CN101921301B - 一种从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法。该方法采用仙草用丙酮水溶液提取，提取液浓缩干燥得到粗提物，粗提物经大孔吸附树脂柱层析分离，收集洗脱液，浓缩干燥得到精提物，精提物经高效液相色谱分离、制备，得到纯度为99%的紫云英苷纯品。本发明所用原料廉价易得，对环境基本不产生污染，工艺简单易行、快捷，所获得得紫云英苷纯度高，适合工业规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法。
背景技术
仙草，又名仙人凉、凉粉草、薪草，为唇形科一年生草本植物，是一种重要的药食两用的东方植物。仙草具有很高的药用价值，中医认为，仙草性凉寒，味甘淡涩，具有清热利湿、凉血解暑，解渴利水和除热毒的功效。在仙草所含功能性成分中，多糖物质能增强人体免疫力，部分具有抗氧化性能；多酚类物质能清除自由基，具有抗氧化性能；微量元素能抑制自由基形成，抗衰、抗癌；熊果酸和齐墩果酸能降压、降血糖；维生素能调节和增强生理机能，部分具有抗氧化性能。
市场上，利用不同的食品加工方法以仙草为原料制成不同的保健食品。如以仙草粉及淀粉为主要原料制成的即食凉粉冻粉，又叫仙草蜜；或制成仙草保健茶饮料，仙人饭；这些产品主要是以水为溶剂提取的仙草胶为原料制成的。而一些水溶性差的物质被当做废物丢弃，造成巨大的资源浪费。目前从仙草提取紫云英苷还未有见文献报导。
发明内容
本发明的目的是提供一种步骤简单、适合工业生产的从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法。
本发明的目的通过以下技术方案来实现：
仙草采用丙酮水溶液提取，提取液浓缩干燥得到粗提物，粗提物经大孔吸附树脂柱层析分离，收集洗脱液，浓缩干燥得到精提物，精提物经高效液相色谱分离、制备，得到紫云英苷纯品。
其中所述仙草采用全草，经过干燥、裁剪、研磨，过40目筛网；所述全草包含花、叶、茎和根。
所述丙酮水溶液浓度为50%～90%（体积比），仙草与丙酮溶液的固液比为1：8～1：12（w/v）；提取条件为：提取温度50℃～60℃，浸提时间1.5～3h，浸提2～3次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物。
所述粗提物经大孔吸附树脂柱层析分离，收集55～65%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物；所述大孔吸附树脂为弱极性大孔吸附树脂；所述弱极性大孔吸附树脂为AB-8、DM130或HPD450大孔吸附树脂；所述大孔吸附树脂柱层析采用乙醇水溶液梯度递增洗脱；优选的洗脱方式为先用水除杂，后用60%乙醇洗脱，最后用95%乙醇洗脱柱中残留，收集60%乙醇洗脱组分。
所述高效液相色谱采用甲醇/水梯度洗脱。所述高效液相色谱方法中色谱柱：Varian C18（5um，4.6×250mm），流动相：甲醇-水（0-15min：50%甲醇-90%甲醇），流速1.0ml·min-1，检测波长：280nm，柱温：室温；紫云英苷的保留时间为10.34min。
鉴别
采用核磁共振谱及质谱法鉴定本发明分离得到的紫云英苷纯品，如图1-3所示，数据结果与文献一致。1H-NMR（600MHz ，DMSO）δ：8.032（2H，d，J=1.51Hz，H-2’，H-6’），δ：6.883（2H，d，J=2.0Hz，H-3’，H-5’），δ：6.426（1H，s，J=0.95Hz，H-8），δ：6.200（1H，s，J=0.86Hz，H-6），δ：5.450（1H，d，J=0.98Hz，H-1”），δ：3.17（1H，m，H-4”），δ：3.208（2H，m， H-2”，H-3”），3.081（1H，m，H-5”），δ：3.320（1H，m，J=3.02Hz，H-6”b），δ：3.550（1H，m，J=2.96Hz，H-6”a）。13C-NMR（150MHz，DMSO）δ：156.00（C-2），133.04（C-3），177.21（C-4），98.70（C-6），93.65（C-8），156.33（C-9），103.61（C-10），156.00（C-1’），130.76（C-2’），114.95（C-3’），159.75（C-4’）， 114.95（C-5’）， 130.76（C-6’）， 100.75（C-1”），74.00（C-2”），76.16（C-3”），69.65（C-4”），77.33（C-5”），60.60（C-6”）。
采用高效液相色谱仪法测定黄酮醇苷化合物中紫云英苷的含量，色谱柱：Varian C18（5um，4.6×250mm），流动相：甲醇-水（0-15min：50%甲醇-90%甲醇），流速1.0ml·min-1，检测波长：280nm，柱温：室温；紫云英苷的保留时间为10.34min，测得紫云英苷含量为99%。紫云英苷的色谱图如图4所示。
本发明采用溶剂提取，大孔吸附柱层析分离，液相色谱分离，液相色谱制备得到纯度为99%的紫云英苷。
本发明与现有技术相比具有以下优点：
本发明所用原料廉价易得，对环境基本不产生污染，工艺简单易行、快捷，所获得得紫云英苷纯度高，适合工业规模化生产。
附图说明
图1为紫云英苷的质谱图。
图2为紫云英苷的核磁氢谱图。
图3为紫云英苷的核磁碳谱图。
图4为紫云英苷高效液相色谱图。
具体实施方式
下面对本发明作进一步详细描述，但是本发明不仅限于此。
实施例1
① 取裁剪、研磨过筛后的仙草全草10g，加约100mL75%丙酮溶液，60℃提取，浸提2h，浸提两次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物，其多酚含量达205.1±7.1 mg GAE/g extract，具体数据如表1所示。
表1 实施例1粗提数据
② 粗提物1g，AB-8弱极性大孔吸附柱层析分离（流动相为不同体积分数的乙醇水溶液：先用水除杂，后用60%乙醇洗脱，最后用95%乙醇洗脱柱中残留），收集60%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物，其多酚浓度为534.9 mg GAE/g，具体数据如表2所示。
表2 实施例1精提数据
③ 0.2g精提物经高效液相色谱分离，制备，得到0.05g99%紫云英苷黄色纯品。高效液相色谱流动相为甲醇水。
实施例2
① 取裁剪、研磨过筛后的仙草全草10g，加约100mL75%丙酮溶液，60℃提取，浸提2h，浸提两次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物，其多酚含量达205.1±7.1 mg GAE/g extract，具体数据如表1所示。
② 粗提物1g，DM130弱极性大孔吸附柱层析分离（流动相为不同体积分数的乙醇水溶液：先用水除杂，后用60%乙醇洗脱，最后用95%乙醇洗脱柱中残留），收集60%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物，其多酚浓度为298.5 mg GAE/g，具体数据如表3所示。
表3实施例2精提数据
③ 0.2g精提物经高效液相色谱分离，制备，得到0.028g99%紫云英苷黄色纯品。高效液相色谱流动相为甲醇水。
实施例3
① 取裁剪、研磨过筛后的仙草全草10g，加约100mL75%丙酮溶液，60℃提取，浸提2h，浸提两次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物，其多酚含量达205.1±7.1 mg GAE/g extract，具体数据如表1所示。
② 粗提物1g，HPD450弱极性大孔吸附柱层析分离（流动相为不同体积分数的乙醇水溶液：先用水除杂，后用60%乙醇洗脱，最后用95%乙醇洗脱柱中残留），收集60%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物，其多酚浓度为415.9 mg GAE/g，具体数据如表4所示；
表4实施例3精提数据
③ 0.2g精提物经高效液相色谱分离，制备，得到0.04g99%紫云英苷黄色纯品。高效液相色谱流动相为甲醇水。
综上实施例1-3所述，3种不同的弱极性大孔吸附树脂都可以用于从仙草粗提物中分离富集紫云英苷，其中AB-8树脂分离出的紫云英苷得率较大。
实施例4
① 取裁剪、研磨过筛后的仙草全草25g，加约500mL90%丙酮溶液，50℃提取，浸提2.5h，浸提三次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物，其多酚含量达22.4±6.6 mg GAE/g extract，具体数据如表5所示。
表5实施例4粗提数据
② 粗提物3g，AB-8大孔吸附柱层析分离，收集60%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物，其多酚含量达79.8 mg GAE/g extract，具体数据如表6所示。
表6实施例4精提数据
③ 0.2g精提物经高效液相色谱分离，制备，得到0.008g99%紫云英苷黄色纯品。高效液相色谱流动相为甲醇水。
实施例5
① 取裁剪、研磨过筛后的仙草全草20g，加约300mL50%丙酮溶液，55℃提取，浸提1.5h，浸提三次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物，其多酚含量达130.8±3.4 mg GAE/g extract，具体数据如表7所示。
表7实施例5粗提数据
② 粗提物2g，AB-8大孔吸附柱层析分离，收集55%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物，其多酚含量达460.1 mg GAE/g extract，具体数据如表8所示。
表8实施例5精提数据
③ 0.2g精提物经高效液相色谱分离，制备，得到0.04g99%紫云英苷黄色纯品。高效液相色谱流动相为甲醇水。
实施例6
① 取裁剪、研磨过筛后的仙草全草15g，加约150mL85%丙酮溶液，50℃提取，浸提3h，浸提三次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物，其多酚含量达21.4±5 mg GAE/g extract，具体数据如表9所示。
表9 实施例6粗提数据
② 粗提物1.4g，AB-8大孔吸附柱层析分离，收集55%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物，其多酚含量达81.7 mg GAE/g extract，具体数据如表10所示。
表10实施例6精提数据
③ 0.2g精提物经高效液相色谱分离，制备，得到0.0085g99%紫云英苷黄色纯品。高效液相色谱流动相为甲醇水。
Claims (4)
1.一种从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法，其特征在于： 仙草采用丙酮水溶液提取，提取液浓缩干燥得到粗提物，粗提物经大孔吸附树脂柱层析分离，收集55～65%乙醇洗脱组分，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到精提物；所述大孔吸附树脂为弱极性大孔吸附树脂；精提物经高效液相色谱分离、制备，得到紫云英苷纯品；所述高效液相色谱采用甲醇/水梯度洗脱。
2.根据权利要求1所述的从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法，其特征在于：所述仙草采用全草，经过干燥、裁剪、研磨，过40目筛网。
3.根据权利要求1所述的从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法，其特征在于：所述丙酮水溶液浓度为50%～90%（体积比），仙草与丙酮溶液的固液比为1：8～1：12（w/v）；提取条件为：提取温度50℃～60℃，浸提时间1.5～3h，浸提2～3次，趁热过滤，合并滤液，减压浓缩去除溶剂，真空干燥得到粗提物。
4.根据权利要求1所述的从植物仙草中提取分离紫云英苷的方法，其特征在于：所述弱极性大孔吸附树脂为AB-8、DM130或HPD450大孔吸附树脂。
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