CN114053351A - 一种鲜地黄有效部位及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种鲜地黄有效部位及其制备方法和用途,具体是从鲜地黄中提取有效部位及其在制备治疗甲亢药物方面的用途,属于中药领域。
Description
技术领域
本发明涉及一种鲜地黄有效部位及其制备方法和用途,具体是从鲜地黄中提取有效部位,及制备方法;该提取物在制备治疗甲亢药物方面的用途,属于中药领域。
背景技术
甲状腺功能亢进症(hyperthyroidism,简称甲亢)是由多种病因引起的甲状腺激素分泌过量,进入血循环中,作用于全身的组织和器官,致机体出现高代谢和神经精神兴奋性增高为主要表现的临床综合征;在中医中,则认为本病属“瘿病”范围。
甲亢是一种任何年龄都可发生的常见病,但以20~50岁多见,男女皆可患病,西方国家报告本病的患病率为1.1%~1.6%,我国学者报告是1.2%;而本病女性较多见,男女发病比例为1:4~1:6。在西方国家中,女性发病率为0.5%~2%,我国女性人群的患病率约为2%,并且逐年增高。
甲亢的病因最主要是由于甲状腺本身功能增高,分泌甲状腺素增多,最常见的是毒性弥漫性甲状腺肿 (Graves Disease ,GD),约占全部甲亢病人的80%~85%。西医认为,环境因素、遗传因素和内在因子(免疫)因素是GD的易感因素,三者通过甲状腺自身抗原作用于T细胞、B细胞等免疫细胞,导致自身免疫疾病的发生。
目前市场上治疗甲亢的药物主要以抗甲状腺药物为主,但均存在一定的不足和副作用,如白细胞减少、粒细胞缺乏症、肝功能损害、肾脏病变等。中医认为,甲亢多是由阴虚导致,肝肾阴亏火旺,灼津液为痰核,结于颈下,出现烦躁易怒、五心烦热、盗汗、多食消瘦、心悸、突眼、甲状腺肿大等症状。该病治疗多从补阴入手,主要以中医内科专方或古方验方及名医常用方剂适当加减制成治疗甲亢的制剂为主,如六味地黄丸、知柏地黄丸、鳖甲煎丸等滋阴降火药物。但是其组方药物较多,质控不够稳定,作用机制研究不够深入,与国外甲亢疾病的防治和药物开发的研究还存在较大的差距。地黄是临床常用的补阴药,在治疗甲亢的临床方剂中亦有广泛应用。像甲亢方、六味地黄丸、知柏地黄丸、甲宁胶囊等都含有地黄。因此,如何从地黄中获得治疗甲亢的提取物,已达到精准治疗的目的,是一个亟待解决的问题。
发明内容
本发明的目的一是提供一种鲜地黄有效部位及制备方法。本发明的目的可以通过以下方式得以实现。
一种鲜地黄有效部位,含有梓醇,地黄苷D,益母草苷,其特征是梓醇含量60%~70%,地黄苷D含量4%~5%,益母草苷含量5%~5.5%。
一种鲜地黄有效部位的制备方法,包括两个步骤:制备鲜地黄粗提物干粉、制备有效部位干粉。
进一步的,在本发明中,从鲜地黄有效部位的制备方法包括如下步骤:
一、制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,乙醇提取,静置,滤过,干燥,即得粗提物干粉;
二、制备有效部位干粉:粗提物干粉加水溶解,上大孔树脂柱,用水及不同浓度乙醇先后洗脱,即得。
更进一步的,在本发明中,从鲜地黄有效部位的制备方法包括如下步骤:
一、制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加1-3倍量(V/W)90-95%乙醇使醇浓度为60-80%,静置6小时以上,滤过,50-70℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15℃(50℃),喷雾干燥,即得;
二、制备有效部位干粉:取鲜地黄粗提物干粉,加入2-5倍量水 (W/V)溶解,上XAD-16树脂,上样后静置吸附3h以上,先用2-3倍树脂体积的水以1-3BV/h流速进行除杂,弃去2-3倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于2-5倍树脂体积的10-30%乙醇洗脱,洗脱流速1-3BV/h,收集洗脱液,50-70℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得。
上述,制备鲜地黄粗提物干粉时,喷雾干燥进风口温度150~190℃,出风口温度80~95℃;制备有效部位干粉时,喷雾干燥进风口温度150~170℃,出风口温度70~90℃。
上述,XAD-16树脂质量为鲜地黄粗干粉质量的15-22倍,柱床径高比为1∶5-7、上样流速1-3BV/h。
较优的,在本发明中,从鲜地黄有效部位的制备方法包括如下步骤:
一、制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加1-2倍量(V/W)90-95%乙醇使醇浓度为70-80%,静置6小时以上,滤过,60-70℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15℃(50℃),喷雾干燥,即得;
二、制备有效部位干粉:取鲜地黄粗提物干粉,加入2-3倍量水 (W/V)溶解,上XAD-16树脂,上样后静置吸附3h以上,先用2-3倍树脂体积的水以1-2BV/h流速进行除杂,弃去2-3倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于2-3倍树脂体积的15-25%乙醇洗脱,洗脱流速1-2BV/h,收集洗脱液,60-70℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得。
上述,制备鲜地黄粗提物干粉时,喷雾干燥进风口温度160~180℃,出风口温度85~90℃;制备有效部位干粉时,喷雾干燥进风口温度160~170℃,出风口温度80~90℃。
上述,XAD-16树脂质量为鲜地黄粗干粉质量的18-20倍,柱床径高比为1∶6-7、上样流速1-2BV/h。
本发明的目的二是提供一种鲜地黄有效部位的用途。本发明的目的通过有效部位的药效学实验得以实现。故本发明的第二个技术方案是,一种鲜地黄有效部位在制备治疗甲亢药物中的用途。
本发明创造性所在:从实验例的表1-4可以得出,鲜地黄中本发明有效部位具有治疗甲亢的作用。梓醇是本发明有效部位中占比最高的成分,申请人在前期研究中也发现了梓醇有治疗甲亢的作用,因此在实验例中,将本发明有效部位与梓醇的药效进行了对比。在指标改善方面,本发明能降低血清T4,而梓醇不能;症状改善方面,本发明优于梓醇。另外,从地黄中提取梓醇较困难、得率低,梓醇储存运输需要低温环境,而本发明较梓醇获得容易、储存运输不受温度限制,更加符合我国所倡导的环保理念。
发明附图
图1为鲜地黄总苷有效部位液相图谱
实验例 本发明有效部位治疗甲亢的药效学研究
1. 实验材料
1.1 动物
清洁级昆明种小鼠,17~19克,上海斯莱克实验动物有限责任公司提供。
1.2 药物
受试药:本发明有效部位;梓醇,纯度:94.41%;鲜地黄水煎液。造模药: 左旋甲状腺钠(L-Thyroxine Sodium salt),白色粉末,美国sigma公司。阳性药:甲巯咪唑片,白色片剂,上海黄海制药有限责任公司。
1.3 试剂
碘[125I]三碘甲状腺原氨酸(T3)放射免疫分析药盒;碘[125I]甲状腺素(T4)放射免疫分析药盒;碘[125I]游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)放射免疫分析药盒;碘[125I]游离甲状腺素(FT4)放射免疫分析药盒,均购自北京北方生物技术研究所。
1.4 仪器
FA1004B电子天平,上海精密科学仪器有限公司;JA5003A电子天平,上海精天电子仪器有限公司;ECG-6511心电图机,上海光电医用仪器有限公司;CY-3型数字式测氧仪,上海华光仪器仪表厂;SN-697放射免疫γ计数器,中国科学院上海原子核研究所日环仪器厂;KK25E73TI西门子冰箱,西门子中国有限公司;Scanspeed mini 离心机,丹麦Labogene公司;DL-50RC低温离心机,上海中科生物医学高科技开发有限公司。
2. 实验方法
2.1 动物模型制备
从96只昆明小鼠中随机抽取12只作为空白组,每天皮下注射生理盐水,剩余84只小鼠均进行模型制备:采用皮下注射左旋甲状腺素钠350μg/kg,给药容量均为10mL/kg,连续给药7天。
2.2 动物分组与给药
将造模成功的小鼠随机分为7组,每组12只,即分为甲亢模型组、本发明有效部位低剂量组、本发明有效部位高剂量组、梓醇低剂量组、梓醇高剂量组、鲜地黄水煎液组、甲巯咪唑组(MMI)。每天灌胃给药,本发明有效部位低剂量组60mg/kg、本发明有效部位高剂量组120mg/kg、梓醇低剂量组30mg/kg、梓醇高剂量组60mg/kg、鲜地黄水煎液组4.5g/kg、甲巯咪唑组7.5 mg/kg,空白组和甲亢模型组给予等体积的蒸馏水。连续三周,每天一次。除了空白组,其它各组小鼠每日每只均继续皮下注射甲状腺素钠350μg/kg。
3.试验结果
3.1对甲亢模型小鼠耗氧量的影响
与空白组小鼠相比,模型组小鼠耗氧量有显著性差异(P<0.001)。与模型组相比,本发明有效部位高剂量和甲巯咪唑组小鼠耗氧量明显减少(P<0.01);本发明有效部位低剂量组亦具有统计学差异(P<0.05)。
表1 地黄中不同组分对甲亢模型小鼠耗氧量的影响(x± S)
注:与空白组相比,△△△P<0.001;与模型组相比,▲▲P<0.01,▲P<0.05
3.2对甲亢模型小鼠心率的影响
相比空白组小鼠,模型组小鼠心率明显有显著性差异(P<0.001)。与模型组相比,本发明有效部位剂量组和甲巯咪唑组小鼠的心率明显减慢(P<0.001)。
表2地黄中不同组分对甲亢模型小鼠心率的影响(x± S)
注:和空白组相比,△△△P<0.001;与模型组相比,▲▲▲P<0.001,▲▲P<0.01
3.3对甲亢模型小鼠血清T3、T4的影响
模型组小鼠的血清T3水平增高明显,与空白组小鼠相比有显著性差异(P<0.001)。与模型组相比,本发明有效部位高剂量组和梓醇高剂量组小鼠血清T3水平下降明显(P<0.01);本发明有效部位低剂量组、梓醇低剂量组、鲜地黄水煎液组和甲巯咪唑组小鼠T3水平下降亦具有统计学差异(P<0.05)。模型组小鼠的血清T4含量增高显著,与空白组小鼠相比有明显差异(P<0.001)。与模型组相比,本发明有效部位剂量组和甲巯咪唑组小鼠的T4水平明显降低(P<0.05)。与模型组相比,梓醇高低剂量组均无统计学差异。
表3地黄中不同组分对甲亢模型小鼠T3、T4的影响( x± S)
注:与空白组相比,△△△P<0.001;与模型组相比,▲▲P<0.01,▲P<0.05
3.4对甲亢模型小鼠心重指数的影响
相比空白组小鼠,模型组小鼠的HWI显著上升,两者比较有明显差异(P<0.001)。与模型组小鼠相比,本发明有效部位低高剂量组、梓醇高剂量组和甲巯咪唑组小鼠的全心重量指数明显下降,有极其显著性差异(P<0.001)。
与空白组小鼠相比,模型组小鼠的LVWI明显上升,两者比较有极其显著性差异(P<0.001)。与模型组小鼠相比,本发明有效部位剂量组、梓醇剂量组和鲜地黄水煎液组小鼠的左心室重量指数明显降低(P<0.01);小鼠的左心室重量指数明显降低(P<0.01)。
表4地黄中不同组分对甲亢模型小鼠心重指数的影响(x± S)
注:与空白组相比,△△△P<0.001;与模型组相比,▲▲▲P<0.001,▲▲P<0.01,▲P<0.05
具体实施方式
实施例1
制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加1.5倍量(V/W)加95%乙醇使醇浓度为70%,静置6小时以上,滤过,65℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15(50℃),喷雾干燥(进风温度口170~180℃,出风口温度85℃),即得;
制备有效部位干粉:取鲜地黄粗提物干粉,加入2-3倍量水 (W/V)溶解,上XAD-16树脂(树脂质量为鲜地黄粗干粉质量的20倍,柱床径高比为1∶7、上样流速1BV/h),静置3小时以上,先用2倍树脂体积的水以1BV/h流速进行除杂,弃去2.5倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于3倍树脂体积的20%乙醇洗脱,洗脱流速1.5BV/h,收集洗脱液,65℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥(喷雾干燥进风温度口160℃,出风口温度90℃),即得。
实施例2
制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加1倍量(V/W)90%乙醇使醇浓度为60%,放置6小时以上,滤过,50℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15(50)℃,喷雾干燥(进风温度口150~160℃,出风口温度70~80℃),即得;
制备有效部位干粉:取地黄喷干粉,加入2倍量水(W/V)溶解,上XAD-16树脂(树脂用量为鲜地黄干粉的15倍 (W/W),柱床径高比为1∶5),上样流速1BV/h,上样后静置吸附3h以上,先用2倍树脂体积的水以1BV/h流速进行除杂,弃去2倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于5倍树脂体积的10%乙醇洗脱,洗脱流速1BV/h,收集洗脱液,50℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥(进风温度口150-160℃,出风口温度80℃),即得。
实施例3
制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加3倍量(V/W) 95%乙醇使醇浓度为80%,放置6小时以上,滤过,70℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15(50)℃,喷雾干燥(进风温度口180~190℃,出风口温度80~90℃),即得;
制备有效部位干粉:取地黄喷干粉,加入5倍量水(W/V)溶解,上XAD-16树脂(树脂用量为鲜地黄干粉的22倍 (W/W),柱床径高比为1∶7),上样流速3BV/h,上样后静置吸附3h以上,先用3倍树脂体积的水以3BV/h流速进行除杂,弃去3倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于2倍树脂体积的30%乙醇洗脱,洗脱流速3BV/h,收集洗脱液, 70℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥(进风温度口160-170℃,出风口温度85-95℃),即得。
实施例4
制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加2倍量(V/W)95%乙醇使醇浓度为70%,放置6小时以上,滤过,65℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15(50)℃,喷雾干燥(进风温度口160~180℃,出风口温度80℃),即得;
制备有效部位干粉:取地黄喷干粉,加入3倍量水(W/V)溶解,上XAD-16树脂(树脂用量为鲜地黄干粉的20倍(W/W),柱床径高比为1∶6),上样流速2BV/h,上样后静置吸附3h以上,先用3倍树脂体积的水以2BV/h流速流速进行除杂,弃去2.5倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于4倍树脂体积的15%乙醇洗脱,洗脱流速2BV/h,收集洗脱液,65℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥(进风温度口160℃),出风口温度85℃),即得。
实施例5
制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加1.5倍量(V/W) 95%乙醇使醇浓度为70%,放置6小时以上,滤过,70℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15(50)℃,喷雾干燥(进风温度口180~190℃,出风口温度80~90℃),即得;
制备有效部位干粉:取地黄喷干粉,加入4倍量水(W/V)溶解,上XAD-16树脂(树脂用量为鲜地黄干粉的18倍(W/W),柱床径高比为1∶5),上样流速2.5BV/h,上样后静置吸附3h以上,先用2.5倍树脂体积的水以2BV/h流速进行除杂,弃去2.5倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于2倍树脂体积的25%乙醇洗脱,洗脱流速1.5BV/h,收集洗脱液,60℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥(进风温度口165℃,出风口温度85℃),即得。
实施例6
鲜地黄有效部位干粉颗粒剂的制备:取有效部位干粉200g,加蔗糖和糊精(1:1)适量,粉碎成细粉,混匀,加入50%乙醇适量制成颗粒,60℃以下干燥,制成1000g,即得。
实施例7
鲜地黄有效部位干粉片剂的制备:取有效部位干粉200g,加蔗糖和糊精(1:1)适量,粉碎成细粉,混匀,加入50%乙醇适量制成颗粒,60℃以下干燥,加入50g的硬脂酸镁总混,压制成2500片,每片重0.4g,包薄膜衣,即得。
实施例8
地黄总环烯醚萜苷胶囊:取有效部位干粉200g,加蔗糖和糊精(1:1)适量,粉碎成细粉,混匀,加入50%乙醇适量制成颗粒,60℃以下干燥,加入50g的硬脂酸镁总混,装入胶囊,制成2500g,每粒装量0.4g,即得。
Claims (10)
1.一种鲜地黄有效部位, 含有梓醇,地黄苷D,益母草苷,其特征是梓醇含量60%~70%,地黄苷D含量4%~5%,益母草苷含量5%~5.5%。
2.一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是包括如下两个步骤:制备鲜地黄粗提物干粉、制备有效部位干粉。
3.根据权利要求2所述的一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是包括如下两个步骤:
(1)制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,乙醇提取,静置,滤过,干燥,即得粗提物干粉;(2)制备有效部位干粉:粗提物干粉加水溶解,上大孔树脂柱,用水及不同浓度乙醇先后洗脱,即得。
4.根据权利要求3所述的一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是包括如下两个步骤:
(1)制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加1-3倍量90-95%乙醇使醇浓度为60-80%,静置6小时以上,滤过,50-70℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15℃(50℃),喷雾干燥,即得;
(2)制备有效部位干粉:取鲜地黄粗提物干粉,加入2-5倍量水溶解,上XAD-16树脂,上样后静置吸附3h以上,先用2-3倍树脂体积的水以1-3BV/h流速进行除杂,弃去2-3倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于2-5倍树脂体积的10-30%乙醇洗脱,洗脱流速1-3BV/h,收集洗脱液,50-70℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得。
5.根据权利要求4所述的一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是包括如下两个步骤:
(1)制备鲜地黄粗提物干粉:取鲜地黄,榨汁,加1-2倍量90-95%乙醇使醇浓度为70-80%,静置6小时以上,滤过,60-70℃减压浓缩至相对密度约为1.10~1.15℃(50℃),喷雾干燥,即得;
(2)取鲜地黄粗提物干粉,加入2-3倍量水溶解,上XAD-16树脂,上样后静置吸附3h以上,先用2-3倍树脂体积的水以1-2BV/h流速进行除杂,弃去2-3倍树脂柱体积的水洗液,继用相当于2-3倍树脂体积的15-25%乙醇洗脱,洗脱流速1-2BV/h,收集洗脱液,60-70℃减压浓缩,浓缩液喷雾干燥,即得。
6.根据权利要求4或5所述的一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是制备鲜地黄粗提物干粉时,喷雾干燥进风口温度150~190℃,出风口温度70~90℃;制备有效部位干粉时,喷雾干燥进风口温度150~170℃,出风口温度80~95℃。
7.根据权利要求6所述的一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是制备鲜地黄粗提物干粉时,喷雾干燥进风口温度160~180℃,出风口温度80~90℃;制备有效部位干粉时,喷雾干燥进风口温度160~170℃,出风口温度85~90℃。
8.根据权利要求4或5所述的一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是其特征是XAD-16树脂质量为鲜地黄粗干粉质量的15-22倍,柱床径高比为1∶5-7,上样流速1-3BV/h。
9.根据权利要求6所述的一种鲜地黄有效部位的制备方法,其特征是XAD-16树脂质量为鲜地黄粗干粉质量的18-20倍,柱床径高比为1∶6-7、上样流速1-2BV/h。
10.一种鲜地黄有效部位,其特征是在制备治疗甲亢药物中的用途。
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