CN103204839A

CN103204839A - 甘草有效成分的同步制备方法

Info

Publication number: CN103204839A
Application number: CN2013101070628A
Authority: CN
Inventors: 朱贺年; 李卫民
Original assignee: Elion Resources Group Co Ltd
Current assignee: Elion Resources Group Co Ltd
Priority date: 2013-03-29
Filing date: 2013-03-29
Publication date: 2013-07-17
Anticipated expiration: 2033-03-29
Also published as: CN103204839B

Abstract

本发明公开了一种甘草有效成分的同步制备方法，包括步骤：1）取甘草，以乙醇水溶液浸泡后浸煮提取；2）提取液过滤，通过极性不同的两节串联大孔树脂柱，收集流出液，串联大孔树脂柱为非极性大孔树脂柱串联中极性或极性大孔树脂柱，或极性大孔树脂柱串联非极性大孔树脂柱；3）用水对树脂柱冲洗除杂，非极性大孔树脂柱以70%~90%的乙醇水溶液洗脱；中极性或极性大孔树脂柱依次以30%~40%的乙醇水溶液和50%~70%的乙醇水溶液进行两次洗脱；4）分别将流出液及各洗脱液，干燥，得甘草总多糖、甘草异戊烯基黄酮、除异戊烯基外的甘草总黄酮和甘草总皂苷。本发明使甘草中不同极性的物质得到分离，提高分离效率，避免溶剂浪费。

Description

甘草有效成分的同步制备方法

技术领域

本发明属于天然产物的提取分离纯化领域，具体涉及一种甘草有效成分的同步制备方法，具体涉及从甘草中同步提取分离异戊烯基黄酮、除异戊烯基黄酮外的总黄酮、总皂苷及总多糖的方法。

背景技术

传统中医理论认为甘草味甘、性平，有补脾益气、清热解毒、祛痰止咳、缓急止痛、调和诸药的功效，主治脾胃虚弱、倦怠乏力、心悸气短、咳嗽多痰等。药理实验证实甘草具有保肝、抗炎、抗菌、抗病毒、免疫调节、降糖和抗血小板凝集等作用。其主要活性成分是黄酮类、皂苷类和多糖类化合物。甘草黄酮具有抑菌、抗病毒、抗肿瘤、抗氧化等作用，其中连有异戊烯基的黄酮类因其抗肿瘤作用明显而日益受到重视。甘草皂苷具有解毒、止咳平喘、抗炎、抗过敏、抗肝损伤及降低胆固醇等的活性。现代药理研究表明桑白皮的多糖类同样具有降血糖作用。目前，现有提取分离技术是单一或间歇性的，往往单纯提取甘草皂苷，甘草渣被废弃，或再从提取后的残渣中提取甘草黄酮，再提取甘草多糖。中国专利“一种提取分离甘草酸、甘草黄酮和甘草多糖的方法”（CN1803789）公开了一种从甘草中提取甘草酸、黄酮及多糖的方法，但工艺过程中运用大量有机溶剂，不够经济、环保。中国专利“从甘草中系统分离、提取甘草黄酮、甘草酸、甘草多糖生产方法”（CN1359905A）公开了一种系统提取甘草酸、甘草黄酮和甘草多糖的方法，但提取分离步骤太多不适宜工业化生产。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供一种同步提取、分离、制备甘草异戊烯基黄酮、除异戊烯基黄酮外的总黄酮、总皂苷和总多糖的方法。

本发明所述甘草原料来源于豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草 Glycyrrhiza inflata Bat. 或光果甘草 Glycyrrhiza glabra L. 的干燥根及根茎。作为提取甘草异戊烯基黄酮、总黄酮、总皂苷和总多糖的原料，可以是市售甘草饮片，也可以是此植物的茎、叶、花穗、果实、地下茎及根等任意部位，其中优选的药材部位为干燥根及根茎。本发明的方法：原料粉碎后，通过用乙醇提取、稀醇上样、树脂串联分离、浓乙醇洗脱，简化工艺过程，提高产品总黄酮、总皂苷及总多糖含量。本发明是降低成本的一种大孔树脂纯化甘草异戊烯基黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷及总多糖的方法。

本发明提供的甘草有效成分的同步制备方法，包括如下步骤：

1）乙醇提取：取甘草，以乙醇水溶液浸泡并在80~100℃下浸煮提取，得提取液；

2）树脂分离：步骤1）得到的提取液过滤后，滤液依次通过极性不同的两节串联大孔树脂柱，收集流出液，其中，所述两节串联大孔树脂柱为非极性大孔树脂柱串联中极性或极性大孔树脂柱，或者为极性大孔树脂柱串联非极性大孔树脂柱；

3）洗脱：先用水对两节串联大孔树脂柱进行冲洗除杂，然后非极性大孔树脂柱以浓度70%~90%的乙醇水溶液进行洗脱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；中极性或极性大孔树脂柱则依次以浓度30%~40%的乙醇水溶液和浓度50%~70%的乙醇水溶液进行两次洗脱，依次得到除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液；

4）回收：分别将步骤2）的流出液、甘草异戊烯基黄酮洗脱液、除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液浓缩、干燥，即得到甘草总多糖、甘草异戊烯基黄酮、除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮和甘草总皂苷。

优选地，步骤1）中甘草粉碎至10~120目后，再以乙醇水溶液浸泡并在80~100℃下浸煮提取，得提取液。

优选地，步骤1）乙醇提取：一次提取：取甘草，加入浓度60%~95%的乙醇水溶液浸泡，然后加热至80~100℃保温浸煮提取，过滤，收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣以浓度20%~60% 乙醇水溶液在80~100℃下保温浸煮提取1~5次，收集提取液合并，得二次提取液；合并一次提取液和二次提取液。

进一步优选地，步骤1）乙醇提取：一次提取：取甘草，加入甘草重量1~10倍的浓度60%~95%的乙醇水溶液浸泡2~3 h，然后加热至80~100℃保温1~2 h，过滤，收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣以甘草重量1~10倍的浓度20%~60% 乙醇水溶液在80~100℃下保温1~2h, 提取1~5次，收集提取液合并，得二次提取液；合并一次提取液和二次提取液。

更优选地，步骤1）乙醇提取：一次提取：取甘草，加入甘草重量6~10倍的浓度60%~95%的乙醇水溶液浸泡2~3 h，然后加热至80~100℃保温1~2 h，过滤，收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣以甘草重量6~10倍的浓度20%~60% 乙醇水溶液在80~100℃下保温1~2h, 提取1~5次，收集提取液合并，得二次提取液；合并一次提取液和二次提取液。

优选地，步骤2）中滤液通过极性不同的两个串联大孔树脂柱的流速为：1/10 BV/min ~ 1/7 BV/min，滤液的上样量以其原料甘草计：甘草与一个大孔树脂柱中大孔树脂的重量比0.5:1~ 1:1（两个大孔树脂柱所装的大孔树脂重量相同）。更优选地，流速为1/10 BV/min，滤液的上样量以其原料甘草计：甘草与一个大孔树脂柱中大孔树脂的重量比1:1。

步骤2）中所述非极性大孔树脂柱可为市售的非极性大孔树脂，优选为PIPO-00大孔树脂柱、PIPO-01大孔树脂柱、HPD-100大孔树脂柱、HPD-300大孔树脂柱或D101大孔树脂柱；所述极性大孔树脂柱可为市售的极性大孔树脂，优选为HPD-500大孔树脂柱或HPD-600大孔树脂柱；所述中极性大孔树脂柱可为市售的中极性大孔树脂，优选为HPD-400大孔树脂柱、HPD-750大孔树脂柱或AB-8大孔树脂柱。

进一步优选地，步骤2）树脂分离：步骤1）得到的提取液过滤后，滤液依次通过串联的PIPO-01大孔树脂柱和AB-8大孔树脂柱，收集流出液。

优选地，步骤3）洗脱：先用10 ~15BV水对两节串联树脂柱进行冲洗除杂，然后非极性大孔树脂柱以6~10 BV浓度70%~90%的乙醇水溶液进行洗脱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；极性或中极性大孔树脂柱则依次以6~10 BV浓度30% ~ 40%的乙醇水溶液和6~10 BV浓度50%~70%的乙醇水溶液进行两次洗脱，依次得到除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。

进一步优选地，步骤3）洗脱：先用10 ~15BV水对两节串联树脂柱进行冲洗除杂，然后非极性大孔树脂柱以6~10 BV浓度80%的乙醇水溶液进行洗脱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；极性或中极性大孔树脂柱则依次以6~10 BV浓度40%的乙醇水溶液和6~10 BV浓度70%的乙醇水溶液进行两次洗脱，分别得到除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。

优选地，步骤4）的浓缩方法为：步骤2）的流出液、甘草异戊烯基黄酮洗脱液、除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液分别减压在真空度0.06 MPa ~ 0.10MPa、温度 70℃~ 80℃条件下浓缩至初体积的20%以下。

优选地，步骤4）的干燥方法：将浓缩得到的各浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20 Pa，冷冻温度 -45℃~ -60℃的条件下冷冻干燥。

优选地，为实现串联工艺且使得分离过程快捷，步骤2）所述两节串联大孔树脂柱均为大孔树脂高压柱。

本发明的甘草有效成分的同步制备方法将不同极性的高压大孔树脂柱串联后，药液依次经过不同极性的高压大孔树脂柱，可以使甘草中不同极性的物质得到分离，明显提高分离效率，避免溶剂浪费，从而避免了单一提取所带来的资源浪费，提高了甘草的综合利用率，降低了甘草深加工的成本。同时制备方法更为简便，实用，易于工业化生产。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好的理解本发明并能予以实施，但所举实施例不作为对本发明的限定。

本发明的甘草有效成分的同步制备方法，优选的具体步骤为：

1）一次提取：将原料甘草碎至10~120目，加入6~10倍甘草重量的浓度60%~95%的乙醇水溶液先浸泡2~3 h，微沸状态（80~100℃）下保温1~2 h，过滤，收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣用 6~10 倍甘草重量的浓度20%~60% 乙醇水溶液在微沸状态（80~100℃）下保温1~2 h，提取1~5次，提取液收集合并，得二次提取液；合并一次提取液和二次提取液；

2）步骤1）的提取液趁热过300~400目滤袋，得到澄清滤液。滤液依次通过两节串联的不同极性的大孔树脂高压柱（具体可为：非极性大孔树脂柱串联中极性或极性大孔树脂柱，或者为极性大孔树脂柱串联非极性大孔树脂柱），收集流出液；

3）先用10 ~15BV水冲洗两节串联树脂后，用6~10 BV浓度 70~90%的乙醇水溶液洗脱非极性大孔树脂柱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；用6~10 BV依次以浓度30% ~ 40%的乙醇水溶液和浓度50%~70%的乙醇水溶液进行两次洗脱，依次得到除异戊烯基外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液；

4）再分别将各洗脱液及流出液减压回收，得浓缩液后继续冷冻干燥；

5）最后得到甘草异戊烯基黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷及总多糖（流出液干燥即得总多糖），测定纯度（即百分比含量）。

实施例中采用的甘草原料为甘草干燥根及根茎。

注：本发明中乙醇水溶液的浓度均指体积百分比浓度。

本发明中甘草异戊烯基黄酮、除异戊烯基外的总黄酮、总皂苷及总多糖含量的测定方法如下：

1、异戊烯基黄酮

称取本品粉末1g，置105 ℃ 干燥3 h,研细，取0.5g，精密称定，置50mL容量瓶中，加氢氧化钠试液至刻度，摇匀，使溶解，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液20 mL，仔细滴加稀盐酸，调节PH值至3，静置片刻，用已恒重的垂熔漏斗滤过，用水洗涤沉淀，至洗液PH为5，105℃干燥至恒重，计算，即得。

2、除异戊烯基黄酮外的总黄酮

精密称取甘草苷对照品适量，置10 mL容量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,制得浓度为0. 1mg/mL的对照品溶液。精密吸取0.1mg/ mL的甘草苷对照品溶液0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 mL分别置10 mL容量瓶中,加入10%的KOH溶液0.5 mL 放置5min后,用70%的乙醇稀释至刻度,放置90min,精密量取对照品溶液0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0 mL的容量瓶中,用70%的乙醇稀释至刻度,作为空白溶液,在400 nm的波长处测定吸光度,以溶液浓度(X)对吸光度值(Y)进行线性回归。

精密称取甘草除异戊烯基外的总黄酮提取物样品各 3 份，每份10mg,置于10 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。取上述样品1.0 mL置10 mL容量瓶中,加入10%的KOH溶液0. 5mL放置5min后,用70%的乙醇稀释至刻度,放置90min,同法量取供试品溶液1.0mL置10 mL的容量瓶中,用70%的乙醇稀释至刻度,作为空白溶液,在400 nm的波长处测定吸收度, 外标两点法计算含量。

3、总皂苷

精密称取甘草酸对照品适量，置于10mL的容量瓶中,用甲醇溶解,定容至刻度, 制得浓度为1mg/mL的对照品溶液。精密吸取1mg/mL的甘草苷对照品溶液0. 02、0. 05、0. 1、0. 15、0.2 mL分别置10 mL容量瓶中，挥干溶剂, 加 5% 香草醛-冰醋酸溶液0.25mL, 摇匀, 加0.8mL 高氯酸, 摇匀, 在55℃水浴反应20min, 取出自来水冷至室温, 定容至刻度, 用不含储备液的溶剂作为空白, 在589 nm的波长处测定吸光度,以溶液浓度(X)对吸光度值(Y)进行线性回归。

精密称取甘草总皂苷提取物样品各 3 份，每份10mg置于 10 mL容量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。取上述样品1. 0 mL置10 mL容量瓶中挥干溶剂, 加 5% 香草醛-冰醋酸溶液0.25mL, 摇匀, 加0.8mL 高氯酸, 摇匀, 在55℃水浴反应20min, 取出自来水冷至室温, 定容至刻度, 用不含储备液的溶剂作为空白, 在589 nm的波长处测定吸光度, 外标两点法计算含量。

4、总多糖

精密称取120℃减压干燥至恒重的葡萄糖对照品适量，置10mL量瓶中，加适量蒸馏水溶解后，稀释至刻度，摇匀，制得1 mg mL^-1葡萄糖对照品溶液。精密取1 mg mL^-1葡萄糖对照品溶液0.0，0.2，0.4，0.6，0.80，l.0mL，分别置10 mL具塞试管中，用纯水补足至l mL，精密加入l mL 5%苯酚试液和5mL浓硫酸后立即置于沸水浴加热15min，取出用冷水冷却至室温，室温放置10min左右，于490nm处测定吸光度。以吸光度值(Y)为纵坐标，浓度(X)为横坐标作线性回归。

精密称取甘草总多糖提取物样品各 3 份，每份10mg,置于 10 mL容量瓶中，加蒸馏水超声溶解并稀释至刻度，摇匀。取上述样品1. 0 mL置10mL容量瓶中，精密加入l mL 5%苯酚试液和5mL浓硫酸后立即置于沸水浴加热15min，取出用冷水冷却至室温，室温放置10min左右，于490nm处测定吸光度。外标两点法计算含量。

实施例 1

1）一次提取：将原料甘草100 g粉碎至50目，加入8倍甘草重量的浓度60%的乙醇水溶液先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1~2 h，过滤收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣用 6倍量的浓度30%的乙醇水溶液在微沸状态下保温1~2 h，依此提取2次（具体过程：滤渣用 6倍量的浓度30%的乙醇水溶液在微沸状态下保温1~2 h，过滤，收集提取液a和二次滤渣，二次滤渣再用 6倍量的浓度30%的乙醇水溶液在微沸状态下保温1~2 h，过滤，收集提取液b，合并提取液a和b，得二次提取液），收集二次提取液；合并一次提取液和二次提取液。

2）步骤1）得到提取液趁热过300~400目滤袋，得到澄清滤液。滤液先通过装有PIPO-01大孔树脂的高压柱（购自广州市牌牌生物科技有限公司），再通过AB-8大孔树脂高压柱后（两节树脂柱中的大孔树脂重量相等），收集通过两节高压柱后的未吸附流出液。滤液上样量以原料甘草计：甘草（重量g）：单根树脂柱中的大孔树脂（重量g）=1:1，（即从与树脂重量比为1:1的甘草中得到的滤液上样），完成上样，流速为1/10 BV/min。

3）先用10BV水洗脱两节串联树脂柱，然后分别用6BV 浓度80%的乙醇水溶液洗脱PIPO-01大孔树脂柱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；依次用6 BV浓度 40%的乙醇水溶液和6 BV浓度70%的乙醇水溶液洗脱AB-8大孔树脂柱，分别得到除异戊烯基外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。最后分别回收乙醇洗脱液及通过两节高压串联树脂未吸附的流出液，浓缩，干燥后得到纯度为60%的甘草异戊烯基黄酮、56%的除异戊烯基外的总黄酮、52%的总皂苷及50%的总多糖。

实施例2

1）一次提取：将原料甘草1kg粉碎至50目，加入6倍甘草重量的浓度95%的乙醇水溶液先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1~2 h，过滤收集一次提取液和滤渣；滤渣用 10倍量的浓度20%的乙醇水溶液在微沸状态下保温1~2 h，依此提取3次，收集二次提取液；合并一次提取液和二次提取液。

2）步骤1）得到提取液趁热过300~400目滤袋，得到澄清滤液。滤液先通过装有PIPO-00号大孔树脂的高压柱（购自广州市牌牌生物科技有限公司），再通过HPD-500大孔树脂高压柱后（两节树脂柱中的大孔树脂重量相等），收集通过两节高压柱后的未吸附流出液。滤液上样量：甘草（重量g）：单根树脂柱中的大孔树脂（重量g）=0.5:1，完成上样，流速为1/7 BV/min。

3）先用10BV水洗脱两节串联树脂柱，后分别用10 BV 浓度70%的乙醇水溶液洗脱PIPO-00号大孔树脂柱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；依次用8 BV浓度 30%的乙醇水溶液和8 BV浓度60%的乙醇水溶液洗脱HPD-500大孔树脂柱，分别得到除异戊烯基外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。最后分别回收乙醇洗脱液及通过两节高压串联树脂未吸附的流出液，干燥后得到纯度为52%的甘草异戊烯基黄酮、 50%的除异戊烯基外的总黄酮、 45%的总皂苷及 40%的总多糖。

实施例3

1）一次提取：将原料甘草10kg粉碎至50目，加入10倍甘草重量的浓度80%的乙醇水溶液先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1~2 h，过滤收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣用8倍量的浓度60%的乙醇水溶液在微沸状态下保温1~2 h，依此提取5次，收集二次提取液；合并一次和二次提取液。

2）步骤1）得到提取液趁热过300~400目滤袋，得到澄清滤液。滤液先通过装有D101号大孔树脂的高压柱，再通过AB-8大孔树脂高压柱后（两节树脂柱中的大孔树脂重量相等），收集通过两节高压柱后的未吸附流出液。滤液上样量：甘草（重量g）：单根树脂柱中的大孔树脂（重量g）=1:1，完成上样，流速为1/10 BV/min。

3）先用15BV水洗脱两节串联树脂柱，后分别用6BV 浓度80%的乙醇水溶液洗脱D101大孔树脂柱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；依次用10 BV浓度 40%的乙醇水溶液和10 BV浓度70%的乙醇水溶液洗脱AB-8大孔树脂柱，分别得到除异戊烯基外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。最后分别回收乙醇洗脱液及通过两节高压串联树脂未吸附的流出液，干燥后得到纯度为45%的甘草异戊烯基黄酮、46%的除异戊烯基外的总黄酮、40%的总皂苷及35%的总多糖。

实施例4

1）一次提取：将原料甘草100 g粉碎至50目，加入7倍甘草重量的浓度75%的乙醇水溶液先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1~2 h，过滤收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣用6倍量的浓度50%的乙醇水溶液在微沸状态下保温1~2 h，依此提取4次，收集二次提取液；合并一次和二次提取液。

2）步骤1）得到提取液趁热过300~400目滤袋，得到澄清滤液。滤液先通过装有PIPO-01号大孔树脂的高压柱，再通过HPD-500大孔树脂高压柱后，收集通过两节高压柱后的未吸附流出液。滤液上样量：甘草（重量g）：单根树脂柱中的大孔树脂（重量g）=1:1，完成上样，流速为1/10 BV/min。

3）先用15 BV水洗脱两节串联树脂柱，后分别用10 BV 浓度90%的乙醇水溶液洗脱PIPO-01大孔树脂柱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；依次用6 BV浓度 40%的乙醇水溶液和6 BV浓度70%的乙醇水溶液洗脱AB-8大孔树脂柱，分别得到除异戊烯基外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。最后分别回收乙醇洗脱液及通过两节高压串联树脂未吸附的流出液，干燥后得到纯度为 43%的甘草异戊烯基黄酮、40%的除异戊烯基外的总黄酮、32%的总皂苷及30%的总多糖。

实施例5

1）一次提取：将原料甘草100 g粉碎至50目，加入7倍甘草重量的浓度60%的乙醇水溶液先浸泡2~3 h，微沸状态下保温1~2 h，过滤收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣用8倍量的浓度50%的乙醇水溶液在微沸状态下保温1~2 h，依此提取5次，收集二次提取液；合并一次和二次提取液。

2）步骤1）得到提取液趁热过300~400目滤袋，得到澄清滤液。滤液先通过装有HPD-600号大孔树脂的高压柱，再通过HPD-100大孔树脂高压柱后，收集通过两节高压柱后的未吸附流出液。滤液上样量：甘草（重量g）：单根树脂柱中的大孔树脂（重量g）=0.8:1，完成上样，流速为1/9 BV/min。

3）先用12BV水洗脱两节串联树脂柱，后分别用10 BV 浓度80%的乙醇水溶液洗脱HPD-100大孔树脂柱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；依次用6 BV浓度 40%的乙醇水溶液和6 BV浓度70%的乙醇水溶液洗脱HPD-600大孔树脂柱，分别得到除异戊烯基外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。最后分别回收乙醇洗脱液及通过两节高压串联树脂未吸附的流出液，干燥后得到纯度为49%的甘草异戊烯基黄酮、45%的除异戊烯基外的总黄酮、40%的总皂苷及43%的总多糖。

以上所述实施例仅是为充分说明本发明而所举的较佳的实施例，本发明的保护范围不限于此。本技术领域的技术人员在本发明基础上所作的等同替代或变换，均在本发明的保护范围之内。本发明的保护范围以权利要求书为准。

Claims

1.一种甘草有效成分的同步制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤1）乙醇提取：一次提取：取甘草，加入浓度60%~95%的乙醇水溶液浸泡，然后加热至80~100℃保温浸煮提取，过滤，收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣以浓度20%~60% 乙醇水溶液在80~100℃下保温浸煮提取1~5次，收集提取液合并，得二次提取液；合并一次提取液和二次提取液。

3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤1）乙醇提取：一次提取：取甘草，加入甘草重量1~10倍的浓度60%~95%的乙醇水溶液浸泡2~3 h，然后加热至80~100℃保温1~2 h，过滤，收集一次提取液和滤渣；二次提取：滤渣以甘草重量1~10倍的浓度20%~60% 乙醇水溶液在80~100℃下保温1~2h, 提取1~5次，收集提取液合并，得二次提取液；合并一次提取液和二次提取液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2）中滤液通过极性不同的两个串联大孔树脂柱的流速为：1/10 BV/min ~ 1/7 BV/min，滤液的上样量以其原料甘草计：甘草与一个大孔树脂柱中大孔树脂的重量比0.5:1~ 1:1。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2）所述非极性大孔树脂柱为PIPO-00大孔树脂柱、PIPO-01大孔树脂柱、HPD-100大孔树脂柱、HPD-300大孔树脂柱或D101大孔树脂柱，所述极性大孔树脂柱为HPD-500大孔树脂柱或HPD-600大孔树脂柱；所述中极性大孔树脂柱为HPD-400大孔树脂柱、HPD-750大孔树脂柱或AB-8大孔树脂柱。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤2）树脂分离：步骤1）得到的提取液过滤后，滤液依次通过串联的PIPO-01大孔树脂柱和AB-8大孔树脂柱，收集流出液。

7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤3）洗脱：先用10 ~15BV水对两节串联树脂柱进行冲洗除杂，然后非极性大孔树脂柱以6~10 BV浓度70%~90%的乙醇水溶液进行洗脱，得到甘草异戊烯基黄酮洗脱液；极性或中极性大孔树脂柱则依次以6~10 BV浓度30% ~ 40%的乙醇水溶液和6~10 BV浓度50%~70%的乙醇水溶液进行两次洗脱，依次得到除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液。

8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）的浓缩方法为：步骤2）的流出液、甘草异戊烯基黄酮洗脱液、除异戊烯基黄酮外的甘草总黄酮洗脱液和甘草总皂苷洗脱液分别减压在真空度0.06 MPa ~ 0.10MPa、温度 70 ℃~ 80 ℃条件下浓缩至初体积的20%以下。

9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤4）的干燥方法：将浓缩得到的各浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20 Pa，冷冻温度 -45℃~ -60℃的条件下冷冻干燥。

10.根据权利要求1~9任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤2）所述大孔树脂柱均为大孔树脂高压柱。