CN104558123A - 一种采用动态轴向压缩柱系统制备纽莫康定b0的方法 - Google Patents

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张宇
关正娟
刘大伟
张大兵
李胜迎
金新亮
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Abstract

本发明提供了一种纽莫康定B0的制备方法，该方法包括：（1）将含有纽莫康定B0的发酵液做酸沉、离心、脱色预处理，得纽莫康定粗品；（2）采用动态轴向压缩柱装柱；（3）将纽莫康定粗品泵入动态轴向压缩柱系统，紫外检测器在线监控，收集目的洗脱组分，浓缩干燥后即得纽莫康定B0。本发明所采用的动态轴向压缩柱，操作方便，能实现在线检测，可大大减少洗脱溶剂量，缩短洗脱时间，同时保证层析柱使用寿命，从而降低了生产成本，同时可将C0有效去除，产品回收率高，纯度可达99%以上。

Description

一种采用动态轴向压缩柱系统制备纽莫康定B0的方法
技术领域
本发明涉及一种制备卡帕芬净前体—纽莫康定B0的纯化方法，属于药物化学领域。
背景技术
纽莫康定B0是由霉菌Glarea lozoyensis发酵所得的次级代谢产物。发酵液中除含有B0外，还有C0等组分，纽莫康定B0主要用于合成药物卡帕芬净。
中国发明专利200910133118.0和201110266790.4都公开了采用树脂柱工艺纯化制备纽莫康定B0的方法，但均没有对相关物质（如：C0）的检测和纯度控制进行描述，一般发酵液中的C0杂质含量在10%左右，若不有效控制，得到的B0和C0混合物将在下一步合成反应中严重影响卡帕芬净的质量。
中国发明专利201410051009.5所公开的方法虽对C0杂质进行了检测和纯度控制，但它的回收率不高，只有30~40%左右，而且采用TLC监测，操作复杂，对流出物需分小份（如接收的每一小杯100ml）进行HPLC检测，不利于实际生产应用。且其采用传统的层析柱，洗脱时间长、柱效低、使用寿命短，这些都会影响生产成本。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明提供一种采用动态轴向压缩柱系统纯化纽莫康定B0并在线监测的新方法，该方法关键在于两点：1.采用动态轴向压缩柱，装柱简单、柱使用寿命长、柱床稳定、柱效高；2.通过紫外检测器在线监控收集洗脱组分，操作简单，可应用于工业规模化生产，生产成本低。包括以下步骤：
a. 发酵液预处理：将含有纽莫康定的发酵液调pH至2~4酸沉，过滤后浸提、离心，加入活性炭脱色得无色滤液；
b. 装柱：将10μm~75μm硅胶用异丙醇匀浆，装入动态轴向压缩柱，装柱压力为6~10Mpa；
c.上样并收集：将步骤a所得无色滤液浓缩干燥后，加入氯仿/甲醇混合物溶解，过柱，并用氯仿/甲醇/水混合液洗脱，洗脱液的体积比为78/18/1~82/17/3，上样量为所装硅胶重量的0.1~0.3倍。洗脱过程中采用紫外检测器在线监测，检测波长为280nm~350nm，根据所出色谱图，在目的物质的对应峰处收集，将收集所得馏分浓缩干燥即得高纯度纽莫康定B0。
本发明的有益效果：1、本工艺采用动态轴向压缩柱，而不是传统的树脂柱或中低压柱，柱床稳定，柱效高，便于杂质的去除，使用寿命长；2、通过紫外检测器在线监控收集洗脱组分，而非传统的TLC监测，操作简单，易控制，工艺技术简化，适合大规模生产制备；3、本工艺通过动态轴向压缩柱即可直接得到高纯度的纽莫康定B0，无需后续重结晶操作，简化了工艺步骤，缩短时间，降低成本。
综上所述，本发明能够有效去除反应体系中的杂质，特别是相关物质去除明显，所得目标物质纯度高，整个工艺过程简单，易操作，成本大幅降低，适合工业化生产。
附图说明
图1是纽莫康定粗品的液相色谱法测定图谱。
图2是纽莫康定B0液相色谱法测定图谱。
具体实施方式
实施例1
1.将含有纽莫康定的发酵液的pH调至2做酸沉处理，过滤后浸提、离心，加入活性炭脱色得无色滤液；
2.将20μm硅胶用异丙醇匀浆，装入动态轴向压缩柱，装柱压力为6Mpa，柱填充尺寸为Φ50×250mm；
3.将步骤1所得的无色滤液浓缩干燥后，加入氯仿/甲醇混合物（体积比为1:5）溶解后得样液，将其泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，并用氯仿/甲醇/水混合液洗脱，洗脱液的体积比为78/18/1，上样量为所装硅胶重量的0.2倍。洗脱过程中采用紫外检测器在线监测，波长为280nm，根据所出色谱图，收集洗脱时间43min~55min之间的馏分。将收集所得馏分浓缩干燥既得纽莫康定B0，经HPLC分析纯度为99.5%。
实施例2
1.将含有纽莫康定的发酵液的pH调至3做酸沉处理，过滤后浸提、离心，加入活性炭脱色得无色滤液；
2.将50μm硅胶用异丙醇匀浆，装入动态轴向压缩柱，装柱压力为8Mpa，柱填充尺寸为Φ150×250mm；
3.将步骤1所得的无色滤液浓缩干燥后，加入氯仿/甲醇混合物（体积比为1:4）溶解后得样液，将其泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，并用氯仿/甲醇/水混合液洗脱，洗脱液的体积比为82/17/3，上样量为所装硅胶重量的0.25倍。洗脱过程中采用紫外检测器在线监测，波长为300nm，根据所出色谱图，收集洗脱时间49min~62min之间的馏分。将收集所得馏分浓缩干燥既得纽莫康定B0，经HPLC分析纯度为99.3%。
实施例3
1.将含有纽莫康定的发酵液的pH调至4做酸沉处理，过滤后浸提、离心，加入活性炭脱色得无色滤液；
2.将75μm硅胶用异丙醇匀浆，装入动态轴向压缩柱，装柱压力为10Mpa，柱填充尺寸为Φ300×250mm；
3.将步骤1所得的无色滤液浓缩干燥后，加入氯仿/甲醇混合物（体积比为1:4.5）溶解后得样液，将其泵入动态轴向压缩柱制备色谱系统，并用氯仿/甲醇/水混合液洗脱，洗脱液的体积比为81/18/2，上样量为所装硅胶重量的0.3倍。洗脱过程中采用紫外检测器在线监测，波长为290nm，根据所出色谱图，收集洗脱时间51min~71min之间的馏分。将收集所得馏分浓缩干燥既得纽莫康定B0，经HPLC分析纯度为99.1%。

Claims (5)

1.一种采用动态轴向压缩柱制备高纯度纽莫康定B0的方法，包括以下步骤：
（1）将含有纽莫康定的发酵液做酸沉、离心、脱色预处理，得纽莫康定粗品；
（2）采用动态轴向压缩柱装填硅胶填料；
（3）将步骤（1）所得的纽莫康定粗品浓缩干燥后，加入氯仿/甲醇混合物溶解，上样，氯仿/甲醇/水混合液洗脱，紫外检测峰值最大时收集洗脱液，得目标组分，浓缩干燥即得纽莫康定B0。
2.根据权利要求1所述的一种采用动态轴向压缩柱制备高纯度纽莫康定B0的方法，其特征在于：动态轴向压缩柱的填充固定相为硅胶，其粒度范围为10μm~75μm，装柱溶剂为异丙醇，使用异丙醇的量为硅胶体积的2~3倍。
3.根据权利要求1所述的一种采用动态轴向压缩柱制备高纯度纽莫康定B0的方法，其特征在于：氯仿/甲醇混合物溶解步骤（3）中的干燥物时，先加入甲醇后再加入氯仿，且其体积比不大于1:4，所述洗脱液，氯仿/甲醇/水的体积比为78/18/1~82/17/3。
4.根据权利要求1所述的一种采用动态轴向压缩柱制备高纯度纽莫康定B0的方法，其特征在于：紫外检测器在线监测波长范围为280nm~350nm。
5.根据权利要求1所述的一种采用动态轴向压缩柱制备高纯度纽莫康定B0的方法，其特征在于：上样量为装柱硅胶重量的0.1~0.3倍。
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