CN102924542A

CN102924542A - 一种从小叶丁香中提取松果菊苷的方法

Info

Publication number: CN102924542A
Application number: CN2012103555402A
Authority: CN
Inventors: 刘普; 邓瑞雪; 赵天增; 董建军; 陈荣峰; 尹卫平
Original assignee: BIOLOGICAL DEVELOPING CENTER OF HENAN ACADEMY OF SCIENCES
Current assignee: BIOLOGICAL DEVELOPING CENTER OF HENAN ACADEMY OF SCIENCES
Priority date: 2012-09-24
Filing date: 2012-09-24
Publication date: 2013-02-13

Abstract

本发明涉及一种从小叶丁香中提取分离松果菊苷的方法，该方法以粉碎过的干燥小叶丁香为原料，先用60－90%乙醇回流提取，再经一系列的提取分离手段，包括溶剂提取、固液萃取、硅胶柱层析及重结晶等方法，从小叶丁香花中分离得到松果菊苷。该方法简便、快捷，所得松果菊苷产品纯度高，收率高，为今后松果菊苷的开发研究奠定了基础。

Description

一种从小叶丁香中提取松果菊苷的方法

技术领域

本发明属于中药有效成分提取及分离技术领域，具体涉及一种从小叶丁香中提取高纯度松果菊苷的方法。

背景技术

小叶丁香（Syringa pubescens Turca）为木犀科丁香属植物，灌木。又名毛（叶）丁香、四季丁香，产自河南、河北、陕西等地。经研究发现，小叶丁香中含有三萜类、黄酮类和皂苷类化合物，其松果菊苷的含量相对较高，有较大的研究开发价值。松果菊苷是一种具有较强生物活性的化合物，文献报道其具有显著的抗氧化、保护神经、保护肝脏，抗炎、抗肿瘤，改善记忆力及免疫调节作用（何文君，方泰惠，屠鹏飞. 松果菊苷的药理研究进展，中国中药杂志，2009,34(4)：476－479）。小叶丁香粗提物有一定的预防和治疗化学性及免疫性肝损伤的作用，而作为其中主要成分的松果菊苷可能是其具有显著抗肝病活性的主要物质。

目前，松果菊苷主要是从肉苁蓉（Cistanche deserticola Y. C. Ma）中提取分离而得。肉苁蓉是一种寄生在沙漠树木梭梭、红柳根部的寄生植物，属于濒危物种，无序的大量采收肉苁蓉对沙漠环境造成一定的破坏。因此，研究开发新的松果菊苷制备工艺，具有重要意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种从小叶丁香中提取分离松果菊苷的方法，该方法过程简单，提取所得的松果菊苷纯度高。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

小叶丁香中的有效成分松果菊苷，其结构式如下所示，该化合物为苯乙醇苷类化合物。

。

一种从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其包括以下步骤：

1）将粉碎过的干燥小叶丁香，用体积浓度60－90%乙醇回流提取3－5小时（为了取得较好的提取效果，可以在回流提取前先浸泡过夜），过滤残渣，残渣重复回流提取1－3次，合并提取液，减压蒸馏浓缩至浸膏；

2）将浸膏用甲醇溶解，过滤，滤液中加入硅胶和硅藻土混匀，晾干（即挥干甲醇），备用；所述硅胶与硅藻土两者的总添加量为浸膏质量的2－4倍，硅胶与硅藻土的质量比为1：1－3；

3）将步骤2）所得样品依次分别用氯仿、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇=1:1、乙酸乙酯-甲醇=1:3萃取，每种溶剂萃取2－3次（每种溶剂每次的添加量以是样品质量的1－3倍为宜），收集乙酸乙酯-甲醇=1:3所对应的萃取液，真空减压蒸除溶剂，得乙酸乙酯-甲醇萃取物，备用；

4）将乙酸乙酯-甲醇萃取物用甲醇（甲醇的添加量以是萃取物质量的2－4倍为宜）溶解后，加入乙酸乙酯-甲醇萃取物2－3质量倍的硅胶混匀，挥干甲醇，然后用硅胶柱（硅胶柱中硅胶的用量一般是萃取物质量的30－40倍）层析分离，依次用体积比为2: 8: 0.02、3: 7: 0.03、4: 6: 0.04、5: 5: 0.05、6: 4: 0.06的氯仿-甲醇-水洗脱液进行梯度洗脱（每个梯度洗脱体积为柱体积的2－3倍为佳），收集各馏分段，用HPLC检测，取松果菊苷含量大于90%的馏分段，即为松果菊苷粗品。

具体的，步骤1）中所述体积浓度60－90%乙醇的添加量优选为干燥小叶丁香质量的10－12倍。

步骤2）中甲醇的添加量优选为浸膏质量的3－5倍。

比较优选的，将松果菊苷粗品溶于温度为50－60℃的乙醇中，然后用活性炭吸附过滤，滤液减压蒸除乙醇，即得松果菊苷纯品。

其中，所述乙醇的用量为松果菊苷粗品质量的3－4倍；活性炭的用量优选为松果菊苷粗品质量的5－7倍。

本发明的优点在于：松果菊苷属于活性较好的单体化合物。目前，制备分离松果菊苷主要是从肉苁蓉中得到，肉苁蓉是一种寄生在沙漠树木梭梭、红柳根部的寄生植物，属于濒危物种，无序的大量采收肉苁蓉对沙漠环境造成一定的破坏。本发明采用有机溶剂乙醇提取、干法萃取、溶剂洗脱、活性碳脱色等工艺较大规模的制备高纯度的苯乙醇苷类化合物-松果菊苷。可以单独或与适宜的赋形剂等结合，按照常规方法制成口服或非口服剂型用于制备治疗肝病的药物。此外，本发明方法简便，快捷，所得到产品纯度高，收率高，为今后松果菊苷的开发研究奠定了基础。

附图说明

图1为所得到松果菊苷HPLC分析图谱；

图2为采用本发明方法制得的松果菊苷的¹H NMR图谱；

图3为采用本发明方法制得的松果菊苷的¹³C NMR图谱。

具体实施方式

以下以通过优选实施例对本发明工艺作进一步的详细说明，但本发明的保护范围并不局限于此。

实施例1

一种从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其包括以下步骤：

1）将1公斤干燥、粉碎过60目的小叶丁香（产自豫西伏牛山），用12公斤体积浓度80%乙醇浸泡过夜（约12h）后，加热回流提取4小时，过滤残渣，残渣再用80%乙醇回流提取2次（每次4h），合并提取液，减压蒸除乙醇得浸膏175g；

2）取浸膏170g用850mL甲醇在超声条件下充分溶解，过滤，滤液中加入硅胶和硅藻土混匀，置于通风橱中晾干（称重为632g），备用；所述硅胶与硅藻土两者的总添加量为510g，硅胶与硅藻土的质量比为1：1；

3）将步骤2）所得样品依次用氯仿、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇=1:1、乙酸乙酯-甲醇=1:3分别萃取，每个溶剂段用溶剂2L，萃取3次。收集乙酸乙酯-甲醇=1:3所对应的萃取液，真空减压蒸除溶剂，得24.5g乙酸乙酯-甲醇萃取物，备用；

4）取24g乙酸乙酯-甲醇萃取物用91ml甲醇溶解后，加入50g硅胶混匀，挥干甲醇，然后用硅胶柱（硅胶柱中硅胶用量900g）层析分离，依次用体积比为2: 8: 0.02、3: 7: 0.03、4: 6: 0.04、5: 5: 0.05、6: 4: 0.06的氯仿-甲醇-水洗脱液进行梯度洗脱（每个梯度洗脱液用量5L），收集各馏分段，用HPLC检测，取松果菊苷含量大于90%的馏分段（即氯仿-甲醇-水为5: 5: 0.05对应的馏分段），即为松果菊苷粗品（3.1g）；

5）将松果菊苷粗品溶于16ml温度为60℃的乙醇中，然后用20g活性炭吸附过滤，滤液减压蒸除乙醇，即得2.4g松果菊苷纯品，HPLC测定其纯度为95.6%。

松果菊苷含量的测定方法：按照文献“高效液相色谱色谱法同时测定小叶丁香不同部位中5种活性成分的含量”（刘普，张创峰，邓瑞雪，等，中国实验方剂学杂志，2011,46(24)：1935－1938）的方法进行：采用Agilent Zorbax SB C₁₈色谱柱（4.6×250 mm，5 μm）；流动相为乙腈-磷酸二氢钾缓冲盐（PH=2.5）20：80等度洗脱，流速1 mL·min^-1，检测波长334 nm，柱温30℃。

实施例2

一种从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其包括以下步骤：

1）将3公斤干燥、粉碎过60目的小叶丁香，用36公斤体积浓度85%乙醇浸泡过夜（约12h）后，加热回流提取4小时，过滤残渣，残渣再用85%乙醇回流提取2次（每次4h），合并提取液，减压蒸除乙醇得浸膏553g；

2）取浸膏550g用2300mL甲醇在超声条件下充分溶解，过滤，滤液中加入硅胶和硅藻土混匀，置于通风橱中晾干（称重为2062g），备用；所述硅胶与硅藻土两者的总添加量为1650g，硅胶与硅藻土的质量比为1：2；

3）将步骤2）所得样品依次用氯仿、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇=1:1、乙酸乙酯-甲醇=1:3分别萃取，每个溶剂段用溶剂7L，萃取3次。收集乙酸乙酯-甲醇=1:3所对应的萃取液，真空减压蒸除溶剂，得81.5g乙酸乙酯-甲醇萃取物，备用；

4）取81g乙酸乙酯-甲醇萃取物用300ml甲醇溶解后，加入170g硅胶混匀，挥干甲醇，然后用硅胶柱（硅胶柱中硅胶用量3000g）层析分离，依次用体积比为2: 8: 0.02、3: 7: 0.03、4: 6: 0.04、5: 5: 0.05、6: 4: 0.06的氯仿-甲醇-水洗脱液进行梯度洗脱（每个梯度洗脱液用量15L），收集各馏分段，用HPLC检测，取松果菊苷含量大于90%的馏分段（即氯仿-甲醇-水为5: 5: 0.05对应的馏分段），即为松果菊苷粗品（10.6g）；

5）将松果菊苷粗品溶于52ml温度为50℃的乙醇中，然后用60g活性炭吸附过滤，滤液减压蒸除乙醇，即得7.3g松果菊苷纯品，HPLC测定其纯度为95.2%。

所得的松果菊苷纯品经HPLC、NMR、HR-MS测定化合物的结构，波谱数据见下表，图谱结果见图1至3。

表1松果菊苷¹H NMR (MeOD，400MHz)和¹³C-NMR(MeOD，100MHz)数据

Claims

1.一种从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将粉碎过的干燥小叶丁香，用体积浓度60－90%乙醇回流提取3－5小时，过滤残渣，残渣重复回流提取1－3次，合并提取液，减压蒸馏浓缩至浸膏；

2）将浸膏用甲醇溶解，过滤，滤液中加入硅胶和硅藻土混匀，晾干，备用；所述硅胶与硅藻土两者的总添加量为浸膏质量的2－4倍，硅胶与硅藻土的质量比为1：1－3；

3）将步骤2）所得样品依次分别用氯仿、乙酸乙酯、乙酸乙酯-甲醇=1:1、乙酸乙酯-甲醇=1:3萃取，每种溶剂萃取2－3次，收集乙酸乙酯-甲醇=1:3所对应的萃取液，真空减压蒸除溶剂，得乙酸乙酯-甲醇萃取物，备用；

4）将乙酸乙酯-甲醇萃取物用甲醇溶解后，加入乙酸乙酯-甲醇萃取物2－3质量倍的硅胶混匀，挥干甲醇，然后用硅胶柱层析分离，依次用体积比为2: 8: 0.02、3: 7: 0.03、4: 6: 0.04、5: 5: 0.05、6: 4: 0.06的氯仿-甲醇-水洗脱液进行梯度洗脱，收集各馏分段，用HPLC检测，取松果菊苷含量大于90%的馏分段，即为松果菊苷粗品。

2.如权利要求1所述从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其特征在于，步骤1）中所述体积浓度60－90%乙醇的添加量为干燥小叶丁香质量的10－12倍。

3.如权利要求1所述从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其特征在于，步骤2）中甲醇的添加量为浸膏质量的3－5倍。

4.如权利要求1所述从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其特征在于，将松果菊苷粗品溶于温度为50－60℃的乙醇中，然后用活性炭吸附过滤，滤液减压蒸除乙醇，即得松果菊苷纯品。

5.如权利要求4所述从小叶丁香中提取松果菊苷的方法，其特征在于，所述乙醇的用量为松果菊苷粗品质量的3－4倍；活性炭的用量为松果菊苷粗品质量的5－7倍。