CN103006721B - 一种石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法 - Google Patents
一种石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，有效解决从石胆草中提取出苯乙醇苷和黄酮碳苷的问题，取石胆草药材，加入乙醇回流提取，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取大孔吸附树脂进行预处理，提取物通过预处理后的树脂柱进行动态吸附，待吸附完全后，用蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，除杂后用乙醇洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷；本发明方法简单、易操作，提取工艺成本低、效率高。
Description
技术领域
本发明涉及中药领域，特别是一种石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法。
背景技术
石胆草做为传统中药之一，在《云南中草药》和《昆明民间常用草药》中均有记载：“苦，辛，寒。活血解毒，消肿止痛。治疗月经不调，赤白带下，心悸，跌打损伤，刀伤疮痈，顽癣。”“清热解毒，除湿。治湿热痹症，腮腺炎，咽喉肿痛。”在现代，石胆草在河南西部伏牛山一带民间常用于初期上呼吸道感染及治疗妇女月经不调，赤白带下等症。石胆草药材来源于苦苣苔科(Gesneriaceae)旋蒴苣苔属(Boea Comm.ex Lam)植物猫耳朵(Boeahygrometrica(Bunge)R.Br)的干燥全草。该植物又名牛耳草、还魂草、镇心草等，多生于溪边或山坡的阴湿岩壁上，主要分布在广西、云南、河南等地，夏、秋采集全草入药，石胆草在我国分布广泛，资源丰富，具有很好的开发利用价值。在结构鉴定研究中，发现其含有大量的苯乙醇苷和黄酮碳苷成分。此两类成分极性大，溶解性相似，均具有很强的生物活性：有抗菌、抗炎、抗病毒、抗甲状腺、抗氧化、保肝、免疫调节、强心、增强记忆等多种药理作用而备受关注。
事实证明，对石胆草药材的深入研究具有很高的医学意义和经济价值，石胆草主要成分苯乙醇苷和黄酮碳苷提取工艺研究可以为同类中药的研究提供借鉴和参考，具有很高的技术价值；能够为石胆草药材及同类中药的开发利用及工业化大生产提供指导和依据，具有广阔的应用前景。而至今还未见有关石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷提取方法的报道。
目前，中药生产中常用的提取方法有煎煮法、回流法、浸渍法、渗漉法等，虽然存在损失较大、周期长、工序多、提取率不高等缺点，但操作简单、设备便易，目前工业生产仍被普遍采用，近年来也出现了一些新提取工艺技术(超临界流体萃取技术、膜提取分离技术、高速逆流色谱提取技术、空气爆破法、半仿生提取法等)。尽管新工艺技术能够提高有效成分的收率和纯度，但是其适用范围及操作应用均有很大的局限性，因此，如何从石胆草中提取出苯乙醇苷和黄酮碳苷是迫切要解决的问题。
发明内容
针对上述情况，为克服现有技术缺陷，本发明之目的就是提供一种石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，可有效解决从石胆草中提取出苯乙醇苷和黄酮碳苷的问题。
本发明解决的技术方案是，取石胆草药材，加入质量浓度为10-95%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:8-16，在50℃-90℃回流提取1-4次，每次提取时间1.5-3.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4-5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4-6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4-6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.06-0.1g·mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1：4-8的预处理后的树脂柱进行动态吸附，浓度为0.06-0.1g·mL-1的提取物的上样量为50-85ml，流速为2-4BV·h-1，待吸附完全后，用2-8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2-4BV·h-1，除杂后用4-6倍柱体积的质量浓度为10-50%的乙醇以1-3BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷；所述的大孔吸附树脂为HPD-100、AB-8、X-5中的一种；所述的重量体积比是指固体（石胆草药材）以g计，液体（乙醇）以ml计。
本发明方法简单、易操作，提取工艺成本低、效率高。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的具体实施方式作详细说明。
实施例1
取石胆草药材，加入质量浓度为50%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:12，在80℃回流提取2次，每次提取时间2.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以5BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.08g·mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1：6的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0.08g·mL-1的提取物的上样量为65ml，流速为3BV·h-1，待吸附完全后，用5倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV·h-1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为30%的乙醇以2BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
实施例2
取石胆草药材，加入质量浓度为10%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:8，在50℃℃回流提取1次，每次提取时间1.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.06g·mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1：4的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0.06g·mL-1的提取物的上样量为85ml，流速为2BV·h-1，待吸附完全后，用2倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2BV·h-1，除杂后用4倍柱体积的质量浓度为10%的乙醇以1BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
实施例3
取石胆草药材，加入质量浓度为95%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:16，在90℃回流提取4次，每次提取时间3.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.1g·mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1：8的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0.1g·mL-1的提取物的上样量为50ml，流速为4BV·h-1，待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4BV·h-1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的乙醇以3BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
实施例4
取石胆草药材，加入质量浓度为30%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:10，在60℃回流提取2次，每次提取时间2h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以5BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.07g·mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1：5的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0.07g·mL-1的提取物的上样量为75ml，流速为3BV·h-1，待吸附完全后，用4倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV·h-1，除杂后用5倍柱体积的质量浓度为20%的乙醇以2BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
实施例5
取石胆草药材，加入质量浓度为70%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:12，在50℃℃回流提取1次，每次提取时间3h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.09g·mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1：7的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0.09g·mL-1的提取物的上样量为60ml，流速为2BV·h-1，待吸附完全后，用6倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2BV·h-1，除杂后用4倍柱体积的质量浓度为30%的乙醇以1BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
实施例6
取石胆草药材，加入质量浓度为80%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:14，在70℃回流提取3次，每次提取时间3.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.1g·mL-1的提取物，通过径高比(树脂床直径与高度比值)为1：8的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0.1g·mL-1的提取物的上样量为50ml，流速为4BV·h-1，待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4BV·h-1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的乙醇以3BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
本发明采用平行试验结合L9(34)正交试验确立的提取工艺方法，苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取率分别为4.48±0.97%、8.06±1.03%，该提取方法除去了叶绿素、糖类、蛋白质、植物纤维等大量杂质，为下一步的纯化工艺提供前提，建立了石胆草药材中苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化工艺，经纯化工艺去除杂质后的纯化物中苯乙醇苷和黄酮碳苷的总含量为50-53%，转移率为58-63%。符合中药五类新药有效部位的有效成分含量达到50%以上，转移率也要达到50%以上的要求。通过对3批3份样品的制备，对石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷成分的提取纯化工艺进行验证，测定结果苯乙醇苷和黄酮碳苷的总含量均达到50%以上，转移率也达到50%以上。本发明工艺条件稳定、可行。具体实验资料如下：
石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷成分的提取工艺实验：
1提取方法选取
中药生产中常用的提取方法有煎煮法、回流法、浸渍法、渗漉法等，虽然存在损伤较大、周期长、工序多、提取率不高等缺点，但操作简单、设备便易，目前工业生产仍被普遍采用。近年来也出现了一些新提取工艺技术(超临界流体萃取技术、膜提取分离技术、高速逆流色谱提取技术、空气爆破法、半仿生提取法等)。尽管新工艺技术能够提高有效成分的收率和纯度，但是其适用范围及操作应用均有很大的局限性，因此，在工业生产中尚未普及。综合以上因素并结合本实验室的条件，仍将选取常用的提取方法作为石胆草药材的提取方法。通过比较几种常用的提取方法的优缺点及使用范围，并考虑石胆草药材自身的特点，最终选取回流法。
2影响回流提取因素考察
影响回流提取法的因素包括溶剂浓度(%)、溶剂用量、提取温度(℃)、提取时间(h)、提取次数等，首先以苯乙醇苷和黄酮碳苷成分的得率为考察指标，采用平行实验考察各因素对回流提取的影响。
2.1溶剂浓度考察
精密称取5份石胆草药材(每份20.0g)，分别加入240mL体积分数分别为10%、30%、50%、70%、95%的乙醇溶液，于60℃恒温水浴加热回流2次，每次2h。提取液浓缩干燥后用紫外分光光度法测定苯乙醇苷和黄酮碳苷含量。
表1不同溶剂浓度回流提取苯乙醇苷和黄酮碳苷含量和得率
如表1所示，当提取所用溶剂为体积分数50%的乙醇溶液时，提取得到的苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量最高分别为137.20mg、224.32mg。乙醇溶液体积分数降低或增加，提取物中苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量均下降，且下降幅度较大：体积分数为10%的乙醇溶液提取时，苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量分别下降了55.05mg、109.60mg；体积分数为95%的乙醇溶液提取时，苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量与体积分数为50%的乙醇溶液提取含量相差73.18mg、121.89mg。这表明低浓度的乙醇对苯乙醇苷提取不够充分，高浓度的乙醇也不利于苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取。
2.2提取温度考察
精密称取5份石胆草药材(每份20.0g)，加入240mL体积分数为50%的乙醇，分别于50℃、60℃、70℃、80℃、90℃恒温水浴加热回流2次，每次2h。测定方法同上。
表2不同提取温度回流提取苯乙醇苷和黄酮碳苷含量和得率
表2表明，提取温度在50℃~90℃之间时，提取得到的苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量随着温度的升高而增加，含量范围为67.47~148.44mg、170.89~231.65mg；当温度升至80℃时苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量都达最高值，分别为148.44mg、231.65mg；继续升温，苯乙醇苷和黄酮碳苷含量均有所下降，苯乙醇苷的含量下降显著。由此说明，提取温度过低对苯乙醇苷和黄酮碳苷提取不充分，温度过高又使其结构遭到破坏。
2.3固液比考察
精密称取5份石胆草药材(每份20.0g)，分别加入固液比为1:8、1：10、1：12、1：14、1：16的体积分数为50%的乙醇，于60℃恒温水浴加热回流2次，每次2h。测定方法同上。
表3不同固液比回流提取苯乙醇苷和黄酮碳苷含量和得率
如表3所示，苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取量随固液比的增加而增多，但固液比在1：10~1：16范围内，其含量仅增多了28.37mg和48.49mg，且固液比大于1：12后变化更小。该结果表明，固液比对苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取影响不大。因此在选择提取溶剂的用量时，应结合工业生产的成本因素进行选取。
2.4提取时间考察
精密称取5份石胆草药材(每份20.0g)，加入240mL体积分数为50%的乙醇，于60℃恒温水浴加热回流2次，回流时间分别为1.0h、1.5h、2.0h、2.5h、3.0h。测定方法同上。
表4不同提取时间回流提取苯乙醇苷和黄酮碳苷含量和得率
由表4可知，随着提取时间的延长，苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量不断增加。提取时间在1.5h左右时，苯乙醇苷和黄酮碳苷提取量基本没有增加，当提取时间延长至2.5h时苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量分别增加了20.44mg和54.39mg，再增加提取时间，苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量增加幅度不大，综合考虑工业生产，提取时间不宜过长。
2.5提取次数考察
精密称取4份石胆草药材(每份20.0g)，加入240mL体积分数为50%的乙醇，于60℃恒温水浴加热回流2h，分别提取1次、2次、3次、4次。测定方法同上。
表5不同提取次数回流提取苯乙醇苷和黄酮碳苷含量和得率
表5所示，随着提取次数的增多，苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量增加幅度较为显著，含量范围分别为65.71~122.58mg、114.28~243.44mg。这表明提取次数对苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取效率影响较大。但当提取次数超过2次后，苯乙醇苷和黄酮碳苷的含量增加幅度逐渐减小，因此提取次数亦不宜过多。考虑实际工业生产的效率问题，提取次数以2次为宜。
3小结
通过以上结果分析，分别以苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取量为指标，所得提取条件分别为A2B2~3C1~3D2~3、A1~2B3C1~3D3。结合实际工业生产，最终确定石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的最佳提取工艺为A2B3C1~3D3，即药材加12倍量50%乙醇，80℃回流提取2次，每次提取时间1.5~3.5h。
石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷成分纯化
1样品制备
取石胆草药材适量，12倍量的50%乙醇80℃水浴回流提取2次，每次2.5h，趁热过滤，减压回收溶剂，真空干燥至恒重，得提取物，备用。
2各大孔吸附树脂类型及其预处理
选取X-5、AB-8、D4006、NKA-Ⅱ、HPD-100、HPD-450、HPD-600七种不同性质及型号的大孔树脂(各树脂性质见表30)，经过预处理后备用。具体处理方法如下：将各树脂分别装于玻璃柱中，0.5BV的乙醇浸泡24h(BV为1个树脂床体积)；用2BV的乙醇以2BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4～5h；用乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的5%盐酸溶液以4~6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2~4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的5%氢氧化钠溶液以4~6BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2~4h，而后用水以同样流速冼脱至中性。
表6不同大孔吸附树脂特性
3树脂类型的筛选
将2.3中处理过的七种树脂分别从静态吸附能力、静态吸附解吸能力、吸附动力学曲线等进行考察，筛选出最佳的树脂类型。
3.1静态吸附能力测定
精确称取不同型号的树脂各2.0g于50mL锥形瓶中，分别加入20mg·mL-1药液30mL，室温下，置摇床上振摇24h。之后过滤药液，取滤液用紫外分光光度法测定总成分的含量，与原药液比较，按下式计算各树脂的静态吸附量。
表7各树脂对苯乙醇苷和黄酮碳苷的静态吸附量
由表7中各树脂的静态吸附量可知，HPD-100和HPD-450两种树脂类型的吸附能力最强，AB-8树脂类型的吸附能力次之。其他树脂类型的吸附能力相对较弱，且以NKA-Ⅱ树脂类型的吸附能力最弱。
3.2静态吸附解吸率
将3.1中已吸附饱和的树脂分别置于50mL锥形瓶中，加入95%乙醇30mL，于室温下置摇床上振荡洗脱24h。之后过滤，取滤液用紫外分光光度法测定总成分的含量。计算各树脂的吸附解吸率。
表8各树脂对苯乙醇苷和黄酮碳苷的静态吸附-解吸量
各树脂的静态吸附解析情况如表25所示，X-5和HPD-100树脂类型的解吸能力最强，其次是AB-8树脂类型。虽然NKA-Ⅱ树脂类型的解吸能力也很强，但其吸附能力极弱，因此不予考虑。
从上述结果可以看出，在所选七种树脂类型中，虽然HPD-450树脂类型具有很强的吸附能力，但其解吸能力不强；NKA-Ⅱ树脂类型虽有很强的解吸能力但吸附能力极弱，因此二者均不适合用作石胆草药材的纯化。HPD-100、AB-8、X-5树脂类型的吸附解吸能力均很强，且以HPD-100树脂类型最为显著。
3.3HPD-100、AB-8、X-5三种树脂在不同时间点对苯乙醇苷和黄酮碳苷的吸附量
精密称取不同型号树脂各2.0g于100mL锥形瓶中，分别加入20mg·L-1药液50mL，室温下，置摇床上不断振摇。振摇过程中每隔1h吸取1mL药液，用紫外分光光度法测定总成分的含量。以静态吸附时间(h)为横坐标，静态吸附量(mg·g-1)为纵坐标，得各树脂的吸附动力学曲线。观察树脂在16h内的吸附动态变化。
表9HPD-100、AB-8、X-5三种树脂在不同时间点对苯乙醇苷
和黄酮碳苷的吸附量
通过树脂的吸附动力学曲线可以看出，在整个吸附过程中，HPD-100树脂类型对苯乙醇苷和黄酮碳苷的吸附量均明显大于AB-8、X-5树脂类型。最终确立HPD-100为最佳的纯化树脂类型。
3.4树脂纯化参数考察
根据以上实验筛选出最佳纯化树脂类型后，再分别对最佳树脂类型的吸附条件、除杂条件、洗脱条件等各纯化参数进行考察。
3.4.1吸附条件考察
3.4.1.1吸附浓度考察
取不同浓度的样品溶液(0.06g·mL-1、0.08g·mL-1、0.1g·mL-1)分别通过3根相同径高比(树脂床直径与高度比值约为1：6)的HPD-100树脂柱，进行动态吸附，流速控制在2BV·h-1。以5mL为一个流份收集流出液，用紫外分光光度法检测目的成分。根据检测到目的成分前的体积计算不同浓度下的树脂吸附量，进而确定最佳吸附浓度。
表10HPD-100树脂在不同上样浓度下对苯乙醇苷和黄酮碳苷的吸附量
从表10中可以看出，树脂吸附不同浓度的样品其泄漏点不同。当吸附浓度为0.06g·mL-1时，第18个流份检测到有目的成分流出，泄露前共吸附样品5.1g；吸附浓度为0.08g·mL-1时，第14个流份开始有目的成分流出，泄漏前共吸附样品5.2g；吸附浓度为0.1g·mL-1时，第11个流份开始有目的成分流出，泄漏前共吸附样品5.0g。最终确定0.08g·mL-1为最佳吸附浓度。3.4.1.2吸附流速考察
将样品溶液按3.4.1.1项下确定的最佳吸附浓度，分别通过3根相同径高比(树脂床直径与高度比值约为1：6)的HPD-100树脂柱，进行动态吸附，流速分别控制在2BV·h-1、3BV·h-1、4BV·h-1。以10mL为一个流份收集流出液，用紫外分光光度法检测目的成分。根据检测到目的成分前的体积计算不同上样流速下树脂的吸附量，进而确定最佳吸附流速。
表11HPD-100树脂在不同吸附流速下对苯乙醇苷和黄酮碳苷吸附量
由上表11可知，吸附流速为2BV·h-1和3BV·h-1时树脂对成分的吸附量均较大，吸附流速增大到4BV·h-1时树脂对目的成分的吸附量反而下降。结果表明树脂的吸附流速太慢，虽然树脂能够充分吸附目的成分，但所需时间较长，影响整个纯化工艺的效率，吸附流速过快，树脂吸附目的成分不充分，造成成分流失。因此最佳吸附浓度为3BV·h-1。
3.4.1.2树脂径高比考察
将样品溶液按3.4.1.1和3.4.1.2项下确定的最佳吸附浓度、吸附流速，分别通过3根不同径高比(树脂床直径与高度比值约为1：4、1：6、1：8)的HPD-100树脂柱，进行动态吸附。以10mL为一流份收集流出液，用紫外分光光度法检测目的成分。根据检测到目的成分前的体积计算不同树脂径高比树脂的吸附量，进而确定最佳径高比。
表12HPD-100树脂在不同径高比下对苯乙醇苷和黄酮碳苷的吸附量
表12中所示不同径高比下树脂的比吸附量，当树脂径高比为1:6时的比吸附量最大，树脂利用较为充分。
3.4.1.4泄漏曲线考察
将样品溶液按3.4.1.1~3.4.1.2项下确定的最佳吸附条件进行动态吸附，以5mL为一个流份收集流出液，用紫外分光光度法检测每一流份。以流份数为横坐标，目的成分的泄漏百分比(%)为纵坐标绘制泄漏曲线。
表13不同流份中苯乙醇苷和黄酮碳苷的泄漏量和泄漏百分比
由上表13可知，当流出液达到第14个流份即70mL时，开始检测到目的成分的泄漏，随着上样量的不断增加，目的成分的泄漏量不断增大，当流出液达到第35个流份即175mL时，目的成分完全泄漏。以检测到目的成分前的体积为样品溶液的最佳上样体积，即65mL。最终确立的最佳上样量为5.2g。
3.4.2除杂条件考察
3.4.2.1除杂流速考察
按3.4.1项下确定的最佳吸附条件装柱、上样，进行动态吸附。待吸附完全后，用蒸馏水洗脱，流速分别控制在2BV·h-1、3BV·h-1、4BV·h-1。每5mL为一个流份收集流出液，用紫外分光光度法检测每一流份。以检测到目的成分前除去杂质的多少确定最佳除杂流速。
表14除杂剂在不同流速下除去杂质质量
结果如表14所示，在确保目的成分不被洗脱出的情况下，当除杂流速为3BV·h-1时，洗脱下来的杂质最多。故最佳的除杂流速为3BV·h-1。
3.4.2.2除杂溶剂的体积考察
按3.4.1项下确定的最佳吸附条件装柱、上样，进行动态吸附。待吸附完全后，用不同体积的蒸馏水洗脱，流速控制在3BV·h-1，除杂后经50%乙醇洗脱至近无色。收集50%乙醇流出液，用紫外分光光度法检测成分含量。
表15不同体积除杂用水的除杂效果
表15显示，用量过少的蒸馏水冲洗树脂柱，虽然能够很好保留目的成分，但不能有效的除去杂质；用量过多的蒸馏水冲洗树脂柱，虽然能够除去大量杂质，但是目的成分也会随着杂质被除去，而5倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱，不仅有效地除去杂质，还能够保证苯乙醇苷和黄酮碳苷被保留在树脂上，故确定除杂剂的用量为5倍柱体积。
3.4.3洗脱条件考察
3.4.3.1洗脱溶剂考察
按3.4.1~3.4.2项下确定的条件处理3根HPD-100树脂柱，再分别用10%、30%、50%的乙醇以2BV·h-1的流速洗脱。每10mL为一个流份收集洗脱液，用紫外分光光度法检测每一流份。以流份数为横坐标，树脂对成分的解吸率(％)为纵坐标绘制洗脱曲线。根据洗脱曲线确定洗脱剂的浓度。
表16不同浓度乙醇的洗脱效果
由表16可知，10%乙醇洗脱树脂柱，虽然能将目的成分洗脱出，但因其洗脱能力较弱，所用洗脱剂用量多、洗脱时间长，且洗脱不够完全，洗脱效果不理想；50%乙醇洗脱树脂柱，洗脱能力太强，目的成分被洗脱出的同时，部分杂质也被洗脱出，洗脱能力太强洗脱效果仍不理想；30%乙醇洗脱树脂柱，不仅目的成分洗脱较为完全，洗脱剂用量和洗脱时间均能适应工业化生产的需求。
3.4.3.2洗脱流速考察
按3.4.1~3.4.2项下确定的条件处理3根HPD-100树脂柱，再用3.4.3.1项下确定的最佳洗脱浓度洗脱，洗脱流速分别控制在1BV·h-1、2BV·h-1、3BV·h-1的。每10mL为一个流份收集洗脱液，用紫外分光光度法检测每一流份。根据洗脱出成分的含量确定最佳洗脱流速。
表17不同洗脱流速下HPD-100树脂对苯乙醇苷和黄酮碳苷的解析效果
如上表17所示，洗脱流速对苯乙醇苷和黄酮碳苷的吸附-解吸率有一定的影响。综合考虑，最终确定洗脱流速为2BV·h-1。
3.4.3.3洗脱曲线考察
按3.4.1~3.4.2项下确定的条件处理3根HPD-100树脂柱，均用30%的乙醇以2BV·h-1的流速洗脱。每10mL为一个流份收集洗脱液，用紫外分光光度法检测每一流份。以流份数为横坐标，树脂对成分的解吸率(%)为纵坐标绘制洗脱曲线。根据洗脱曲线确定洗脱剂的用量。
从洗脱曲线可知，洗脱剂用量为150mL即6倍树脂柱体积，可将目的成分洗脱完全。3.4.4树脂纯化各部位成分比较
按上述所确定的最佳吸附条件、除杂条件、洗脱条件，进行吸附、除杂、洗脱，得到水洗脱部位、30%乙醇洗脱部位、95%乙醇洗脱部位。将原药液与以上三个部位分别注入HPLC色谱仪，可知，水部位基本不含目的成分，说明5倍柱体积的蒸馏水洗脱树脂柱能够除去大量的杂质，并保证目的成分不被洗脱出；30%乙醇部位中目的成分与原药液中一致，且成分含量较原药液高，说明6倍柱体积的30%乙醇洗脱树脂柱，能够将目的成分从树脂上洗脱出；虽然95%乙醇洗脱树脂柱，收集的洗脱液呈深棕色，但95%乙醇部位基本不含成分，这表明30%乙醇可以将目的成分洗脱完全且部分杂质被保留在树脂上。此结果进一步验证了以上确定的纯化条件的合理性。
3.4.5树脂再生性能考察
取处理过的HPD-100树脂，按上述所确定的吸附条件、除杂条件、洗脱条件，进行吸附、除杂、洗脱，并在同一根树脂柱上重复此操作，测定每次操作所得成分含量，计算吸附解吸率。当其吸附解吸率下降至75%以下时，对树脂进行再生。循环上次操作，直至树脂不能再生和重复使用为止，结果见表18。
表18树脂再生性能考察结果
由上表可知，新树脂使用2次后，需要再生处理。只用95%乙醇处理并不能再生使用，经95%乙醇处理后再用5%NaOH及HCl处理可继续使用1次。故建议树脂以上法使用并再生使用3次后，弃去。
5小结
HPD-100型大孔吸附树脂对石胆草药材中苯乙醇苷和黄酮碳苷成分具有良好的吸附-解吸性能，最终确定最佳纯化工艺为：石胆草提取物吸附浓度为0.08g·mL-1，与HPD-100树脂比为0.22g:1mL，树脂径高比为1：6，除杂剂为5倍量柱体积的水，除杂流速为3BV·h-1，洗脱剂为6倍量柱体积的30%乙醇，洗脱流速为2BV·h-1。树脂经95%乙醇和5%NaOH及HCl再生处理后，可重复使用3次。
苯乙醇苷和黄酮碳苷化合物研究进展：
1化学结构及理化性质
苯乙醇苷是由苯乙醇和糖结合在一起形成的苷，黄酮碳苷是指糖直接与黄酮母体以C-C键联结，苯乙醇苷和黄酮碳苷成分极性大，溶解性相似，此两类成分在石胆草中的含量均较高。经对320只小鼠试验发现苯乙醇苷和黄酮碳苷是一种低毒、安全的化合物。其含量测定方法常见的有UV法、HPLC法等几种，UV法是根据物质分子在紫外光区200~400nm范围内电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量方法。该法操作简便、快捷、准确度高、重现性好。HPLC法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱进行分离，再进入检测器进行检测，从而实现对样品的定性、定量分析的方法。此法具有高压、高效、高灵敏度、应用范围广、分析速度快、色谱柱可反复使用、样品不被破坏等多种优点，是现代研究中较为常见的一种含量测定方法。
4药理作用
很多学者对苯乙醇苷和黄酮碳苷的药理活性进行了大量的研究，发现其具有抗菌、抗炎、抗病毒、抗甲状腺、保肝、强心、抗辐射、抗肿瘤、增强记忆、免疫调节等多种药理活性。随着研究的不断深入，近5年又有了新的进展：
4.1抗菌、抗病毒作用作用
苯乙醇苷和黄酮碳苷对五种多药耐药金黄色葡萄球菌有抑制作用，对Para 3病毒具有抗抑制活性。
4.2抗炎、保肝作用
通过体外研究发现，苯乙醇苷和黄酮碳苷能够抑制LPS诱导的小鼠巨噬细胞中NO的释放，具有显著的抗炎作用。
苯乙醇苷和黄酮碳苷对四氯化碳所致的大鼠肝毒性有保护作用。其不仅能够显著抑制四氯化碳引起的丙氨酸转氨酶升高，还能显著抑制肝脏中丙二醛的形成，并能减少四氯化碳中毒小鼠肝脏中还原型谷胱甘肽的含量。
4.3抗氧化作用
通过TOSC法评定抗氧化能力，且测定结果与Trolox比较，发现苯乙醇苷和黄酮碳苷具有很强的抗氧化活性。苯乙醇苷和黄酮碳苷在人类HL-60细胞的氧化系统中具有明显的抗氧化作用，且其自由基抑制活性强度与阳性对照银杏叶提取物标准品EGb761类似。
4.4免疫调节作用
苯乙醇苷和黄酮碳苷能够提高小鼠骨髓来源树突状细胞(DCS)表面分子CD11c，CD86，MHCⅡ和CD80的表达及DCs吞噬功能的变化，表明苯乙醇苷和黄酮碳苷具有调控DCs的功能，提示此功能与免疫调节活性相关。
4.5增强记忆
苯乙醇苷和黄酮碳苷可通过提高SOD及GSH2Px活性提高双侧颈总动脉结扎所致的脑缺血大鼠学习记忆水平，并对β-淀粉样肽所致AD小鼠及喹啉酸所致的AD小鼠的学习记忆能力均有提高。
4.6抗衰老
Xuan GD等以维生素E为阳性对照，探讨苯乙醇苷和黄酮碳苷对D-半乳糖致衰老模型小鼠的抗衰老作用。发现苯乙醇苷和黄酮碳苷能降低小鼠的学习和记忆的错误次数，学习反应期缩短，记忆潜伏期延长，同时能显著提高小鼠血清、脑SOD活力(P<0.01)，对降低肝脏、血清MDA含量亦有一定作用，说明苯乙醇苷和黄酮碳苷可通过增强机体抗氧化能力而抗衰老。
4.7抗中脑神经细胞凋亡
帕金森症(Parkinson′s disease,PD)是以神经退行性病变为特征的老年性疾病。凋亡是PD的重要发病机制之一，它是一个复杂的、有Caspase家族成员介导的蛋白酶级联反应过程。天冬氨酸特异性的半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)在这一反应中发挥了重要作用。苯乙醇苷和黄酮碳苷可有效的抑制Caspase-3的活性，实现其抗由1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phylpyridiniumion，MPP+)所致的中脑多巴胺能神经细胞元凋亡的作用。因此苯乙醇苷和黄酮碳苷在预防治疗PD方面，可能有较好的开发前景。
4.8其他作用
4.8.1心肌保护作用苯乙醇苷和黄酮碳苷对阿霉素(ADR)所致小鼠心肌线粒体损伤有一定的保护作用。
4.8.1脑部保护作用苯乙醇苷和黄酮碳苷对大鼠局灶性脑缺血具有保护作用。
5结语
随着人们认识的不断深入，越来越多的人们渴望用低毒、高效的天然药物来攻克现代生活中的各种疾病。国内外学者在药物的研发方面也逐渐偏重于传统药物。苯乙醇苷和黄酮碳苷化合物所表现的较强而且广泛的药理活性，及其低毒、安全的特性，使其具有潜在的开发研究价值，符合现代人们对药物的要求。
Claims (7)
1.一种石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为10-95%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:8-16，在50℃-90℃回流提取1-4次，每次提取时间1.5-3.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4-5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4-6 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4-6 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.06-0.1g·mL-1的提取物，通过径高比为1：4-8的预处理后的树脂柱进行动态吸附，浓度为0.06-0.1g·mL-1的提取物的上样量为50-85ml，流速为2-4 BV·h-1，待吸附完全后，用2-8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2 -4 BV·h-1，除杂后用4-6倍柱体积的质量浓度为10-50%的乙醇以1-3 BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷；所述的大孔吸附树脂为HPD-100、AB-8、X-5中的一种。
2.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为50%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:12，在80℃回流提取2次，每次提取时间2.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以5 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.08g·mL-1的提取物，通过径高比为1：6的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0.08g·mL-1的提取物的上样量为65ml，流速为3 BV·h-1，待吸附完全后，用5倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV·h-1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为30%的乙醇以2BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
3.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为10%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:8，在50℃℃回流提取1次，每次提取时间1.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.06g·mL-1的提取物，通过径高比为1：4的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0.06g·mL-1的提取物的上样量为85ml，流速为2 BV·h-1，待吸附完全后，用2倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2 BV·h-1，除杂后用4倍柱体积的质量浓度为10%的乙醇以1 BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
4.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为95%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1: 16，在90℃回流提取4次，每次提取时间3.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取HPD-100大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，HPD-100大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以6 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以6 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的HPD-100树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.1g·mL-1的提取物，通过径高比为1：8的预处理后的HPD-100树脂柱进行动态吸附，浓度为0.1g·mL-1的提取物的上样量为50ml，流速为4 BV·h-1，待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4 BV·h-1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的乙醇以3 BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
5.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为30%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:10，在60℃回流提取2次，每次提取时间2h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以5 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以5 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂3h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.07g·mL-1的提取物，通过径高比为1：5的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0.07g·mL-1的提取物的上样量为75ml，流速为3 BV·h-1，待吸附完全后，用4倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为3BV·h-1，除杂后用5倍柱体积的质量浓度为20%的乙醇以2BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
6.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为70%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1:12，在50℃℃回流提取1次，每次提取时间3h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂4h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以4 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以4 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂2-4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.09g·mL-1的提取物，通过径高比为1：7的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0.09g·mL-1的提取物的上样量为60ml，流速为2 BV·h-1，待吸附完全后，用6倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为2 BV·h-1，除杂后用4倍柱体积的质量浓度为30%的乙醇以1 BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
7.根据权利要求1所述的石胆草中苯乙醇苷和黄酮碳苷的提取方法，其特征在于，取石胆草药材，加入质量浓度为80%的乙醇，石胆草药材和乙醇的重量体积比为1: 14，在70℃回流提取3次，每次提取时间3.5h，过滤，滤液减压回收溶剂，真空干燥得提取物，备用，取AB-8大孔吸附树脂进行预处理，预处理方法是，AB-8大孔吸附树脂用0.5BV的质量浓度为95%的乙醇浸泡24h，用2BV的质量浓度为95%的乙醇以2 BV·h-1的流速通过树脂柱，并浸泡树脂5h，用质量浓度为95%的乙醇2BV·h-1的流速洗涤树脂，至流出液加水无白色混浊为止，再用水以同样流速洗至无醇味；用2BV的质量浓度为5%盐酸溶液以6 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速洗至中性；用2BV的质量浓度为5%氢氧化钠溶液以6 BV·h-1的流速通过树脂层，并浸泡树脂4h，而后用水以同样流速冼脱至中性，得预处理后的AB-8树脂柱；苯乙醇苷和黄酮碳苷的纯化：取浓度为0.1g·mL-1的提取物，通过径高比为1：8的预处理后的AB-8树脂柱进行动态吸附，浓度为0.1g·mL-1的提取物的上样量为50ml，流速为4 BV·h-1，待吸附完全后，用8倍柱体积的蒸馏水冲洗树脂柱洗脱除杂，流速为4 BV·h-1，除杂后用6倍柱体积的质量浓度为50%的乙醇以3 BV·h-1的流速洗脱至无色，收集洗脱液，即得苯乙醇苷和黄酮碳苷。
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