CN104016955B - 一种由枳椇子提取杨梅素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种由枳椇子提取杨梅素的方法，该方法包括枳椇子提取、提取液浓缩、树脂吸附分离、硅胶柱纯化与重结晶等步骤。与现有技术相比，本发明的提取方法首先通过预处理药材，再进行微波提取，微波提取的提取率明显高于其它提取方法，最后经过树脂分离、硅胶柱纯化，最后得到高纯度的杨梅素(纯度≥99.8％)，其提取率达到95％。提供了一种从枳椇子中大量提取杨梅素的有效方法。

Description

一种由枳椇子提取杨梅素的方法
【技术领域】
本发明涉及中药技术领域。更具体地，本发明涉及一种由枳椇子提取杨梅素的方法。
【背景技术】
枳椇子(HoveniaacerbaLindl.)，是鼠李科(Rhamnaceae)枳椇属植物的干燥成熟种子，枳椇属鼠李科枳属植物，别名拐枣、鸡爪树、鸡脚爪、万字果、万寿果、桔扭子等，主要分布于中国、朝鲜、日本和印度，我国大部份省份区均有零星分布。枳椇子性味甘，有保肝解酒、清热利尿，止渴除烦之功效，民间常用于主治酒病、烦热、口渴、呕吐、二便不利等症，国内外常用来做解酒毒的饮料和预防肝炎的保健食品。目前国内外对枳椇子的化学成分的研究较少，仅限于研究黄酮类化学成分。此外，已报道杨梅素具有血小板活化因子(PAF)的拮抗作用，具有抗血栓、抗心肌缺血、改善微循环等多方面的心血管药理作用，以及降血糖，抗氧化，解轻乙醇中毒等作用；另外，它在制备预防和治疗急、慢性炎症、类风湿性关节炎、肝炎、护肝保健、治疗各种疼痛的药物中，杨梅素(myricetin)还可以和药物上可接受的载体一起制成胶囊、颗粒剂、片剂、滴丸等剂型。杨梅素的化学名称是3,5,7-三羟基-2-(3,4,5-三羟基苯基)-4H-1-苯并呋喃-4-酮，英文名称3,5,7-Trihydroxy-2-(3,4,5-trihydroxy-phenyl)-chromen-4-one。它的化学分子式是C15H10O8，分子量318.2351，分子结构式如下：
CN200610019693公开了一种从藤茶及其它葡萄科蛇葡萄属植物中提取制备杨梅素的方法，CN200810050893公开了一种从葡萄科蛇葡萄属AMPELOPSISMICHX植物蛇葡萄茎叶或其它葡萄科蛇葡萄属植物中提取杨梅素的方法。CN201010293209公开一种从杨梅枝叶中提取杨梅素的方法。CN200710026228报道了从枳椇子提取二氢杨梅素的方法，但未见到有关从枳椇子中提取杨梅素的报道。
本发明的目的在于增加从天然植物中提取杨梅素的来源，解决提取率低，纯度不高等缺点，提供一种从枳椇子中提取杨梅素的方法。
【发明内容】
[要解决的技术问题]
本发明的目的是提供一种由枳椇子提取杨梅素的方法。
[技术方案]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及一种由枳椇子提取杨梅素的方法。
该提取方法的步骤如下：
A、枳椇子提取
将枳椇子粉碎与筛分，得到80～100目枳椇子粉，然后在一元醇水溶液中在室温下浸泡30～60min，再在微波设备中在温度60～80℃与微波功率200～600W的条件下微波提取1～4次，每次5～30min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.06～-0.08MPa与温度40～60℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.02～1.5mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让纯水，接着让浓度以体积计5～20％的一元醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用浓度以体积计45～65％的一元醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液进行真空浓缩成浸膏，该浸膏用低极性溶剂溶解或与硅胶混合均匀，得到一种含杨梅素样品，它再通过硅胶柱进行纯化，然后先用弱极性溶剂洗脱杂质，再用强极性洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
让步骤D得到的粗制杨梅素在一元醇水溶液中进行重结晶，过滤分离，干燥，得到纯度以重量计99％以上的杨梅素。
根据本发明的一种优选实施方式，在步骤A中，所述的一元醇水溶液是浓度为以体积计40～70％的甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C中，所述的大孔吸附树脂是D101型、AB-8型、LX-38型、D3520型、NKA-9型、D4020型或S-8型大孔吸附树脂。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C中，所述的浓缩液以流速35～60mg/g通过预处理大孔吸附树脂床。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤C中，所述的一元醇水溶液是甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液；除去杂质时，所述一元醇水溶液的量是3～5BV；洗脱时，所述一元醇水溶液的量是6～8BV。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，含有杨梅素的洗脱液在压力-0.06～0.08MPa与温度为40～60℃的条件下进行浓缩。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，所述硅胶的粒度是100～400目硅胶；含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：30～70；采用干法上样时，让含杨梅素样品与所述硅胶按照重量比1:1.2～2.0混合后上样通过硅胶柱；采用湿法上样时，让含杨梅素样品溶解于选自乙醚、石油醚或正己烷的低极性溶剂中，让得到的溶液上样通过硅胶柱。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤D中，所述的弱极性洗脱剂是由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂；所述的强极性洗脱剂是由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤E中，所述的一元醇水溶液是浓度以体积计1～50％的甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液。
根据本发明的另一种优选实施方式，在步骤E中，所述的重结晶是将步骤D得到的粗制杨梅素与甲醇按照重量比1：5～15进行混合，并加热到温度60～80℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素甲醇溶液，再按照杨梅素甲醇溶液与蒸馏水的重量比1：10～20加入蒸馏水，继续搅拌30～60min，然后降温至温度0～5℃，静置5～8h，抽滤，得到的晶体在在压力-0.06～0.08MPa的条件下真空干燥，得到纯度以重量计99％以上的杨梅素。
下面将更详细地描述本发明。
本发明涉及一种由枳椇子提取杨梅素的方法。
该提取方法的步骤如下：
A、枳椇子提取
将枳椇子粉碎与筛分，得到80～100目枳椇子粉，然后在一元醇水溶液中在室温下浸泡30～60min，再在微波设备中在温度60～80℃与微波功率200～600W的条件下微波提取1～4次，每次5～30min，于是得到一种枳椇子提取液。
本发明使用的枳椇子为中国特产，例如是目前我国市场上销售的枳椇子中药材，例如选自亳州市保华药业有限公司、安国市杰仁堂中药材有限责任公司、安徽三义堂中药饮片有限公司等销售的产品。
然后，使用在本技术领域中通常使用的超声波清洗器进行清洗，除去泥沙，例如使用昆山市超声仪器有限公司生产的KQ-250B型超声波清洗器进行清洗。清洗的枳椇子再使用在本技术领域中通常使用的真空干燥箱进行干燥，例如像德国MMM公司生产的真空干燥箱进行干燥。然后，使用在药材加工中通常使用的粉碎机对干燥枳椇子的进行粉碎，粉碎的枳椇子再用标准筛进行筛分，收集80-100目的枳椇子粉。
在这个步骤中，所述的一元醇水溶液是浓度为以体积计40～70％的甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液。
所述枳椇子粉在一元醇水溶液中浸泡时，它与一元醇水溶液的重量比是1:6～15。
优选地，所述枳椇子粉按照它与一元醇水溶液的重量比1:8～12在50～60％甲醇或乙醇水溶液中浸泡40～50min。
在这个步骤中，所使用的微波设备是在本技术领域中通常使用的微波设备，例如由上海隆誉微波设备有限公司以商品名LY3-10L微波提取试验机、上海庞哲微波设备有限公公司以商品名PZ-TQ1微波提取机销售的产品。
优选地，浸泡的枳椇子粉在微波设备中在温度65～75℃与微波功率400W的条件下微波提取2～3次，每次15～25min。
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.06～-0.08MPa与温度40～60℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.02～1.5mg/ml的浓缩液。
在这个步骤中，减压浓缩的目的在于除去在步骤A得到的枳椇子提取液中的一元醇。减压浓缩时所使用的设备是在本技术领域里普遍使用的在目前市场上销售的产品，例如由上海知信实验仪器技术以商品名SHZ-Ⅲ，上海亚荣生化仪器厂以商品名RE-52AA销售的产品。
优选地，所述的枳椇子提取液在压力-0.08MPa与温度45℃的条件下减压浓缩至无醇味。
C、树脂吸附分离
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让纯水，接着让浓度以体积计5～20％的一元醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用浓度以体积计45～65％的一元醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液。
在这个步骤中，过滤主要除去在步骤B得到的浓缩液中存在的例如多糖、蛋白质、鞣质等杂质，主要采用减压抽滤方式进行过滤。过滤设备是本技术领域里通常使用的、在目前市场上销售的产品，例如由禹州大张过滤设备有限公司以商品名450/630/870液压自动压紧压滤机，上海青上过滤设备有限公司以商品名板框压滤机销售的产品。
在这个步骤中，使用的大孔吸附树脂是D101型、AB-8型、LX-38型、D3520型、NKA-9型、D4020型或S-8型大孔吸附树脂，它们都是目前市场上销售的产品，例如由天津波鸿树脂科技有限公司销售的D-101型大孔吸附树脂；由陕西蓝深特种树脂有限公司销售的AB-8型大孔吸附树脂；由西安蓝晓科技新材料股份有限公司销售的LX-38型大孔吸附树脂等。
所述的预处理是大孔吸附树脂的常规预处理，例如2％热碱(≥75℃)浸泡30min→去离子水水洗至中性→1％硝酸浸泡30min→水洗至中性。
使用纯水主要除去在过滤的浓缩液中还存在的例如多糖、蛋白质、鞣质等杂质。所述纯水的量是5～8BV(大孔吸附树脂床体积)；
使用一元醇水溶液主要除去在浓缩液中仍然存在的例如丹参酮IIA、隐丹参酮等杂质。
在这个步骤中，所述的一元醇水溶液是甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液。
在这个步骤中，所述的浓缩液以流速35～60mg/g通过预处理大孔吸附树脂床。
除去杂质时，所述一元醇水溶液的量是3～5BV(大孔吸附树脂床体积)；洗脱时，所述一元醇水溶液的量是6～8BV。
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液进行真空浓缩成浸膏，该浸膏用低极性溶剂溶解或与硅胶混合均匀，得到一种含杨梅素样品，它再通过硅胶柱进行纯化，然后先用弱极性溶剂洗脱杂质，再用强极性洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
在这个步骤中，含有杨梅素的洗脱液在压力-0.06～-0.08MPa与温度为40～60℃的条件下进行减压浓缩，得到杨梅素浸膏。
减压浓缩时所使用的设备是本技术领域里通常使用的、在目前市场上销售的产品，例如由上海知信实验仪器技术以商品名SHZ-Ⅲ，上海亚荣生化仪器厂以商品名RE-52AA销售的产品。
采用反相高效液相色谱方法(参考文献时珍国医国药2010年第21卷第11期)，在C18(4.6mm×250mm,5um)；流动相为乙腈-甲醇-水-磷酸(17.5:17.5:65:1.3)；检测波长360nm；柱温室温；流速1ml/min条件下分析杨梅素浸膏，其中杨梅素含量可以达到以重量计70％以上，回收率可以达到90％以上。
在这个步骤中，所述硅胶的粒度是100～400目硅胶，优选地150～350目，更优选地200～300目。
含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：30～70。
根据本发明，可以采用干法上样或湿法上样。采用干法上样时，让杨梅素浸膏与所述硅胶按照重量比1:1.2～2.0混合后上样通过硅胶柱。采用湿法上样时，让含杨梅素样品溶解于选自乙醚、石油醚或正己烷的低极性溶剂中，让得到的溶液上样通过硅胶柱。所述含杨梅素样品与低极性溶剂的重量比是1:3～5。
在这个步骤中，所述的弱极性洗脱剂是由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂；所述的强极性洗脱剂是由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂。
收集含有杨梅素的洗脱液在在压力-0.08MPa与温度45℃的条件下减压浓缩，得到粗制杨梅素。减压浓缩时所使用的设备是本技术领域里通常使用的、在目前市场上销售的产品，例如由上海知信实验仪器技术以商品名SHZ-Ⅲ，上海亚荣生化仪器厂以商品名RE-52AA销售的产品。
E、重结晶
让步骤D得到的粗制杨梅素在一元醇水溶液中进行重结晶，过滤分离，干燥，得到纯度以重量计99％以上的杨梅素。
在这个步骤中，所述的一元醇水溶液是浓度以体积计1～50％的甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液。
在这个步骤中，所述的重结晶是将步骤D得到的粗制杨梅素与甲醇按照重量比1：5～15进行混合，并加热到温度60～80℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素甲醇溶液，再按照杨梅素甲醇溶液与蒸馏水的重量比1：10～20加入蒸馏水，继续搅拌30～60min，然后降温至温度0～5℃，静置5～8h，抽滤，得到的晶体在压力-0.06～0.08MPa的条件下真空干燥，得到纯度以重量计99％以上的杨梅素。
优选地，杨梅素甲醇溶液与蒸馏水的重量比1：12～18；更优选地，杨梅素甲醇溶液与蒸馏水的重量比1：14～16。
所得到杨梅素产物进行了紫外光谱、红外光谱、质谱与核磁分析。
紫外光谱法测定条件：
仪器：TU-1810型紫外可见分光光度计；
测定条件：先用甲醇做对照品进行全波长(200nm-400nm)扫描，然后将配好的杨梅素溶液在此波段下进行全波长扫描，使峰高在1-2之间。
测定结果参见附图1，其中最大吸收波长是272nm与324nm。
红外光谱法测定条件：
仪器：EQUINX55型傅立叶变换红外光谱仪
测定条件：称取烘干的杨梅素0.005g放入研钵中，加入0.5g干燥的KBr粉末混匀，研磨10min，过2μm筛网，之后压片，扫描样品图。
测定结果参见附图2，其中具有3422cm-1(羟基峰)、1663cm-1(碳基)和1603cm-1、1514cm-1(苯环)结构。
质谱法测定条件：
仪器：液质联用(LC-MS)布鲁克公司
测定条件：用毛细管粘取微量杨梅素溶于1ml甲醇中待测。
测定结果参见附图3，ESI-MSm/z317[M-H]-。
核磁谱法测定条件：
仪器：布鲁克核磁共振仪
测定条件：取杨梅素10mg用氘代DMSO溶解，在400MHz下测定杨梅素的氢谱位移。
测定结果参见附图4，1HNMR(DMSO，400MHz):δ12.50(s,1H，5-OH)，10.78(s,1H,7-OH)，9.35(s,1H)，9.22(s,2H)，8.81(s,1H)，7.24(s,2H)，6.37(s,1H)，6.18(s,1H)，1HNMR谱中，δH12.50(s,1H)处的质子信号为A环5-OH质子的信号；δH7.24(s,2H)信号为黄酮B环对称位置的两个质子，提示黄酮B环为典型的3＇，4＇，5＇-三取代结构，δH6.37(s,1H)和6.18(s,1H)为A环上的两个质子信号。
由上述测定结果可以确定，采用本发明方法所得到的最终产物是杨梅素。
[有益效果]
本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明的提取方法首先通过预处理药材，再进行微波提取，微波提取的提取率明显高于其它提取方法，最后经过树脂分离、硅胶柱纯化，最后得到高纯度的杨梅素(纯度≥99.8％)，其提取率达到95％。提供了一种从枳椇子中大量提取杨梅素的有效方法。
【附图说明】
图1是本发明制备的杨梅素的紫外光谱图；
图2是本发明制备的杨梅素的红外光谱图；
图3是本发明制备的杨梅素的质谱图；
图4是本发明制备的杨梅素的核磁谱图。
【具体实施方式】
通过下述实施例将能够更好地理解本发明。
实施例1：从枳椇子提取杨梅素
该实施例的实施步骤如下：
A、枳椇子提取
将亳州市保华药业有限公司销售的枳椇子清洗、干燥，再粉碎与筛分，得到80目枳椇子粉，然后按照枳椇子粉与一元醇水溶液的重量比1:6，在浓度为以体积计60％的甲醇一元醇水溶液中在室温下浸泡40min，再在由上海隆誉微波设备有限公司以商品名LY3-10L微波提取试验机销售的微波设备中在温度75℃与微波功率300W的条件下微波提取3次，每次10min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.06MPa与温度40℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.3mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
D101型大孔吸附树脂预处理：2％热碱(≥75℃)浸泡30min→去离子水水洗至中性→1％硝酸浸泡30min→水洗至中性。
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着以流速45mg/g通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让5BV的纯水，接着让4BV、浓度以体积计12％的甲醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用6BV、浓度以体积计60％的甲醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液在压力-0.06MPa与温度为40℃的条件下进行真空浓缩成浸膏。采用本说明书中描述的方法测定杨梅素浸膏，其中杨梅素含量以重量计71.2％，回收率92％。
该浸膏按照其浸膏与低极性溶剂的重量比1:4用乙醚低极性溶剂溶解；然后通过硅胶柱进行纯化，含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：56。然后先用由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杂质，再用由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，在压力-0.06MPa与温度为40℃的条件下浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
在这个步骤中，将步骤D得到的粗制杨梅素与甲醇按照重量比1：10进行混合，并加热到温度68℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素甲醇溶液，再按照杨梅素甲醇溶液与蒸馏水的重量比1：12加入蒸馏水，继续搅拌40min，然后降温至温度0℃，静置6h，抽滤，得到的晶体在压力-0.06MPa的条件下真空干燥，得到杨梅素4.2g纯度以重量计99.8％杨梅素，产率达0.42％。
实施例2：从枳椇子提取杨梅素
该实施例的实施步骤如下：
A、枳椇子提取
将亳州市保华药业有限公司销售的枳椇子清洗、干燥，再粉碎与筛分，得到80～100目枳椇子粉，然后按照枳椇子粉与一元醇水溶液的重量比1:12，在浓度为以体积计40％的乙醇水溶液中在室温下浸泡50min，再在由上海庞哲微波设备有限公公司以商品名PZ-TQ1微波提取机销售的微波设备中在温度60℃与微波功率200W的条件下微波提取4次，每次5min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.08MPa与温度60℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.02mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
AB-8型大孔吸附树脂预处理：2％热碱(≥75℃)浸泡30min→去离子水水洗至中性→1％硝酸浸泡30min→水洗至中性。
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着以流速52mg/g通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让6BV的纯水，接着让3BV、浓度以体积计5％的乙醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用8BV、浓度以体积计65％的乙醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液在压力-0.08MPa与温度为50℃的条件下进行真空浓缩成浸膏。采用本说明书中描述的方法测定杨梅素浸膏，其中杨梅素含量以重量计70.1％，回收率91.2％。
该浸膏按照其浸膏与低极性溶剂的重量比1:3用石油醚低极性溶剂溶解；然后通过硅胶柱进行纯化，含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：30。然后先用由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杂质，再用由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
在这个步骤中，将步骤D得到的粗制杨梅素与乙醇按照重量比1：5进行混合，并加热到温度60℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素乙醇溶液，再按照杨梅素乙醇溶液与蒸馏水的重量比1：10加入蒸馏水，继续搅拌30min，然后降温至温度2℃，静置5h，抽滤，得到的晶体在压力-0.08MPa的条件下真空干燥，得到杨梅素3.9g纯度以重量计99.9％杨梅素，产率达0.39％。
实施例3：从枳椇子提取杨梅素
该实施例的实施步骤如下：
A、枳椇子提取
将亳州市保华药业有限公司销售的枳椇子清洗、干燥，再粉碎与筛分，得到80～100目枳椇子粉，然后按照枳椇子粉与一元醇水溶液的重量比1:8，在浓度为以体积计50％的丙醇水溶液中在室温下浸泡30min，再在由上海庞哲微波设备有限公公司以商品名PZ-TQ1微波提取机销售的微波设备中在温度80℃与微波功率400W的条件下微波提取2次，每次20min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.06MPa与温度45℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.1mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
LX-38型大孔吸附树脂预处理：2％热碱(≥75℃)浸泡30min→去离子水水洗至中性→1％硝酸浸泡30min→水洗至中性。
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着以流速60mg/g通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让8BV的纯水，接着让4BV、浓度以体积计16％的丙醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用6BV、浓度以体积计45％的丙醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液在压力-0.06MPa与温度为60℃的条件下进行真空浓缩成浸膏。采用本说明书中描述的方法测定杨梅素浸膏，其中杨梅素含量以重量计70.5％，回收率90.6％。
按照该浸膏与硅胶重量比1:1.6让浸膏与硅胶混合均匀，然后通过硅胶柱进行纯化，含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：45。然后先用由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杂质，再用由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
在这个步骤中，将步骤D得到的粗制杨梅素与丙醇按照重量比1：8进行混合，并加热到温度80℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素丙醇溶液，再按照杨梅素丙醇溶液与蒸馏水的重量比1：20加入蒸馏水，继续搅拌50min，然后降温至温度4℃，静置8h，抽滤，得到的晶体在压力-0.06MPa的条件下真空干燥，得到杨梅素3.6g纯度以重量计99.8％杨梅素，产率达0.36％。
实施例4：从枳椇子提取杨梅素
该实施例的实施步骤如下：
A、枳椇子提取
将亳州市保华药业有限公司销售的枳椇子清洗、干燥，再粉碎与筛分，得到80～100目枳椇子粉，然后按照枳椇子粉与一元醇水溶液的重量比1:15，在浓度为以体积计70％的丁醇水溶液中在室温下浸泡60min，再在由上海庞哲微波设备有限公公司以商品名PZ-TQ1微波提取机销售的微波设备中在温度65℃与微波功率600W的条件下微波提取1次，每次30min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.08MPa与温度50℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.5mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
D3520型大孔吸附树脂预处理：2％热碱(≥75℃)浸泡30min→去离子水水洗至中性→1％硝酸浸泡30min→水洗至中性。
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着以流速35mg/g通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让5BV的纯水，接着让5BV、浓度以体积计20％的丁醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用8BV、浓度以体积计50％的丁醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液在压力-0.08MPa与温度为50℃的条件下进行真空浓缩成浸膏。采用本说明书中描述的方法测定杨梅素浸膏，其中杨梅素含量以重量计70.2％，回收率90.1％。
该浸膏按照该浸膏与硅胶重量比1:1.8让浸膏与硅胶混合均匀，然后通过硅胶柱进行纯化，含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：70。然后先用由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杂质，再用由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
在这个步骤中，将步骤D得到的粗制杨梅素与丁醇按照重量比1：15进行混合，并加热到温度72℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素丁醇溶液，再按照杨梅素丁醇溶液与蒸馏水的重量比1：16加入蒸馏水，继续搅拌60min，然后降温至温度5℃，静置7h，抽滤，得到的晶体在压力-0.08MPa的条件下真空干燥，得到杨梅素3.3g纯度以重量计99.9％杨梅素，产率达0.33％。
实施例5：从枳椇子提取杨梅素
该实施例的实施步骤如下：
A、枳椇子提取
将亳州市保华药业有限公司销售的枳椇子清洗、干燥，再粉碎与筛分，得到80～100目枳椇子粉，然后按照枳椇子粉与一元醇水溶液的重量比1:6，在浓度为以体积计40％的丙醇水溶液中在室温下浸泡40min，再在由上海隆誉微波设备有限公司以商品名LY3-10L微波提取试验机销售的微波设备中在温度60℃与微波功率400W的条件下微波提取1次，每次10min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.08MPa与温度45℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.4mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
AB-8型大孔吸附树脂预处理：2％热碱(≥75℃)浸泡30min→去离子水水洗至中性→1％硝酸浸泡30min→水洗至中性。
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着以流速58mg/g通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让8BV的纯水，接着让5BV、浓度以体积计12％的丙醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用6BV、浓度以体积计60％的丙醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液在压力-0.07MPa与温度为56℃的条件下进行真空浓缩成浸膏。采用本说明书中描述的方法测定杨梅素浸膏，其中杨梅素含量以重量计71.6％，回收率90.8％。
该浸膏按照其浸膏与低极性溶剂的重量比1:5用石油醚低极性溶剂溶解；然后通过硅胶柱进行纯化，含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：70。然后先用由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杂质，再用由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
在这个步骤中，将步骤D得到的粗制杨梅素与丙醇按照重量比1：12进行混合，并加热到温度74℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素丙醇溶液，再按照杨梅素丙醇溶液与蒸馏水的重量比1：18加入蒸馏水，继续搅拌56min，然后降温至温度4℃，静置6.8h，抽滤，得到的晶体在压力-0.08MPa的条件下真空干燥，得到杨梅素3.7g重量份纯度以重量计99.9％杨梅素，产率达0.37％。
实施例6：从枳椇子提取杨梅素
该实施例的实施步骤如下：
A、枳椇子提取
将亳州市保华药业有限公司销售的枳椇子清洗、干燥，再粉碎与筛分，得到80～100目枳椇子粉，然后按照枳椇子粉与一元醇水溶液的重量比1:15，在浓度为以体积计60％的乙醇水溶液中在室温下浸泡30min，再在由上海隆誉微波设备有限公司以商品名LY3-10L微波提取试验机销售的微波设备中在温度65℃与微波功率300W的条件下微波提取3次，每次5min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.06MPa与温度55℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.4mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
D3520型大孔吸附树脂预处理：2％热碱(≥75℃)浸泡30min→去离子水水洗至中性→1％硝酸浸泡30min→水洗至中性。
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着以流速48mg/g通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让8BV的纯水，接着让5BV、浓度以体积计12％的乙醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用8BV、浓度以体积计60％的乙醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液在压力-0.06MPa与温度为50℃的条件下进行真空浓缩成浸膏。采用本说明书中描述的方法测定杨梅素浸膏，其中杨梅素含量以重量计72.1％，回收率92.6％。
该浸膏按照该浸膏与硅胶重量比1:1.2让浸膏与硅胶混合均匀，然后通过硅胶柱进行纯化，含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：48。然后先用由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杂质，再用由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
在这个步骤中，将步骤D得到的粗制杨梅素与乙醇按照重量比1：12进行混合，并加热到温度62℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素乙醇溶液，再按照杨梅素乙醇溶液与蒸馏水的重量比1：14加入蒸馏水，继续搅拌54min，然后降温至温度0℃，静置6.8.h，抽滤，得到的晶体在压力.-0.08MPa的条件下真空干燥，得到杨梅素4.1g纯度以重量计99.8％杨梅素，产率达0.41％。

Claims (9)

1.一种由枳椇子提取杨梅素的方法，其特征在于该方法的步骤如下：
A、枳椇子提取
将枳椇子粉碎与筛分，得到80~100目枳椇子粉，然后在一元醇水溶液中在室温下浸泡30~60min，所述的一元醇水溶液是浓度为以体积计40~70%的甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液，再在微波设备中在温度60~80℃与微波功率200~600W的条件下微波提取1~4次，每次5~30min，于是得到一种枳椇子提取液；
B、提取液浓缩
让步骤A得到的枳椇子提取液在压力-0.06~-0.08MPa与温度40~60℃的条件下进行减压浓缩，得到密度1.02~1.5mg/ml的浓缩液；
C、树脂吸附分离
步骤B得到的浓缩液经过滤除去杂质，接着通过预处理大孔吸附树脂床，然后先让纯水，接着让浓度以体积计5~20%的一元醇水溶液通过所述的树脂床，以进一步除去其浓缩液中含有的杂质，最后用浓度以体积计45~65%的一元醇水溶液洗脱，收集含有杨梅素的洗脱液；
D、硅胶柱纯化
将步骤C收集的含有杨梅素的洗脱液进行真空浓缩成浸膏，该浸膏用低极性溶剂溶解或与硅胶混合均匀，得到一种含杨梅素样品，它再通过硅胶柱进行纯化，然后先用弱极性溶剂洗脱杂质，再用强极性洗脱剂洗脱杨梅素，收集含有杨梅素的洗脱液，浓缩得到粗制杨梅素；
E、重结晶
让步骤D得到的粗制杨梅素在一元醇水溶液中进行重结晶，过滤分离，干燥，得到纯度以重量计99%以上的杨梅素。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤C中，所述的大孔吸附树脂是D101型、AB-8型、LX-38型、D3520型、NKA-9型、D4020型或S-8型大孔吸附树脂。
3.根据权利要求1所述方法，其特征在于在步骤C中，所述的浓缩液以流速35~60mg/g通过预处理大孔吸附树脂床。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤C中，所述的一元醇水溶液是甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液；除去杂质时，所述一元醇水溶液的量是3~5BV；洗脱时，所述一元醇水溶液的量是6~8BV。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，含有杨梅素的洗脱液在压力-0.06~0.08MPa与温度为40~60℃的条件下进行浓缩。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，所述硅胶的粒度是100~400目硅胶；含杨梅素样品上样量与所述硅胶的重量比是1：30~70；采用干法上样时，让含杨梅素样品与所述硅胶按照重量比1:1.2~2.0混合后上样通过硅胶柱；采用湿法上样时，让含杨梅素样品溶解于选自乙醚、石油醚或正己烷的低极性溶剂中，让得到的溶液上样通过硅胶柱。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤D中，所述的弱极性洗脱剂是由乙醚、石油醚与正己烷按照体积比5:1:0.1组成的洗脱剂；所述的强极性洗脱剂是由石油醚、乙酸乙酯与乙酸按照体积比1:1:0.1组成的洗脱剂。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤E中，所述的一元醇水溶液是浓度以体积计1~50%的甲醇、乙醇、丙醇或丁醇水溶液。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在步骤E中，所述的重结晶是将步骤D得到的粗制杨梅素与甲醇按照重量比1：5~15进行混合，并加热到温度60~80℃使杨梅素完全溶解，得到杨梅素甲醇溶液，再按照杨梅素甲醇溶液与蒸馏水的重量比1：10~20加入蒸馏水，继续搅拌30~60min，然后降温至温度0~5℃，静置5~8h，抽滤，得到的晶体在压力-0.06~0.08MPa的条件下真空干燥，得到纯度以重量计99%以上的杨梅素。
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