速，洗脱至经TLC检测无产品后停止；使用HPLC方法检测收集C₀≤5.0%的产品，收集合格的洗脱液总重1020kg。

粗品加入120kg的乙酸乙酯溶剂体系，升温至50~60℃，搅拌溶解，降温至0~5℃结晶2小时；析晶，离心，得固体潮晶；将潮晶放入真空干燥箱，控制浓缩温度45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa，干燥20h，即得到成品14.8kg，水份1.19%；有关物质C₀ 正相纯度0.04%，纽莫康定B₀正相纯度99.92%，反相纯度99.4%。

实施例5

11吨发酵液先转移到酸化罐，用草酸将发酵液的pH值调至2.0～4.0，板框压滤。得菌渣1200kg，加入6吨75%的乙醇溶液，搅拌6小时，再次板框压滤，得浸提液5.7吨。

浸提液再次转移到1000L搪瓷釜中，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa真空浓缩，浓缩过程中，观察料液变浑浊后，取样离心，清液送检含量，当清液中纽莫康定B₀含量10mg/L时停止浓缩，得浸提液浓缩混合物35kg；浸提液浓缩混合物中加入105kg规格为120目的硅藻土充分吸附，裹晶，再加入140kg去离子水搅拌，离心，得到含有纽莫康定B₀的白色固体，收集离心固体180kg。

将180kg离心固体用360kg的乙醇溶解，搅拌1小时，加入9kg规格为180目的活性炭，搅拌2小时，脱色，过滤得无色滤液。

将无色滤液在釜内控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa下浓缩，浓缩至250000mg/L，得到滤液浓缩混合物重量55kg。

500L硅胶柱湿法装柱，称取110kg规格为300目的硅胶，加入110kg氯仿搅拌均匀装柱，用165kg氯仿冲柱，出口处收集300kg的氯仿时冲柱结束，准备上样；

样品溶解：将滤液浓缩混合物中加入165kg重量的氯仿，混合均匀，即得上柱样品溶液；

上样吸附：将溶解好的样品通过已装好的硅胶柱吸附；每次上样的产品量11kg，吸附过程出口阀全开，自然流速；以氯仿：甲醇质量比5:1进行预洗，出口阀全开，自然流速，预洗至经TLC检测无前杂；使用氯仿：甲醇质量比3:1进行洗脱，出口阀全开，自然流速，洗脱至经TLC检测无产品后停止；使用HPLC方法检测收集C0≤5.0%的产品，收集合格的洗脱液总重750kg。

将洗脱液进釜，控制温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa减压浓缩至氯仿含量≤0.5%，得到干粉，称重12kg，即为纽莫康定B₀粗品。

粗品加入60kg的异丙醇溶剂体系，升温至50~60℃，搅拌溶解，降温至0~5℃结晶2小时；析晶，离心，得固体潮晶；将潮晶放入真空干燥箱，控制浓缩温度45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa，干燥20h，即得到成品12.6kg，水份1.01%；有关物质C₀ 正相纯度0.02%，纽莫康定B₀正相纯度99.96%，反相纯度99.7%。

以上实例仅用于说明本发明的内容，应当指出，这些实施例的给出只用以对帮助理解本发明的内容及优点，而不作为对本发明保护范围的限定。

Claims

1.一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，包括以下步骤：

（5）将步骤（4）所得的洗脱液浓缩至氯仿含量≤0.5%，然后将洗脱液浓缩混合物加入多相体系中结晶，得到潮晶，并在真空下干燥得成品。

2.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（2）中硅藻土的目数为100～150，所述硅藻土的加入重量为浸提液浓缩混合物重量的3～6倍，并使硅藻土充分吸附浸提液浓缩混合物中的纽莫康定B₀；所述去离子水的加入重量为浸提液浓缩混合物与硅藻土的重量之和，加入去离子水后并充分搅拌。

3.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（3）中加入的乙醇的重量为离心固体重量的2～4倍；所述活性炭的目数为140～200，所述活性炭的加入重量为离心固体重量的0.05～0.1倍。

4.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（4）中过硅胶柱上柱液为滤液浓缩得到的滤液浓缩混合物加入氯仿并充分搅拌、溶解制成的氯仿溶液，加入氯仿的量为滤液浓缩得到滤液浓缩混合物重量的3～6倍。

5.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（4）中硅胶柱使用的硅胶目数为200～400，所述硅胶使用量为滤液浓缩混合物重量的2～3倍；装柱溶剂为氯仿，装柱所使用的氯仿量为硅胶重量的1～2倍；冲柱溶剂为氯仿，冲柱所使用的氯仿量为滤液浓缩混合物重量的3～8倍；上柱量为硅胶使用量的0.1～0.2倍。

6.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（4）中对吸附完全的硅胶柱预洗所使用的氯仿与甲醇的混合液中氯仿与甲醇的质量比为5：1，所述预洗的终点为预洗液中无前杂；对预洗后的硅胶柱进行洗脱所使用的氯仿与甲醇的混合液中氯仿与甲醇的质量比为3：1，所述洗脱的终点为洗脱液中无纽莫康定B₀。

7.根据权利要求6所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述预洗液中前杂和洗脱液中纽莫康定B₀测定均采用TLC监控，硅胶板为正相硅胶板；所述预洗液中前杂测定时TLC点板展开剂为氯仿与甲醇按质量比8:1组成的混合液；所述洗脱液中纽莫康定B₀测定时TLC点板展开剂为氯仿与甲醇按质量比2:1组成的混合液；所述TLC点板显色剂为磷钼酸，热风枪烘烤显色。

8.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（5）中多相溶剂体系为乙酸乙酯、异丙醇、石油醚的一种或几种的组合；所述多相溶剂的量为洗脱液浓缩混合物重量的5～8倍。

9.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：所述步骤（5）中结晶溶解温度为50～60℃，析晶温度为0～5℃；所述干燥的条件为温度为45.0～50.0℃，真空度≤-0.07MPa，干燥时间为18～24h；干燥后固体水份≤2%。

10.根据权利要求1所述的一种高效提纯纽莫康定B₀的方法，其特征在于：步骤（2）、（4）、（5）中所述的浓缩为真空条件下，浓缩温度≤50℃，真空度≤-0.07MPa。