CN102977173A - 一种高纯度维生素b12的纯化工艺 - Google Patents

一种高纯度维生素b12的纯化工艺 Download PDF

Info

Publication number
CN102977173A
CN102977173A CN2012105368665A CN201210536866A CN102977173A CN 102977173 A CN102977173 A CN 102977173A CN 2012105368665 A CN2012105368665 A CN 2012105368665A CN 201210536866 A CN201210536866 A CN 201210536866A CN 102977173 A CN102977173 A CN 102977173A
Authority
CN
China
Prior art keywords
purity
resin
column
sample
column volume
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN2012105368665A
Other languages
English (en)
Inventor
江邦和
厉留柱
宁方红
杨超男
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
SHANGHAI HUAZHEN SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
SHANGHAI HUAZHEN SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by SHANGHAI HUAZHEN SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical SHANGHAI HUAZHEN SCIENCE AND TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN2012105368665A priority Critical patent/CN102977173A/zh
Publication of CN102977173A publication Critical patent/CN102977173A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Landscapes

  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明公开了一种高纯度维生素B12的纯化工艺，属于生化产品的分离纯化技术领域。所解决的是现有工艺中存在的产品杂质难以除去、纯度不高技术问题，其特征在于将大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂作为层析填料，装入色谱柱成为固定相，把含有待分离的VB12粗品溶液流过该色谱柱，然后再把吸附在树脂上的VB12洗脱下来，实现VB12和杂质的分离。本发明釆用的树脂吸附量大，选择性好，一次操作可以得到99%以上纯VB12产品，工艺方法简单，生产效率高，具有容易工业化生产、环境污染小等优点。

Description

一种高纯度维生素B12的纯化工艺
技术领域
本发明属于生化产品的分离纯化领域，具体涉及一种高纯度维生素B12（以下简称VB12）的纯化工艺。
背景技术
维生素B12，简称VB12，又叫钴胺素，自然界中的VB12都是微生物合成的，高等动植物不能制造VB12。在保健食品和注射针剂等领域，随着食品和药品的安全要求越来越高，VB12用途越来越广泛，相应地制备生产高纯度的VB12渐成技术发展的必然要求和广大技术人员的努力目标。 
目前，目前商品化的VB12由工业发酵法获得， VB12的分离纯化工艺有:溶剂法，膜法，树脂吸附法，磺酸Zn2+型配位吸附法等，上述方法分别存在溶剂消耗大，生产繁琐，离子污染，产品纯度及收率不高等技术问题，上述方法所得到的产品经重结晶可得到90%左右的粗品，但在这种粗品中残留的杂质难以再用重结晶的方法除去，造成产品品质不高只能做低档的原料出售。
发明内容
为解决现有技术产品中杂质难以除去、产品纯度不高的技术问题，本发明的目的是：提供一种不仅工艺简单成本低，而且可达到高纯度和高产率的VB12的纯化工艺。
为达到上述目的，本发明的技术方案是：采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为层析填料，使用低浓度的丙酮水溶液做流动相，实现对VB12的纯化。
一种高纯度VB12的纯化工艺，其特征在于包括下述步骤：
1>色谱柱平衡：采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为层析填料，装入色谱柱作为固定相，装柱完成后，用两倍柱体积去离子水以1～4倍柱体积每小时的流速平衡色谱柱；
2>样品制备：称取纯度为85～93%的VB12粗品，加入到去离子水中搅拌溶解完全，使VB12粗品的浓度为5～12.5mg/ml，用滤纸过滤得到样品液备用；
3>上样：将步骤2>得到的样品液以1～4倍柱体积每小时的流速连续流过所述色谱柱，所用树脂的体积（L）和样品的重量（g）比为1:10～1:30；
4>洗脱：上样结束后，用去离子水冲洗1～4倍柱体积，然后以6.25%的丙酮水溶液为流动相，1～4倍柱体积每小时的流速洗脱，所述洗脱液用高效液相色谱仪检测纯度，将纯度合格的洗脱液合并得到收集液；
5>后处理：将步骤4>得到的收集液用纳滤膜浓缩，再经喷雾干燥，得到纯度大于99%的VB12。
所述的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂。
其中步骤3>中样品液优选以2倍柱体积每小时流速连续流过色谱柱。
其中步骤4>中流动相洗脱流速优选以2倍柱体积每小时。
采用本技术方案的有益效果是：将大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂作为层析填料，装入色谱柱成为固定相，釆用的树脂具有吸附量大，选择性好；把含有待分离的VB12粗品溶液流过该色谱柱，然后再把吸附在树脂上的VB12洗脱下来而实现VB12和杂质的分离。本发明具有工艺简单，生产效率高，容易工业化生产，环境污染小等优点，一次操作就可以得到99%以上纯的VB12。
具体实施方式
下面通过实施例更详细的说明本发明，但本发明的范围不限于这些实施例。
实施例中采用的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为的HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂：HZ PS20ss树脂，HZ PS816树脂、HZ PS818树脂或HZ PS830树脂，系市售，由上海华震科技有限公司生产。
实施例1
样品制备: 称取16g VB12粗品(纯度92.5%)，加入到1280ml去离子水中，搅拌使样品溶解完全，后用滤纸过滤备用, 得到的样品浓度为12.5mg/ml；
    VB12纯化：采用49X460mm玻璃柱，HZ PS20ss树脂为层析填料，装柱体积800ml，用两倍柱体积去离子水以每小时一倍柱体积流速平衡色谱柱；取配置好的上样液，以每小时一倍柱体积流速连续流过色谱柱上样，上样结束后继续用去离子水冲洗一倍柱体积，然后用6.25%的丙酮水溶液以每小时一倍柱体积的流速洗脱，根据安捷伦高效液相色谱仪1100检测收集纯度合格的洗脱液，共得到合并的收集液8000ml，HPLC检测纯度为99.3%， VB12回收率为75.1%。
实施例2
样品制备: 称取24g VB12粗品(纯度90.5%)，加入到4800ml去离子水中，搅拌使样品溶解完全，后用滤纸过滤备用, 样品的浓度为5mg/ml；；
    VB12纯化：采用49X460mm玻璃柱，HZ PS816树脂为层析填料，装柱体积800ml，用两倍柱体积去离子水以每小时四倍柱体积流速平衡色谱柱；取配置好的上样液，以每小时四倍柱体积流速连续流过色谱柱上样，上样结束后继续用去离子水冲洗两倍柱体积，然后用6.25%的丙酮水溶液以每小时二倍柱体积的流速洗脱，根据高效液相色谱仪1100检测收集纯度合格的洗脱液，共得到合并的收集液9600ml，HPLC检测纯度为99.1%， VB12回收率为67.1%。
实施例3
样品制备: 称取16gVB12粗品(纯度88.7%)，加入到1600ml去离子水中，搅拌使样品溶解完全，后用滤纸过滤备用, 样品的浓度为10mg/ml；
    VB12纯化：采用49X460mm玻璃柱，HZ PS818树脂为层析填料，装柱体积800ml，用两倍柱体积去离子水以每小时一倍柱体积流速平衡色谱柱；取配置好的上样液，以每小时一倍柱体积流速连续流过色谱柱上样，上样结束后继续用去离子水冲洗两倍柱体积，然后用6.25%的丙酮水溶液以每小时一倍柱体积的流速洗脱，根据高效液相色谱仪1100检测收集纯度合格的洗脱液，共得到合并的收集液8000ml，HPLC检测纯度为99.4%， VB12回收率为69.1%。
实施例4
样品制备: 称取12g VB12粗品(纯度91.6%)，加入到960ml去离子水中，搅拌使样品溶解完全，后用滤纸过滤备用, 样品的浓度为12.5mg/ml；
    VB12纯化：采用49X460mm玻璃柱，HZ PS830树脂为层析填料，装柱体积800ml，用两倍柱体积去离子水以每小时二倍柱体积流速平衡色谱柱；取配置好的上样液，以每小时二倍柱体积流速连续流过色谱柱上样，上样结束后继续用去离子水冲洗四倍柱体积，然后用6.25%的丙酮水溶液以每小时二倍柱体积的流速洗脱，根据高效液相色谱仪1100检测收集纯度合格的洗脱液，共得到合并的收集液8800ml，HPLC检测纯度为99.5%， VB12回收率为77.8%。

Claims (2)

1.一种高纯度VB12的纯化工艺，其特征在于包括下述步骤：
1>色谱柱平衡：采用大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为层析填料，装入色谱柱作为固定相，装柱完成后，用两倍柱体积去离子水以1～4倍柱体积每小时的流速平衡色谱柱；
2>样品制备：称取纯度为85～93%的VB12粗品，加入到去离子水中搅拌溶解完全，使VB12粗品的浓度为5～12.5mg/ml，用滤纸过滤得到样品液备用；
3>上样：将步骤2>得到的样品液以1～4倍柱体积每小时的流速连续流过所述色谱柱，所用树脂的体积（L）和样品的重量（g）比为1:10～1:30；
4>洗脱：上样结束后，用去离子水冲洗1～4倍柱体积，然后以6.25%的丙酮水溶液为流动相，1～4倍柱体积每小时的流速洗脱，所述洗脱液用高效液相色谱仪检测纯度，将纯度合格的洗脱液合并得到收集液；
5>后处理：将步骤4>得到的收集液用纳滤膜浓缩，再经喷雾干燥，得到纯度大于99%的VB12。
2.根据权利要求1所述的一种高纯度VB12的纯化工艺，其特征在于：所述的大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂为HZ PS系列大孔聚苯乙烯-二乙烯苯微球树脂。
CN2012105368665A 2012-12-13 2012-12-13 一种高纯度维生素b12的纯化工艺 Pending CN102977173A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012105368665A CN102977173A (zh) 2012-12-13 2012-12-13 一种高纯度维生素b12的纯化工艺

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2012105368665A CN102977173A (zh) 2012-12-13 2012-12-13 一种高纯度维生素b12的纯化工艺

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN102977173A true CN102977173A (zh) 2013-03-20

Family

ID=47851560

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2012105368665A Pending CN102977173A (zh) 2012-12-13 2012-12-13 一种高纯度维生素b12的纯化工艺

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN102977173A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104045580A (zh) * 2014-06-25 2014-09-17 上海华震科技有限公司 一种碘普罗胺脱色纯化工艺
CN108250216A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 天津领世生物科技开发有限公司 一步精制他克莫司粗品中他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的方法
CN111035963A (zh) * 2019-12-31 2020-04-21 赤峰制药股份有限公司 一种维生素b6的脱色方法及维生素b6的脱色装置
CN112442095A (zh) * 2020-12-01 2021-03-05 南京艾斯特医药科技有限公司 一种维生素b12的精制方法及所得产品的应用
CN112494649A (zh) * 2020-12-01 2021-03-16 南京艾斯特医药科技有限公司 一种用于辅助bnct的邻碳硼烷复配组合物

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4383110A (en) * 1980-11-29 1983-05-10 Nippon Oil Company, Ltd. Process for purifying and separating vitamin B12
EP0533115A1 (en) * 1991-09-17 1993-03-24 Nippon Oil Co. Ltd. Process for production of hydroxocobalamin
CN102131820A (zh) * 2008-06-03 2011-07-20 谢尔盖·尼科拉耶维奇·费多索夫 通过在含有羧基的不溶性材料上进行吸附来纯化天然钴胺素的方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4383110A (en) * 1980-11-29 1983-05-10 Nippon Oil Company, Ltd. Process for purifying and separating vitamin B12
EP0533115A1 (en) * 1991-09-17 1993-03-24 Nippon Oil Co. Ltd. Process for production of hydroxocobalamin
CN102131820A (zh) * 2008-06-03 2011-07-20 谢尔盖·尼科拉耶维奇·费多索夫 通过在含有羧基的不溶性材料上进行吸附来纯化天然钴胺素的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
弓爱君，等: "《高等色谱》", 31 May 2009, 化学工业出版社 *
张雪荣，等: "《药物分离与纯化技术 第二版》", 28 February 2011, 化学工业出版社 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104045580A (zh) * 2014-06-25 2014-09-17 上海华震科技有限公司 一种碘普罗胺脱色纯化工艺
CN108250216A (zh) * 2016-12-29 2018-07-06 天津领世生物科技开发有限公司 一步精制他克莫司粗品中他克莫司、双氢他克莫司、子囊霉素的方法
CN111035963A (zh) * 2019-12-31 2020-04-21 赤峰制药股份有限公司 一种维生素b6的脱色方法及维生素b6的脱色装置
CN111035963B (zh) * 2019-12-31 2022-05-31 赤峰制药股份有限公司 一种维生素b6的脱色方法及维生素b6的脱色装置
CN112442095A (zh) * 2020-12-01 2021-03-05 南京艾斯特医药科技有限公司 一种维生素b12的精制方法及所得产品的应用
CN112494649A (zh) * 2020-12-01 2021-03-16 南京艾斯特医药科技有限公司 一种用于辅助bnct的邻碳硼烷复配组合物
CN112442095B (zh) * 2020-12-01 2022-07-22 上海科黛生物科技有限公司 一种维生素b12的精制方法及所得产品的应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111960926B (zh) 大麻二酚晶体的制备方法
CN101619028B (zh) 一种制备辣椒碱单体的方法
CN102977173A (zh) 一种高纯度维生素b12的纯化工艺
CN1321961C (zh) 一种从虎杖中提取纯化白藜芦醇的新方法
CN101721979B (zh) 一种缬氨酸分离专用大孔吸附树脂的制备方法
CN101987815B (zh) 一种制备高纯度辅酶q10的纯化工艺
CN104513286A (zh) 一种分离纯化非达米星的方法
CN101781346A (zh) 一种从生物催化转化液中分离尿苷酸的方法
CN104418761A (zh) 苦可胺的分离方法
CN111057142A (zh) 一种特立帕肽的纯化方法
CN101230080B (zh) 模拟移动床色谱拆分20(S)和20(R)-人参皂苷Rg3对映体
CN114988979B (zh) 一种宏量分离制备高纯度番茄红素的方法
CN103012228B (zh) 一种银离子螯合色谱柱用于分离纯化虾青素的方法
CN102070647B (zh) 一种从银杏内酯混合物中分离银杏内酯b的方法
CN102276570B (zh) 一种提纯表没食子儿茶素没食子酸酯（egcg）的方法
CN104558123A (zh) 一种采用动态轴向压缩柱系统制备纽莫康定b0的方法
CN101353294A (zh) 高含量白藜芦醇分离纯化的方法
CN104045580A (zh) 一种碘普罗胺脱色纯化工艺
CN102659872B (zh) 一种高纯度灯盏花乙素的制备方法
CN102516340A (zh) 一种采用d150大孔树脂分离纯化羟钴胺素的方法
CN102432489A (zh) 一种制备辣椒碱和二氢辣椒碱单体的方法
CN102633846A (zh) 一种林可霉素纯化方法
CN104910258A (zh) 一种精细纯化卡泊芬净的方法
CN101781338A (zh) 一种分离提取l-核糖的方法
CN101367728A (zh) 从紫锥菊提取物纯化菊苣酸和单咖啡酰酒石酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C02 Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001)
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20130320