CN102441026A - 胡芦巴黄酮提取物制备方法及其降血糖应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种胡芦巴黄酮提取物制备方法，该方法包括以下步骤：(1)将干燥、粉碎的胡芦巴种子用乙醇溶液进行超声提取，得到提取液；(2)所述提取液经浓缩后用乙醇醇沉、过滤，得到浓缩液；该浓缩液依次通过乙醇、纯水、盐酸、纯水、氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂；(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用乙醇洗脱至无黄酮流出并收集洗脱液；(4)蒸发回收所述洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液；(5)经所述黄酮溶液经浓缩、真空干燥即得粉状胡芦巴黄酮提取物。本发明具有快速、高效、易于放大、绿色安全的特点，所得提取物具有显著的降血糖生物学活性，可广泛应用于各种胡芦巴黄酮类降血糖的药物及保健食品开发需求。
Description
技术领域
本发明涉及一种黄酮提取物的制备方法，尤其涉及胡芦巴黄酮提取物制备方法及其降血糖应用。
背景技术
胡芦巴(Trigonella foenum-graecum L.)是豆科蝶形花亚科胡芦巴属的一种一年生草本植物，其干燥成熟种子作为常用中药被收入《中华人民共和国药典》。研究表明胡芦巴含有多种生物活性物质，如黄酮、皂苷、生物碱、香豆素和多糖等多种活性成分。其中，黄酮作为一大类活性物质，具有降血糖和抗氧化等作用。
黄酮类化合物的提取方法现在一般采用水煮提取、有机溶剂提取和超声提取等方法。水煮和超临界CO2流体提取的方法存在诸多局限，没有被广泛应用。超声提取是在相对较低的温度下进行的，节省能源，也有利于对热不稳定黄酮化合物的提取，并且超声提取由于空化效应、机械效应和热效应等的作用，加强了溶剂的扩散和有效成分的溶解，从而缩短提取时间。同时超声法节省溶剂，操作步骤简化，提高工作效率。此外，超声提取过程无化学反应，被浸提的生物活性物质在短时间内保持不变，生物活性不减。因此，超声提取是一种快速、高效、易于放大、绿色安全的方法。
高血糖是糖尿病的临床表现之一，持续的高血糖会引起起糖代谢、脂肪和蛋白质代谢紊乱，并导致一系列心脑血管疾病、肾功能衰竭等，近年来研究发现，中药降糖作用温和持久、副作用小，且作用机理具有多效应、多位点、多功能的综合作用。因此，开发具有降血糖的中药提取物及其制剂具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种快速、高效、易于放大、绿色安全的胡芦巴黄酮提取物制备方法。
本发明所要解决的另一个技术问题是提供该提取物在降血糖药物或保健食品中的应用。
为解决上述问题，本发明所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为20～60目的胡芦巴种子用质量浓度为10～90％的乙醇溶液在提取温度为20～60℃、超声功率为100～600W、料液质量体积比为1∶5～1∶20、提取时间为0.5～2h的条件下进行超声提取，得到提取液；
(2)所述提取液经浓缩后用质量浓度为70～95％的乙醇醇沉除去蛋白，并过滤，得到浓缩液；该浓缩液依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂；
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为10～90％的乙醇以2～4BV/h的流速洗脱至无黄酮流出并收集洗脱液；
(4)蒸发回收所述洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液；
(5)经所述黄酮溶液经浓缩、真空干燥即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
用下述制备方法代替权利要求1中所述步骤(1)：将干燥、粉碎成粒度为20～60目的胡芦巴种子先用超临界CO2萃取提取油脂后，再用质量浓度为10～90％的乙醇溶液在提取温度为20～60℃、超声功率为100～600W、料液质量体积比为1∶5～1∶20、提取时间为0.5～2h的条件下进行超声提取，得到提取液。
所述步骤(3)中极性大孔吸附树脂为DM130型。
所述步骤(2)中的浓缩温度为50～60℃。
所述步骤(4)中的蒸发回收温度为45～60℃。
所述步骤(5)中的真空干燥温度为50～60℃。
如上所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖药物中的应用。
所述降血糖药物中含有质量30～60％的胡芦巴黄酮提取物和药学可接受的辅料。
如上所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖保健食品中的应用。
所述降血糖保健食品中含有质量20～50％的胡芦巴黄酮提取物和保健食品可接受的添加剂。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
1、本发明首次对胡芦巴种子的黄酮类化合物的超声提取制备过程进行了研究，对影响提取得率及黄酮含量的各个参数进行了优化，从而确定了最优条件；同时提高了黄酮类物质得率，并减小了工业消耗、降低了生产成本。
2、本发明采用乙醇为溶剂，安全可靠、易于工业化生产。
3、本发明是在相对较低的温度下进行的，节省能源，也有利于对热不稳定黄酮化合物的提取。
4、本发明节省溶剂，操作步骤简化，提高了工作效率，是一种快速、高效、易于放大、绿色安全的方法。
5、本发明胡芦巴黄酮提取物经实验证明具有显著的降血糖的生物学活性，可明显降低糖尿病小鼠和大鼠血糖的含量、改善小鼠和大鼠的葡萄糖耐量、提高糖尿病小鼠胰腺重量指数、促进肝糖原的合成，可广泛应用于各种胡芦巴黄酮类降血糖的药物及保健食品开发需求。
降血糖的生物学活性实验：
(1)糖尿病小鼠和大鼠血糖的含量实验：
①昆明种小鼠，雌雄各半，体重为18～22g，随机分为对照组和造模组。待造模组小鼠禁食(不禁水)16h后，尾静脉快速注射四氧嘧啶生理盐水溶液。3d后尾尖取血测定小鼠血糖，选定血糖值＞20.0mmol/L，同时伴有多饮、多尿症状的小鼠为糖尿病小鼠。灌胃途径给予糖尿病小鼠胡芦巴黄酮提取物，剂量为250mg·kg-1，连续14d。阳性对照组给予格列齐特40mg/kg。给药第7天和第14天时分别测定血糖1次，结果发现糖尿病小鼠血糖显著降低(p＜0.01)，结果见表1。
表1胡芦巴黄酮提取物对糖尿病小鼠血糖的影响(n＝10，
)
注：与正常组相比，*P＜0.001；与糖尿病模型组相比，**P＜0.01。
②选健康大鼠150只(雄性)，体重180～200g，饲养1周，禁食24h，尾静脉注射1％四氧嘧啶(0.45mL/100g)，造型后3d，自眶静脉丛采血测血糖值。剔除血糖低于20mmol/L、高于50mmol/L的大鼠，剩余的按血糖值的高低随机分为7组：造型组、FSE大、中、小剂量组、糖尿灵组、降糖灵组和对照组。分组后按照胡芦巴黄酮提取物大、中、小剂量组给药4、2、1g/kg，糖尿灵组给药100mg/kg，降糖灵组给药1.5g/kg，对照组和造型组灌服蒸馏水(0.2mL/10g)，一日一次，连续给药14d，于末次给药后1h取血测定血糖含量，结果见表2。
表2胡芦巴黄酮提取物对四氧嘧啶大鼠血糖的影响(n＝15，
)
| 分组 | 给药前血糖含量/mmol·L1 | 给药后血糖含量/mmol·L1 |
| 模型组 | 20.78±2.68 | 12.67±3.8 |
| 提取物大剂量组 | 20.71±2.46 | 6.59±1.43* |
| 提取物中剂量组 | 20.76±2.51 | 7.06±2.46* |
| 提取物小剂量组 | 20.69±2.64 | 8.15±4.24* |
| 糖尿灵组 | 20.75±2.57 | 6.65±2.37* |
| 降糖灵组 | 20.69±2.37 | 7.18±1.62* |
| 对照组 | 5.04±0.41 | 5.14±0.52 |
注：与模型组比，*p＜0.05。
由表2可知，大鼠尾静脉注射四氧嘧啶造型后3d，血糖含量明显升高，与对照组比较上升近5倍，连续给药14d后，各给药组血糖含量均显著下降。可见，胡芦巴黄酮提取物的降糖效果与降糖灵及糖尿灵相近，具有明显的降血糖作用。
(2)小鼠和大鼠的葡萄糖耐量实验：
①取小鼠75只，按体重随机分为5组：正常组、正常+胡芦巴黄酮提取物组、模型组、模型+胡芦巴黄酮提取物组、对照组(降糖灵组)，每组15只。实验前小鼠禁食16h，实验时先从小鼠尾部取血(0h)，再灌胃给药。正常组和模型组给等量蒸馏水，正常+胡芦巴黄酮提取物组和模型+胡芦巴黄酮提取物组给胡芦巴黄酮70％乙醇提物，给药组剂量均为0.25g·kg-1，对照组给药剂量为降糖灵0.1g/kg-1。1h后灌胃葡萄糖(2.5g·kg-1)，血糖仪测定空腹(0h)及餐后0.5、1、2h的血糖值，结果见表3，结果表明模型+提取物组在餐后各个时间点血糖均有降低趋势，特别是小鼠餐后2h血糖显著降低(P＜0.05)，具有统计学意义。
表3胡芦巴黄酮提取物对小鼠糖耐量的影响(n＝12，)
注：a：与模型组比较，p＜0.05。
②将大鼠常规饲养1周后，眶后静脉取血，分离血清，检测空腹血糖水平，选择血糖水平在3.6～5.4mmol/L范围内的大鼠72只，取其中12只大鼠作为正常对照组，其余60只大鼠分别腹腔注射链脲佐菌素(STZ，50mg/kg)，72h后检测空腹血糖，选择48只血糖水平大于13.8mmol/L的大鼠作为糖尿病模型成功大鼠用于试验。将48只糖尿病大鼠随机分为4组，每组12只，分别为模型对照组、胡芦巴黄酮提取物小剂量组(0.15g/kg)、胡芦巴黄酮提取物大剂量组(0.30/kg)及阳性药苯乙双胍组(0.1g/kg)。给药组每日灌胃给药1次，容量为1ml/100g体重，正常对照组及模型对照组大鼠给予等容量蒸馏水，连续7d，第6天给药后，各组动物均禁食12h，第7天给药后30min，灌胃给予葡萄糖2g/kg，然后眶后静脉采血，测定0、0.5、1、2h的血糖值，结果见表4，结果表明胡芦巴黄酮提取物组0.5、1、2h时间点血糖值均低于模型对照组大鼠(P＜0.05或P＜0.01)，具有统计学意义。
表4胡芦巴黄酮提取物对大鼠糖耐量的影响(n＝12，
)
| 组别 | 0h | 0.5h | 1h | 2h |
| 正常组 | 4.50±0.74 | 8.52±1.20 | 14.18±0.88 | 7.91±1.24 |
| 模型对照组 | 18.49±1.99 | 23.74±2.15 | 26.47±4.08 | 21.57±2.54 |
| 小剂量组 | 11.45±1.39b | 16.78±1.78b | 18.92±2.16a | 15.12±2.41a |
| 大剂量组 | 12.51±2.12b | 17.32±2.14b | 16.88±2.58b | 15.62±2.09b |
| 苯乙双胍组 | 9.75±1.37b | 1236±2.14b | 15.67±1.37b | 11.36±2.01b |
注：a：与模型组相比，p＜0.05；b：与模型组相比，p＜0.01。
(3)提高糖尿病小鼠胰腺重量指数实验：
昆明种小鼠60只，雌雄各半，20±2g，随机分为正常对照组和待造模组。待造模组小鼠禁食16h后(不禁水)，尾静脉快速注射四氧嘧啶生理盐水溶液，剂量为60mg·kg-1。72h后尾尖取血测定小鼠血糖，血糖值＞20.0mmol·L-1的小鼠，同时伴有多饮、多尿症状，被选为糖尿病小鼠。糖尿病小鼠采用灌胃途径给予胡芦巴黄酮提取物，剂量为250mg·kg-1，连续17d。阳性对照药为格列奇特(40mg·kg-1)。给药第7天和第17天时分别测定血糖1次，实验结束时取血后处死小鼠，摘除胰腺称重，计算重量指数，结果见表5，结果表明正常小鼠注射四氧嘧啶72h后，脾脏和胰腺发生萎缩(P＜0.05)。糖尿病小鼠给予亚组分胡芦巴黄酮提取物17d后，胰腺萎缩得到一定的改善(P＜0.05)。
表5胡芦巴黄酮提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠胰腺重量指数的影响(n＝12，
)
| 组别 | 胰腺重量指数(10-3g/g) |
| 正常组 | 4.45±0.65 |
| 糖尿病组 | 4.15±0.48 |
| 胡芦巴提取物组 | 4.68±0.67a |
| 格列奇特组 | 4.53±0.63b |
注：a：与模型组相比，p＜0.05；b：与模型组相比，p＜0.01。
(4)促进肝糖原的合成实验：
在糖尿病小鼠胰腺重量指数实验结束时取血后处死小鼠，摘取肝脏称重、冷冻，一周内待测肝糖原含量。准确称重肝脏200mg，加入4mL的体积分数5％三氯乙酸溶液，制成匀浆。3000rpm离心5min，精确吸取上清液1mL，然后加入蒽酮试剂显色。在620nm波长处测定光密度，根据标准曲线计算样品中总糖含量，再换算成肝糖原含量(mg/g)，结果见表6，实验数据表明，胡芦巴黄酮提取物能促进肝糖原合成。
表6胡芦巴黄酮提取物对四氧嘧啶糖尿病小鼠血肝糖原含量的影响(n＝12，
)
| 组别 | 肝糖原含量(10-2g/g) |
| 正常组 | 5.57±1.28 |
| 糖尿病组 | 4.04±1.14 |
| 胡芦巴提取物组 | 5.71±1.52a |
| 格列奇特组 | 3.34±1.54 |
注：a：与模型组相比，p＜0.05。
具体实施方式
实施例1胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为60目的胡芦巴种子用质量浓度为70％的乙醇溶液在提取温度为60℃、超声功率为600W、料液比为1∶20(g/mL)、提取时间为2h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经50℃下真空浓缩后用质量浓度为90％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为90％的乙醇以2BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在45℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经50℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在50℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为28％。
实施例2胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为20目的胡芦巴种子用质量浓度为10％的乙醇溶液在提取温度为20℃、超声功率为100W、料液比为1∶5(g/mL)、提取时间为0.5h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经55℃下真空浓缩后用质量浓度为70％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为30％的乙醇以4BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在50℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经55℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在55℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为16％。
实施例3胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为40目的胡芦巴种子用质量浓度为90％的乙醇溶液在提取温度为40℃、超声功率为350W、料液比为1∶15(g/mL)、提取时间为1h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经60℃下真空浓缩后用质量浓度为85％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为70％的乙醇以3BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在55℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经60℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在60℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为24％。
实施例4胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为20目的胡芦巴种子用质量浓度为50％的乙醇溶液在提取温度为30℃、超声功率为400W、料液比为1∶10(g/mL)、提取时间为1.5h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经58℃下真空浓缩后用质量浓度为80％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为50％的乙醇以3BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在60℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经58℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在58℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为20％。
实施例5胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为40目的胡芦巴种子先在31MPa，40℃，90min条件下用超临界CO2萃取提取油脂后，再用质量浓度为50％的乙醇溶液在提取温度为40℃、超声功率为250W、料液比为1∶2(g/mL)、提取时间为1.2h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经50℃下真空浓缩后用质量浓度为82％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为60％的乙醇以2BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在45℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经50℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在50℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为18％。
实施例6胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为40目的胡芦巴种子先在29MPa，45℃，80min条件下用超临界CO2萃取提取油脂后，再用质量浓度为75％的乙醇溶液在提取温度为45℃、超声功率为350W、料液比为1∶15(g/mL)、提取时间为2h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经55℃下真空浓缩后用质量浓度为90％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为10％的乙醇以2.5BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在50℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经55℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在55℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为19％。
实施例7胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为20目的胡芦巴种子先在32MPa，50℃，120min条件下用超临界CO2萃取提取油脂后，再用质量浓度为85％的乙醇溶液在提取温度为25℃、超声功率为100W、料液比为1∶5(g/mL)、提取时间为0.5h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经60℃下真空浓缩后用质量浓度为95％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为75％的乙醇以4BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在55℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经60℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在60℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为15％。
实施例8胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为40目的胡芦巴种子先在25MPa，35℃，60min条件下用超临界CO2萃取提取油脂后，再用质量浓度为90％的乙醇溶液在提取温度为60℃、超声功率为150W、料液比为1∶20(g/mL)、提取时间为2h的条件下进行超声提取，得到提取液。
(2)提取液经56℃下真空浓缩后用质量浓度为90％的乙醇醇沉除去蛋白，重复三次，得到浓缩液；该浓缩液以2BV/h的流速依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂。
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为90％的乙醇以2BV/h的流速洗脱至无黄酮流出时停止洗脱，收集洗脱液。
(4)在60℃下真空蒸发回收洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液。
(5)黄酮溶液先经56℃下旋转浓缩至粘稠状，然后在56℃下经真空干燥后粉碎即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
该胡芦巴黄酮提取物经标准曲线法测定，其总黄酮含量为25％。
上述实施例1～8中步骤(2)和(3)中极性大孔吸附树脂为DM130型。
实施例9胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖药物中的应用。
本发明药物由本发明中任意一种含有质量30～60％的胡芦巴黄酮提取物和药学可接受的辅料按常规方法加工制成(但并不限于)片剂、丸剂、胶囊剂、粉针剂等任何一种适用于临床给药的药物制剂。
实施例10胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖保健食品中的应用。
本发明保健食品由本发明中任意一种含有质量20～50％的胡芦巴黄酮提取物和保健食品可接受的添加剂按常规方法加工制成。
上述实施例1～10是对本发明的进一步详细说明，但不意味着对本发明的任何限制。在不脱离本发明上述思想的情况下，根据本领域普通技术知识和常规手段作出的各种替换方式或变更，均包含在本发明之内。
Claims (10)
1.胡芦巴黄酮提取物制备方法，包括以下步骤：
(1)将干燥、粉碎成粒度为20～60目的胡芦巴种子用质量浓度为10～90％的乙醇溶液在提取温度为20～60℃、超声功率为100～600W、料液质量体积比为1∶5～1∶20、提取时间为0.5～2h的条件下进行超声提取，得到提取液；
(2)所述提取液经浓缩后用质量浓度为70～95％的乙醇醇沉除去蛋白，并过滤，得到浓缩液；该浓缩液依次通过质量浓度为95％的乙醇、纯水、质量浓度为5％的盐酸、纯水、质量浓度为2％的氢氧化钠和纯水处理的中极性大孔吸附树脂；
(3)先用水洗脱中极性大孔吸附树脂至流出的溶液为无色或淡棕色，再用质量浓度为10～90％的乙醇以2～4BV/h的流速洗脱至无黄酮流出并收集洗脱液；
(4)蒸发回收所述洗脱液中的乙醇，得到黄酮溶液；
(5)经所述黄酮溶液经浓缩、真空干燥即得粉状胡芦巴黄酮提取物。
2.如权利要求1所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法，其特征在于：用下述制备方法代替权利要求1中所述步骤(1)：将干燥、粉碎成粒度为20～60目的胡芦巴种子先用超临界CO2萃取提取油脂后，再用质量浓度为10～90％的乙醇溶液在提取温度为20～60℃、超声功率为100～600W、料液质量体积比为1∶5～1∶20、提取时间为0.5～2h的条件下进行超声提取，得到提取液。
3.如权利要求1所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法，其特征在于：所述步骤(2)和(3)中极性大孔吸附树脂为DM130型。
4.如权利要求1所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法，其特征在于：所述步骤(2)中的浓缩温度为50～60℃。
5.如权利要求1所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中的蒸发回收温度为45～60℃。
6.如权利要求1所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法，其特征在于：所述步骤(5)中的真空干燥温度为50～60℃。
7.如权利要求1所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖药物中的应用。
8.如权利要求7所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖药物中的应用，其特征在于：所述降血糖药物中含有质量30～60％的胡芦巴黄酮提取物和药学可接受的辅料。
9.如权利要求1所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖保健食品中的应用。
10.如权利要求9所述的胡芦巴黄酮提取物制备方法所得的胡芦巴黄酮提取物在制备降血糖保健食品中的应用其特征在于：所述降血糖保健食品中含有质量20～50％的胡芦巴黄酮提取物和保健食品可接受的添加剂。
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