发明内容
本发明目的是提供一种地黄总苷类提取物,本发明的另一个目的是提供该提取物的制备方法和用途。
本发明的目的是通过如下技术方案实现的:
一种鲜地黄总苷提取物,其特征是梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷含量之和大于50%。
本发明的鲜地黄总苷提取物,呈棕黄色粉末;气特异,味微苦。
上述鲜地黄总苷提取物的制备方法,其特征是:鲜地黄榨汁液加入乙醇,上清液干燥成粉,加水溶解,滤液上大孔吸附树脂,水、乙醇洗脱,收集乙醇洗脱液,浓缩,干燥,粉碎,即得。
优选地,上述鲜地黄总苷提取物的制备方法,其特征是:鲜地黄榨汁液加入4-6倍量95%乙醇。
优选地,上述鲜地黄总苷提取物的制备方法,其特征是:滤液上大孔吸附树脂,控制流速为0.5~1.5BV/h;先用1.0-2.0BV的水进行除杂,然后用1.0-3.0BV60-80%乙醇洗脱,收集60-80%醇洗脱液。
最优地,上述鲜地黄总苷提取物的制备方法,其特征是:取鲜地黄,压榨榨汁,榨汁液加入4倍量95%乙醇,放置过夜,上清液减压浓缩至相对密度1.1,喷雾干燥,得鲜地黄干粉;鲜地黄干粉加水溶解并稀释至相对密度1.05,滤过,滤液上大孔吸附树脂,控制流速为0.5~1.5BV/h;先用2.0BV的水进行除杂,然后用2.0BV80%乙醇洗脱,收集80%醇洗脱液,减压浓缩,60~70℃真空干燥,粉碎,即得。
上述鲜地黄总苷提取物,在制备降血糖药物中的用途。
本发明的优点:
(1)选择鲜地黄为原料更为科学。一般中药使用前,先行炮制,地黄经过炮制加工成干地黄或熟地黄才予入药。但是现代药学研究表明,在地黄炮制过程中,环烯醚萜苷及苯乙醇苷类成分将从鲜地黄中不同程度的降解而遭受损失;其中主要发挥降糖作用的梓醇、益母草苷、毛蕊花糖苷等正是环烯醚萜苷及苯乙醇苷类成分。因此,以鲜地黄为提取原料,得率更高,具有创造性。
(2)制备工艺简单,更适合工业化生产。本发明的鲜地黄总苷提取物制备方法,省去了常规的提取、浓缩工艺步骤,节约了能源,降低了成本,更容易实现工业化,具有实用性。
(3)鲜地黄总苷提取物质量可控,使其更加安全可靠。本工艺制备得到的鲜地黄总苷,其主要成分为以梓醇、益母草苷为代表的环烯醚萜苷和以毛蕊花糖苷为代表的苯乙醇苷类成分,两大类成分的含量之和超过了50%,采用高效液相法,可以有效控制质量。使得该提取物的质量可控性能够满足制药需求。
(4)鲜地黄总苷提取物对糖尿病治疗作用确定,服用量降低。本发明的制备方法去除了降糖作用较弱的寡糖及多糖类成分,充分富集了鲜地黄中降糖有效成分,使药物服用量更小,作用更强。
说明书附图
图1鲜地黄总苷中梓醇和益母草苷高效液相图
图2鲜地黄总苷中毛蕊花糖苷高效液相图
图3梓醇对照品高效液相图
图4益母草苷对照品高效液相图
图5毛蕊花糖苷对照品高效液相图
实验例:
1.含量测定
(1)梓醇和益母草苷用高效液相色谱法测定。
色谱条件与系统适应性试验:用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈为流动相A,0.1%磷酸溶液为流动相B,按下表进行梯度洗脱;检测波长为210nm,柱温30℃。理论塔板数按梓醇峰计算应不低于10000。
对照品溶液的制备:取梓醇、益母草苷对照品适量,精密称定,各加5%乙腈制成每1ml含梓醇、益母草苷0.4mg、0.4mg的溶液,摇匀,即得。
供试品溶液的制备:取本品50mg,精密称定,置50ml量瓶中,加入50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,即试验:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以乙腈-水-0.1%冰醋酸(16∶84)为流动相;检测波长为334nm;流速为1ml/min。理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000。
对照品溶液的制备:精密称取毛蕊花糖苷对照品适量,加流动相制成每1ml中含毛蕊花糖苷10μg的溶液。
供试品溶液的制备:取本品约50mg,精密称定,置50ml量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,即得。
测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl,注入液相色谱仪,测定,即得。结果见图2。
本品按干燥品计算,含梓醇、益母草苷及毛蕊花糖苷之和(C29H36015)不少于50.0%。
2.鲜地黄总苷提取物对链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型影响
(1)试验目的
观察鲜地黄总苷提取物对链脲佐菌素致糖尿病大鼠模型血糖的影响。
(2)试验材料
①动物
SD大鼠,雄性,200-230g。许可证号:SCXK(京)2006-0009;清II鼠料,许可证号:SCXK(京)2005-0007。
②受试药物
鲜地黄总苷提取物。
③试剂
链脲菌素:(Streptozotocin,STZ),美国Signa公司产品,批号:038k1523
血糖试剂盒:北京北化康泰临床试剂有限公司产品,批号:20110607。
(3)方法
①剂量设置
采用人用量为10g生药/60kg/d算等效剂量,大鼠试验中分别采用5.6倍(小剂量)、11.2倍(大剂量)量。。
②药物配制
受试药物:大鼠试验中分别采用36.4mg/kg体重、72.8mg/kg体重两个剂量。
③试剂
柠锰酸:称取2.1g加灭菌双蒸水至100ml为A液;柠锰酸钠:称取2.94g加灭菌双蒸水至100ml为B液,将A液、B液按1∶1配制;链脲佐菌素:称取3g链脲佐菌素加柠锰酸盐缓冲液至300ml将其配制成1%浓度,PH调至4.5(在冰浴内配制,避光,30分钟内注射完毕),上述试剂配制所用器皿为无菌。
④试验方法
取SD大鼠60只,适应性饲养1d,随机分为4个组,每组15只。试验组动物禁食12h后,按照0.6ml/100g体重,即60mg/kg体重,腹腔一次性注射浓度为10mg/ml的链脲佐菌素,对照组注射等体积柠檬酸盐缓冲液。对照组与试验组注射7天后,动物均眼眶取血,用葡萄糖氧化酶法测禁食12h血糖,以血糖浓度在9.0~15.0mmol·L-1为合格糖尿病模型动物。
将成模的大鼠随机分为4个组,即正常对照组、模型组、鲜地黄总苷大剂量组、鲜地黄总苷小剂量组,每组15只。试验组每天灌胃给药一次,正常对照组给同体积蒸馏水,连续给药15天,给药期间对照组与试验组大鼠均喂普通饲料,正常饮水,饲料和饮水均不受限制。
⑤检测指标
动物成模后开始分组给药,每5天称体重并眼眶取血,测禁食12h后血糖,于末次给药后禁食12h,股动脉取血,测血清中血糖。
⑥数据处理
试验所得数据均用X±SD表示,组间比较t检验。
(4)试验结果
鲜地黄提取物对链脲佐菌素致大鼠糖尿病模型血糖的影响
注:与模型组比较,**P<0.01;*P<0.05
上表显示:正常对照组在整个试验期间血糖值平稳在正常范围;模型组试验期间血糖平稳在所需范围;鲜地黄总苷大剂量组给药第10天、第15天血糖,与模型对照组比较有显著性差异(**P<0.01);鲜地黄总苷小剂量组第10天血糖,与模型对照组比较有显著性差异
(*P<0.05)。
(5)结论
采用链尿佐菌素造成大鼠糖尿病模型后,给予鲜地黄总苷提取物治疗连续15天结果显示:鲜地黄总苷大剂量组给药第10天、第15天均可明显降低血糖含量;鲜地黄总苷小剂量组给药第10天可明显降低血糖含量;说明鲜地黄总苷提取物具有明显抗糖尿病作用。