CN106749526A - 一种低成本纯化九胜肽‑1的方法 - Google Patents

一种低成本纯化九胜肽‑1的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN106749526A
CN106749526A CN201611197530.5A CN201611197530A CN106749526A CN 106749526 A CN106749526 A CN 106749526A CN 201611197530 A CN201611197530 A CN 201611197530A CN 106749526 A CN106749526 A CN 106749526A
Authority
CN
China
Prior art keywords
victory
low cost
peptide
peptides
purifies
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201611197530.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN106749526B (zh
Inventor
苏晨灿
郭添
王慧
韩广
张忠旗
王万科
王惠嘉
赵金礼
杨小琳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shaanxi HuiKang Bio Tech Co Ltd
Original Assignee
Shaanxi HuiKang Bio Tech Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shaanxi HuiKang Bio Tech Co Ltd filed Critical Shaanxi HuiKang Bio Tech Co Ltd
Priority to CN201611197530.5A priority Critical patent/CN106749526B/zh
Publication of CN106749526A publication Critical patent/CN106749526A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN106749526B publication Critical patent/CN106749526B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明公开了一种低成本纯化九胜肽‑1的方法，该方法采用高效液相色谱，先用反相聚合物柱对大批量的九胜肽‑1粗品进行纯化，除去九胜肽‑1粗品中的杂质，再用弱阴离子交换柱将三氟乙酸型九胜肽‑1转化成醋酸型九胜肽‑1。本发明纯化方法简单，不仅能得到纯度大于99％的九胜肽‑1，而且能达到九胜肽‑1成本低、收率高、产业化的要求。

Description

一种低成本纯化九胜肽-1的方法
技术领域
本发明属于多肽纯化技术领域，具体涉及一种九胜肽-1的纯化方法。
背景技术
九胜肽-1又名美立肽，为含有九个氨基酸的美白九肽，主要用于美白亮肤及祛斑。九胜肽-1是一种仿生肽，它和黑色素细胞上的MC1受体有非常好的匹配性，因此可以作为促黑色素细胞激素的对抗剂，竞争性的与MC1受体结合，阻止酪氨酸酶进一步被激活而产生黑色素。九胜肽-1竞争性的封闭黑素母细胞上受体与各种因子信号的入口，弱化了黑素母细胞的活性，减少黑素产生量，14天开始逐步均匀肤色，一个皮肤周期28天后，明显提亮肤色，呈现肌肤红润、白皙，因此九胜肽-1常被用作化妆品原料。
九胜肽-1作为化妆品原料时必须满足HPLC纯度≥99％，然而通过合成得到的九胜肽-1粗品中含有很多杂质，需要进一步提纯后才可以作为化妆品原料。传统纯化九胜肽-1的方法纯化效率低，得到的九胜肽-1纯度低，且所使用的流动相为乙腈，乙腈的用量大、价格昂贵。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服现有九胜肽-1纯化方法存在的缺点，提供一种成本低、纯度高，适合产业化的九胜肽-1纯化方法。
解决上述技术问题所采用的技术方案由下述步骤组成：
1、溶样
将九胜肽-1粗品溶解于蒸馏水中，用滤膜过滤，收集滤液。
2、粗纯
采用高效液相色谱法，用反相聚合物柱对滤液进行粗纯，填料为F型SBC MCI GEI反相色谱填料，流动相A为0.1mol/L三氟乙酸水溶液，流动相B为0.1mol/L三氟乙酸甲醇溶液，进行梯度洗脱纯化，流动相梯度选择A:B由(70～59):(30～41)到(45～40):(55～60)，收集粗纯后的九胜肽-1溶液，减压浓缩。
3、转盐
将步骤2得到的浓缩液用弱阴离子交换柱去除三氟乙酸，转换成醋酸型九胜肽-1，填料为DEAE高流速琼脂糖微球，流动相为体积浓度2％的醋酸水溶液，收集醋酸型九胜肽-1溶液，减压浓缩，得到纯度大于99％的醋酸型九胜肽-1。
上述步骤1中，优选九胜肽-1粗品与蒸馏水的质量体积比为1g:15～50mL。
上述步骤2中，流动相梯度优选0到10分钟A:B由70:30到59:41，15到40分钟A:B由45:55到40:60。
上述步骤2中，所述F型SBC MCI GEI反相色谱填料的粒径是30～50μm。
上述步骤3中，所述DEAE高流速琼脂糖微球的粒径是50～160μm。
上述步骤2和3中，所述流动相的流速优选4～10mL/分钟，上样和洗脱的柱温优选35～45℃。
本发明具有如下有益效果：
1、本发明方法打破了直接运用反相高效液相色谱法进行反复纯化的传统多肽纯化方法，将反相聚合物柱与弱阴离子交换柱结合使用，先对九胜肽-1进行粗纯，除去了大部分杂质，再用弱阴离子交换柱进行脱盐，将三氟乙酸型九胜肽-1转换成醋酸型九胜肽-1，并进一步纯化了多肽，极大地提高了纯化效率。
2、本发明方法粗纯过程中使用三氟乙酸水溶液和三氟乙酸甲醇溶液做为动相，甲醇用量少且价格低廉，对环境污染小，节省了整个纯化过程中流动相的成本，且纯化工艺较为环保。
3、本发明方法两种柱子交替使用，有效地弥补了单一柱子难以完全分离粗肽中不同结构、不同化学性质的杂质，得到的九胜肽-1纯度高(大于99％)，且收率高。
4、本发明方法易于工业放大，能达到九胜肽-1成本低、收率高、产业化的要求。
附图说明
图1是实施例1纯化后的九胜肽-1的色谱图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。
实施例1
1、溶样
将0.3g固相合成的九胜肽-1粗品加入5mL蒸馏水中，超声分散使其完全溶解，然后用0.45μm滤膜过滤，收集滤液。
2、粗纯
采用高效液相色谱法，用反相聚合物柱对滤液进行粗纯，填料是粒径为30～50μm的F型SBC MCI GEI反相色谱填料(由成都科谱生物有限公司提供)，柱子填装体积为30mL，流动相A为0.1mol/L三氟乙酸水溶液，流动相B为0.1mol/L三氟乙酸甲醇溶液，流速为4mL/分钟，柱温为40℃，检测波长为215nm，进样前反相聚合物柱先用0.1mol/L三氟乙酸水溶液平衡至电导率恒定不变，然后上样，对样品进行梯度洗脱纯化，流动相梯度选择0到10分钟A:B由70:30到59:41，15到40分钟A:B由45:55到40:60，收集粗纯后的九胜肽-1溶液，将粗纯后的九胜肽-1溶液在40℃减压旋蒸浓缩，浓缩至九胜肽-1含量为30～50mg/mL。
3、转盐
将步骤2得到的浓缩液用弱阴离子交换柱去除三氟乙酸，转换成醋酸型九胜肽-1，填料是粒径为50～160μm的DEAE高流速琼脂糖微球(由西安交大保赛生物技术股份有限公司提供)，柱子填装体积为30mL，流动相是体积浓度为2％的醋酸水溶液，流速为4mL/分钟，柱温为40℃，检测波长为215nm，进样前弱阴离子交换柱先用体积浓度为2％的醋酸水溶液平衡至电导率恒定不变，平衡后上样，收集醋酸型九胜肽-1溶液，将醋酸型九胜肽-1溶液在40℃减压旋蒸浓缩后，冷冻干燥，得到纯度大于99％的醋酸型九胜肽-1，九胜肽-1的纯化收率为79％。其色谱图见图1。
实施例2
本实施例的溶样步骤1中，将1g固相合成的九胜肽-1粗品加入50mL蒸馏水中，超声分散使其完全溶解，然后用0.45μm滤膜过滤，收集滤液。其他步骤与实施例1相同，得到纯度大于99％的醋酸型九胜肽-1，九胜肽-1的纯化收率为76％。
实施例3
本实施例的粗纯步骤2中，流动相梯度选择0到10分钟A:B由65:35到55:45，15到40分钟A:B由55:45到40:60，其他步骤与实施例2相同，得到纯度大于99％的醋酸型九胜肽-1，九胜肽-1的纯化收率为72％。
实施例4
本实施例的溶样步骤1中，将5g固相合成的九胜肽-1粗品加入100mL蒸馏水中，超声分散使其完全溶解，然后用0.45μm滤膜过滤，收集滤液。其他步骤与实施例1相同，得到纯度大于99％的醋酸型九胜肽-1，九胜肽-1的纯化收率为79％。

Claims (7)

1.一种低成本纯化九胜肽-1的方法，其特征在于它由下述步骤组成：
(1)溶样
将九胜肽-1粗品溶解于蒸馏水中，用滤膜过滤，收集滤液；
(2)粗纯
采用高效液相色谱法，用反相聚合物柱对滤液进行粗纯，填料为F型SBC MCIGEI反相色谱填料，流动相A为0.1mol/L三氟乙酸水溶液，流动相B为0.1mol/L三氟乙酸甲醇溶液，进行梯度洗脱纯化，流动相梯度选择A:B由(70～59):(30～41)到(45～40):(55～60)，收集粗纯后的九胜肽-1溶液，减压浓缩；
(3)转盐
将步骤(2)得到的浓缩液用弱阴离子交换柱去除三氟乙酸，转换成醋酸型九胜肽-1，填料为DEAE高流速琼脂糖微球，流动相为体积浓度2％的醋酸水溶液，收集醋酸型九胜肽-1溶液，减压浓缩，得到纯度大于99％的醋酸型九胜肽-1。
2.根据权利要求1所述的低成本纯化九胜肽-1的方法，其特征在于：在步骤(1)中，九胜肽-1粗品与蒸馏水的质量体积比为1g:15～50mL。
3.根据权利要求1所述的低成本纯化九胜肽-1的方法，其特征在于：在步骤(2)中，流动相梯度选择0到10分钟A:B由70:30到59:41，15到40分钟A:B由45:55到40:60。
4.根据权利要求3所述的低成本纯化九胜肽-1的方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述F型SBC MCI GEI反相色谱填料的粒径是30～50μm。
5.根据权利要求1所述的低成本纯化九胜肽-1的方法，其特征在于：在步骤(3)中，所述DEAE高流速琼脂糖微球的粒径是50～160μm。
6.根据权利要求1～5任意一项所述的低成本纯化九胜肽-1的方法，其特征在于：在步骤(2)和(3)中，所述流动相的流速为4～10mL/分钟。
7.根据权利要求1～5任意一项所述的低成本纯化九胜肽-1的方法，其特征在于：在步骤(2)和(3)中，上样和洗脱的柱温为35～45℃。
CN201611197530.5A 2016-12-22 2016-12-22 一种低成本纯化九胜肽-1的方法 Active CN106749526B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611197530.5A CN106749526B (zh) 2016-12-22 2016-12-22 一种低成本纯化九胜肽-1的方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201611197530.5A CN106749526B (zh) 2016-12-22 2016-12-22 一种低成本纯化九胜肽-1的方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN106749526A true CN106749526A (zh) 2017-05-31
CN106749526B CN106749526B (zh) 2020-06-19

Family

ID=58897242

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201611197530.5A Active CN106749526B (zh) 2016-12-22 2016-12-22 一种低成本纯化九胜肽-1的方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN106749526B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113952944A (zh) * 2021-12-23 2022-01-21 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司 一种纯化九肽-1的方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101531705A (zh) * 2009-04-21 2009-09-16 深圳市翰宇药业有限公司 一种纯化卡贝缩宫素的方法
CN101538314A (zh) * 2009-01-13 2009-09-23 深圳市翰宇药业有限公司 一种纯化爱啡肽的方法
CN102690329A (zh) * 2011-03-25 2012-09-26 杭州九源基因工程有限公司 一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法
CN102702321A (zh) * 2012-06-14 2012-10-03 吉尔生化（上海）有限公司 一种纯化依非巴特的方法
CN102977192A (zh) * 2012-12-06 2013-03-20 安徽工程大学 一种卡贝缩宫素的纯化方法
CN103613655A (zh) * 2013-11-20 2014-03-05 陕西东大生化科技有限责任公司 一种低成本纯化艾塞那肽的方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101538314A (zh) * 2009-01-13 2009-09-23 深圳市翰宇药业有限公司 一种纯化爱啡肽的方法
CN101531705A (zh) * 2009-04-21 2009-09-16 深圳市翰宇药业有限公司 一种纯化卡贝缩宫素的方法
CN102690329A (zh) * 2011-03-25 2012-09-26 杭州九源基因工程有限公司 一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法
CN102702321A (zh) * 2012-06-14 2012-10-03 吉尔生化（上海）有限公司 一种纯化依非巴特的方法
CN102977192A (zh) * 2012-12-06 2013-03-20 安徽工程大学 一种卡贝缩宫素的纯化方法
CN103613655A (zh) * 2013-11-20 2014-03-05 陕西东大生化科技有限责任公司 一种低成本纯化艾塞那肽的方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113952944A (zh) * 2021-12-23 2022-01-21 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司 一种纯化九肽-1的方法
CN113952944B (zh) * 2021-12-23 2022-03-29 浙江湃肽生物有限公司深圳分公司 一种纯化九肽-1的方法

Also Published As

Publication number Publication date
CN106749526B (zh) 2020-06-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101372492B (zh) 一种制备高纯度莫西克汀的方法
CN106699847B (zh) 一种低成本纯化六胜肽的方法
CN105669560B (zh) 一种从发酵液中分离提取四氢嘧啶的方法
CN107501045B (zh) 一种利用大孔吸附树脂从发酵液中分离提纯丁三醇的方法
CN109593034A (zh) 一种从银杏叶提取废液中制备莽草酸的方法
CN108823268A (zh) 鱼胶原抗氧化肽的制备方法
CN101584853B (zh) 一种地龙蛋白多肽制剂
CN105131079A (zh) 一种醋酸去氨加压素的纯化方法
CN106349324A (zh) 从油橄榄叶中提取分离山楂酸的方法
CN106226426B (zh) 一种高效液相色谱拆分卡格列净五元环杂质对映体的方法
CN106749526A (zh) 一种低成本纯化九胜肽‑1的方法
CN102993251A (zh) 一种用高效液相色谱纯化台勾霉素b的方法
CN106632608A (zh) 一种六胜肽的纯化方法
CN102093458A (zh) 一种富集纯化桦树皮中白桦酯醇的方法
CN106831943B (zh) 一种低成本纯化透皮肽的方法
CN101230080A (zh) 模拟移动床色谱拆分20(S)和20(R)-人参皂苷Rg3对映体
CN104558101A (zh) 一种海绵动物水溶性肽类的制备方法
CN101456898B (zh) 一种使用氢键吸附色谱分离纯化多肽的方法
CN103951665A (zh) 新型托品醇类氨基酸阴离子型手性离子液体的制备、固定化及其拆分dl-苯丙氨酸和dl-色氨酸的方法
CN104558123A (zh) 一种采用动态轴向压缩柱系统制备纽莫康定b0的方法
CN102464586A (zh) 一种丹酚酸a的制备方法
CN104945468A (zh) Mmaf手性异构体的制备方法及其应用
CN101525382A (zh) 一种纯化普兰林肽的方法
CN108440619A (zh) 山茱萸提取物制备高纯度马钱子苷的方法
CN101628930A (zh) 一种三羟甲基氨基甲烷配基琼脂糖介质分离多肽的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant