CN106167516A - 一种大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的方法 - Google Patents
一种大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106167516A CN106167516A CN201610739680.8A CN201610739680A CN106167516A CN 106167516 A CN106167516 A CN 106167516A CN 201610739680 A CN201610739680 A CN 201610739680A CN 106167516 A CN106167516 A CN 106167516A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- leuprorelin
- purified
- isolated
- mobile phase
- extensive
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
本发明涉及一种利用反相高效液相色谱大规模分离纯化亮丙瑞林的一种方法,亮丙瑞林粗品溶解在乙腈水溶液中,超声处理,滤膜过滤,取滤液待用;使用高效液相色谱仪器对过滤后的粗品进行分离纯化,将浓缩液经过反相柱换盐转成醋酸盐;将转好醋酸盐且纯度99%以上产品进行减压旋蒸浓缩、冷冻干燥,得到粉末状产品,经检测合格即为最终产品。本发明使用反相高效液相色谱分离纯化亮丙瑞林,可以一次性生产公斤级纯度达到99%的亮丙瑞林成品,其样品中不含三乙胺残留溶剂,而且此工艺能够进行更大规模的工业化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,特别涉及一种利用反相高效液相色谱大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的一种方法。
背景技术
亮丙瑞林是GnRH类似物,重复给予大剂量的LH-RH或其高活性衍生物醋酸亮丙瑞林,在首次给药后能立即产生一过性的垂体-性腺系统兴奋作用 (急性作用),然后抑制垂体生成和释放促性腺激素。它还进一步抑制卵巢和睾丸对促性腺激素的反应,从而降低雌二醇和睾酮的生成(慢性作用)。醋酸亮丙瑞林的促LH释放活性约为LH-RH的100倍,它的抑制垂体-性腺系统功能的作用也强于LH-RH。醋酸亮丙瑞林是高活性的LH-RH衍生物,由于它对蛋白分解酶的抵抗力和对LH-RH受体的亲和力都比LH-RH强,所以能有效地抑制垂体-性腺系统的功能。此外,醋酸亮丙瑞林又是一种缓释制剂,它恒定地向血液中释放醋酸亮丙瑞林,故能有效地降低卵巢和睾丸的反应,产生高度有效的垂体-性腺系统的抑制作用。
亮丙瑞林的适应症为:子宫内膜异位症;伴有月经过多、下腹痛、腰痛及贫血等的子宫肌瘤;绝经前乳腺癌,且雌激素受体阳性患者;前列腺癌;中枢性性早熟症。临床主要用于前列腺癌及子宫内膜异位症。在已发表的文献和专利中,较少涉及纯化工艺报道。
发明内容
本发明针对现有技术中,纯化亮丙瑞林成本高、收率低、生产周期长等问题,提供了一种大规模分离纯化亮丙瑞林的工艺方法,纯度高且收率好,达到工业化生成的要求。
本发明的技术方案如下:一种大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的方法,包括以下步骤:
1)亮丙瑞林粗品溶解在乙腈水溶液中,超声处理,滤膜过滤,取滤液待用;
2)使用高效液相色谱仪器对过滤后的粗品进行分离纯化:通过DAC-CXTH200制备动态轴向加压柱,流动相A为质量浓度0.012%~3.0%的磷酸二氢钠缓冲溶液,并用磷酸或氢氧化钠调pH至2.5~4.5。流动相B为乙腈,进行梯度洗脱分离纯化,流速为700-1000ml/min,检测波长为220nm,分段收集目的峰;将分离纯化后的纯度99%以上高浓度目的肽溶液于水温不超过40℃下进行减压旋蒸浓缩,至约40-50mg/ml后备用。
3)将浓缩液经过反相柱换盐转成醋酸盐。
4)将转好醋酸盐且纯度99%以上产品进行减压旋蒸浓缩、冷冻干燥,得到粉末状产品,经检测合格即为最终产品。
具体地步骤2)中纯化条件为:通过DAC-CXTH200制备动态轴向加压柱,流动相A为磷酸二氢钠缓冲溶液,用磷酸或氢氧化钠调pH;流动相B为乙腈,进行流动相梯度洗脱分离纯化,流速为700-1000ml/min,检测波长为220nm,分段收集目的峰;
步骤2)中纯化过程为:将色谱柱用流动相A平衡,上样品溶液,线性梯度洗脱40min,收集目的峰;将分离纯化后纯度99%以上高浓度目的肽溶液于不超过40℃的水温下进行减压旋蒸浓缩,浓缩后至约40-50mg/ml后备用;
步骤3)中转盐具体过程为:将色谱柱用流动相A平衡后上样,醋酸铵水溶液冲洗柱子3个柱体积,每一个柱体积约8分钟;最后用占本次冲洗体积总量50%的质量百分浓度0.1%醋酸乙腈溶液,把样品冲洗下来;
步骤4)样品终处理:收集转好醋酸盐的肽溶液进行减压旋蒸浓缩至40-50mg/ml,得到纯度99%以上产品,再经过冷冻干燥,得到粉末状产品,经检测合格即为最终产品。
步骤1)中溶解亮丙瑞林粗品的乙腈溶液的浓度为25%。
步骤1)中亮丙瑞林粗品与乙腈溶液的质量体积比为1g/50ml。
步骤1)所述的滤膜的孔径为0.4-0.5μm。
步骤2)所使用的DAC-CXTH200制备动态轴向加压柱内装固定相为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶。
步骤2)所述的流动相梯度选择0到40分钟A:B由(85~75):(15~25)到(25~15):(75~85)。
步骤2)所述的流动相其体系为水、乙腈体系,且水体系中加入质量百分浓度0.012%~3.0%磷酸二氢钠作为离子对试剂,其pH值为2.5-4.5。
更为优选的方案是,步骤2)所述的流动相A,其磷酸二氢钠的质量百分浓度为0.3%-0.6%,pH值为3.0-4.0。磷酸二氢钠浓度过低,影响分离效果;磷酸二氢钠浓度过高,在生产过程中易析出,造成仪器和柱子损坏。
步骤3)所述的反相动态轴向加压柱转盐所用到的流动相为20~400mmol/L醋酸铵缓冲盐体系。
步骤2)中上样量为70-100g,步骤3)中上样量为120-200g。
本发明的有益效果:本发明提出了一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,使用反相高效液相色谱分离纯化亮丙瑞林,并在转盐过程中仍借助纯化色谱系统,无需购买额外的仪器和色谱柱,使用的流动相也是反相高效液相色谱中常用的试剂,通过此方法可以一次性生产公斤级纯度达到99%的亮丙瑞林成品,其样品中不含三乙胺残留溶剂,而且此工艺能够进行更大规模的工业化生产。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅为本发明的部分实施方式,而不是全部,不能理解为对本发明内容的限制。
实施例1
1.样品处理:每克亮丙瑞林粗品溶解于50ml体积比:乙腈:水=25:75的乙腈水溶液中,超声处理,待样品完全溶解后,用孔径为0.45μm滤膜过滤,收集滤液待用。
2.纯化:纯化条件:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的DAC-CXTH200动态轴向加压柱,柱子直径和填装长度为:20*25cm。流动相A:质量百分浓度0.1%磷酸二氢钠水溶液,用磷酸调pH值至3.0;B相:乙腈。流速700~1000ml/min。检测波长220nm。梯度:B%:18~78%(40min)。进样量为80g。
纯化过程:将色谱柱用流动相A平衡后上样,上样量4L样品溶液。线性梯度洗脱40min,收集目的峰,将收集的目的肽溶液于不超过40℃下进行减压旋蒸浓缩,至约40-50mg/ml后备用。
3.转盐:将色谱柱用流动相A平衡后上样,上样量120-200g,用40mmol/L醋酸铵水溶液冲洗柱子3个柱体积(一个柱体积约8分钟);最后用占本次冲洗体积总量50%的质量百分浓度0.1%醋酸乙腈溶液,把样品冲洗下来,收集转好醋酸盐的肽溶液进行减压旋蒸至40-50mg/ml,转至大小合适的不锈钢盘中。冷冻干燥后得到纯度大于99%的醋酸亮丙瑞林,其质量符合欧洲药典标准和美国药典标准,收率为65.2%。
实施例2
1.样品处理:每克亮丙瑞林粗品溶解于50ml体积比:乙腈:水=25:75的乙腈水溶液中,超声处理,待样品完全溶解后,用孔径为0.45μm滤膜过滤,收集滤液待用。
2.纯化:纯化条件:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的DAC-CXTH200动态轴向加压柱,柱子直径和填装长度为:20*25cm。流动相A:质量百分浓度0.2%磷酸二氢钠水溶液,用磷酸调pH值至3.5;B相:乙腈。流速700~1000ml/min。检测波长220nm。梯度:B%:15~75%(40min)。进样量为80g。
纯化过程:将色谱柱用流动相A平衡后上样,上样量4L样品溶液。线性梯度洗脱40min,收集目的峰,将收集的目的肽溶液于不超过40℃下进行减压旋蒸浓缩,至约40-50mg/ml后备用。
3.转盐:将色谱柱用流动相A平衡后上样,上样量120-200g,用40mmol/L醋酸铵水溶液冲洗柱子3个柱体积(一个柱体积约8分钟);最后用占本次冲洗体积总量50%的质量百分浓度0.1%醋酸乙腈溶液,把样品冲洗下来,收集转好醋酸盐的肽溶液进行减压旋蒸至40-50mg/ml,转至大小合适的不锈钢盘中。冷冻干燥后得到纯度大于99%的醋酸亮丙瑞林,其质量符合欧洲药典标准和美国药典标准,收率为69.1%。
实施例3
1.样品处理:每克亮丙瑞林粗品溶解于50ml体积比:乙腈:水=25:75的乙腈水溶液中,超声处理,待样品完全溶解后,用孔径为0.45μm滤膜过滤,收集滤液待用。
2.纯化:纯化条件:色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相的DAC-CXTH200动态轴向加压柱,柱子直径和填装长度为:20*25cm。流动相A:质量百分浓度0.15%磷酸二氢钠水溶液,用磷酸调pH值至4.0;B相:乙腈。流速700~1000ml/min。检测波长220nm。梯度:B%:25~85%(40min)。进样量为100g。
纯化过程:将色谱柱用流动相A平衡后上样,上样量5L样品溶液。线性梯度洗脱40min,收集目的峰,将收集的目的肽溶液于不超过40℃下进行减压旋蒸浓缩,至约40-50mg/ml后备用。
3.转盐:将色谱柱用流动相A平衡后上样,上样量120-200g,用40mmol/L醋酸铵水溶液冲洗柱子3个柱体积(一个柱体积约8分钟);最后用占本次冲洗体积总量50%的质量百分浓度0.1%醋酸乙腈溶液,把样品冲洗下来,收集转好醋酸盐的肽溶液进行减压旋蒸至40-50mg/ml,转至大小合适的不锈钢盘中。冷冻干燥后得到纯度大于99%的醋酸亮丙瑞林,其质量符合欧洲药典标准和美国药典标准,收率为70.5%。
本发明使用反相高效液相色谱法纯化亮丙瑞林,得到符合欧洲药典标准和美国药典标准的醋酸亮丙瑞林,纯度高且收率好,提供了一条适于规模化生产亮丙瑞林的工艺方法,达到工业化生产要求。对其他类似肽的纯化也有借鉴意义。
以上内容是结合具体的优选实施方式对本发明所作的进一步详细说明,不能认定本发明的具体实施只局限于这些说明。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干简单推演和替换,都应当视为属于本发明的保护范围。
Claims (9)
1.一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,包括以下步骤:
1)样品处理:将亮丙瑞林粗品溶解在25%的乙腈水溶液中,超声处理,滤膜过滤,取滤液待用;
2)纯化:a、纯化条件:通过DAC-CXTH200制备动态轴向加压柱,流动相A为磷酸二氢钠缓冲溶液,用磷酸或氢氧化钠调pH;流动相B为乙腈,进行流动相梯度洗脱分离纯化,流速为700-1000ml/min,检测波长为220nm,分段收集目的峰;
b、纯化过程:将色谱柱用流动相A平衡,上样品溶液,线性梯度洗脱40min,收集目的峰;将分离纯化后纯度99%以上高浓度目的肽溶液于不超过40℃的水温下进行减压旋蒸浓缩,浓缩后至约40-50mg/ml后备用;
3)转盐:将步骤2)中得到的浓缩液经过反相动态轴向加压柱完成离子交换转成醋酸盐;具体过程为:将色谱柱用流动相A平衡后上样,醋酸铵水溶液冲洗柱子3个柱体积,每一个柱体积约8分钟;最后用占本次冲洗体积总量50%的质量百分浓度0.1%醋酸乙腈溶液,把样品冲洗下来;
4)样品终处理:收集转好醋酸盐的肽溶液进行减压旋蒸浓缩至40-50mg/ml,得到纯度99%以上产品,再经过冷冻干燥,得到粉末状产品,经检测合格即为最终产品。
2.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:步骤1)中亮丙瑞林粗品与乙腈溶液的质量体积比为1g/50ml。
3.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:所述的滤膜的孔径为0.4-0.5μm。
4.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:DAC-CXTH200制备动态轴向加压柱内装固定相为十八烷基硅烷键合硅胶的反相硅胶。
5.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:流动相A的磷酸二氢钠质量浓度为:0.012%~3.0%,pH值为2.5~4.5。
6.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:流动相A,其磷酸二氢钠的质量百分浓度为0.3%-0.6%,pH值为3.0-4.0。
7.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:步骤2)中的流动相梯度选择0到40分钟A:B由(85~75):(15~25)到(25~15):(75~85)。
8.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:步骤3)中反相动态轴向加压柱转盐所用到的流动相A为20~400mmol/L醋酸铵缓冲盐体系。
9.根据权利要求1所述的一种大规模分离纯化亮丙瑞林的方法,其特征在于:步骤2)中上样量为70-100g,步骤3)中上样量为120-200g。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610739680.8A CN106167516A (zh) | 2016-08-29 | 2016-08-29 | 一种大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201610739680.8A CN106167516A (zh) | 2016-08-29 | 2016-08-29 | 一种大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN106167516A true CN106167516A (zh) | 2016-11-30 |
Family
ID=57376947
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201610739680.8A Pending CN106167516A (zh) | 2016-08-29 | 2016-08-29 | 一种大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN106167516A (zh) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107312072A (zh) * | 2017-06-20 | 2017-11-03 | 浙江湃肽生物有限公司 | 一种纯化分离阿托西班的方法 |
CN107312073A (zh) * | 2017-06-20 | 2017-11-03 | 浙江湃肽生物有限公司 | 一种纯化分离西曲瑞克的方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101597325A (zh) * | 2009-01-13 | 2009-12-09 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化亮丙瑞林(Leuprorelin)的方法 |
CN102219849A (zh) * | 2011-04-27 | 2011-10-19 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种大规模分离纯化艾塞那肽的方法 |
CN105622726A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-06-01 | 吉尔生化(上海)有限公司 | 一种醋酸亮丙瑞林的制备方法 |
-
2016
- 2016-08-29 CN CN201610739680.8A patent/CN106167516A/zh active Pending
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101597325A (zh) * | 2009-01-13 | 2009-12-09 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化亮丙瑞林(Leuprorelin)的方法 |
CN102219849A (zh) * | 2011-04-27 | 2011-10-19 | 滨海吉尔多肽有限公司 | 一种大规模分离纯化艾塞那肽的方法 |
CN105622726A (zh) * | 2016-02-25 | 2016-06-01 | 吉尔生化(上海)有限公司 | 一种醋酸亮丙瑞林的制备方法 |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107312072A (zh) * | 2017-06-20 | 2017-11-03 | 浙江湃肽生物有限公司 | 一种纯化分离阿托西班的方法 |
CN107312073A (zh) * | 2017-06-20 | 2017-11-03 | 浙江湃肽生物有限公司 | 一种纯化分离西曲瑞克的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN105622726A (zh) | 一种醋酸亮丙瑞林的制备方法 | |
CN106167522A (zh) | 一种大规模分离纯化特立帕肽(Teriparatide)的方法 | |
CN102690329B (zh) | 一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法 | |
CN108373499B (zh) | 一种特立帕肽醋酸盐的纯化及离子控制方法 | |
Zhang et al. | Preparative isolation of cordycepin, N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine and adenosine from Cordyceps militaris by macroporous resin and purification by recycling high-speed counter-current chromatography | |
CN101787071B (zh) | 一种伐普肽的纯化方法 | |
CN107312073A (zh) | 一种纯化分离西曲瑞克的方法 | |
CN102993293A (zh) | 一种特立帕肽醋酸盐的纯化方法 | |
CN103694319B (zh) | 一种布舍瑞林的纯化方法 | |
WO2013117122A1 (zh) | 一种阿托西班的纯化方法 | |
CN106167516A (zh) | 一种大规模分离纯化亮丙瑞林(Leupeorelin)的方法 | |
CN102863517B (zh) | 一种戈舍瑞林的纯化方法 | |
CN106349301A (zh) | 一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法 | |
CN101597325A (zh) | 一种纯化亮丙瑞林(Leuprorelin)的方法 | |
CN109879919B (zh) | 一种从酸枣仁中分离制备三种黄酮苷的方法 | |
CN109467591B (zh) | 一种西曲瑞克的纯化方法 | |
CN114369142A (zh) | 一种纯化醋酸去氨加压素的方法 | |
CN104784972B (zh) | 一种橙皮苷类免疫亲和柱的制备及其应用 | |
CN104558125A (zh) | 一种纯化多肽类pdgf受体抑制剂的方法 | |
CN105693844A (zh) | 一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法 | |
CN101851287B (zh) | 一种高比活绝经期促性腺素及其制备方法和用途 | |
CN107312072A (zh) | 一种纯化分离阿托西班的方法 | |
CN107163106A (zh) | 醋酸亮丙瑞林粗产品的纯化方法 | |
WO2021129016A1 (zh) | 一种多肽脱盐的方法 | |
CN108250272A (zh) | 卡泊芬净高效分离纯化方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
C06 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
C10 | Entry into substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20170106 Address after: Three town Zhejiang city of Shaoxing province Shengzhou city 312452 city 8 city under the head of a stove Applicant after: Zhejiang Pai peptide Biotechnology Co. Ltd. Address before: 311121 block B, building two, No. 2628 Yuhang Road, Yuhang street, Zhejiang District, Hangzhou, China, 401 Applicant before: HANGZHOU PEPTIDE BIOCHEM CO., LTD. |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20161130 |