CN107998212A - 一种地黄环烯醚萜苷类提取物的制备方法 - Google Patents

一种地黄环烯醚萜苷类提取物的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了一种从中药地黄中分离制备环烯醚萜苷类提取物的方法。为提高地黄环烯醚苷类提取物的提取率，本发明首先采用质量百分含量20%～50%甲醇或乙醇为溶媒，低温组织破碎闪提法提取；然后以极性和非极性大孔吸附树脂联合应用，分离除杂，制备高效液相法精制；低温真空干燥，制得干燥提取物。制得的干燥提取物以梓醇、地黄苷A、D、益母草苷4种成分总含量计环烯醚苷类成分含量达60%～80%（w/w）。优于现有提取工艺，有利于地黄的开发利用。

Description

一种地黄环烯醚萜苷类提取物的制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种从中药地黄中分离制备环烯醚萜苷类提取物的方法。
背景技术
地黄为玄参科植物地黄Rehmannia glutinosa Libosch.的新鲜或干燥块根及其炮制加工品。是我国著名的“四大怀药”之一，是药用价值很高的滋阴补血类中药，活性作用十分广泛，在免疫、血液、内分泌、心脑血管、神经系统及抗菌、抗炎等方面均有一定的作用。
地黄的化学成分以苷类为主，其中又以环烯醚萜苷类为主。药理研究表明环烯醚萜苷类成分为其主要活性成分。从鲜地黄及干地黄中，已分离鉴定出20多种苷类：梓醇，二氢梓醇，乙酰梓醇，益母草苷，桃叶珊瑚苷，单蜜力特苷，蜜力特苷，地黄苷A、B、C、D，Cerebrosid 及Rehmaionoside A、B、C，Rehmapicroside，PurpureasideC，海胆苷，Jionoside A、B， Jioglutoside A，B，去羟栀子苷，筋骨草苷，8-表番木鳖酸，乙酰梓醇苷等。另外,还含有苯乙醇苷，糖类，氨基酸，微量元素等。
有关地黄提取物的文献报道涉及的提取物多为不同溶剂部位或指标成分单一含量低的提取物，未见有以梓醇、地黄苷A、D、益母草苷4种成分总含量计环烯醚苷类成分含量达 30％～80％(w/w)的报道。如鲁艳柳等报道涉及地黄标准提取物为地黄药材最粗粉加水回流提取，制得梓醇浓度为2.23mg/ml的地黄药材总提取溶液，继以XDA-1大孔吸附树脂制备地黄标准提取物，得到梓醇含量约为10.26％的地黄标准提取物(地黄标准提取物制备及质量控制方法研究[J].上海中医药大学学报，2008,22(6)：68-71.)；李宁宁等报道涉及地黄提取物为地黄的95％乙醇提取物，分别制成乙酸乙酯部位、正丁醇部位，再用水提取制成水部位(地黄提取物对阿霉素诱导心衰大鼠的影响[J].中华中医药学刊，2016， 34(9):2222-2224.)；刘静等研究地黄提取物对高尿酸血症小鼠的影响所涉及的提取物实际为地黄梓醇提取物(梓醇含量≥94.8％，常州千杏生物科技有限公司)(生地黄提取物的抗氧化活性研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版)，2011，39(3):137-140,145.)；袁保刚等研究抗氧化活性所用地黄提取物为生地黄70％的乙醇提取液，减压浓缩得到乙醇浸膏，依次用等体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到不同溶剂部位提取物(生地黄提取物的抗氧化活性研究[J].西北农林科技大学学报(自然科学版)，2011， 39(3):137-140,145.)；罗河生申请的发明专利(地黄总苷提取物的医药用途及制备方法: 中国,200710064095.3)所述地黄总苷提取物梓醇2.0-40％，地黄苷D2.0-10.0％，地黄总苷含量以梓醇计为50-80％。宋后燕等申请的发明专利(地黄提取物及其制备方法和应用:中国,01105857.9)所述地黄提取物的制备方法如下：方法(1)取地黄剪碎后，用水煎煮后取汤剂提取活性成分；方法(2)取地黄剪碎后，直接用稀乙醇(甲醇)溶液提取活性成分；方法(3)按上述方法提取地黄原液后，加入乙醇(或异丙醇/甲醇)至80％以上,取其沉淀部分精制。玄振玉发明专利(一种鲜地黄总苷提取物及其制备方法和应用:中国,201110278677.8)所述鲜地黄总苷提取物梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和大于 50％。
目前文献报道地黄提取物的研究多集中于药理活性的研究，现代药理研究表明地黄中含有的环烯醚萜及其苷类对免疫、血液、心血管、内分泌、中枢神经系统等许多方面均具有肯定的药效作用。涉及的地黄提取物为水提取、醇提取、水提醇精制或水提物经XDA-1大孔吸附树脂制备等方法制得，提取物多没有成分含量标准或者只以梓醇单一成分含量为标准，其中冠名地黄环烯醚萜苷提取物者也只是以梓醇单一成分为对照品测定含量，并且提取物含量较低，不利于地黄的开发利用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多种有效成分提取率高的地黄环烯醚萜苷类提取物的制备方法。
本发明所述的地黄环烯醚萜苷类提取物系从中药鲜地黄中提取分离得到。
所述制备工艺如下：
(1)提取：将鲜地黄药材净选后切成块状，置于粉碎机中加入质量百分含量50％乙醇或 30％甲醇溶液，室温组织破碎闪提2～3次，搅拌均匀，置于密封容器中冷浸提取2～4小时。溶剂加入量与药材的体积重量比为10：1。
⑵过滤：离心滤取提取液，进一步抽滤过滤，备用。
⑶浓缩：将步骤(2)所得取提取液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至无醇得浓缩液，备用。
⑷除杂：步骤(3)所得浓缩液经活性炭柱层析水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水或丙酮-水梯度洗脱解吸附，富集目标部位；提取浓缩液上样液浓度1.0～2.0g/mL，吸附流速2～6BV/h，树脂柱径高比1:5～10，质量百分含量0～20％乙醇2～4倍于树脂体积洗脱进行除杂，除杂流速为2～6BV/h，用质量百分含量30％～50％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为2～6BV/h，进一步精制目标部位，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至适量，备用。
⑸纯化、精制：步骤(4)所得浓缩液采用非极性大孔吸附树脂(如D101、HPD400、HP20)及极性大孔吸附树脂(如DA-201、AB-8、SP700、SP825L)串联柱层析法，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水洗脱解吸附；提取浓缩液上样液浓度0.5～1.0g/mL，吸附流速2～ 6BV/h，树脂柱径高比1:5～10，质量百分含量0～20％乙醇2～4倍于树脂体积洗脱进行除杂，除杂流速为2～6BV/h，用质量百分含量30％～50％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为2～6BV/h，进一步精制目标部位，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至适量，备用；或继续采用制备高效液相色谱层析法，甲醇-水(1％-10％)梯度洗脱，收集目标部位洗脱液，备用。
⑹浓缩：取步骤(5)洗脱液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至适量，得洗脱浓缩液，备用。
⑺干燥：取步骤(6)所得洗脱浓缩液室温真空干燥或喷雾干燥，得干燥提取物。
本发明所述的地黄环烯醚萜苷类提取物为浅棕色至棕褐色粉末，味甘、微苦。可溶于水、甲醇、乙醇，难溶于氯仿、丙酮。
本发明所述的地黄环烯醚苷类提取物，以HPLC法测定其中梓醇、地黄苷A、D、益母草苷的含量计总环烯醚萜苷类成分含量60％～80％(w/w)。
由于地黄中梓醇及益母草为环烯醚萜单糖苷，化学稳定性差，长时间高温加热易破坏，故本发明采用低温组织破碎闪提法提取，避免加热，破碎提取效率高。地黄中化学成分极性差别较大，有水溶性多糖、有脂溶性色素，其中环烯醚萜苷类目标成分极性较大，为提高地黄环烯醚苷类提取物的活性成分含量，本发明采用活性炭柱层析、极性和非极性大孔吸附树脂柱层析联合应用，并经制备高效液相色谱法精制，可以去除多种杂质保留目标部位，提高环烯醚萜苷类成分纯度，制得的干燥提取物以梓醇、地黄苷A、D、益母草苷4种成分总含量计环烯醚苷类成分含量达60％～80％(w/w)。
因此，本发明优点如下：本发明首先采用质量百分含量20％～50％甲醇或乙醇为溶媒，低温组织破碎闪提法提取；然后以活性炭柱层析、极性和非极性大孔吸附树脂柱层析联合应用，分离除杂，制备高效液相法精制；低温真空干燥，制得干燥提取物。以梓醇、地黄苷A、 D、益母草苷为对照品建立多指标质量控制标准，制得的干燥提取物以4种成分总含量计环烯醚萜苷类成分含量达60％～80％(w/w)。优于现有提取工艺，有利于地黄的开发利用。
附图说明
图1为地黄环烯醚萜苷类提取物HPLC图谱，图中，1-梓醇，2-地黄苷D，3-地黄苷A，4-益母草苷；
图2为梓醇、地黄苷D、地黄苷A及益母草苷分子结构式。
具体实施方式
为对本申请进行更好地说明，举实施例如下：
实施例1
⑴提取：将10kg鲜地黄药材净选后切成块状，置于粉碎机中加入质量百分含量30％甲醇溶液，室温组织破碎闪提2～3次，搅拌均匀，置于密封容器冷浸2～4小时。溶剂加入量与药材的体积重量为10：1。
⑵过滤：离心滤取提取液，进一步抽滤过滤，备用。
⑶浓缩：将步骤(2)所得提取液室温减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至无醇得浓缩液，备用。
⑷除杂：步骤(3)所得浓缩液经活性炭柱层析脱色纯化，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水或丙酮-水梯度洗脱解吸附，富集目标部位；提取浓缩液上样液浓度2.0g/mL，吸附流速6BV/h，树脂柱径高比1:5，水2～4倍于树脂体积洗脱除杂，除杂流速为6BV/h，用质量百分含量30％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为6BV/h；收集洗脱液，减压浓缩至无醇浓缩液，备用。
⑸纯化、精制：步骤(4)所得浓缩液经D101非极性大孔吸附树脂柱层析法除杂纯化，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水梯度洗脱解吸附；提取浓缩液上样液浓度1.0g/mL，吸附流速6BV/h，树脂柱径高比1:6，质量百分含量10％乙醇2～4倍于树脂体积洗脱进行除杂，除杂流速为6BV/h，用质量百分含量50％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为6BV/h，进一步纯化目标部位，收集洗脱液，备用。
⑹浓缩：取步骤(5)洗脱液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至适量，得洗脱浓缩液，备用。
⑺干燥：取步骤(6)所得洗脱浓缩液低温真空干燥或喷雾干燥，得干燥提取物约300g(梓醇51.24％、地黄苷D 3.86％、地黄苷A 2.69％、益母草苷2.45％，总含量60.24％)。
实施例2
⑴提取：将10kg鲜地黄药材净选后切成块状，置于粉碎机中加入质量百分含量50％乙醇溶液，室温组织破碎闪提2～3次，搅拌均匀，置于密封容器中冷浸2～4小时提取。溶剂加入量与药材的体积重量比为10：1。
⑵过滤：离心滤取提取液，进一步抽滤过滤，备用。
⑶浓缩：将步骤(2)所得提取液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至无醇得浓缩液，备用。
⑷除杂：步骤(3)所得浓缩液经活性炭柱层析脱色纯化，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水或丙酮-水梯度洗脱解吸附，富集目标部位；提取浓缩液上样液浓度2.0g/mL，吸附流速6BV/h，树脂柱径高比1:10，质量百分含量10％乙醇2～4倍于树脂体积洗脱除杂，除杂流速为6BV/h，用质量百分含量30％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为6BV/h；收集洗脱液，减压浓缩至无醇浓缩液，备用。
⑸纯化：步骤(4)所得浓缩液经HPD400非极性大孔吸附树脂及DA-201极性大孔吸附树脂串联柱层析法，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水洗脱解吸附；提取浓缩液上样液浓度1.0g/mL，吸附流速2BV/h，树脂柱径高比1:10，质量百分含量10％乙醇2～4倍于树脂体积洗脱进行除杂，除杂流速为26BV/h，用质量百分含量30％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为2BV/h，进一步精制目标部位，收集洗脱液，备用。
⑹浓缩：取步骤(5)所得洗脱液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至适量，得洗脱浓缩液，备用。
⑺干燥：取步骤(6)所得洗脱浓缩液室温真空干燥或喷雾干燥，得干燥提取物300g(梓醇52.17％、地黄苷D 3.51％、地黄苷A 2.56％、益母草苷3.06％，总含量61.30％)。
实施例3
⑴提取：将10kg鲜地黄药材净选后切成块状，置于粉碎机中加入质量百分含量50％乙醇溶液，室温组织破碎闪提2～3次，搅拌均匀，置于密封容器中冷浸2～4小时提取。溶剂加入量与药材的体积重量比为10：1。
⑵过滤：离心滤取提取液，进一步抽滤过滤，备用。
⑶浓缩：将步骤(2)所得提取液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至无醇得浓缩液，备用。
⑷除杂：步骤(3)所得浓缩液经活性炭柱层析脱色纯化，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水或丙酮-水梯度洗脱解吸附，富集目标部位；提取浓缩液上样液浓度2.0g/mL，吸附流速6BV/h，树脂柱径高比1:5，质量百分含量20％乙醇2～4倍于树脂体积洗脱除杂，除杂流速为4BV/h，用质量百分含量40％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为4BV/h；收集洗脱液，减压浓缩至无醇得浓缩液，备用。
⑸纯化、精制：步骤(4)所得浓缩液经HP20非极性大孔吸附树脂及SP825L极性大孔吸附树脂串联柱层析法，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水洗脱解吸附；提取浓缩液上样液浓度0.5g/mL，吸附流速4BV/h，树脂柱径高比1:6，质量百分含量10％乙醇2～4倍于树脂体积洗脱进行除杂，除杂流速为4BV/h，用质量百分含量40％乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为4BV/h，进一步精制目标部位，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至适量，采用制备高效液相色谱层析，甲醇-水(1％-10％)梯度洗脱，收集目标部位洗脱液，备用。
⑹浓缩：取步骤(5)所得洗脱液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至适量，得洗脱浓缩液，备用。
⑺干燥：取步骤(6)所得洗脱浓缩液室温真空干燥或喷雾干燥，得干燥提取物200g(梓醇70.03％、地黄苷D 4.26％、地黄苷A 3.49％、益母草苷2.81％，总含量80.59％)。
实施例4含量测定方法
1.含量测定高效液相色谱(HPLC)法
色谱条件：色谱柱：ZORBAX SB-C18柱(5μm，4.6×250mm)；流动相:乙腈-0.1％磷酸梯度洗脱；流速:1.00mL·min-1；检测波长：203nm；柱温：30℃。
2.对照品溶液制备
分别取梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL分别含0.161mg、0.203mg、0.190mg、0.158mg的混合对照品溶液。
3.供试品溶液的制备
取本发明地黄环烯醚萜苷类提取物0.2g，精密称定，置25ml的容量瓶中，加流动相溶解定容,超声处理(功率350W，频率50kHz)20分钟，放冷，加流动相补足至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
4.线性关系考察
精密吸取上述混合对照品溶液2、4、6、8、10μl，注入液相色谱仪，分别按上述色谱条件测定梓醇、地黄苷D、A、益母草苷的吸收峰峰面积值，以峰面积为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制工作曲线，得线性回归方程：
Y梓醇＝7.51×105X+2.78×104(r＝0.9996)，线性范围0.322～1.61μg；
Y地黄苷D＝5.43×105X+2.50×103(r＝0.9998)，线性范围0.406～2.03μg；
Y地黄苷A＝6.72×105X+5.47×102(r＝0.9997)，线性范围0.380～1.90μg；
Y益母草苷＝4.61×105X+8.16×103(r＝0.9998)，线性范围0.316～1.58μg。
地黄中梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷这四种苷类成分分别在其相应的范围内呈良好的线性关系，
5.精密度试验：
精密吸取上述混合对照品溶液10μl，重复进样5次，按上述色谱条件分别测定各对照品峰面积积分值，梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷峰面积RSD依次为0.38％、0.62％、0.56％、0.39％。
6.稳定性试验：
分别精密吸取同一供试品溶液，于0，2，4，6，8，10h注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件分别测定梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷峰面积积分值，RSD依次为1.77％、0.84％、1.29％、0.79％，表明供试品溶液在10h内稳定性良好。
7.重复性试验:
精密称取本发明同一鲜地黄提取物6份，按供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，分别测定提取物中的梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷含量，计算平均值，得梓醇含量为51.24％(RSD＝0.73％)；地黄苷D含量为3.86％(RSD＝0.79％)；地黄苷A含量为2.69％(RSD＝0.81％)；益母草苷含量为2.45％(RSD＝1.06％)。表明本方法的重现性良好。
8.加样回收率试验:
取适量已知含量样品6份，精密称定，置10mL的容量瓶中，精密加入质量浓度(m:V)为4.980mg/mL、0.375mg/mL、0.270mg/mL、0.249mg/mL的梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷对照品溶液各1mL，加流动相定容,超声处理(功率350W，频率50kHz)20分钟，放冷，加流动相补足至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤，即得加样回收率试验样品溶液。按上述色谱条件测定梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷的含量，计算回收率，得梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷平均加样回收率分别为99.00％、97.73％、99.01％、99.53％， RSD分别为1.11％、1.30％、1.58％、1.41％。结果见表1。
表1梓醇、地黄苷D、地黄苷A、益母草苷加样回收率试验
9.结果
取3批次本发明地黄环烯醚萜苷类提取物，分别按上述制备方法供试品溶液，依照上述色谱条件进行测定，计算提取物中梓醇、地黄苷D、、地黄苷A、益母草苷的含量和总含量。结果见表2。
表2 3批地黄环烯醚萜苷类提取物含量测定结果
根据结果，可见地黄环烯醚萜苷提取物含梓醇50-70％、地黄苷D3.0-4.0％、地黄苷A 大于2.5-3.5％、益母草苷2.0-3.0％，总含量60-80％。

Claims (2)

1.一种地黄环烯醚萜苷类提取物的制备方法，其特征在于，通过如下步骤实现：
(1) 提取：将鲜地黄药材净选后切成块状，置于粉碎机中加入质量百分含量50%乙醇或30%甲醇溶液，室温组织破碎闪提2～3次，搅拌均匀，置于密封容器中冷浸提取2～4小时；溶剂加入量与药材的体积重量比为10：1；
(2) 过滤：离心滤取提取液，进一步抽滤过滤，备用；
(3) 浓缩：将步骤（2）所得提取液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩至无醇得浓缩液，备用；
(4) 除杂：步骤（3）所得浓缩液经活性炭柱层析水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水或丙酮-水梯度洗脱解吸附，富集目标部位；提取浓缩液上样液浓度1.0～2.0g/mL，吸附流速2～6BV/h，树脂柱径高比1:5～10，质量百分含量0～20%乙醇2～4倍于树脂体积洗脱进行除杂，除杂流速为2～6BV/h，用质量百分含量30%～50%乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为2～6BV/h，收集洗脱液，备用；
(5) 纯化、精制：步骤（4）所得浓缩液采用非极性大孔吸附树脂及极性大孔吸附树脂串联柱层析法，水洗脱除杂，甲醇-水或乙醇-水洗脱解吸附；提取浓缩液上样液浓度0.5～1.0g/mL，吸附流速2～6BV/h，树脂柱径高比1:5～10，质量百分含量0～20%乙醇2～4倍于树脂体积洗脱进行除杂，除杂流速为2～6BV/h，用质量百分含量30%～50%乙醇3～6倍于树脂体积进行洗脱解吸，解吸流速为2～6BV/h，收集洗脱液，回收乙醇并减压浓缩至适量，备用；或采用制备高效液相色谱层析法，甲醇-水（1%-10%）梯度洗脱，收集目标部位洗脱液，备用；
(6)浓缩：取步骤（5）洗脱液减压薄膜蒸发回收溶剂，继而旋转蒸发仪浓缩，得洗脱浓缩液，备用；
(7)干燥：取步骤（6）所得洗脱浓缩液室温真空干燥或喷雾干燥，得干燥提取物。
2.如权利要求1所述的地黄环烯醚萜苷类提取物的制备方法，其特征在于，非极性大孔吸附树脂选D101、HPD400或HP20；极性大孔吸附树脂选DA-201、AB-8、SP700或SP825L。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN112362792A (zh) * 2020-12-15 2021-02-12 北京中医药大学 玄参环烯醚萜对照提取物及其制备方法和用途
CN113480581A (zh) * 2021-07-21 2021-10-08 湖南朗林生物资源股份有限公司 一种地黄中环烯醚萜苷的提取方法
CN114053351A (zh) * 2020-08-05 2022-02-18 苏州玉森新药开发有限公司 一种鲜地黄有效部位及其制备方法和用途
CN114451509A (zh) * 2021-06-04 2022-05-10 泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司 一种人参提取物的制备方法及其应用
CN115708845A (zh) * 2022-12-15 2023-02-24 河南省纳普生物技术有限公司 地黄提取物的提取方法及其在制备抗炎药物方面的应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103524579A (zh) * 2013-10-14 2014-01-22 江苏大学 一种利用三联柱层析技术从地黄中快速分离梓醇的方法

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103524579A (zh) * 2013-10-14 2014-01-22 江苏大学 一种利用三联柱层析技术从地黄中快速分离梓醇的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
吕杨: "地黄总环烯醚萜部位的制备及质量控制研究", 《万方》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114053351A (zh) * 2020-08-05 2022-02-18 苏州玉森新药开发有限公司 一种鲜地黄有效部位及其制备方法和用途
CN112362792A (zh) * 2020-12-15 2021-02-12 北京中医药大学 玄参环烯醚萜对照提取物及其制备方法和用途
CN114451509A (zh) * 2021-06-04 2022-05-10 泰州医药城国科化物生物医药科技有限公司 一种人参提取物的制备方法及其应用
CN113480581A (zh) * 2021-07-21 2021-10-08 湖南朗林生物资源股份有限公司 一种地黄中环烯醚萜苷的提取方法
CN113480581B (zh) * 2021-07-21 2022-05-24 湖南朗林生物资源股份有限公司 一种地黄中环烯醚萜苷的提取方法
CN115708845A (zh) * 2022-12-15 2023-02-24 河南省纳普生物技术有限公司 地黄提取物的提取方法及其在制备抗炎药物方面的应用
CN115708845B (zh) * 2022-12-15 2023-09-08 河南省纳普生物技术有限公司 地黄提取物的提取方法及其在制备抗炎药物方面的应用

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