CN105693844A - 一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高纯度多肽醋酸盐的制备方法，它是用反相-高效液相色谱法，在制备级反相高效液相色谱系统的色谱柱上两次冲洗后进行梯度洗脱，实现同步转盐及纯化。与现有技术相比，本发明工艺简单、成本低廉，容易获得回收率高、转盐彻底的高纯度多肽醋酸盐，适合该类产品的大规模工业化生产。
Description
技术领域
本发明属于药物化学领域，具体涉及一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法。
背景技术
多肽由于其良好的生物活性和极低的毒性而被用于药物研究或疾病治疗。促性腺激素释放激素类似物，包括其激动剂和拮抗剂，是人工合成的具有一定药理作用的多肽，用于多种疾病的治疗，特别是对于很多癌症也具有明确的治疗效果。
促性腺激素释放激素类似物作为药物使用的时候，要求其必须是醋酸盐形式，但是在多肽的合成过程中，会由于裂解或脱保护而引入三氟醋酸或盐酸，形成了三氟醋酸盐或盐酸盐形式的粗品多肽；以及因为反相-高效液相色谱法制备时的流动相中含有三氟醋酸、硫酸、高氯酸或磷酸，从而导致其形成了非醋酸盐形式的多肽产品。这些非醋酸盐形式的多肽产品对人体是有害的，需要再使用反相-高效液相色谱法或离子交换色谱法将其转化成醋酸盐形式的多肽产品，才能作为药物而用于人体。
现有的技术通常使用一或两个步骤的反相-高效液相色谱法纯化多肽，所获得的是非醋酸盐形式的多肽产品，然后使用反相-高效液相色谱法或离子交换色谱法转盐，以获得纯度较高的促性腺激素释放激素类似物的醋酸盐产品。这些方法工艺路线复杂，溶剂使用量很大，产品回收率不高，甚至转盐不彻底，导致产品不合格，生产成本高，不利于大规模工业化的生产。
专利文献CN102993274A报道了一种加尼瑞克的纯化及转盐的方法，其缺点在于将转盐和纯化分为两个步骤，工艺繁琐；且第一次纯化的时候在流动相中加入了高氯酸和磷酸，如果转盐不彻底，会使成品中引入更多的有毒杂质。
专利文献CN103012564A报道了一种曲普瑞林的纯化方法，其缺点在于先使用离子交换色谱将粗肽制备成醋酸盐的形式，再以硅胶柱进行纯化。该方法使用两种手段分别进行转盐和纯化，增加了操作步骤，提高了生产成本；以硅胶柱进行纯化时候，流动相中没有加入酸性调节剂，很难保证最终产品的纯度和产品的回收率，该方法难以应用于大批量的工业生产。
专利文献CN102690329A报道了一种戈舍瑞林的纯化方法，其缺点在于分别使用SourceRPC和反相-高效液相色谱柱进行两次纯化，再使用阴离子交换色谱法获得醋酸戈舍瑞林。整个工艺需要三个步骤，非常繁琐，需要多个色谱柱，设备成本高，且会导致产品损失过多，使回收率降低。
专利文献US6258933报道了一种寡肽的纯化及转盐的方法，涉及西曲瑞克和安雷利克斯，其缺陷在于，没有在开始纯化和转盐的梯度洗脱之前以含有醋酸铵和醋酸的流动相进行充分的冲洗，这会导致粗肽原先带有的强酸仍然与多肽结合在一起，增加转盐不彻底的隐患；而且该文献只研究了对盐酸盐粗肽的纯化和转盐，没有研究三氟醋酸盐粗肽的纯化和转盐。
专利文献CN104447960A报道了一种片段缩合制备醋酸阿托西班的方法，在实施例中，使用了醋酸水溶液和乙腈水溶液为流动相进行阿托西班的纯化和转盐，其缺陷在于，没有在开始纯化和转盐的梯度洗脱之前使用含有醋酸铵和醋酸的流动相进行充分的冲洗，这会导致粗肽原先带有的强酸离子依然与多肽结合在一起，导致转盐不彻底；且该专利只研究了阿托西班的纯化和转盐，这是含有二硫键的环肽，并没有研究GnRH类似物这样的直链肽的纯化和转盐。
综合研究以往的专利文献，可以发现其中有诸多的技术缺陷，有的分别使用反相-高效液相色谱和离子交换色谱进行纯化和转盐；有的甚至以SourceRPC和反相-高效液相色谱柱进行两次纯化，再使用阴离子交换色谱法转盐，工艺路线复杂，需要更多的硬件投资，且溶剂使用量大，生产成本高，产品损失多，回收率小；有的在纯化步骤加入磷酸、硫酸或高氯酸等试剂，再以碱调节流动相的pH值，引入更多的试剂，使成品的杂质有增多的风险；有的未使用含醋酸铵和醋酸的流动相进行充分的冲洗，会导致转盐不彻底，容易使产品不合格，这些技术都不能获得促性腺激素释放激素类似物的高纯度醋酸盐产品，不利于此类产品的大规模工业化生产。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法，以解决现有技术存在的难以获得促性腺激素释放激素类似物的高纯度醋酸盐产品的问题。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法，它包括如下步骤：
(1)将促性腺激素释放激素类似物粗品溶于混合溶剂中，离心后过滤，取滤液加载到制备级反相高效液相色谱系统的色谱柱上，先以含醋酸铵的流动相进行第一次冲洗，再以含醋酸的流动相进行第二次冲洗，最后进行梯度洗脱，实现同步转盐及纯化，收集洗脱液；
(2)将步骤(1)中所得的洗脱液减压蒸馏浓缩后，经冷冻干燥后，即得高纯度的促性腺激素释放激素类似物醋酸盐。
步骤(1)中，所述的促性腺激素释放激素类似物，包括促性腺激素释放激素激动剂和促性腺激素释放激素拮抗剂；
其中，促性腺激素释放激素激动剂包括但不限于阿伏瑞林(Avorelin)、布舍瑞林(Buserelin)、德舍瑞林(Deslorelin)、戈那瑞林(Gonadorelin)、戈舍瑞林(Goserelin)、组氨瑞林(Histrelin)、亮丙瑞林(Leuprorelin)、那法瑞林(Nafarelin)和曲普瑞林(Triptorelin)。
促性腺激素释放激素拮抗剂包括但不限于阿巴瑞克(Abarelix)、西曲瑞克(Cetrorelix)、地加瑞克(Degarelix)、地肽瑞里(Detirelix)、加尼瑞克(Ganirelix)、伊妥瑞克(Iturelix)、普拉瑞克(Prazarelix)、雷莫瑞克(Ramorelix)、替维瑞克(Teverelix)和安雷利克斯(Antarelix)；
步骤(1)中，所述的促性腺激素释放激素类似物粗品为三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品，其性状包括颗粒状、絮状、粉末状和液态，其HPLC纯度小于或等于95％。
其中，所述的三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品由如下方法制备得到：
通过液相法、固相法或固液相结合法合成含(或不含)保护基的促性腺激素释放激素类似物(以溶解在反应液中、连接在固态树脂上或其它形式存在)，再以含三氟醋酸的裂解液裂解(并同步去除保护基)后，用乙醚或其它试剂进行沉淀，获得三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品；或者将前述的促性腺激素释放激素类似物(一般是指溶解在反应液中的促性腺激素释放激素类似物)在乙醚或其它试剂中进行沉淀，得到三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品。
其中，上述三种合成方法中，优选固相法或固液相结合法。
步骤(1)中，所述的促性腺激素释放激素类似物粗品为常规纯化方法得到的HPLC纯度小于或等于95％的醋酸盐形式或非醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物，其剂型包括乙醚沉淀后干燥所得的颗粒状粗品、各种形式的粗品溶液和经过冷冻干燥而得的絮状或粉末状粗品。
步骤(1)中，所述的混合溶剂由乙腈、醋酸和水以50～100：250～350：500～700的体积比混合而成，或者由甲醇、醋酸和水以50～100：250～350：500～700的体积比混合而成。
步骤(1)中，离心的转速为1000～10000rpm，时间为1～10min。
步骤(1)中，过滤的方式为抽滤、压滤或加压抽滤；其中，过滤所用滤膜为水系或有机系的微孔滤膜，孔径为0.1～10.0μm。
步骤(1)中，所述的制备级反相高效液相色谱系统的色谱柱的填料为C4、C6、C8和C18键合硅胶或高分子聚合物。
步骤(1)中，两次冲洗中，第一次冲洗时所用的流动相A为乙腈水溶液或甲醇水溶液，流动相B为醋酸铵水溶液；第二次冲洗时所用的流动相A为乙腈水溶液或甲醇水溶液，流动相B为醋酸的水溶液；
其中，两次冲洗中，每次冲洗所用流动相的总体积均为1～20个柱体积，优选2～5个柱体积；流动相A的体积均占流动相总体积的5～20％。
步骤(1)中，两次冲洗中，乙腈水溶液中，乙腈和水的体积比均为800～1200：1～100；甲醇水溶液中，甲醇和水的体积比均为800～1200：1～100；醋酸铵水溶液中，醋酸铵和水的质量/体积比g/mL为1～50：800～1200；醋酸的水溶液中，醋酸和水的体积比为1～100：800～1200。
步骤(1)中，梯度洗脱中，流动相A和流动相B的pH值为1～5；
其中，
流动相A由乙腈、醋酸和水以500～1500：10～100：200～400的体积比混合而成，流动相B由乙腈、醋酸和水以10～100：10～100：800～1200的体积比混合而成，流动相A和B的pH值为1～5，优选1～3；梯度洗脱程序以体积百分比计为：由30％A+70％B线性变为60％A+40％B，梯度洗脱所需的时间为10～120min；
或者，
流动相A由甲醇、醋酸和水以700～1500：10～100：10～100的体积比混合而成，流动相B为甲醇、醋酸和水以10～100：10～100：800～1200的体积比混合而成，流动相A和B的pH值为1～5，优选1～3；梯度洗脱程序以体积百分比计为：由65％A+35％B线性变为75％A+25％B，梯度洗脱所需的时间为10～100min；
步骤(1)中，梯度洗脱的温度为0～40℃，优选15～25℃；梯度洗脱时，色谱柱压力为1～20Mpa，优选3～10MPa。
步骤(1)中，两次冲洗和梯度洗脱时候所用的检测器为紫外检测器，检测波长为200～300nm。
本发明针对背景技术中所提及的这些问题(例如三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物的纯化和转盐的工艺繁琐、有机溶剂使用量大、成本高、试剂复杂、设备要求高、回收率小，特别是产品的纯度低以及转盐不彻底)，发明人通过反复调节流动相A和流动相B的组成，并且反复调节每个流动相的pH值，提供一种步骤简单，有机溶剂使用量小，成本低、回收率大、纯度高且转盐彻底的促性腺激素释放激素类似物的高纯度醋酸盐产品的制备方法。本发明使用反相-高效液相色谱法，将三氟醋酸盐形式的粗品多肽加载到色谱柱上后，先以醋酸铵/水和醋酸/水依次冲洗，以完全除去肽链分子上结合的三氟醋酸，再使用分别含有醋酸的流动相A和B进行梯度洗脱，实现同步转盐和纯化，收集不同时间段的洗脱液，检测后合并合格的样品，减压蒸馏浓缩，最后经过冷冻干燥，即可获得到高纯肽的醋酸盐。
整个过程只需对三氟醋酸盐形式的粗品多肽进行一次上样，减少样品的损失，操作简单；以醋酸铵/水和醋酸/水依次冲洗，可以保证转盐彻底；将纯化和转盐合并为一个步骤，只需一个反相色谱柱，无需额外的离子交换色谱柱或其他色谱柱；梯度洗脱的时候也无需在流动相中添加磷酸、硫酸、高氯酸或三氟醋酸做离子对试剂，避免了这些酸根离子残留的风险。本发明工艺简单、成本低廉，容易获得回收率高、转盐彻底的促性腺激素释放激素类似物的高纯度醋酸盐产品，适合该类产品的大规模工业化生产。
有益效果：本发明所述的GnRH类似物醋酸盐的制备方法，使用反相-高效液相色谱法，先以醋酸铵/水和醋酸/水依次冲洗，再使用分别含有醋酸的流动相A和B进行梯度洗脱，实现同步转盐和纯化。本发明将纯化和转盐合并为一个步骤，只需一个反相色谱柱，无需额外的离子交换色谱柱或其他色谱柱；整个过程只需对粗品进行一次上样，避免了样品的损失，操作简单；以醋酸铵/水和醋酸/水依次冲洗，可以保证转盐彻底；梯度洗脱的时候也无需在流动相中添加磷酸、硫酸、高氯酸或三氟醋酸做离子对试剂，杜绝了这些酸根离子残留的风险。本发明工艺简单、成本低廉，容易获得回收率高、转盐彻底的高纯度多肽醋酸盐，适合该类产品的大规模工业化生产。
附图说明
图1为三氟醋酸西曲瑞克粗肽的高效液相色谱分析图；
图2为以乙腈为流动相的西曲瑞克粗肽的高效液相色谱制备图；
图3为以甲醇为流动相的西曲瑞克粗肽的高效液相色谱制备图；
图4为以乙腈为流动相的西曲瑞克粗肽的高效液相色谱中试制备图；
图5为醋酸西曲瑞克纯肽的高效液相色谱分析图。
图6为醋酸西曲瑞克纯肽的质谱分析图；
图7为三氟醋酸布舍瑞林粗肽的高效液相色谱分析图；
图8为以乙腈为流动相的布舍瑞林粗肽的高效液相色谱制备图；
图9为醋酸布舍瑞林纯肽的高效液相色谱分析图；
图10为醋酸布舍瑞林纯肽的质谱分析图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明的方法及其核心思想。实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。对于本发明所属领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，所做出的若干简单推演或者替换，在具体实施方式及应用范围上所做的改变之处，比如更换具有同等功能的色谱柱填料，改变梯度洗脱的时间、温度和压力，对流动相的各组分做简单调整，都应当视为本发明的保护范围。
实施例1三氟醋酸西曲瑞克粗肽的制备
称取40.0g(12.47mmol)Ac-D-2-Nal-D-Phe(4-Cl)-D-3-Pal-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Cit-Leu-Arg(Pbf)-Pro-D-Ala-氨基树脂，置于500mL圆底烧瓶中，加入400mL裂解液(三氟醋酸、苯酚、水和三异丙基硅烷按照88：5：5：2的体积比混合)，25℃油浴反应4h，将裂解液过滤到4000mL预冷至-20℃的冰乙醚中，以4000rpm离心10min，再以冰乙醚洗涤离心三次，真空干燥除去乙醚，得20.62g白色颗粒状三氟醋酸西曲瑞克粗肽(理论可得20.69g三氟醋酸西曲瑞克)，HPLC纯度为87.98％(见图1)，产率为87.68％(计算过程为(20.62×87.98％)/20.69)，图谱数据见表1：
表1
实施例2
(1)三氟醋酸西曲瑞克粗肽的溶解和过滤
称取例1所得的纯度为87.98％的三氟醋酸西曲瑞克粗肽100.0mg(含西曲瑞克75.9mg)，加入8mL溶剂(乙腈、醋酸和水按照100：300：600的体积比混合)，超声促溶后，以4000rpm离心2min，以0.45μm的有机系滤膜过滤。
(2)以醋酸铵/水为流动相进行第一次冲洗
将上述过滤后的溶液通过进样阀加载到色谱柱上，色谱柱的规格为250*30mm，内装Dasio的反相C18填料，粒径8μm。
以900：100体积比的乙腈/水溶液为流动相A，以10g：1000mL的醋酸铵/水溶液为流动相B，按照10％的A相和90％的B相，冲洗45min，流速为10mL/min，检测波长为220nm。
(3)以醋酸/水为流动相进行第二次冲洗
在样品、色谱柱和流动相A不变的情况下，将上述的流动相B改为20：1000体积比的醋酸/水溶液为流动相，按照10％的A相和90％的B相，冲洗45min，流速为10mL/min，检测波长为220nm。
(4)同步转盐和纯化
以体积比750：50：250的乙腈、醋酸和水的混合液为流动相A，以体积比50：50：1000的乙腈、醋酸和水的混合液为流动相B。梯度洗脱的方式为：50min内，梯度由30％A+70％B(V/V)线性变为60％A+40％B(V/V)，梯度洗脱的温度为25℃。
流速为10mL/min，检测波长为220nm，柱压为3～4MPa。
收集纯度大于99.5％的样品，将纯度介于95～100％之间的样品回收，重复上述的梯度洗脱过程，再次收集纯度大于99.5％的样品，其余不合格的样品舍弃。高效液相色谱制备图见图2。
以减压旋蒸的方式，在30℃条件下除去大部分的乙腈，同时浓缩样品，然后进行冷冻干燥，获得高纯度的醋酸西曲瑞克70.5mg(含无水无醋酸西曲瑞克60.4mg)，纯度为99.87％(见图5)，质谱分析图见图6，单杂小于0.1％，醋酸含量为6.14％，水分8.11％，三氟醋酸未检出，回收率为79.58％((60.4/75.9)×100％)。图谱数据见表2。
表2
实施例3
(1)三氟醋酸西曲瑞克粗肽的溶解和过滤
称取纯度为87.98％的三氟醋酸西曲瑞克粗肽90.0mg(含西曲瑞克68.3mg)，加入8mL溶剂(乙腈、醋酸和水按照100：300：600的体积比混合)，超声促溶后，以4000rpm离心2min，以0.45μm的有机系滤膜过滤。
(2)以醋酸铵/水为流动相进行第一次冲洗
将上述过滤后的溶液通过进样阀加载到色谱柱上，色谱柱的规格为250*30mm，内装Dasio的反相C18填料，粒径8μm。
以900：100体积比的甲醇/水溶液为流动相A，以10g：1000mL的醋酸铵/水溶液为流动相B，按照10％的A相和90％的B相，冲洗45min，流速为10mL/min，检测波长为220nm。
(3)以醋酸/水为流动相进行第二次冲洗
在样品、色谱柱和流动相A不变的情况下，将上述的流动相B改为20：1000体积比的醋酸/水溶液为流动相，按照10％的A相和90％的B相，冲洗45min，流速为10mL/min，检测波长为220nm。
(4)同步转盐和纯化
以体积比900：50：50的甲醇、醋酸和水的混合液为流动相A，以体积比50：60：900的甲醇、醋酸和水的混合液为流动相B，梯度洗脱的方式为：15min内，梯度由65％A+35％B(V/V)线性变为75％A+25％B(V/V)，梯度洗脱的温度为25℃。
流速为10mL/min，检测波长为220nm，柱压为3～4MPa。
收集纯度大于99.5％的样品，将纯度介于95～100％之间的样品回收，重复上述的梯度洗脱过程，再次收集纯度大于99.5％的样品，其余不合格的样品舍弃。高效液相色谱制备图见图3。
以减压旋蒸的方式，在30℃条件下除去大部分的乙腈，同时浓缩样品，然后进行冷冻干燥，获得高纯度的醋酸西曲瑞克59.0mg(含无水无醋酸西曲瑞克50.3mg)，纯度为99.89％，单杂小于0.1％，醋酸含量为6.25％，水分8.33％，三氟醋酸未检出，回收率为73.65％((50.3/68.3)×100％)。
实施例4
(1)三氟醋酸西曲瑞克粗肽的溶解和过滤
称取例1所得的纯度为87.98％的三氟醋酸西曲瑞克粗肽10.00g(含西曲瑞克7.59g)，加入1000mL溶剂(乙腈、醋酸和水按照100：300：600的体积比混合)，超声促溶后，以4000rpm离心2min，以0.45μm的有机系滤膜过滤。
(2)以醋酸铵/水为流动相进行第一次冲洗
将上述过滤后的溶液通过进样泵加载到色谱柱上，色谱柱的规格为250*200mm，内装Dasio的反相C18填料，粒径8μm。
以900：100体积比的乙腈/水溶液为流动相A，以10g：1000mL的醋酸铵/水溶液为流动相B，按照10％的A相和90％的B相，冲洗30min，流速为1000mL/min，检测波长为220nm。
(3)以醋酸/水为流动相进行第二次冲洗
在样品、色谱柱和流动相A不变的情况下，将上述的流动相B改为20：1000体积比的醋酸/水溶液为流动相，按照10％的A相和90％的B相，冲洗30min，流速为1000mL/min，检测波长为220nm。
(4)同步转盐和纯化
以体积比750：50：250的乙腈、醋酸和水的混合液为流动相A，以体积比50：50：1000的乙腈、醋酸和水的混合液为流动相B。梯度洗脱的方式为：55min内，梯度由30％A+70％B(V/V)线性变为60％A+40％B(V/V)，梯度洗脱的温度为25℃。
流速为1000mL/min，检测波长为220nm，柱压为4～5MPa。
收集纯度大于99.5％的样品，将纯度介于95～100％之间的样品回收，重复上述的梯度洗脱过程，再次收集纯度大于99.5％的样品，其余不合格的样品舍弃。高效液相色谱制备图见图4。
以减压旋蒸的方式，在30℃条件下除去大部分的乙腈，同时浓缩样品，然后进行冷冻干燥，获得高纯度的醋酸西曲瑞克7.28g(含无水无醋酸西曲瑞克6.30g)，纯度为99.88％，单杂小于0.1％，醋酸含量为5.86％，水分7.43％，三氟醋酸未检出，回收率为83.00％((6.30/7.59)×100％)。
实施例5三氟醋酸布舍瑞林粗肽的制备
称取417mg(0.51mmol)的三氟醋酸五肽片段(H-Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-OH·TFA)放入100mL的圆底烧瓶中，加入20mLDMF，25℃，磁力搅拌至五肽完全溶解，再加入0.170mL(1.02mmol)DIEA、164.8mg(1.22mmol)HOBt和0.210mL(1.33mmol)DIC，冰浴活化30min后，向圆底烧瓶中加入295.6mg(0.50mmol)的四肽片段(H-D-Ser(tBu)-Leu-Arg(HCl)-Pro-NHEt)的DMF溶液，搅拌反应4h。将反应液缓慢滴入200mL的冰乙醚中，出现白色沉淀。静置半小时后，4℃，4200rpm离心10min，倾去上清液，将白色沉淀用乙醚重复洗涤三次，得三氟醋酸布舍瑞林粗肽705.0mg(理论可得694.8mg)，HPLC的纯度为84.28％(见图7)，收率为85.52％(计算过程为(705.0×84.28％)/694.8)。图谱数据见表3。
表3
实施例6
(1)三氟醋酸布舍瑞林粗肽的溶解和过滤
称取例5所得的纯度为84.28％的三氟醋酸布舍瑞林粗肽100.0mg(含布舍瑞林75.2mg)，加入10mL溶剂(乙腈、醋酸和水按照100：300：600的体积比混合)，超声促溶后，以4000rpm离心2min，以0.45μm的有机系滤膜过滤。
(2)以醋酸铵/水为流动相进行第一次冲洗
将上述过滤后的溶液通过进样阀加载到色谱柱上，色谱柱的规格为250*30mm，内装Dasio的反相C18填料，粒径8μm。
以900：100体积比的乙腈/水溶液为流动相A，以10g：1000mL的醋酸铵/水溶液为流动相B，按照10％的A相和90％的B相，冲洗45min，流速为10mL/min，检测波长为220nm。
(3)以醋酸/水为流动相进行第二次冲洗
在样品、色谱柱和流动相A不变的情况下，将上述的流动相B改为20：1000体积比的醋酸/水溶液为流动相，按照10％的A相和90％的B相，冲洗45min，流速为10mL/min，检测波长为220nm。
(4)同步转盐和纯化
以体积比700：50：250的乙腈、醋酸和水的混合液为流动相A，以体积比50：70：1000的乙腈、醋酸和水的混合液为流动相B。梯度洗脱的方式为：60min内，梯度由30％A+70％B(V/V)线性变为60％A+40％B(V/V)，梯度洗脱的温度为25℃。
流速为10mL/min，检测波长为220nm，柱压为3～4MPa。
收集纯度大于99.5％的样品，将纯度介于95～100％之间的样品回收，重复上述的梯度洗脱过程，再次收集纯度大于99.5％的样品，其余不合格的样品舍弃。高效液相色谱制备图见图8。
以减压旋蒸的方式，在30℃条件下除去大部分的乙腈，同时浓缩样品，然后进行冷冻干燥，获得高纯度的醋酸布舍瑞林65.4mg(含无水无醋酸布舍瑞林55.6mg)，纯度为99.15％(见图9)，质谱分析图见图10，单杂小于0.5％，醋酸含量为6.27％，水分7.96％，三氟醋酸未检出，回收率为73.94％((55.6/75.2)×100％)。
Claims (10)
1.一种促性腺激素释放激素类似物醋酸盐的制备方法，其特征在于，它包括如下步骤：
(1)将促性腺激素释放激素类似物粗品溶于混合溶剂中，离心后过滤，取滤液加载到制备级反相高效液相色谱系统的色谱柱上，先以含醋酸铵的流动相进行第一次冲洗，再以含醋酸的流动相进行第二次冲洗，最后进行梯度洗脱，实现同步转盐及纯化，收集洗脱液；
(2)将步骤(1)中所得的洗脱液减压蒸馏浓缩后，经冷冻干燥后，即得高纯度的促性腺激素释放激素类似物醋酸盐。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的促性腺激素释放激素类似物，包括促性腺激素释放激素激动剂和促性腺激素释放激素拮抗剂。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的促性腺激素释放激素类似物粗品为三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品，其性状包括颗粒状、絮状、粉末状和液态，其HPLC纯度小于或等于95％。
4.根据权利要求1和3所述的制备方法，其特征在于，所述的三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品由如下方法制备得到：
通过液相法、固相法或固液相结合法合成促性腺激素释放激素类似物，用含三氟醋酸的裂解液裂解后经沉淀，得到三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品；或者将由液相法、固相法或固液相结合法合成的促性腺激素释放激素类似物经沉淀后即得三氟醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物粗品。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的促性腺激素释放激素类似物粗品为常规纯化方法得到的HPLC纯度小于或等于95％的醋酸盐形式或非醋酸盐形式的促性腺激素释放激素类似物。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的混合溶剂由乙腈、醋酸和水以50～100：250～350：500～700的体积比混合而成，或者由甲醇、醋酸和水以50～100：250～350：500～700的体积比混合而成。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的制备级反相高效液相色谱系统的色谱柱的填料为C4、C6、C8和C18键合硅胶或高分子聚合物。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，两次冲洗中，第一次冲洗时所用的流动相A为乙腈水溶液或甲醇水溶液，流动相B为醋酸铵水溶液；第二次冲洗时所用的流动相A为乙腈水溶液或甲醇水溶液，流动相B为醋酸的水溶液；
其中，
乙腈水溶液中，乙腈和水的体积比均为800～1200：1～100；
甲醇水溶液中，甲醇和水的体积比均为800～1200：1～100；
醋酸铵水溶液中，醋酸铵和水的质量/体积比g/mL为1～50：800～1200；
醋酸的水溶液中，醋酸和水的体积比为1～100：800～1200；
两次冲洗中，每次冲洗所用流动相的总体积均为1～20柱体积，流动相A的体积均占流动相总体积的5～20％。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，梯度洗脱中，流动相A和流动相B的pH值分别为1～5；
其中，
流动相A由乙腈、醋酸和水以500～1500：10～100：200～400的体积比混合而成，流动相B由乙腈、醋酸和水以10～100：10～100：800～1200的体积比混合而成，流动相A和B的pH值为1～5；梯度洗脱程序以体积百分比计为：由30％A+70％B线性变为60％A+40％B，梯度洗脱所需的时间为10～120min；
或者，
流动相A由甲醇、醋酸和水以700～1500：10～100：10～100的体积比混合而成，流动相B为甲醇、醋酸和水以10～100：10～100：800～1200的体积比混合而成，流动相A和B的pH值为1～5；梯度洗脱程序以体积百分比计为：由65％A+35％B线性变为75％A+25％B，梯度洗脱所需的时间为10～100min。扩大保护范围。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，梯度洗脱的温度为0～40℃，梯度洗脱时，色谱柱压力为1～20Mpa。
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| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105693844A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112423775A (zh) * | 2018-07-05 | 2021-02-26 | 安迪威有限公司 | 替维瑞克-tfa组合物 |
| CN114276414A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-05 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种纯化西曲瑞克的方法 |
| CN115260293A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-01 | 南京汉欣医药科技有限公司 | 一种醋酸加尼瑞克的纯化方法 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101531705A (zh) * | 2009-04-21 | 2009-09-16 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化卡贝缩宫素的方法 |
| CN102690329A (zh) * | 2011-03-25 | 2012-09-26 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法 |
| CN104086632A (zh) * | 2014-08-05 | 2014-10-08 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备西曲瑞克的方法 |
-
2016
- 2016-03-10 CN CN201610136247.5A patent/CN105693844A/zh active Pending
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101531705A (zh) * | 2009-04-21 | 2009-09-16 | 深圳市翰宇药业有限公司 | 一种纯化卡贝缩宫素的方法 |
| CN102690329A (zh) * | 2011-03-25 | 2012-09-26 | 杭州九源基因工程有限公司 | 一种戈舍瑞林多肽的纯化生产方法 |
| CN104086632A (zh) * | 2014-08-05 | 2014-10-08 | 杭州诺泰制药技术有限公司 | 一种制备西曲瑞克的方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| 赵晓华等: "《仪器分析》", 31 January 2015, 中国轻工业出版社 * |
| 韩香等: "高效液相色谱法在合成多肽分离与纯化中的应用", 《天津药学》 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112423775A (zh) * | 2018-07-05 | 2021-02-26 | 安迪威有限公司 | 替维瑞克-tfa组合物 |
| CN112423775B (zh) * | 2018-07-05 | 2024-03-15 | 安迪威有限公司 | 替维瑞克-tfa组合物 |
| CN114276414A (zh) * | 2021-12-30 | 2022-04-05 | 江苏诺泰澳赛诺生物制药股份有限公司 | 一种纯化西曲瑞克的方法 |
| CN115260293A (zh) * | 2022-08-22 | 2022-11-01 | 南京汉欣医药科技有限公司 | 一种醋酸加尼瑞克的纯化方法 |
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| PB01 | Publication | ||
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| CB02 | Change of applicant information |
Address after: 225316, Jiangsu, Taizhou, Taizhou drug City Road on the 1st (on the east side of the road on the north side of the park) new drug initiative base, phase two, D building, room 1409 Applicant after: Taizhou Rui Rui Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Address before: 225316, Jiangsu, Taizhou, Taizhou drug City Road on the 1st (on the east side of the road on the north side of the park) new drug initiative base, phase two, D building, room 1409 Applicant before: Meikang polypeptide drugs technology company limited is executed in Taizhou |
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| COR | Change of bibliographic data | ||
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| TA01 | Transfer of patent application right | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
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