CN102690329A - 一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种戈舍瑞林的纯化方法,经Source柱和反相色谱柱进行梯度洗脱纯化,得到较高纯度的戈舍瑞林三氟乙酸盐,然后采用阴离子交换转盐法转成醋酸盐。本发明通过组合纯化方法纯化戈舍瑞林,纯度高且收率好,提供了一条适于规模化纯化戈舍瑞林的工艺方法,达到产业化要求。
Description
技术领域
本发明属于多肽纯化技术领域,具体涉及一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法。
技术背景
戈舍瑞林(goserelin)的化学名为pyro-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Ser(Bu)-Leu-Arg-Pro-Azgly-NH2,其分子式为C59H84N18O14,分子量为1269.42,上市产品以醋酸盐形式存在。戈舍瑞林的化学结构式如下所示:
戈舍瑞林是促黄体生成释放激素(LH RH)的高活性衍生物,它可以抑制性激素的分泌(睾丸酮和雌二醇),从而使激素敏感性肿瘤萎缩。适应症主要为:
(1)前列腺癌:适用于可用激素治疗的前列腺癌;
(2)乳腺癌:适用于可用激素治疗的绝经前期及围绝经期妇女的乳腺癌;
(3)子宫内膜异位症:缓解症状包括减轻疼痛并减少子宫内膜损伤的大小和数目。
戈舍瑞林属于寡肽类化合物,具有易于吸收、生物利用度高、生物活性强且对人体无毒副作用等诸多优点,其效果较好且副作用小,具有很好的市场前景。临床上主要治疗乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜异位症等一些激素依赖性疾病。
US5602231中有关于合成戈舍瑞林的报道,通过低浓度的三氟乙酸/二氯甲烷溶液将戈舍瑞林从树脂裂解下来,最后在高效液相色谱上用C18柱将其纯化。但方法只涉及毫克级的多肽纯化,纯化规模很小,不适合于工业化生产。
在已发表的文献和专利中,未有大规模生产且具有较高收率的戈舍瑞林纯化工艺报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一条适于产业化纯化戈舍瑞林的工艺方法,使用组合纯化方法纯化戈舍瑞林,纯度高且收率好,可以实现10g级以上的工业化生产要求,克服了现有技术存在的缺陷。
本发明的方法包括如下步骤:
1)、将戈舍瑞林粗肽先经Source RPC柱进行梯度洗脱纯化,流动相以0.01-0.5%三氟乙酸水溶液为A相,色谱纯乙腈为B相,洗脱梯度为B%:10%-60%,收集目的峰值的肽溶液;
2)、将步骤1)纯化所得的目标肽溶液经反相高效液相色谱柱进行梯度洗脱纯化,流动相以0.01-0.5%三氟乙酸水溶液为A相,色谱纯乙腈为B相,洗脱梯度为B%:20%-50%,收集目标峰值的肽溶液;
3)、将目标峰肽溶液经阴离子交换树脂进行离子交换,流动相为0.01-0.5%醋酸水溶液,收集目标峰,经冷冻干燥得到戈舍瑞林醋酸盐。
本发明中所述的戈舍瑞林粗肽意指经固相合成戈舍瑞林-树脂后,经裂解反应后从树脂上脱落的戈舍瑞林多肽混合物,或任何已经纯化或未经纯化的纯度低于95%的戈舍瑞林多肽混合物。
戈舍瑞林的固相合成方法已经为本领域技术人员所熟悉,具体可参考us5602231,wo97/48726、EP1008656或wo2008/044890实施例3中公开的方法。本发明中戈舍瑞林粗肽的制备优先参考us5602231的方法。
上述步骤中,步骤(1)和/或(2)中三氟乙酸水溶液的浓度优选为0.05-0.1%。
上述步骤中,步骤(1)的洗脱梯度优选为B%:20%-45%,步骤(2)的洗脱梯度优选为B%:25%-45%。
上述步骤中,洗脱流速可根据纯化柱子的大小做相应调整,克级水平的纯化洗脱流速为50-100ml/min;10克级以上的纯化洗脱流速为400-500ml/min,优选为450ml/min。
上述步骤中,柱温为20-55℃,优选为25-30℃。
上述步骤中,Source RPC柱优选为Source 15RPC或Source30RPC。
上述步骤中,反相高效液相色谱柱为C4、C8、C18,优选为C18柱。
上述步骤中,所述的阴离子交换树脂为能够提供醋酸根实现离子交换的树脂,所述的阴离子交换树脂优选为Amberlite IRA-400。
上述步骤中,检测波长为220nm、240nm、260nm,优先为240nm。
本发明通过SOURCE RPC柱、反相高效液相色谱柱和阴离子交换柱组合纯化戈舍瑞林,纯度大于98%,且收率高,提供了一条适于规模化纯化戈舍瑞林的工艺方法,达到产业化要求。
附图说明
图1经纯化后的戈舍瑞林醋酸盐的HPLC检测图谱,纯度为98.8%。
具体实施方式
实施例1克级水平纯化
1.样品处理:经固相合成的戈舍瑞林肽树脂用2%三氟乙酸/二氯甲烷裂解,Φ=0.45μm滤膜过滤,收集滤液备用。
2.第一次纯化:纯化条件:色谱柱:以Source 15RPC为色谱柱,柱子直径和长度为:5cm/25cm。流动相:A相:0.05%三氟乙酸水溶液;B相:乙腈。流速:70-80ml/min。检测波长:240nm。梯度:B%:10%-45%(40min)。进样量为1.5-2.0g。
纯化过程:将色谱柱用80%乙腈冲洗干净后平衡上样,上样量为1.5-2.0g。线性梯度洗脱40min,收集目标峰,将收集的目标肽溶液于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约50-60mg/mL后备用。
3.第二次纯化:纯化条件:色谱柱:以C18为色谱柱,柱子直径和长度为:5cmx25cm。流动相:A相:0.05%三氟乙酸水溶液;B相:乙腈。流速:50-60ml/min。检测波长:240nm。梯度:B%:25%-45%(40min)。
纯化过程:将色谱柱用80%乙腈冲洗干净后平衡上样,上样量为35-45ml样品溶液。线性梯度洗脱40min,收集目标峰,将收集的目标肽溶液于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约55-65mg/ml后备用。
4.转盐:色谱柱填料为阴离子交换树脂:Amberlite IRA-400,柱子直径和长度为:5cmx25cm。流动相:0.05%醋酸水溶液。流速:50-60ml/min。检测波长:240nm。
转盐过程:将色谱柱用去离子水平衡后上样,上样量为30-40ml样品溶液。0.05%醋酸水溶液洗脱60min,收集目标峰,将收集的目标肽溶液合并,于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约90-100mg/ml。冷冻干燥后即可得到纯度大于98%的符合标准的醋酸盐戈舍瑞林,纯化收率45.1%。
实施例2 10克级以上水平纯化
1.样品处理:经固相合成的戈舍瑞林肽树脂用2%三氟乙酸/二氯甲烷裂解,Φ=0.45μm滤膜过滤,收集滤液备用。
2.第一次纯化:纯化条件:色谱柱:以Source为色谱柱,柱子直径和长度为:15cm/10cm。流动相:A相:0.05%三氟乙酸水溶液;B相:乙腈。流速:400-500ml/min。检测波长:240nm。梯度:B%:10%-45%(40min)。进样量为16-20g。
纯化过程:将色谱柱用80%乙腈冲洗干净后平衡上样,上样量为16-20g。线性梯度洗脱40min,收集目标峰,将收集的目标肽溶液于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约50-60mg/mL后备用。
3.第二次纯化:纯化条件:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的色谱柱,柱子直径和长度为:15cmx25cm。流动相:A相:0.05%三氟乙酸水溶液;B相:乙腈。流速:400-500ml/min。检测波长:240nm。梯度:B%:25%-45%(40min)。
纯化过程:将色谱柱用80%乙腈冲洗干净后平衡上样,上样量为350-400ml样品溶液。线性梯度洗脱40min,收集目标峰,将收集的目标肽溶液于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约50-60mg/ml后备用。
4.转盐:色谱柱填料为阴离子交换树脂:Amberlite IRA-400,柱子直径和长度为:15cmx25cm。流动相:0.05%醋酸水溶液。流速:150-180ml/min。检测波长:240nm。
转盐过程:将色谱柱用去离子水平衡后上样,上样量为350-400ml样品溶液。0.05%醋酸水溶液洗脱80min,收集目标峰,将收集的目标肽溶液合并,于水温不超过32℃下减压旋蒸浓缩至约90-100mg/ml。冷冻干燥后即可得到符合标准的醋酸盐戈舍瑞林,纯化收率44.2%,,纯度为98.8%(图1)。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明,不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干简单推演或替换,都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种戈舍瑞林的纯化方法,包括以下步骤:
(1)、将戈舍瑞林粗肽先经Source RPC柱进行梯度洗脱纯化,流动相以0.01-0.5%三氟乙酸水溶液为A相,色谱纯乙腈为B相,洗脱梯度为B%:10%-60%,收集目的峰值的肽溶液;
(2)、将步骤(1)纯化所得的目标肽溶液经反相高效液相色谱柱进行梯度洗脱纯化,流动相以0.01-0.5%三氟乙酸水溶液为A相,色谱纯乙腈为B相,洗脱梯度为B%:20%-50%,收集目标峰值的肽溶液;
(3)、将目标峰肽溶液经阴离子交换树脂进行离子交换,流动相为0.01-0.5%醋酸水溶液,收集目标峰,经冷冻干燥得到戈舍瑞林醋酸盐。
2.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤(1)和/或(2)中三氟乙酸水溶液的浓度为0.05-0.1%。
3.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤(1)中的洗脱梯度为B%:20%-45%。
4.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤(2)中的洗脱梯度为B%:25%-45%。
5.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤中洗脱流速可根据纯化柱子的大小做相应调整。
6.根据权利要求5所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤(1)或步骤(2)中克级水平的纯化洗脱流速为50-100ml/min,10克级以上的纯化洗脱流速为400-500ml/min。
7.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤中柱温为20-55℃。
8.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤(1)中Source RPC柱为Source 15RPC或Source 30RPC。
9.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤(2)中反相高效液相色谱柱为C4、C8或C18。
10.根据权利要求1所述的纯化方法,其特征在于,所述步骤(3)中的阴离子交换树脂为Amberlite IRA-400。
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Cited By (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103012564A (zh) * | 2013-01-15 | 2013-04-03 | 成都天台山制药有限公司 | 高纯度的曲普瑞林及其纯化方法 |
CN103012565A (zh) * | 2013-01-15 | 2013-04-03 | 成都天台山制药有限公司 | 一种曲普瑞林及其固相合成制备方法 |
CN104530214A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种醋酸普兰林肽的制备方法 |
CN105223296A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-01-06 | 江苏开元医药化工有限公司 | 一类多肽的纯化方法 |
CN105399793A (zh) * | 2015-12-24 | 2016-03-16 | 北京康立生医药技术开发有限公司 | 一种胆烷酸的制备方法 |
RU2578414C1 (ru) * | 2015-03-26 | 2016-03-27 | Олег Ростиславович Михайлов | Способ очистки гозерелина |
CN105646671A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-06-08 | 吉尔生化(上海)有限公司 | 一种纯化戈那瑞林的方法 |
CN105693844A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-22 | 泰州施美康多肽药物技术有限公司 | 一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法 |
CN106749526A (zh) * | 2016-12-22 | 2017-05-31 | 陕西慧康生物科技有限责任公司 | 一种低成本纯化九胜肽‑1的方法 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5602231A (en) * | 1991-06-14 | 1997-02-11 | Zeneca Limited | Process for making peptides |
CN1260005A (zh) * | 1997-08-04 | 2000-07-12 | 伊藤火腿株式会社 | Lh-rh衍生物的制备方法 |
WO2008044890A1 (en) * | 2006-10-12 | 2008-04-17 | Dong Kook Pharm. Co., Ltd | A method for preparing peptides using by solid phase synthesis |
WO2010095953A1 (en) * | 2009-02-19 | 2010-08-26 | Axellia Pharmaceuticals Aps | Process for purifying lipopeptides |
-
2011
- 2011-03-25 CN CN201110073257.6A patent/CN102690329B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US5602231A (en) * | 1991-06-14 | 1997-02-11 | Zeneca Limited | Process for making peptides |
CN1260005A (zh) * | 1997-08-04 | 2000-07-12 | 伊藤火腿株式会社 | Lh-rh衍生物的制备方法 |
WO2008044890A1 (en) * | 2006-10-12 | 2008-04-17 | Dong Kook Pharm. Co., Ltd | A method for preparing peptides using by solid phase synthesis |
WO2010095953A1 (en) * | 2009-02-19 | 2010-08-26 | Axellia Pharmaceuticals Aps | Process for purifying lipopeptides |
Cited By (12)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN103012564A (zh) * | 2013-01-15 | 2013-04-03 | 成都天台山制药有限公司 | 高纯度的曲普瑞林及其纯化方法 |
CN103012565A (zh) * | 2013-01-15 | 2013-04-03 | 成都天台山制药有限公司 | 一种曲普瑞林及其固相合成制备方法 |
CN103012564B (zh) * | 2013-01-15 | 2013-11-13 | 成都天台山制药有限公司 | 高纯度的曲普瑞林及其纯化方法 |
CN103012565B (zh) * | 2013-01-15 | 2014-07-16 | 成都天台山制药有限公司 | 一种曲普瑞林及其固相合成制备方法 |
CN104530214A (zh) * | 2014-12-23 | 2015-04-22 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种醋酸普兰林肽的制备方法 |
CN104530214B (zh) * | 2014-12-23 | 2018-07-20 | 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 | 一种醋酸普兰林肽的制备方法 |
RU2578414C1 (ru) * | 2015-03-26 | 2016-03-27 | Олег Ростиславович Михайлов | Способ очистки гозерелина |
CN105223296A (zh) * | 2015-10-16 | 2016-01-06 | 江苏开元医药化工有限公司 | 一类多肽的纯化方法 |
CN105399793A (zh) * | 2015-12-24 | 2016-03-16 | 北京康立生医药技术开发有限公司 | 一种胆烷酸的制备方法 |
CN105646671A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-06-08 | 吉尔生化(上海)有限公司 | 一种纯化戈那瑞林的方法 |
CN105693844A (zh) * | 2016-03-10 | 2016-06-22 | 泰州施美康多肽药物技术有限公司 | 一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法 |
CN106749526A (zh) * | 2016-12-22 | 2017-05-31 | 陕西慧康生物科技有限责任公司 | 一种低成本纯化九胜肽‑1的方法 |
Also Published As
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