CN106349301A - 一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法 - Google Patents

一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，包括以下步骤：1，粗提：将石榴皮粉碎得石榴皮粉，然后用浸提乙醇对石榴皮粉提取，得安石榴苷粗提液；2，吸附：将安石榴苷粗提液作为吸附液，采用大孔树脂对安石榴苷粗提液中的安石榴苷进行树脂吸附，得吸附树脂；3，解吸附：采用乙醇对吸附树脂进行解吸附，收集洗脱液；步骤4，纯化：浓缩洗脱液，对浓缩后的树脂洗脱液进行高速逆流色谱方式纯化，得安石榴苷纯化产物。本发明的分离纯化方法步骤简单、工业化操作成本低，且对安石榴苷的提取率高，提纯效果佳，纯化物中安石榴苷纯度达90％以上。

Description

一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法
技术领域
本发明涉及多酚类物质分离纯化方法的技术领域，具体涉及一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法。
背景技术
安石榴苷(Punicalagin)属于多酚类物质，分子式为C48H28O30，为石榴科植物石榴(Punica granatum L.)的皮提取物里面的主要活性成分，具有抗氧化、抗癌、抗菌、抗病毒、抗炎等多种药理学功效。安石榴苷已被证实具有优良的抗氧化性，可被用作抗氧化剂在食品行业中广泛使用，现已在日本和法国用于化妆品方面。目前，安石榴苷依靠天然提取方式制备，且提取主要原料为石榴皮。现有的安石榴苷的提取方法工艺复杂、能耗大，且提取率低。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，该方法提取工艺简单，提取率高。
为了达到上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现。
一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，粗提：将石榴皮烘干、粉碎、过筛，得石榴皮粉；然后将所述石榴皮粉和浸提乙醇按照1g∶(20-30)mL的比例混合，并在60-80℃的条件下提取，抽滤多次，合并滤液；最后将合并的滤液浓缩，得安石榴苷粗提液；
步骤2，吸附：将所述安石榴苷粗提液作为吸附液，采用大孔树脂对安石榴苷粗提液中的安石榴苷进行树脂吸附，得吸附树脂；
步骤3，解吸附：采用乙醇对所述吸附树脂进行洗脱，收集洗脱液；
步骤4，纯化：对所述洗脱液进行浓缩，浓缩至树脂洗脱液中的安石榴苷浓度为60-70％，对浓缩后的树脂洗脱液进行高速逆流色谱方式纯化，得安石榴苷纯化产物。
优选地，步骤1中，所述浸提乙醇的体积分数为为40-60％。
优选地，步骤1中，所述浓缩的方式为在50℃条件下旋转蒸发浓缩，浓缩后的安石榴苷粗提液的浓度为1.0-5.0mg/mL。
更优选地，所述浓缩后的安石榴苷粗提液的浓度为1.0mg/mL。
优选地，步骤2中，所述大孔树脂为LX-620、LX-280、LX-1010或LX-3010。
更优选地，步骤2中，所述大孔树脂为LX-3010。
优选地，步骤2中的吸附，吸附工艺参数影响吸附率的权重关系为：吸附液流速＞吸附液浓度＞吸附时间。
优选地，步骤2中的吸附，吸附液流速为1.00mL/min。
优选地，步骤2中的吸附，吸附时间为50.00min。
优选地，步骤3中的解吸附，解吸附工艺参数影响洗脱率的权重关系为：乙醇浓度＞洗脱液流速＞洗脱时间。
优选地，步骤3中的解吸附，所述乙醇的浓度为20-100％
更优选地，所述乙醇的浓度为40％。
优选地，步骤3中的解吸附，所述洗脱液流速为1.00mL/min。
优选地，步骤3中的解吸附，所述洗脱时间为150.00min。
优选地，步骤4中，采用旋转蒸发的方式对所述洗脱液进行浓缩。
优选地，步骤4中的高速逆流色谱方式纯化，其采用的溶剂为正丁醇、三氟乙酸和水，其中，正丁醇、三氟乙酸和水的体积比为100∶1∶100，所述溶剂经超声波脱气后，静置分层，得上相和下相。
优选地，步骤4中的高速逆流色谱方式纯化，溶剂的上相作为高速逆流色谱方式纯化中的流动相，溶剂的下相作为高速逆流色谱方式纯化中的固定相。
优选地，步骤4的纯化过程中，高速逆流色谱方式纯化中的流动相的流速1.5ml/min，螺旋管的转速800r/min。
本发明以石榴皮为安石榴苷的提取原料，采用乙醇浸提出安石榴苷粗提液，并将其作为吸附液，采用大孔树脂对安石榴苷粗提液中的安石榴苷进行树脂吸附，解吸附过程采用等度洗脱方式对安石榴苷进行洗脱，采用高速逆流色谱对浓缩后的树脂洗脱液进行纯化，本发明的分离纯化方法步骤简单、工业化操作成本低，且对安石榴苷的提取率高，提纯效果佳，纯化物中安石榴苷纯度达90％以上，可为安石榴苷的分离纯化提供技术支持，也为石榴皮的综合利用提供了参考。
附图说明
下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步详细说明。
图1为安石榴苷标准品的高效液相色谱图；
图2为安石榴苷粗提物的高效液相色谱图；
图3为不同型号大孔树脂的吸附率和解析率的柱状图；
图4为吸附液流速对吸附率的影响曲线图；
图5为吸附液浓度对吸附率的影响曲线图；
图6为吸附时间对安石榴苷浓度的影响曲线图；
图7为洗脱液流速对洗脱率的影响曲线图；
图8为洗脱时间对洗脱率的影响曲线图；
图9为洗脱液浓度对洗脱率的影响曲线图；
图10为等度洗脱试验中以水为洗脱液对吸附树脂进行解吸附的结果图，图a为洗脱液中安石榴苷浓度随洗脱时间的变化曲线图，图b为洗脱液中安石榴苷浓度最高时的高效液相色谱图；
图11为等度洗脱试验中以20％乙醇溶液为洗脱液对吸附树脂进行解吸附的结果图，图a为洗脱液中安石榴苷浓度随洗脱时间的变化曲线图，图b为洗脱液中安石榴苷浓度最高时的高效液相色谱图；
图12为等度洗脱试验中以40％乙醇溶液为洗脱液对吸附树脂进行解吸附的结果图，图a为洗脱液中安石榴苷浓度随洗脱时间的变化曲线图，图b为洗脱液中安石榴苷浓度最高时的高效液相色谱图；
图13为等度洗脱试验中以60％乙醇溶液为洗脱液对吸附树脂进行解吸附的结果图，图a为洗脱液中安石榴苷浓度随洗脱时间的变化曲线图，图b为洗脱液中安石榴苷浓度最高时的高效液相色谱图；
图14为等度洗脱试验中以80％乙醇溶液为洗脱液对吸附树脂进行解吸附的结果图，图a为洗脱液中安石榴苷浓度随洗脱时间的变化曲线图，图b为洗脱液中安石榴苷浓度最高时的高效液相色谱图；
图15为等度洗脱试验中以100％乙醇溶液为洗脱液对吸附树脂进行解吸附的结果图，图a为洗脱液中安石榴苷浓度随洗脱时间的变化曲线图，图b为洗脱液中安石榴苷浓度最高时的高效液相色谱图；
图16为梯度洗脱试验中以水为洗脱液的高效液相色谱图；
图17为梯度洗脱试验中以20％乙醇溶液为洗脱液的高效液相色谱图；
图18为梯度洗脱试验中以40％乙醇溶液为洗脱液的高效液相色谱图；
图19为梯度洗脱试验中以60％乙醇溶液为洗脱液的高效液相色谱图；
图20为梯度洗脱试验中以80％乙醇溶液为洗脱液的高效液相色谱图；
图21为梯度洗脱试验中以100％乙醇溶液为洗脱液的高效液相色谱图；
图22为梯度洗脱试验中安石榴苷的提取量曲线图；
图23为等度洗脱试验中安石榴苷的提取量曲线图；
图24为高速逆流色谱纯化试验中的高速逆流色谱图。
图25为图24中峰I的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域的技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。
一、试验方案
1、安石榴苷粗提液的制备
将石榴皮置于50℃烘箱内烘干，粉碎，过100目筛，得石榴皮粉；然后将石榴皮粉与60％乙醇按照料液比为1g∶∶25mL的比例混合，并在60℃条件下提取6h，抽滤两次，合并滤液；最后将合并的滤液在50℃条件下旋转蒸发浓缩，得到不同浓度的安石榴苷粗提液。
2、树脂型号筛选
取西安蓝晓科技新材料股份有限公司的大孔树脂产品LX-620、LX-280、LX-1010、LX-3010，并按照其说明书要求，对各大孔树脂进行预处理。将安石榴苷粗提液作为吸附液，取各型号大孔树脂20g，加入0.1mg/mL安石榴苷粗提液30mL，20℃振荡吸附12h，抽滤，测定滤液安石榴苷浓度，计算各树脂吸附率；将过滤后的树脂分别用30mL20％乙醇溶液在20℃振荡解吸12h，抽滤，测定滤液安石榴苷浓度，计算各树脂解吸率。
3、吸附单因素试验
依次考察吸附流速、吸附液浓度、吸附时间3个因素变化对安石榴苷吸附效果的影响，制备2.0mg/mL安石榴苷粗提液，分别以0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL/min的速度流过树脂柱，吸附60min；分别制备1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg/mL不同浓度安石榴苷粗提液，分别以1mL/min的速度流过树脂柱，吸附60min；制备2.0mg/mL安石榴苷粗提液，以1mL/min的速度流过树脂柱，每15min收集一次吸附后溶液。分别收集各单因素试验吸附后溶液，采用高效液相色谱(HPLC)法测定安石榴苷的浓度，计算吸附后溶液中安石榴苷的浓度或吸附率。
4、解吸附单因素试验
依次考察洗脱流速、洗脱时间、乙醇浓度3个因素变化对安石榴苷洗脱效果的影响，用40％乙醇溶液，分别以0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL/min的速度流过树脂柱，洗脱180min；用40％乙醇溶液，以1mL/min的速度进行洗脱，分别洗脱60、90、120、150、180、210min；分别用水、20％、40％、60％、80％、100％乙醇溶液以1mL/min流速进行洗脱，洗脱120min。分别收集各单因素试验洗脱后溶液，HPLC法测定洗脱后溶液安石榴浓度，计算洗脱率。
5、解吸附方式选择试验
采用乙醇对所述吸附树脂进行解吸附，即洗脱，得安石榴苷树脂洗脱液。
本实施例的洗脱方式有两种，一种为等度洗脱，另一种为梯度洗脱。
(1)等度洗脱试验
取预处理好的树脂100mL，湿法装柱，柱的长径比为5∶1，将浓度为2.0mg/mL安石榴苷粗提液分别以1mL/min的速度流过树脂柱，吸附60min，用乙醇溶液以1mL/min的速度洗脱，每15min收集一次洗脱液，HPLC法检测各洗脱液中安石榴苷浓度，确定各洗脱液的最佳洗脱时间并计算安石榴苷总提取量。每次洗脱完毕后，将树脂进行再生处理。
在此试验中，依次考察洗脱流速、洗脱时间、乙醇浓度3个因素变化对安石榴苷洗脱效果的影响，用40％乙醇溶液，分别以0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL/min的速度流过树脂柱，洗脱180min；用40％乙醇溶液，以1mL/min的速度进行洗脱，分别洗脱60、90、120、150、180、210min；分别用0％(水)、20％、40％、60％、80％、100％乙醇溶液以1mL/min流速进行洗脱，洗脱120min；分别收集各单因素试验洗脱后溶液，HPLC法测定洗脱后溶液安石榴浓度，计算洗脱率。
(2)梯度洗脱试验
取预处理好的树脂100mL，湿法装柱，柱的长径比为5∶1，将浓度为2.0mg/mL的安石榴苷粗提液以1mL/min的速度流过树脂柱，吸附60min，依次用水、20％、40％、60％、80％和100％乙醇溶液各200mL以1mL/min的速度洗脱，每15min收集一次洗脱液，HPLC法检测各洗脱液中安石榴苷浓度，计算安石榴苷总提取量。
6、响应面试验
根据Box-Behnken中心组合设计原理，按照表1和表3所示因素水平进行树脂吸附和洗脱响应面试验，确定最优条件。
7、高速逆流色谱纯化试验
利用HPLC检测高速逆流色谱仪HSCCC纯化后安石榴苷浓度，对比三种不同溶剂体系安石榴苷的分配系数，选择最佳溶剂体系(表4)。将选好的溶剂体系按照比例配好，超声波脱气1-3h，静置一会儿至上下两相完全分层后，将上下两相分开，然后用塑料薄膜将各容器封好，放置一夜，使体系中的气体排尽。将树脂洗脱液旋转蒸发浓缩至安石榴苷含量为60％，取浓缩后的浸膏0.5g，用上相流动相10mL将其溶解，过0.45μm微孔过滤器后作为样液。分离前，先高流速泵入固定相，待固定相充满整个管路后，停泵，启动工作鼓，把转速调至800r/min，以1.5mL/min的速度泵入流动相，待溶剂体系平衡时，进样10mL，继续以1.5mL/min的速度泵入流动相，并启动色谱工作站记录图谱，紫外检测器检测波长378nm。接收不同峰段的液体，用HPLC分析。
每项试验平行做三次，数据用试验数据用均数±标准差(mean±S.D.)表示；高效液相色谱图数据用Sigmaplot 10.0软件处理和作图；响应面试验数据采用Design-Expert8.0软件处理和分析试验结果。
二、试验结果
1、安石榴苷的色谱分析
安石榴苷标准品和安石榴苷粗提物的高效液相检测结果如图1和图2所示，α和β为安石榴苷分子两种同分异构体。安石榴苷的高效液相色谱方法分离检测方法如下：称取安石榴苷标准品和待测样品0.005g，用水溶解，并用容量瓶定容至10mL，配制成0.5mg/mL的储备液，-20℃保存。上样前用0.45μm滤膜过滤。色谱柱为Waters C18，柱温30℃，紫外检测器，波长378nm，流动相为0.1％的磷酸水溶液和0.1％的磷酸乙腈溶液。
2、树脂型号筛选结果
图3为不同大孔树脂的吸附率和解析率结果图，由图可知，LX-3010型号树脂的吸附率最高，达到83.68％；LX-280和LX-3010型号树脂的解吸率相当，分别为59.99％和59.36％。综合考虑吸附率和解吸率，选择LX-3010型号树脂作为分离纯化树脂。
3、吸附单因素试验结果
单因素试验结果如图4-6所示。吸附流速单因素试验结果显示，流速在0.5-1.5mL/min吸附率逐渐上升，当流速为1.5mL/min时，吸附率最大；流速在1.5-3.0mL/min吸附率逐渐降低。大孔树脂未饱和之前，吸附速率逐渐增大可以增加安石榴苷的吸附量，使吸附率增加，但当大孔树脂饱和后，增大吸附流速，不但不会增加安石榴苷吸附量，而且还会因为流速增大导致大孔树脂来不及吸附从而使吸附率大幅下降。吸附液浓度单因素试验结果显示，流速在1.0-2.0mL/min吸附率逐渐上升，当流速为2.0mL/min时，吸附率最大；流速大于2.0mL/min吸附率逐渐降低。吸附液浓度增大，在大孔树脂未饱和之前，可以增加吸附率，但是继续增大浓度，大孔树脂不能吸附，导致吸附率下降。吸附时间单因素试验结果显示，吸附30min后的溶液中安石榴苷浓度变大，75min时吸附后溶液与吸附前溶液浓度相当。在一定吸附液浓度和流速下，大孔树脂达到饱和需要的时间不一样，在安石榴苷粗提液浓度为2.0mg/mL、吸附流速为1mL/min时，30min即达到了树脂的泄漏点。
4、解吸附单因素试验结果
树脂解吸附单因素试验结果如图7-9所示。洗脱流速单因素试验结果如图7所示，流速在0.5-1.5mL/min洗脱率逐渐上升，当流速为1.5mL/min时，洗脱率最大；流速在1.5-3.0mL/min吸附率逐渐降低。洗脱流速过慢，安石榴苷不能完全从树脂上洗脱下来；洗脱流速过快，洗脱液来不及与树脂充分接触，也不能将安石榴苷完全洗脱洗脱，所以需要在合适的洗脱流速下降安石榴苷充分洗脱才能得到较高的洗脱率。时间单因素试验结果如图8所示，洗脱时间在60-180min吸附率逐渐上升，当洗脱时间为180min时，洗脱率最大，大于180min时洗脱率基本没有变化。洗脱时间越长，越多的洗脱溶液与树脂吸附的安石榴接触，越多的安石榴苷被洗脱，洗脱率越高。洗脱液浓度即乙醇浓度的单因素试验结果如图9所示，乙醇浓度在0-40％洗脱率逐渐上升，当浓度为40％时，洗脱率最大；流速在40-100％洗脱率逐渐降低。洗脱液中乙醇浓度影响洗脱液极性，从而影响安石榴苷在洗脱液中的溶解度，与安石榴苷极性越相近，溶解度越大，洗脱率也越高。
5、洗脱方式的筛选结果
(1)等度洗脱试验结果
结果如图10-15所示，色谱图为安石榴苷浓度最高时间段所收集的抽滤液的HPLC分析图。由图10-15可知，不同洗脱液进行洗脱时，能够将安石榴苷洗脱浓度降到0.1mg/mL的时间有所差异，水为150min，20％乙醇为555min，40％乙醇为150min，60％、80％和100％乙醇均为180min。各洗脱液HPLC色谱图显示，水、20％乙醇、40％乙醇和60％乙醇洗脱液中杂峰较少，其中水洗脱液安石榴苷浓度最低；80％乙醇和100％乙醇洗脱液中杂峰较多。
(2)梯度洗脱试验结果
结果如图16-图22所示，由图16-22的HPLC图谱可知，40％乙醇梯度洗脱液中杂峰最少，水和60％乙醇梯度洗脱液中杂峰最多，100％乙醇梯度洗脱液中安石榴苷峰面积最小，且在水、60％、80％、100％乙醇梯度洗脱液中，分别出现了一个较大的峰a，并随着乙醇浓度的增大，该峰的峰高越高；由图22的各洗脱液浓度结果可知，20％乙醇梯度洗脱液得到的安石榴苷浓度最高，其次为40％乙醇梯度洗脱液，浓度最低的为100％乙醇梯度洗脱液。
(3)不同洗脱方式安石榴苷提取量比较
结果如图22-23所示。由图可以看出，等度洗脱中，20-100％乙醇洗脱液得到安石榴苷提取量相当，分别为160.25、164.10、163.98、162.87、162.99mg，水洗脱得到的安石榴苷量最少，仅为14.17mg；而梯度洗脱中，总的安石榴苷提取量为158.04mg，低于等度洗脱方式得到的安石榴苷量。
从安石榴苷提取总量考虑，等度洗脱纯化可以得到较多的安石榴苷，且步骤简单，成本低；而梯度洗脱步骤较繁琐，操作费时，工业化操作成本较高，因此，选择等度洗脱为安石榴分离纯化操作方式。
6、响应面试验结果
选择4因素3水平进行试验设计。树脂吸附响应面试验结果和方差分析如表1和表2所示；树脂洗脱响应面试验结果和方差分析如表3和表4所示。
表1树脂吸附试验优化结果
表2树脂吸附试验结果方差分析表
注：*表示显著水平(P＜0.05)；**表示极显著水平(P＜0.01)。
由表2可知，树脂吸附响应面试验回归模型极显著(P＜0.001)，失拟检验不显著(P＞0.05)，决定系数R1 2＝0.9629，调整决定系数R1 2 Adj＝0.9152，说明模型拟合性较好，96.29％响应值变化与所选变量有关。模型给出关于3个因素二次回归方程为：
R1＝48.60125+6.23025A1+1.60648B1-0.96300C1-0.043167A1B1-0.44249E-015A1C1-0.023333B1C1-2.16725A1 2-0.014832B1 2-2.69900C1 2。各影响因素中，3个因素均对安石榴苷吸附率影响极显著(P＜0.01)。比较F值大小，各影响因素对吸附率的影响顺序为：吸附液流速＞吸附液浓度＞吸附时间。
模型给出最优吸附条件为：吸附液浓度1.18mg/mL，吸附时间50.81min，吸附流速1.14mL/min，在此条件下，模型预测最高吸附率87.74％。结合操作可行性，取整最优条件：吸附液浓度1.00mg/mL，吸附时间50.00min，吸附流速1.00mL/min在此试验条件下平行验证三次，得到安石榴苷吸附率平均值为86.16％，与模型预测结果相近。
表3树脂洗脱试验优化结果
由表4可知，树脂吸洗脱应面试验回归模型极显著(P＜0.001)，失拟检验不显著(P＞0.05)，其决定系数R2 2＝0.9866，调整决定系数R2 2 Adj＝0.9695，说明模型拟合性较好，98.66％响应值变化与所选变量有关。模型给出关于3个因素二次回归方程为：
R2＝60.25775+2.48310A2-0.429344B2+1.73350C2+.08333E-005A2B2-0.099750A2C2+0.033667B2C2-0.028108A2 2+1.07722E-004B2 2-2.22200C2 2。各影响因素中，乙醇浓度对安石榴苷洗脱率影响极显著(P＜0.01)，洗脱液流速对洗脱率影响极显著(P＜0.01)。比较F值大小，各影响因素对洗脱率的影响顺序为：乙醇浓度＞洗脱液流速＞洗脱时间。
表4树脂洗脱试验结果方差分析表
注：*表示显著水平(P＜0.05)；**表示极显著水平(P＜0.01)
模型给出最优洗脱条件：乙醇浓度42.59％，洗脱时间150min，洗脱流速1.00mL/min，在此条件下，模型预测最高洗脱率75.63％。结合操作可行性，取整最优条件：乙醇浓度40.00％，洗脱时间150.00min，洗脱流速1.00mL/min。在取整后的试验条件下平行验证三次，得到安石榴苷洗脱率平均值为71.89％，与模型预测试验结果相近。
7、安石榴苷的HSCCC纯化
(1)溶剂体系选择
不同溶剂体系对安石榴苷的不同异构体分配系数如表5所示。三种溶剂体系中，正丁醇∶三氟乙酸∶水(100∶1∶100)具有较高的分配系数，所以选择此体系进行HSCCC纯化操作。
表5不同溶剂体系分配系数
(2)HSCCC纯化
HSCCC纯化后得到两个峰(图24)，对各峰进行HPLC分析，结果显示(图25)I峰中含有安石榴苷。对HSCCC纯化后的产品浓缩、冻干后，HPLC测定其中安石榴苷含量平均值为90.69％。
由上述实施例可以得到，本发明的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法的最优工艺参数为：将LX-3010树脂装填在长径比为5∶1树脂柱内，制备安石榴苷浓度为1.0mg/mL的石榴皮粗提物上柱液，在吸附时间为50min、吸附流速为1.0mL/min的条件下进行吸附，再用40.00％乙醇，以1.0mL/min洗脱流速进行洗脱，洗脱150.00min，采用高速逆流色谱进一步纯化，以正丁醇、三氟乙酸和水为溶剂体系，且正丁醇、三氟乙酸和水的体积比为100∶1∶100，溶剂的上相作为流动相，下相作为固定相，流动相的流速1.5ml/min，螺旋管的转速800r/min，可以得到纯度为90％以上的安石榴苷纯化产物。
本发明得到的最优工艺路线，可为石榴皮中安石榴苷的分离纯化提供技术支持，也为石榴皮的综合利用提供参考。
虽然，本说明书中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1，粗提：将石榴皮烘干、粉碎、过筛，得石榴皮粉；然后将所述石榴皮粉和浸提乙醇按照1g:(20-30)mL的比例混合，并在60-80℃的条件下提取，抽滤多次，合并滤液；最后将合并的滤液浓缩，得安石榴苷粗提液；
步骤2，吸附：将所述安石榴苷粗提液作为吸附液，采用大孔树脂对安石榴苷粗提液中的安石榴苷进行树脂吸附，得吸附树脂；
步骤3，解吸附：采用乙醇对所述吸附树脂进行洗脱，收集洗脱液；
步骤4，纯化：对所述洗脱液进行浓缩，浓缩至树脂洗脱液中的安石榴苷浓度为60-70％，对浓缩后的树脂洗脱液进行高速逆流色谱方式纯化，得安石榴苷纯化产物。
2.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述浸提乙醇的体积分数为40-60％。
3.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤1中，所述将合并的滤液浓缩，是在50℃条件下旋转蒸发浓缩，浓缩后的安石榴苷粗提液的浓度为1.0-5.0mg/mL。
4.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤2中，所述大孔树脂为LX-620、LX-280、LX-1010或LX-3010。
5.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤2中，所述大孔树脂为LX-3010。
6.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤2中的吸附，吸附工艺参数影响吸附率的权重关系为：吸附液流速>吸附液浓度>吸附时间。
7.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤2中的吸附，吸附工艺参数为：吸附液流速为1.00mL/min，吸附液浓度为1.0mg/mL，吸附时间为50.00min。
8.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤3中的解吸附，解吸附工艺参数影响洗脱率的权重关系为：乙醇浓度>洗脱液流速>洗脱时间。
9.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤3中的解吸附，解吸附工艺参数为：乙醇浓度为40％，洗脱液流速为1.00mL/min，洗脱时间为150.00min。
10.根据权利要求1所述的石榴皮中安石榴苷的分离纯化方法，其特征在于，步骤4中的高速逆流色谱方式纯化，其采用的溶剂为正丁醇、三氟乙酸和水，其中，正丁醇、三氟乙酸和水的体积比为100∶1∶100，所述溶剂经超声波脱气后，静置分层，得上相和下相；其中，上相作为高速逆流色谱方式纯化中的流动相，下相作为高速逆流色谱方式纯化中的固定相。
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